经典名方甘草附子汤治疗骨关节病的研究进展

甘草附子汤来源于《伤寒杂病论》,主治“骨节烦疼”“不得屈伸”,具有补益脾肾,祛湿化浊之效,故临床广泛应用于各种骨关节疾病的治疗。该文对甘草附子汤治疗骨关节疾病的临床研究和作用机制方面进行了综述。研究发现,甘草附子汤在治疗风湿性关节炎、类风湿、强直性脊柱炎、痛风、椎间盘突出等骨关节疾病等方面有较好的疗效,其作用机制可能与调控炎症因子水平、抗氧化、调控炎症及凋亡细胞相关通道的蛋白质表达、改善骨质疏松、缓解相关症状等有关。该研究可为进一步深化甘草附子汤防治骨关节疾病的研究提供参考。

基于TRPV1探讨黄五甘附膏治疗膝骨关节炎外周炎性痛敏的作用机制

目的:观察黄五甘附膏对阳虚寒凝证膝骨关节炎(KOA)大鼠滑膜组织瞬时受体电位锚蛋白1(TRPV1)受体表达、巨噬细胞极化及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路调控作用,探讨其缓解KOA外周炎性痛敏的作用机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、黄五甘附膏高、中、低剂量组(9.3、4.65、2.325 g·kg^(-1))、塞来昔布组(208.2 mg·kg^(-1)),采用气候箱加游泳2周联合膝关节腔注射碘乙酸钠(MIA)建立阳虚寒凝证KOA大鼠模型,连续给药4周,观察各组大鼠一般情况,记录机械刺激缩足痛阈值(PWT)和关节直径,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)炎性因子表达;苏木素-伊红(HE)染色观察膝关节滑膜组织病理学改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠膝关节滑膜组织TRPV1、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达水平;免疫荧光(IF)测量评估M1/M2巨噬细胞极化情况。结果:与空白组比较,模型组大鼠整体精神状态较差,自主活动减少,体质量偏低,关节直径增加,X射线提示关节边缘骨赘增生,关节面明显粗糙,关节腔间隙明显变窄,大鼠PWT显著降低(P<0.01),大鼠血清IL-1β、TNF-α、CGRP、NGF含量均显著升高(P<0.01),滑膜Krenn评分显著升高(P<0.01),TRPV1、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达显著升高(P<0.01),M1巨噬细胞占比和M1/M2显著升高(P<0.01),M2巨噬细胞占比显著降低(P<0.01);与模型组比较,黄五甘附膏低、中、高剂量体质量有不同程度上升(P<0.05,P<0.01),黄五甘附膏高剂量组和塞来昔布组大鼠膝关节直径减少(P<0.01),黄五甘附膏高、中剂量组PWT恢复较为明显(P<0.05),各给药组大鼠血清IL-1β和CGRP的含量都显著降低(P<0.01),塞来昔布组和黄五甘附膏高剂量组大鼠血清TNF-α含量明显降低(P<0.05),黄五甘附膏中剂量组大鼠血清NGF含量明显降低(P<0.05),黄五甘附膏高剂量组滑膜Krenn评分明显降低(P<0.05),黄五甘附膏各剂量组大鼠滑膜组织中TRPV1和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达都显著下降(P<0.01),塞来昔布组和黄五甘附膏各剂量组滑膜组织中M1巨噬细胞占比均降低(P<0.01),黄五甘附膏高剂量组M2巨噬细胞占比升高(P<0.05),黄五甘附膏中、高剂量M1/M2降低(P<0.05)。结论:黄五甘附膏可通过调控巨噬细胞极化减轻KOA炎症反应,减少炎性疼痛介质释放,同时还降低了TRPV1蛋白表达,其机制可能与p38 MAPK信号通路有关,从而达到改善KOA外周痛敏的效应。

