犬种布氏菌地方株的DNA中G+Cmol%测定

首次利用热变性法对9株地方犬种布氏菌DNA的G+C含量进行了测定,同时以2株国际标准株为对照。G+C mol％值在56.6～58.4范围内,与文献报道的犬种布氏菌和我们所用的2株标准株所得的G+C mol％值是一致的。各株菌经常规检定、噬菌体裂解试验、血清学检查所得的结果均符合于犬种布氏菌的特性。说明本试验测定的G+C mol％值代表了犬种布氏菌的DNA分子结构比值。为我国地方菌种、特别是粗糙型布氏菌的检定提供了一个新的方法。此外,对传统的DNA提取法进行了改进,使之更便于本试验的要求。

反相高效液相色谱法测定色盐杆菌新种ST307的DNA G+C mol%含量

目的:使用反相高效液相色谱法测定色盐杆菌新种ST307的DNAG+Cmol%含量。方法:以Escherichia coli DH5α为标准菌株,采用90%重蒸水10%甲醇为流动相,检测波长260nm,流速1ml.min-1,在VenusilM P C18柱上对四种碱基进行分离。结果:DNA碱基分离效果好,以外标法计算得到标准菌株DH5α的DNAG+Cmol%含量为50.3%,待测菌株ST307的DNAG+Cmol%含量为60.5%。结论:采用反向高效液相色谱法测定色盐杆菌的DNAG+Cmol%含量准确可靠。

高效反相液相色谱测定致龋菌DNAG+Cmol%

目的 :鉴定变形链球菌和远缘链球菌临床分离株。方法 :采用苯酚氯仿混合法提取纯化 46株变链菌和远缘链球菌分离株的DNA ,采用高效反相液相色谱法测定细菌DNAG +Cmol%。结果 :30株变链菌和 16株远缘链球菌分离株的DNAG +Cmol%分别为 36 2 2～ 38 81和 44 5 7～ 45 77,两者差异大于 5 % ,并与国际参考菌株变链菌Ingbritt和远缘链球菌 6 715的G+Cmol%一致。结论 :DNAG +Cmol%测定可作为细菌分类学的重要指标。

绿脓杆菌基因组DNA G+Cmol%含量的测定

目的 探讨绿脓杆菌基因组DNA的提取及测定G +Cmol%含量的方法。方法 采用巨量法与微量法相结合的方法 ,首先提取绿脓杆菌和大肠杆菌K1 2 的染色体DNA ,再用DNAG +Cmol%测定装置测定Tm值 ,并计算绿脓杆菌G +Cmol%。结果 提取了高纯度的绿脓杆菌染色体DNA ,并计算出G +Cmol%为 6 3.40 %。结论 本方法灵敏度和准确度高 ,可作为细菌分类和菌种鉴定的一种重要指标。

弯曲菌属DNA的G+Cmol%测定的初步研究

用热变性温度法测定14株弯曲菌DNA的碱基组成,结果表明,该菌属的DNA在0.1ssc缓冲液中的热变性温度为63.4～64.8℃,G+C mol%在27.9～30.8之间。空肠弯曲菌和结肠弯曲菌DNA的G+C mol%无明显差别。

高效液相色谱法测定红树林放线菌DNA的(G+C)mol%含量

应用高效液相色谱法测定了放线菌的(G+C)mol%,并就有关分析条件和DNA水解条件进行了优化选择。以Escherichia.coli DH5α作为标准菌株,实验室分离鉴定的8株红树林放线菌作为待测菌株,采用流动相为20mmol/LKH_2PO_4缓冲液(pH 5.6):甲醇(体积比90:10),检测波长为260 nm,流速为1 ml/min,柱温为35℃,分析时间15 min对4种碱基进行分离。结果表明:标准碱基溶液的pH值、流动相的组成和pH值是影响各碱基色谱峰分离和峰形的主要因素。在优化选择的条件下测定,DNA碱基分离效果好,无杂峰干扰,以峰面积计算得到标准菌株Escherichia coli DH5α的(G+C)mol%为54.9694%与已经报道的差异不显著;待测菌株的(G+C)mol%均在菌株所在科或属下的(G+C)mol%范围内;采用酸水解放线菌的DNA可缩短鉴定时间,步骤简明。实验结果充分显示高效液相色谱法测定放线菌(G+C)mol%快速、准确、结果稳定,是放线菌分类鉴定的一种可靠方法。

反相高效液相色谱法测定一株新分离的两歧双歧杆菌DNA G+C摩尔百分含量

建立了用反相高效液相色谱法测两歧双歧杆菌 DNA G+ C 摩尔百分含量的方法. 采用 20 mmol·L-1KH2PO4(pH 5 6)缓冲液—甲醇(体积比90∶10)为流动相, 检测波长260 nm, 流速1 mL·min-1, 在Kromasil C18柱(5μm, 250 mm×4.6 mm i d )上对各碱基进行分离, 以峰面积计算, 计算值和文献值相符.

