UV-B辐射对拟南芥细胞周期G1/S期转变的影响

以同步化的拟南芥(Arabidopsis thaliana)根尖细胞为材料,研究了UV-B辐射对拟南芥细胞周期G1/S期转变的影响。细胞周期荧光显微图像分析表明,UV-B辐射延缓了拟南芥根尖细胞G1/S期的转变。基因表达的RT-PCR检测表明,在UV-B辐射下G1/S期转变的标志基因Histone H4和E2Fa的表达受抑制,而G1/S期转变的抑制因子KRP2基因表达则受诱导上调。单细胞凝胶电泳检测结果表明,UV-B辐射引起拟南芥根尖细胞内积累大量的环丁烷嘧啶二聚体。以上结果表明,UV-B辐射抑制植物的生长可能受细胞周期和DNA损伤调控。

流体切应力促成骨细胞通过细胞周期G1/S调控点机制的研究

[目的]探讨流体切应力(FSS)促成骨细胞增殖、分化作用与细胞周期从G1期向S期转化机制的关系,为确立最佳生理应力刺激骨再生提供依据。[方法]从KM乳鼠颅盖骨提取原代成骨细胞,在体外流体小室内分别受FSS(12dyn/cm2)作用0、0.25、0.5、1、2、4h,通过MTT法分析细胞增殖能力,并利用碱性磷酸酶(ALP)的表达评价其分化能力;通过流式细胞仪、免疫荧光染色和RT-PCR测定细胞周期G1/S百分比、细胞周期依赖激酶2和4(CDK2、CDK4)的活性改变及E2F1、p27mRNA的表达实现FSS促成骨细胞由G1期转向S期的测定。[结果]FSS促增殖作用在短期(0.25h、0.5h)明显,并且细胞生长曲线前移;但在1、2、4h却有明显抑制增殖作用。FSS同样增加了ALP的活性,尤其在应力作用0.25、0.5h时显著(比对照达128%和158%);而应力作用1、2、4h后减低了ALP的表达。在FSS作用1h内细胞周期S期百分比增高,作用0.5h后与对照组比较明显增高(P<0.05);但随着时间的增加细胞周期S期百分比开始下降,当作用时间持续4h后S期百分比下降明显(P<0.05)。流体切应力增加了活化pRb的CDK2、CDK4的活性,而且与CDK2相关的E2F1表达量也明显增加;而细胞周期依赖激酶抑制剂p27在流体切应力作用下有所下降。其中流体切应力在0.25h、0.5h明显增加了E2FlmRNA的表达水平(P<0.05),此效应在作用1h后减退。[结论]适宜的流体切应力通过上调CDK2、CDK4及E2F1,下调p27,使细胞从G1期转化到S期,在流体切应力促成骨细胞增殖、分化机制中起重要作用;并且这种作用有明显的FSS作用时间限制性。

G1/S检测点调控机制研究进展

G1/S检测点是细胞增殖的关键步骤,细胞在该点对DNA损伤、各类信号传导因子等复杂的细胞内外信号进行整合和传递,决定细胞是否进行分裂或发生凋亡.G1/S检测点的调控涉及到正性调控子(如CDK-cyclins和E2Fs)与负性调控子(如CDKIs)间相互作用,蛋白质泛素化、CDC25、信号转导系统等对其调控也至关重要.以下针对G1/S检测点调控机制研究的最新进展作一综述.