麻黄的“破癥坚积聚”功效分析

结合古今文献研究,分析麻黄"破癥坚积聚"的功效机制,为拓展麻黄治疗妇科疾病的应用范围提供文献依据。通过梳理古今麻黄相关文献,筛选麻黄的特殊用法资料,并结合临床应用,归纳麻黄在阳和汤及麻黄细辛附子汤中治疗癥瘕的临床和配伍特点。麻黄消癥瘕的机制在于温经散寒、散邪外出、宣通气机、振奋肾阳。临床应用麻黄消癥瘕主要体现在阳和汤及麻黄细辛附子汤中。中医辨证治疗癥瘕有很大的应用前景,麻黄灵活配伍治疗癥瘕,疗效显著,扩大了麻黄在妇科疾病中的应用范围。

“三焦次第疗法”治疗急性脑梗死的临床研究

目的:评价"三焦次第疗法"治疗急性脑梗死的临床疗效及对S100-β蛋白(S100-β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),超敏C反应蛋白(hs-CRP)和神经肽Y(NPY)的影响。方法:将180例患者随机按数字表法分为对照组和观察组各90例。对照组口服拜阿司匹林肠溶片,100 mg/次,1次/d;依达拉奉注射液,30 mg/次,30 min内滴完,2次/d,连续14 d;口服辛伐他汀片,20 mg/次,1次/d。观察组西医治疗同对照组,并采用"三焦次第疗法",第一步,采用以桂枝法为主疏通中上焦,1剂/d,共8 d;第二步,以四逆法温通中下焦,1剂/d,共10 d;第三步,填精固本法,1剂/d,共10 d。两组疗程均治疗4周。进行美国国立卫生院神经功能缺损(NIHSS)评分,于治疗前、治疗后1,2,3和4周进行评价;评价治疗前后四肢简化Fugl-Meyer功能量表(FMA),日常生活活动能力(ADL),简易精神状态量表(MMSE)和中医主要症状评分;进行治疗前后中风患者报告的临床结局(PRO)的综合评估;检测治疗前后S100-β,hs-CRP,TNF-α和NPY水平;记录住院期间肺部感染、泌尿系感染、骨骼肌痛、肩手综合征、肩关节半脱位等并发症的发生率。结果:观察组临床疗效优于对照组(Z=2.141,P<0.05);观察组在治疗后1,2,3,4周NIHSS评分均低于同期对照组(P<0.01);观察组患者FMA量表上、下肢评分和总分均高于对照组(P<0.01);观察组患者中医主要症状评分低于对照组(P<0.01),ADL和MMSE评分均高于对照组(P<0.01);观察组症状、心理和社会评分及PRO总分均低于对照组(P<0.01);观察组血清S100-β,hs-CRP,TNF-α和NPY水平均低于对照组(P<0.01);观察组并发症总发生率为27.27%(21/77),低于对照组的46.15%(36/78)(χ^2=5.941,P<0.05)。结论:在常规西医治疗的基础上,采用以"三焦次第疗法"治疗急性脑梗死患者,能改善神经功能缺损程度,提高认知功能、四肢运动功能和日常生活活动能力,减轻中医主要症状,降低并发症的发生率,并能减轻炎症反应,保护神经细胞,临床疗效均优于单纯的西医治疗。