变形链球菌和远缘链球菌耐氟菌株DNAG+C含量测定

目的 探讨变形链球菌和远缘链球菌耐氟菌株基因型是否发生改变。方法 采用高效液相色谱法测定变形链球菌和远缘链球菌及相应耐氟菌株DNA碱基含量 ,即DNAG +C摩尔百分比 (mol% )。结果 四株耐氟菌株DNAG +Cmol%为 5 4.45 ,44 .86 ,5 4.41,5 5 .39;相应亲代菌株G +Cmol%为 35 .8,37.4,43.35和 46 .6 2。两者明显不同 ,差值大于 5 %。结论 变形链球菌和远缘链球菌的耐氟菌株已发生基因型改变 ,且可能包括多个基因的突变。

球壳孢目真菌DNAGC含量及其分类学意义

利用热变性温度法测得球壳孢目5属14种19个菌株DNAG十Cmol％的变化范围为48．08～53．7，平均值为51.12，与文献报道的丝孢菌类的平均值接近，也与子囊菌的平均值相差不大，提示该类群的种类及其与大多数丝孢菌间在系统演化上似具一定的同源性，与形态分类对半知菌的处理相吻合，也为其有性阶段大多属子囊菌这一事实提供了佐证；各属、种GC值接近，且相互间有交叉，种内菌株间差异小于2％，方差分析显示属间差异不显著，故认为GC含量分析不宜用于球壳孢目属、种级分类单位的划分，但可作为排除性指标辅助某些种类的否定性判定。

用DNAG+C含量和DNA同源性测定法鉴定米克戴德军团菌

本文采用热变性温度法和液相复性速率法对—轻型特征及血清学反应相似米克戴德军团菌(Lm)的菌株进行了测定,结果表明该菌与标准Lm(C DC株)的DNA G+Cmol％相差3.45％,与标准Lm(C DC株)的DNA同源性达81.99％,根据伯杰细菌鉴定手册(1984),可判定该菌株与标准Lm(C DC株)为遗传型一致的类群,即从遗传学角度证明该菌为Lm。

一株碱性淀粉酶产生菌Bacillus flexus XJU-3的分离鉴定及酶学特性分析(英文)

【目的】从新疆石河子市一处碱性工业污水（pH11．0）分离、鉴定高产碱性淀粉酶菌株，并对其所产酶酶学特性进行研究。【方法】在碱性淀粉酶分离培养基上对所分离菌株进行筛选，分离到一株高产碱性淀粉酶菌株，并将其编号XJU-3。应用生理生化试验，脂肪酸含量，16SrDNA序列以及（G＋C）mol％含量等方法对菌株进行鉴定，同时对XJU-3所产碱性淀粉酶的生物学特性进行研究。【结果】XJU-3可在pH4．0～12．5的LB培养基上生长，最适生长温度37℃。16SrDNA序列构建的系统进化树表明XJU-3与Bacillus flexus类聚在一起，且序列同源性为99％。该菌产生的淀粉酶最适pi110．0，最适温度40℃，且在pH9．0～13．0内有较高活性和稳定性。Co^2＋和Mg^2＋能明显提高酶的活性。【结论】XJU-3被鉴定为Bacillus flexus，由于XJU-3与B．flexus DSM 1320^γ在尿素水解和优势脂肪酸含量上有差异，且具有宽范围pH耐受性，因此XJU-3被认为是B．flexus的一个新菌株。XJU-3所产的碱性淀粉酶酶学特性良好，具有极大的工业应用潜力。

不同立克次体DNA的G+Cmol%含量分析

本文以普氏斑疹伤寒立克次体和斑点热立克次体为参照,对我国斑点热立克次体分离株的代表株 DNA 的 G+C mol%含量进行了分析比较,结果指出,斑疹伤寒群与斑点热群立克次体的 G+C mol%含量不同,分别为29.1和32.05;国内分离的精河株和内-01株分别为32.7和32.4,与参照的斑点热立克次体 Barbash 株(32.5)基本一致,054株的 G+C mol%是30.6,低于斑点热群的 G+C mol%数值,高于斑疹伤寒群的含量,揭示了该株 DNA 的 G+C 含量的特殊性,这是否意味着054株的特殊分类地位或是否是新种有待深入研究。

兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及其免疫原性检测

2004年,山东省某一大型养兔场的20~30日龄幼兔突然大批发病死亡。病兔早期精神不振,多数病兔鼻腔流出脓性鼻液,随着病程的延长逐渐表现为呼吸困难,并出现鼻鼾声,以体况瘦弱,腹泻为主要症状。从中主要分离到4株细菌,根据其形态学特性、培养特性、生化特性、血清学反应特性等将分离菌鉴定为兔支气管败血波氏杆菌。然后对所分离到的兔支气管败血波氏杆菌菌株进行(G+C)mol%含量的测定以及16SrRNA的扩增,结果(G+C)mol%含量为61.7%~62.4%,与Kersters K结果相符(61.6%~62.6%);而该菌16SrRNA核苷酸序列与GenBank中收录的AF177666株禽波氏杆菌核苷酸序列同源性为82.7%,与本实验室保存的禽波氏杆菌及兔败血波氏杆菌参考菌株S80103株同源性高,分别为99.7%和99.9%。利用所分离到的兔支气管败血波氏杆菌菌株制备免疫原,通过免疫孕前母兔,使仔兔获得母源抗体,而使幼仔兔获得早期保护,效果较好。