P15^(INK4B)高表达对人黑色素瘤细胞G1/S进程的阻滞及与MAPK信号相关性之初探

利用TdR-N_2O同步法分别获得P15高表达的MLIK6和表达空载体的MLC2的M期细胞和G_1期细胞,~3H-TdR掺入结果显示,与对照组细胞MLC2相比,实验组细胞MLIK6从G_1期进入S期时间延长2h,并且掺入强度明显减弱,DNA合成被抑制。进一步观察了P15^(INK4B)对G_1/S相关调控蛋白的影响,在M期细胞释放8h(晚G_1期细胞)后,与对照组MLC2细胞相比,实验组MLIK6细胞中CyclinD1,CyclinE,Cdk4,C-Myc蛋白水平均降低。相反,P27^(KIP1)的表达却上升。同时探讨了MAPK信号在P15^(INK4B)阻抑A375细胞G_1/S转换中的作用与相关性,结果显示晚G_1期的MLIK6细胞中ERK1,ERK2水平变化不大,而具有活性的P-ERK1和P-ERK2均表现出下降。上述实验表明,P15^(INK4B)可能通过作用于G_1期相关的周期调节蛋白和抑制ERK1和ERK2活性,阻滞G_1/S转换与抑制DNA合成。

G1/S检测点调控与癌变

细胞周期G1/S期转换受G1/s检测点的调控,其功能由周期素D、E、A及相应的CDKs和CKIs综合作用所决定。检测点功能的正常发挥保证了机体细胞有序地增殖及遗传信息的稳定。相反,其功能的失控使细胞积累突变,最终致肿瘤的生成。如何调整肿瘤细胞的检测点功能则是近期肿瘤治疗的热点。

β_2受体阻滞剂诱导胰腺癌细胞G1/S期阻滞的实验研究

目的研究β_2受体阻滞剂ICI118,551诱导胰腺癌细胞G1/S期阻滞及其相关机制。方法应用β_2受体阻滞剂ICI118,551和β_1受体阻滞剂美托洛尔干预胰腺癌细胞,通过流式细胞仪检测细胞周期、Western blot技术检测β_2受体阻滞剂对细胞周期调节蛋白Cyclin D1和Cyclin E表达的影响,EMSA技术检测核转录因子NF-κB的活性,构建裸鼠肾包膜下移植瘤模型检测肿瘤增殖情况。结果 ICI118,551可显著诱导胰腺癌细胞G1/S期阻滞,并显著优于美托洛尔组(P<0.05);ICI118,551干预组抑制Cyclin D1和Cyclin E的表达,并可抑制NF-κB的活性;裸鼠肾包膜下移植瘤实验显示ICI118,551可显著抑制胰腺癌细胞的增殖。结论β_2受体阻滞剂ICI118,551可有效诱导胰腺癌细胞G1/S期阻滞,抑制胰腺癌细胞的增殖。

在鼻咽癌细胞中EB病毒LMP1调控G1/S检测点重要相关蛋白的转录

目的在Tet-on-LMP1 HNE2鼻咽癌细胞中探讨EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(LMP1)调控p16和cyclin D1的转录.方法采用Western blot方法、荧光素酶报道系统和RT-PCR方法检测在DOX诱导下不同时间点p16和cyclin D1的启动子活性和转录.结果LMP1可下调p16启动子活性和mRNA表达;同时上调cyclin D1启动子活性和mRNA表达.结论在Tet-on-HNE2鼻咽癌细胞中EB病毒LMP1在转录水平调控G1/S检测点重要相关蛋白p16和cyclin D1的表达.

细胞周期素D与G1/S检测点相关信号传导途径

细胞周期素D(cyclin D)家族的3位成员,是最先启动细胞周期G1/S检测点调控的周期蛋白因子。研究发现,cyclin D家族的作用机制与众多癌基因、抑癌基因信号传导途径均存在着密切联系。本文就目前已知的细胞G1/S检测调控点与cyclin D相关信号传导途径的进展作一综述。