桂枝附子汤对CIA大鼠滑膜组织中MAPK信号通路的影响

目的:探讨桂枝附子汤对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜组织中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法:将SD大鼠60只随机分为正常组,模型组,桂枝附子汤组(1.5,4.5,13.5 g·kg^(-1)),甲氨喋呤组,共6组;大鼠尾根部皮下注射鸡Ⅱ型胶原(chicken typeⅡcollagen,CCⅡ)乳剂制备CIA模型;自造模后第14天开始,每周观察各给药组的关节炎指数;采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测滑膜组织MAPK信号转导通路中JNK,ERK,p38蛋白及相应磷酸化蛋白p-JNK,p-ERK,p-p38的表达水平。结果:CIA大鼠的足爪肿胀度和关节炎指数第7,14,21,28,35,42天个时间点均高于正常组,在给予桂枝附子汤治疗后在第14天后CIA大鼠的足爪肿胀度和关节炎指数均明显降低。桂枝附子汤能明显改善CIA大鼠滑膜增生和炎性细胞浸润,使得炎性细胞减少。与正常组p-JNK,p-ERK,p-p38比较,CIA组中的p-JNK,p-ERK,p-p38的表达水平显著增强,两组治疗间有显著性变化(P<0.01);用甲氨蝶呤治疗CIA大鼠,与模型组比较其p-JNK,p-ERK和p-p38表达水平显著降低,两组治疗间有显著性变化(P<0.01);用桂枝附子汤治疗CIA大鼠,与模型组相比较其p-JNK,p-ERK,p-p38明显降低,并且呈现剂量依赖性关系。结论:桂枝附子汤可抑制CIA大鼠MAPK信号转导通路的活化,从而缓解炎症症状。

附子汤合芍药甘草汤加味离子导入治疗寒湿瘀阻证非特异性下腰痛

目的:评价附子汤合芍药甘草汤加味离子导入治疗非特异性下腰痛(NLBP)寒湿瘀阻证的临床疗效及对白细胞介素-1β(IL-1β),血栓素2(TXB2),6-酮前列腺素F_(lα)(6-Keto-PGF_(lα)),降钙素基因相关肽(CGRP),血管活性肠肽(VIP)的影响。方法:将176例患者以入诊先后顺序随机按数字表法分为对照组和观察组。对照组采用腰腿痛丸+电针治疗,观察组采用附子汤合芍药甘草汤离子导入+电针。两组疗程均为治疗4周。进行治疗前后简化McG ill疼痛量表(SF-MPQ),压痛情况评分,并进行压痛和痛阈值的测量;功能情况采用日本骨科协会(JOA)法评估;进行寒湿瘀阻证和总体感觉(PGIC)评价;检测治疗前后IL-1β,TXB2,6-Keto-PGF_(lα),CGRP和VIP水平;进行安全性评价。结果:观察组JOA总改善率为95.18%,高于对照组的83.95%(χ~2=5.564,P<0.05);观察组疼痛感觉评分、疼痛情绪评分、疼痛总分、目测类比疼痛评分和现在疼痛状况评分均低于对照组(P<0.01);观察组硬度值低于对照组,压痛和中医证候评分均低于对照组,痛阈值高于对照组(P<0.05,P<0.01);观察组JOA量表主观症状、临床体征、日常活动受限度及总分均高于对照组(P<0.01);观察组PGIC"明显好转"的患者为68.67%,多于对照组的50.62%(χ~2=5.558,P<0.05);观察组IL-1β,TXB2,CGRP和VIP水平均低于对照组,6-KetoPGF_(lα)高于对照组(P<0.01)。结论:采用附子汤合芍药甘草汤加味离子导入治疗NLBP寒湿瘀阻证患者,能改善血液循环,促进腰部功能的恢复,减轻疼痛,提高患者活动能力。

附子不同炮制品对麻黄细辛附子汤煎剂质量的影响

目的：比较不同附子炮制品制备所得麻黄细辛附子汤（MXF）的质量差异,探析经方中炮制品规格选用的科学性。方法：采用临床常用的5种附子炮制品规格分别制备MXF煎剂,选取MXF中具有效毒二重性的化学成分为评价指标,考察不同附子炮制品对MXF煎剂中效毒成分含量的影响。结果：建立了MXF中13种指标成分的含量测定方法。采用多元统计分析筛选出区别附子不同炮制品制备所得煎剂的指标性成分有卡枯醇、甲基丁香酚、细辛脂素、新乌头碱、次乌头碱和乌头碱。与附子的其他炮制品规格相比,炒附片制备所得煎剂中,双酯型生物碱类成分的含量较低但其单酯型生物碱类成分的含量最高。结论：附子不同炮制品制备所得MXF煎剂中效毒成分的含量存在较大差异,可为经方的古为今用提供参考。

