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鸡贫血病毒凋亡素基因的可溶性融合表达及抗肿瘤活性分析
1
作者
冀君
朱晨晨
+5 位作者
许鑫
刘晓
冷超粮
史鸿飞
姚伦广
阚云超
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第2期26-32,共7页
为获得高效可溶表达的鸡贫血病毒凋亡素基因(CAV-Apoptin),根据大肠杆菌密码子偏爱性优化CAV-Apoptin基因序列,将其连接到含msyB伴侣基因的pBCX载体上,转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定后应用镍柱亲和层析纯化蛋白质...
为获得高效可溶表达的鸡贫血病毒凋亡素基因(CAV-Apoptin),根据大肠杆菌密码子偏爱性优化CAV-Apoptin基因序列,将其连接到含msyB伴侣基因的pBCX载体上,转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定后应用镍柱亲和层析纯化蛋白质,采用显微镜观察、CCK-8实验与DNA ladders测定其抗肿瘤细胞的活性。结果显示,成功构建大肠杆菌表达载体pBCX-CAV-Apoptin,在37℃正常培养条件下的大肠杆菌中得到大量可溶性表达产物,融合蛋白质分子量大小约为42 kDa,50 ml菌液即可获得1.5 mg左右的纯化重组蛋白,CCK-8实验结果显示纯化后的重组蛋白作用36 h后可对套氏淋巴瘤JEKO-1、REC-1细胞生长产生超过60%的抑制率;显微镜观察与DNA ladder实验证明重组蛋白可诱导JEKO-1、REC-1细胞的凋亡,对HUVEC没有诱导凋亡的作用。免疫印迹分析表明重组凋亡素对JEKO-1细胞诱导了Caspase-3的激活,而对Caspase-8的表达没有影响。研究表明融合蛋白msyB-CAV-Apoptin可达到高效可溶表达,且表达产物具有特异抗肿瘤活性。
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关键词
凋亡素
鸡贫血病毒
融合伴侣
高效可溶性表达
活性分析
原文传递
题名
鸡贫血病毒凋亡素基因的可溶性融合表达及抗肿瘤活性分析
1
作者
冀君
朱晨晨
许鑫
刘晓
冷超粮
史鸿飞
姚伦广
阚云超
机构
南阳师范学院南阳市兽医生物工程技术研究中心/南阳师范学院昆虫生物反应器河南省工程实验室
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第2期26-32,共7页
基金
河南省国际合作项目(152102410055)
高层次人才专项项目(70638)资助项目
文摘
为获得高效可溶表达的鸡贫血病毒凋亡素基因(CAV-Apoptin),根据大肠杆菌密码子偏爱性优化CAV-Apoptin基因序列,将其连接到含msyB伴侣基因的pBCX载体上,转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定后应用镍柱亲和层析纯化蛋白质,采用显微镜观察、CCK-8实验与DNA ladders测定其抗肿瘤细胞的活性。结果显示,成功构建大肠杆菌表达载体pBCX-CAV-Apoptin,在37℃正常培养条件下的大肠杆菌中得到大量可溶性表达产物,融合蛋白质分子量大小约为42 kDa,50 ml菌液即可获得1.5 mg左右的纯化重组蛋白,CCK-8实验结果显示纯化后的重组蛋白作用36 h后可对套氏淋巴瘤JEKO-1、REC-1细胞生长产生超过60%的抑制率;显微镜观察与DNA ladder实验证明重组蛋白可诱导JEKO-1、REC-1细胞的凋亡,对HUVEC没有诱导凋亡的作用。免疫印迹分析表明重组凋亡素对JEKO-1细胞诱导了Caspase-3的激活,而对Caspase-8的表达没有影响。研究表明融合蛋白msyB-CAV-Apoptin可达到高效可溶表达,且表达产物具有特异抗肿瘤活性。
关键词
凋亡素
鸡贫血病毒
融合伴侣
高效可溶性表达
活性分析
Keywords
Apoptin
Chicken anemia virus
fusion chaperonin
Efficient soluble expression
Activity assay
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸡贫血病毒凋亡素基因的可溶性融合表达及抗肿瘤活性分析
冀君
朱晨晨
许鑫
刘晓
冷超粮
史鸿飞
姚伦广
阚云超
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017
0
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