肺岩宁颗粒干预细胞周期G_1/S检测点调控信号抗Lewis肺癌细胞增殖的研究

目的观察肺岩宁颗粒对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长、肿瘤细胞周期分布,以及G1/S检测点调控信号RB-E2F1生物轴的影响。方法采用C57BL/6小鼠,造模并随机分为6组:模型组、顺铂组、肺岩宁煎剂组(煎剂组)、肺岩宁颗粒低剂量组(低剂量组,0·3g)、肺岩宁颗粒中剂量组(中剂量组,0·6g)、肺岩宁颗粒高剂量组(高剂量组,1·2g)。造模后顺铂组1、3、5天腹腔注射顺铂0·1mg,其他各组分别灌胃给药14天,观察各组治疗后抑瘤率、瘤重、体重,流式细胞术检测细胞周期时相分布,RT-PCR测定肿瘤组织视网膜母细胞瘤蛋白(RB)-腺病毒E2启动子结合转录因子(E2F1)的mRNA表达,Western blot检测RB、E2F1蛋白表达。结果各用药组瘤重低于模型组(P<0·05,P<0·01),中剂量组体重明显高于模型组和顺铂组(P<0·05,P<0·01)。流式细胞术发现中剂量组的G0/G1比例较模型组、顺铂组和煎剂组显著增多(P<0·01),癌细胞增殖指数明显降低(P<0·01,P<0·05)。RT-PCR显示中剂量组E2F1mRNA水平明显低于模型组、顺铂组和煎剂组(P<0·01);中剂量组RBmRNA表达明显高于模型组、顺铂组和煎剂组(P<0·01)。Western blot分析显示中剂量组较模型组和顺铂组明显抑制E2F1蛋白表达(P<0·05),并较模型组、顺铂组和煎剂组明显增加RB蛋白表达(P<0·05)。结论肺岩宁颗粒抑制Lewis肺癌肿瘤生长与干预细胞周期时相分布有关,能使癌细胞较多的阻滞在细胞周期G0/G1期,通过抑制E2F1,增强RB表达,从而干预细胞周期G1/S检测点信号通路中RB-E2F1生物轴实现抗肺癌增殖。

胃癌细胞周期G1/S转换期基因表达谱的分析

目的检测胃癌细胞在DNA合成前期/DNA合成期(G1/S)交界点基因表达谱的变化,探讨胃癌细胞由G1期进入S期相关基因的调控作用。方法应用胸腺嘧啶核苷(thymidine)-偌考达唑(nocodazole)及双胸腺嘧啶核苷(doublethymidine)法分别阻断胃癌细胞株(MKN45)于DNA合成后期/有丝分裂期(G2/M)及G1/S交接点释放后收集标本,应用cDNA微阵列基因芯片检测细胞周期中G1早期、G1末期、S早期及S晚期的基因表达谱,专业软件进行聚类分析。结果检测到4个时间点均可信的2001个基因,其中959个基因出现上调或下调。147个基因在G1末期出现上调,其功能涉及DNA代谢、转录与翻译、翻译后修饰、泛素化、信号转导等,这些过程在不同环节上影响细胞周期。结论多基因参与胃癌细胞周期G1期至S期的转换,且为其转换所必需,部分参与以上过程的基因与胃癌过度增殖有关。

肺岩宁颗粒对Lewis肺癌细胞周期G1/S检测点信号通路中MDM2-P53生物轴的影响

目的:观察肺岩宁颗粒对Lewis肺癌小鼠细胞周期G1/S检测点信号通路中MDM2-P53生物轴的影响。方法:采用C57BL/6小鼠,造模并随机分为6组:模型组、顺铂组、肺岩宁煎剂组、肺岩宁颗粒低剂量组、肺岩宁颗粒中剂量组、肺岩宁颗粒高剂量组,进行相应药物干预。观察各组抑瘤率、瘤重、体质量、去瘤体质量,流式细胞术检测细胞周期时相分布,RT-PCR测定肿瘤组织MDM2、P53的mRNA表达。结果:肺岩宁颗粒中剂量组瘤重显著低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01),与顺铂组比较差异无统计学意义。肺岩宁颗粒中剂量组体质量与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与顺铂组比较,体质量明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);肺岩宁颗粒中剂量组去瘤后体质量显著高于煎剂组、模型组、顺铂组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。流式细胞术发现肺岩宁颗粒中剂量组的G0/G1比例较模型组和顺铂组显著增多,癌细胞增殖指数也明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR显示肺岩宁颗粒中剂组MDM2 mRNA水平明显低于模型组、顺铂组、煎剂组,差异有统计学意义(P<0.01);肺岩宁颗粒中剂组P53 mRNA表达明显高于模型组、顺铂组和煎剂组,差异有统计学意义(P<0.01)。肺岩宁颗粒高剂量组无小鼠存活,考虑与颗粒剂溶解度有关。结论:在Lewis肺癌模型中,调节细胞周期G1/S检测点信号通路MDM2-P53生物轴可能是肺岩宁颗粒抗肺癌增殖的重要途径之一。