不同配伍组方对麻黄细辛附子汤体外经皮渗透行为的影响

目的：探讨不同配伍组方对麻黄细辛附子汤（MXF）体外经皮吸收的影响,以阐明MXF外用的配伍机制,为其经皮给药提供科学依据,也为中药复方外用配伍机制研究积累数据。方法：采用Franz体外扩散池法,以含1%聚山梨酯-80的生理盐水溶液为接受液,采用麻黄生物碱类成分（盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱）,附子生物碱类成分（苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和苯甲酰乌头原碱）和细辛挥发油类成分（细辛脂素和甲基丁香酚）的12 h累积渗透量（Q12 h）和稳态渗透速率（Jss）为指标,考察麻黄组、附子组、细辛组、麻黄-附子组、麻黄-细辛组、附子-细辛组、麻黄-附子-细辛组（全方组）对大鼠背部的透皮吸收情况。结果：各成分的Q12 h和Jss比较,盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱排序均为全方组〉麻黄-细辛组〉麻黄组〉麻黄-附子组,且盐酸麻黄碱〉盐酸伪麻黄碱;苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和苯甲酰乌头原碱排序均为附子-细辛组〉附子组〉麻黄-附子组〉全方组,且苯甲酰新乌头原碱〉苯甲酰乌头原碱〉苯甲酰次乌头原碱;甲基丁香酚排序为细辛组〉麻黄-细辛组〉附子-细辛组〉全方组。各组中细辛脂素的Q12 h和Jss差异不大。结论：不同配伍组方对MXF中各指标成分的经皮吸收有影响,且对不同成分的影响程度不同;成分不同,经皮吸收效果也不同。细辛对盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和苯甲酰乌头原碱的经皮吸收具有一定的促进作用,附子对盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的经皮吸收均有一定抑制作用,麻黄和附子均会对甲基丁香酚的经皮吸收起到显著抑制作用。

麻黄细辛附子汤结合针灸治疗局限性硬皮病的临床疗效

目的观察麻黄细辛附子汤结合针灸治疗局限性硬皮病的临床疗效。方法将2019年9月至2021年10月于武汉市第一医院就诊的95例局限性硬皮病患者通过随机数字表法分为对照组(47例)何观察组(48例),对照组予以积雪苷片、肝素钠软膏治疗,观察组以积雪苷片、肝素钠软膏+麻黄细辛附子汤结合针灸治疗,两组患者治疗时间均为8周。观察两组患者临床治疗疗效、治疗前后中医证候(局部皮肤硬化、皮肤纹路消失、皮损色素加深、肌肤甲错等)积分、血清可溶性白细胞介素-2α受体(sIL-2R)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化、血细胞沉降率(ESR)及嗜酸性粒细胞(EO)水平变化、不良反应发生情况。结果治疗8周后,对照组患者总有效率为82.98%(39/47),观察组治疗总有效率为95.83%(46/48),观察组总有效率明显高于对照组,差异具有统计学意义(χ^(2)=4.1664,P<0.05);治疗前,两组患者中医证候(局部皮肤硬化、皮肤纹路消失、皮损色素加深、肌肤甲错等)积分、sIL-2R及TNF-α、ESR、EO水平比较,差异无统计学意义。治疗后,与本组治疗前比较,两组患者中医证候(局部皮肤硬化、皮肤纹路消失、皮损色素加深、肌肤甲错等)积分、sIL-2R及TNF-α、ESR、EO水平均明显改善(P<0.05);与对照组治疗后比较,观察组患者治疗后中医证候(局部皮肤硬化、皮肤纹路消失、皮损色素加深、肌肤甲错等)积分、sIL-2R及TNF-α、ESR、EO水平优于对照组(P<0.05)。治疗期间,观察组出现1例肝功能异常,1例恶心呕吐;对照组出现1例恶心呕吐,1例肾功能异常,1例肝功能异常,观察组(4.17%)与对照组(6.38%)总不良反应比较,差异无统计学意义(χ^(2)=0.2339,P=0.06286)。结论麻黄细辛附子汤结合针灸治疗局限性硬皮病的临床效果显著,治疗安全、可靠。

