旋毛虫p49抗原相关抗体的快速检测

目的 建立旋毛虫病的快速检测技术。方法 基因工程抗原包被有色乳胶颗粒，抗抗体包被磁性颗粒，在抗体存在下形成抗原－ 乳胶－ 抗体－ 抗抗体－ 磁性颗粒的复合场，在磁场作用下沉淀下来，从而达到快速检测旋毛虫相关抗体的目的。结果 １９ 份人工感染鼠血清、５ 份人工感染猪血清、３ 份旋毛虫病猪血清、４ 份病人血清均呈阳性反应，而对照血清均为阴性反应；该方法在鼠感染旋毛虫后第五天可测出ＩｇＭ 抗体，第九天可测出ＩｇＧ抗体。结论 本检测技术简便易行，不需专用设备，可望成为一种快速诊断旋毛虫病的有效方法。

旋毛虫病p49抗原相关抗体的ELISA检测

目的以纯化的融合蛋白 p49/GST为抗原建立ELISA检测方法。方法对一批试验血清进行间接ELISA检测。结果 19份人工感染鼠血清、5份人工感染猪血清、4份旋毛虫病猪血清、4份病人血清呈IgG抗体阳性 ,2 1份人工感染鼠血清呈IgM抗体阳性 ,而正常对照血清及 30 0份屠宰场待检猪血清均呈阴性反应 ,其结果与常规压片法结果相符。

旋毛虫p49抗原基因克隆体外表达条件的研究

旋毛虫肌幼虫排泄一分泌（ES）抗原是用于旋毛虫病免疫检测的理想抗原，包括45kD、49kD和53kD三种主要的特异性蛋白成分。本文利用含有P49抗原基因克隆的重组表达质粒pGEX—p49，电转化大肠杆菌，获得DH5α／pGEX—p49转化子。SDS—PAGE电泳表明，含重组质粒pGEX—p49的大肠杆菌能表达-分子量为61kD的融合蛋白（p49／GST），Western—blot表明该融合蛋白能被鼠旋毛虫病阳性血清特异识别。为提高融合蛋白的表达量，本文对宿主菌诱导条件、诱导物浓度、诱导时细菌生长状态等条件与表达量的关系进行了研究。

血清旋毛虫p49抗原IgG抗体的斑点金免疫渗滤法检测

目的 建立一种快速诊断人体旋毛虫感染的新途径。方法 以基因工程表达的猪旋毛虫融合蛋白p49/GST为抗原,将其结合于硝酸纤维素膜上,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG作为标记抗体,建立斑点金免疫渗滤法(Dot-immunogoldfiltration assay,DIGFA),检测人血清抗旋毛虫p49抗原IgG抗体。共检测76份旋毛虫患者血清并与酶联免疫吸附试验(ELISA)作对比研究。结果 抗原抗体通过渗滤在膜上反应,10min肉眼即可观察到结果,在76份患者血清的检测中,阳性率为98.68％,显著高于ELISA法的检出阳性率86.84％,(X2=7.94,P<0.01)。交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性。结论 以纯化的融合蛋白p49/GST为抗原建立的DIGFA可快速准确检测旋毛虫病人血清特异性旋毛虫IgG抗体,具有推广应用的价值。

旋毛虫p49抗原基因原核表达产物的纯化

目的建立旋毛虫p49抗原基因原校表达产物的纯化方法。方法菌体经冻融、超声破菌及提取包涵体后，用离子交换和凝胶过滤层析纯化蛋白质。结果纯化后的融合蛋白P49／GST经SDS－PAGE电冰鉴定达电泳纯。双抗体夹心ELISA法检测结果表明纯化的P49／GST融合蛋白能与旋毛虫感染的鼠血清和纯化融合蛋白免疫的兔血清反应，而不与正常民和兔血清反应。结论纯化后的融合蛋白P49／GST具有较高的纯度及较强的免疫活性，可望作为旅毛虫病的免疫诊断抗原。