有氧运动对大鼠外周血EPCs G_1/S转换信号通路相关基因mRNA表达的影响

目的:研究有氧运动对EPCs细胞周期关键转换点G1/S转换信号通路相关基因mRNA表达的影响,从分子水平探讨有氧运动影响外周血EPCs增殖的机制。方法:两月龄雄性SD大鼠20只,按体重分层随机分为空白对照组和有氧运动组.。采用递增负荷跑台运动,每天训练1次,每周6天,由15 m/min(持续25 min)递增至26 m/min(持续50 min),跑台坡度为10%,共训练8周。运动方案结束后,采集大鼠外周血得到单个核细胞并诱导其分化获取EPCs,培养12天后收集贴壁EPCs进行全基因组检测,检测结果采用GeneSpring11.0芯片软件进行分析,对运动组与对照组相比差异表达基因进行信号通路分析。运动组/对照组基因差异表达倍数大于2倍视为表达具有差异,且表达上调;对照组/运动组基因差异表达倍数大于2倍视为表达具有差异,且表达下调。结果:在G1/S转换信号通路的10个相关基因中,Fbxo5 mRNA、Ccne1 mRNA、Orc1lmRNA、Dhfr mRNA、Pola1 mRNA、Pcna mRNA表达上调,Tyms mRNA、Cdc45l mRNA、Cdc6mRNA、Cdt1 mRNA无明显改变。结论:有氧运动可通过改变EPCs细胞周期G1/S转换相关基因Fbxo5、Ccne1、Orc1l、Dhfr、Pola1、Pcna mRNA表达,促使细胞增殖的关键点由DNA合成前期向DNA合成期转化,并为DNA的复制做充分准备,有利于EPCs细胞周期的缩短。

ALA-PDT对SW480结肠癌细胞周期阻滞作用及对G_1/S关卡调控因子的影响

目的:了解光动力疗法对结肠癌SW480细胞的周期阻滞作用与G1/S关卡调控因子之间的联系. 方法:对体外培养的SW480结肠癌细胞进行ALA-PDT实验,使用流式细胞仪技术观测基于δ-氨基乙酰丙酸的光动力疗法对SW480细胞的细胞周期阻滞作用,应用免疫细胞化学技术检测光动力疗法对G1/S关卡调控因子Chk2,P21wAF1/Cip1/Sdi1,CyclinD1蛋白表达的影响. 结果:基于δ-氨基乙酰丙酸的光动力疗法可在其作用后早期诱导SW480细胞产生G0-G1细胞周期阻滞,G0/G1期比例显著增加,而S期和G2/M期比例明显下降,且呈时间依赖性变化;光动力作用诱导SW480细胞G1/S关卡调控因子Chk2,P21wAF1/Cip1/Sdi1蛋白表达增高,降低CyclinD1 蛋白表达,与G1/S期阻滞进程相一致,均呈时间依赖性变化. 结论:基于δ-氨基乙酰丙酸的光动力疗法可诱导SW480 细胞产生G0-G1细胞周期阻滞,光动力疗法对SW480细胞的G0-G1期阻滞作用与其对多个G1/S关卡调控因子的调节事件有关.