五脏温阳化瘀汤抑制周期蛋白依赖激酶-5过表达对SAMP8小鼠脑神经纤维缠结的影响

目的:探讨五脏温阳化瘀汤改善SAMP8小鼠认知能力的周期蛋白依赖性激酶-5(CDK-5)相关脑神经纤维缠结机制。方法:10只SAMR1小鼠为正常组,40只SAMP8小鼠随机分为模型组,多奈哌齐组(0.4 mg·kg^(-1)·d^(-1)),五脏温阳化瘀汤高、低剂量组(5,1.25 g·kg^(-1)·d^(-1)),连续灌胃给药4周。Morris水迷宫测试定位航行与空间探索能力;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测脑神经组织CDK-5 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脑神经组织CDK-5蛋白表达与Tau蛋白磷酸化水平;银染法检测脑神经纤维缠结。结果:与正常组比较,模型组脑神经组织CDK-5与Tau蛋白磷酸化表达水平均显著升高(P<0.01),脑神经纤维缠结明显增多,定位航行与空间探索能力显著减弱(P<0.01);与模型组比较,五脏温阳化瘀汤高、低剂量组脑神经组织CDK-5与Tau蛋白磷酸化表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),脑神经纤维缠结减少,小鼠定位航行并空间探索能力明显改善(P<0.05,P<0.01)。结论:五脏温阳化瘀汤可显著改善SAMP8小鼠认知能力,可能与其抑制CDK-5过表达进而抑制Tau蛋白过磷酸化导致脑神经纤维缠结减少有关。

甘草附子汤对佐剂性关节炎小鼠滑膜成纤维样细胞增殖的影响

目的:观察佐剂性关节炎(AA)小鼠滑膜组织成纤维样细胞(FLS)增殖的变化及甘草附子汤对其的影响。方法:将48只雄性Balb/c小鼠随机分为正常组,模型组,甘草附子汤组(7.8 g·kg^(-1)),雷公藤多苷组(10 mg·kg^(-1))。采用AA小鼠模型,模型成功后,治疗组小鼠给予相应给药灌胃18 d,1次/d,正常组和模型组小鼠灌胃等体积生理盐水。采用足肿胀法评价药物治疗作用;苏木素-伊红(HE)染色观察各组踝关节组织病理变化;Vimentin免疫组化法检测滑膜组织成纤维样增殖;免疫荧光法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平以及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测滑膜组织中细胞周期蛋白D_1(Cyclin D_1),增殖细胞核抗原(PCNA),p53和p21蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组足肿胀度增加,滑膜增生和骨侵蚀明显,滑膜组织成纤维样细胞增殖率升高(P<0.05),滑膜组织中TNF-α,Cyclin D_1,PCNA蛋白表达明显升高(P<0.05),p53和p21蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组比较,甘草附子汤组小鼠足肿胀,滑膜增生和骨侵蚀有所改善,滑膜组织成纤维样细胞增殖率降低(P<0.05),滑膜组织中TNF-α水平,Cyclin D_1,PCNA蛋白表达显著降低,而p53和p21蛋白表达升高(P<0.05)。结论:甘草附子汤对AA小鼠关节和滑膜损伤具有明显改善作用,可能与降低局部慢性炎症,调节AA小鼠滑膜Cyclin D_1,PCNA,p53和p21的蛋白异常表达,抑制FLS增殖有关。