一个甲烷杆菌新种的描述和系统分类学研究

从清华大学环境科学系处理北京啤酒厂污水的厌氧消化器中分离到一株产甲烷菌菌株Px1。其菌体形态为弯曲杆状 ,淡黄色菌落 ,只利用H2 +CO2 产生甲烷。通过生理、形态、结构特征与 1 6SrDNA序列的同源性分析 ,表明菌株Px1是甲烷杆菌属中一个与其它成员不同的新种 ,命名为弯曲甲烷杆菌 (Methanobacteriumcurvumsp .nov .)。

棉花黄萎病高效拮抗菌XJUL-6的筛选鉴定及其特性研究

为探讨棉花黄萎病高效拮抗菌的拮抗机制，从新疆有毒植物掀麻（Urtica cannabina L．）中筛选出一株对棉花黄萎病具有较强抗性的内生菌XJUL-6，对其生物学特性进行初步研究，结果表明，36℃～38℃为最适生长温度，pH6～8为最适生长pH值。根据其形态特征、生理生化检测、16SrDNA、（G＋C）mol％，将其鉴定为蜡状芽孢杆菌，XJUL-6的获得为进一步的研究棉花黄萎病高效拮抗菌的拈抗机制提供了实验材料。

制品生产用及地方疑难布氏菌DNA基因同源性的研究

本文以布氏菌19株国际标准菌种为对照,对国内外实验室参考菌种14株及地方疑难菌种11株结合常规方法进行了DNA G+Cmol％测定,同时以羊种菌M16 DNA为标准,与布氏菌所有种和型的24个代表株及8株地方疑难菌种进行了DNA-DNA杂交测定,布氏菌及地方疑难菌种的G+Cmol％值范围为54.1～59.3,M16株与布氏菌参考菌种的杂交率81.7～109％,与地方疑难菌种的杂交率除一株为72.1外,其余为84.2～109％,属高度同源,鉴定为布氏菌。本试验首次使用进口新仪器“PEKIN LAMBDA 17UV/Vis SPECTROPHOTOMETER”采用热变性法测DNA G+Cmol％,复性速率法进行DNA-DNA杂交,使杂交的DNA样品变性和复性在同一比色杯中进行,省去半导体点温计操作带来的麻烦,减小了实验误差,缩短测时,结果精确、操作简便、重复性好。

分子生物学方法在污染土壤微生物多样性研究中的应用

综述了应用于污染土壤微生物多样性分析的各种分子生物学方法 ,包括DNA中mol%G +C丰度的分析、核酸杂交技术、DNA复性动力学研究及基于PCR技术的DNA指纹图谱分析等方法。

一株高效高温菌的筛选初步鉴定和性质研究

从高温堆肥物料中通过平板培养法分离、纯化并筛选出一株高效高温菌YB16.YB16具有同时分解淀粉、蛋白质、油脂和纤维素等大分子有机物的能力.经鉴定YB16为革兰氏阳性,杆状,有芽孢,好氧,G＋C mol%为50.66%,初步鉴定YB16属于芽孢杆菌属.pH生长范围为6.0～9.0,最适生长温度为65℃左右.

利用遗传特征实现微生物基因序列聚类分析

文章提出了一种使用微生物遗传特征来进行基因序列聚类的方法。该方法首先从每条基因序列中划分出若干个等差长度的采样片断,然后利用各采样片断的遗传特征DNA(G+C)mol%值来作为基因序列聚类的依据。试验结果表明该方法是可行的,并且具有较好的聚类质量。

O139霍乱弧菌生物学特性研究

１９９２年以来，许多国家和地区先后暴发了Ｏ１３９霍乱大流行。本文从微生物学和分子遗传学的角度对来自不同地区的四株Ｏ１３９霍乱弧菌的生物学特性进行了研究。结果表明四株Ｏ１３９霍乱弧菌均呈典型弧形、单端单鞭毛，培养要求不高、耐碱，固体平板上菌落呈不透明。电镜下显示有菌毛、荚膜结构。有较广的抗生素敏感谱及霍乱Ｈｅｉｂｅｒｇ氏Ⅰ群的糖发酵能力。ＤＮＡＧ＋ＣＭＯＬ％测定值均在霍乱弧菌范围之内且数值接近。质粒图谱检测发现四株中有三株含有一个４．１０ＭＤａ大小的质粒，而另一株不含质粒。Ｏ１３９霍乱弧菌的生物学特性大多数与Ｏ１群菌相似，两者重大的区别在于Ｏ１３９菌具荚膜结构。