大黄有效成分与附子有效成分配伍在Caco-2细胞模型上的转运分析

目的：研究大黄中大黄酸、大黄素，附子中去甲乌药碱，以及大黄酸、大黄素与去甲乌药碱分别配伍后在Caco-2细胞模型上的转运过程。方法：以大黄酸、大黄素、去甲乌药碱的累积转运量及表观渗透系数（P…）为指标，采用HPLC对大黄酸、大黄素、去甲乌药碱的含量进行检测，考察大黄酸、大黄素、去甲乌药碱在Caco．2细胞上的转运行为，以及大黄素、大黄酸分别配伍去甲乌药碱后转运行为的变化情况。结果：不同浓度去甲乌药碱的Pspp均〉1×10^-1cm·s^-1，外排与吸收比值接近1．5，配伍大黄酸、大黄素后去甲乌药碱的Pspp显著上升（P〈0．05）。大黄酸、大黄素配伍去甲乌药碱后前二者的Pspp显著下降（P〈0．05）。结论：去甲乌药碱是1个中等吸收的药物，其吸收方式主要为被动转运。大黄中大黄酸、大黄素可促进附子中去甲乌药碱的在肠吸收，而去甲乌药碱却会抑制大黄酸、大黄素的在肠吸收。

甘草附子汤调控NF-κB信号通路抑制胶原诱导型关节炎小鼠骨质破坏的作用

目的:探讨甘草附子汤(GCFZ)抑制胶原诱导型关节炎(CIA)小鼠模型骨质破坏的作用机制。方法:将30只雄性DBa/1J小鼠随机分为5组,分别为正常组、CIA组、甘草附子汤低剂量组(GCFZ-L,2.4 g·kg^(-1))、甘草附子汤高剂量组(GCFZ-H,4.8 g·kg^(-1))和甲氨蝶呤组(MTX,1 mg·kg^(-1)),每组6只,二次免疫法诱导CIA模型;观察记录各组小鼠关节炎指数,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠踝关节组织病理学变化;番红-固绿染色检测小鼠踝关节软骨破坏情况;显微计算机断层扫描(Micro-CT)扫描检测小鼠踝关节骨质破坏的情况;免疫组化法观察踝关节核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、磷酸化核转录因子-κB p65(p-NF-κB p65)、核转录因子-κB抑制蛋白激酶α/β(IKKα/β)、磷酸化核转录因子-κB抑制蛋白激酶α/β(p-IKKα/β)的表达情况。结果:与正常组比较,CIA组关节肿胀明显,关节炎指数评分显著升高(P<0.01);与CIA组比较,GCFZ-L组、GCFZ-H组和MTX组均能显著抑制关节肿胀,并且明显降低关节炎指数评分(P<0.05,P<0.01)。HE染色和番红-固绿染色显示,与CIA组比较,治疗组(GCFZ-L组、GCFZ-H组和MTX组)能明显抑制滑膜的侵袭,并且关节软骨破坏明显减轻。Micro-CT扫描分析显示,与CIA组比较,治疗组(GCFZ-H组和MTX组)骨破坏评分显著降低(P<0.01)。免疫组化结果显示,与正常组比较,CIA组NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKKα/β和p-IKKα/β积分吸光度均显著升高(P<0.01);而与CIA组比较,治疗组(GCFZ-H组和MTX组)NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKKα/β和p-IKKα/β积分吸光度均明显降低(P<0.05,P<0.01);而GCFZ-L组仅NF-κB p65积分吸光度显著降低(P<0.01)。结论:甘草附子汤可能通过调控NF-κB信号通路来抑制CIA小鼠的骨质破坏。

附子汤对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖和miR-155表达的影响

目的:观察附子汤对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖的影响,研究附子汤对miR-155表达的影响并进一步探讨其抗类风湿性关节炎的作用机制。方法:体外培养MH7A细胞,设空白组、附子汤高剂量组(25 g·L^(-1))、低剂量组(12.5 g·L^(-1))和硫酸羟氯喹阳性药组(0.00625 g·L^(-1)),采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)试剂盒法检测细胞增殖,流式细胞术检测MH7A细胞周期的改变;应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测药物处理后miR-155及其下游基因含SH2结构域的肌醇5-磷酸酶-1(SHIP-1)、蛋白激酶B3(Akt3)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、Akt3和mTOR的蛋白表达。结果:附子汤体外在质量浓度6.25 g·L^(-1)以上时,能明显抑制MH7A增殖,且呈明显的量-效关系和时-效关系。与空白组比较,附子汤高、低剂量组G2/M期细胞比例均明显增加(P<0.05),高剂量组G0/G1期细胞比例明显降低(P<0.05),其细胞周期的阻滞作用呈明显的量效关系。与空白组比较,附子汤高、低剂量组miR-155的表达均明显下调(P<0.05);附子汤高剂量组SHIP1 mRNA表达明显上调、Akt3 mRNA表达明显下调(P<0.05),附子汤高、低剂量组mTOR mRNA表达均明显下调(P<0.05)。与空白组比较,附子汤高、低剂量组的PI3K、Akt3和mTOR的蛋白表达均明显下调(P<0.05)。结论:附子汤对MH7A细胞增殖具有显著的抑制作用,作用机制与下调miR-155的表达,从而促进SHIP-1的表达,抑制其下游PI3K/Akt3/mTOR信号通路的基因表达有关。

基于网络药理学及大鼠体内实验的方法探讨麻黄细辛附子汤干预偏头痛的作用机制

目的:研究麻黄细辛附子汤(MXFT)干预偏头痛的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、SiwssTargetPrediction等数据库筛选MXFT活性成分及活性成分、偏头痛的相关靶点;运用STRING 11.5平台对药物和疾病的交集靶点建立潜在蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络图;采用Metascape数据库对潜在交集靶点进行基因本体(GO)分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;利用Cytoscape 3.7.1做MXFT成分-靶点-通路网络图,筛选度值较高的核心靶点;最后通过分子对接方法验证核心靶点与其映射成分的结合强度,将对接结果较好的核心靶点进行动物体内实验验证。选用SD大鼠48只,除空白组外,其余大鼠皮下注射硝酸甘油制备偏头痛大鼠模型,成模大鼠随机分为模型组、西药组、MXFT高、中、低剂量组。西药组给予佐米曲普坦片,治疗组给予MXFT高、中、低剂量干预。成模后隔日1次观测各组大鼠行为学及疼痛阈值变化。酶联免疫吸附测定试验(ELISA)检测血浆中降钙素基因相关肽(CGRP)、大鼠细胞外信号调节激酶2(ERK2)、c-fos原癌基因蛋白(FOS)水平。免疫组化技术、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SD大鼠三叉神经细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2,又称MAPK1/3)、蛋白激酶B1(Akt1)、蛋白激酶Cα(PRKCA)水平。结果:网络药理学分析显示,MXFT治疗偏头痛的核心靶点为MAPK1、MAPK3、Akt1、PRKCA等;主要通路为神经活性配体/受体相互作用信号通路、钙离子信号通路、MAPK信号通路等;分子对接结果表明,MAPK1、MAPK3、Akt1、PRKCA、PRKCB、PRKCG与其映射成分具有较好的结合能力。动物实验结果显示,与空白组比较,模型组大鼠挠头次数显著增加(P<0.01),疼痛阈值显著降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠挠头次数显著减少(P<0.01),疼痛阈值显著提高(P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠血浆中CGRP、ERK2、FOS蛋白水平明显增高(P<0.05,P<0.01),三叉神经节中Akt1、ERK1/2、PRKCA蛋白水平明显增高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,各给药组血浆中CGRP、ERK2、FOS蛋白水平,三叉神经节中Akt1、ERK1/2、PRKCA蛋白水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:MXFT抗偏头痛具有多成分-多靶点-多通路的特点,其作用机制可能与抑制血管扩张、减少炎症因子释放、抑制神经元过度活跃等多途径发挥作用。