G_1/S限制点的调控与肿瘤的发生

肿瘤的特征之一是细胞生长失控,这种失控与细胞周期异常密切相关,因而细胞周期重要的调节因子在肿瘤研究中越来越受到人们的重视,尤其G1/S限制点的调控已成为当前肿瘤学研究的热点之一。本文就G1/S点调控网络中细胞周期素依赖性激酶抑制因子16(P16)-细胞周期素D1(cyc linD1)-细胞周期素依赖性激酶4/6(CDK4/6)、视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)途径中几个重要调控因子功能与肿瘤的关系作一综述。

白花地胆草单体EM-12诱导2774-C10细胞G1/S期阻滞及细胞凋亡的分子机制研究

目的：研究白花地胆草（Elephantopus mollis H.B.K.）的乙醇提取物EM-12抗肿瘤作用分子机制。方法：MTT检测EM-12对卵巢癌细胞活性影响;克隆形成抑制实验检测EM-12对卵巢癌细胞增殖能力的影响;GO功能分析（gene ontology analysis）分析EM-12对卵巢癌2774-C10细胞的影响;PI单染检测细胞周期;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blotting检测细胞凋亡、周期相关蛋白。结果：MTT实验结果表明,EM-12可以显著抑制卵巢癌细胞的活性;RNASeq及GO功能分析表明EM-12诱导2774-C10发生G1/S期阻滞;克隆形成抑制实验结果表明,EM-12可以显著抑制卵巢癌细胞的增殖;流式细胞术结果表明,随着药物浓度的增加,凋亡率逐渐增加,并且G1期细胞比例逐渐增加,S期细胞比例减少,发生G1/S期阻滞。Western blotting结果表明,随着药物浓度的增加cyclin E2、cyclin D1、CDK2、CDK6蛋白水平下降,并伴随caspase-8、caspase-3活化及多聚ADP核糖聚合酶PARP酶切失活。结论：EM-12诱导卵巢癌细胞发生G1/S期阻滞,且通过死亡受体通路诱导细胞凋亡。

细胞周期G_1/S期调控元件异常与卵巢癌关系研究进展

细胞周期调控需要有多个元件参与,起关键作用的在于G1/S期调控元件,包括p21,p27,p53,p16,p15,CyclinE,CyclinD,CDK2,CDK4和CDK6等。对卵巢癌组与正常对照组的研究常发现在卵巢癌组有p53高表达且p21低表达,或p27低表达,或p16和p15缺失,或CyclinD1过度表达,表明这些因素与卵巢癌的发生、发展有关。对卵巢癌预后指标的研究发现p53高表达且p21缺失,或p16和p15缺失,或CyclinD1高表达,或CyclinE高表达与患者预后差显著相关,而p16和p15缺失组或p21低表达组常表现为对铂类化疗不敏感。

健骨颗粒通过G_1/S期调控蛋白对成骨细胞增殖的影响

目的观察健骨颗粒对成骨细胞G_1/S期调控的影响,探讨健骨颗粒促进成骨细胞增殖的作用机制。方法制备健骨颗粒血清组、模型血清组和雌二醇血清组。采用酶消化法培养SD大鼠成骨细胞,健骨颗粒含药血清干预,以模型血清和雌二醇血清为对照。运用流式细胞术检测成骨细胞增殖周期,荧光定量PCR法检测成骨细胞G_1/S期调控蛋白Cyclin E、CDK2、p21和转录因子E2F-1 m RNA的表达。结果 15%的雌二醇血清与健骨颗粒血清干预48 h,成骨细胞增殖速度均明显快于模型血清组(P<0.01);G_0/G_1期成骨细胞比例明显降低(P<0.01),S期、G_2/M期细胞比例及增殖指数则明显高于模型血清组(P<0.01);与模型血清组比较,雌二醇血清组与健骨颗粒血清组能提高成骨细胞Cyclin E、CDK2及转录因子E2F-1 m RNA的表达(P<0.01),而降低p21的表达(P<0.01)。结论健骨颗粒通过调节成骨细胞G_1/S期调控机制,推进成骨细胞顺利通过G_1/S检测点,促进成骨细胞增殖。

PKC刺激与抑制对HeLa细胞G_1/S期进程的影响

蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫＣ）是一类分布广泛的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，在真核细胞的跨膜信号传递中发挥重要的作用［１］．而细胞周期进程是一个复杂的调控过程，受控于多种磷酸酶与磷酸激酶作用下的中心调控体系［２］．大量报道表明ＰＫＣ信号...

温心方对动脉粥样硬化大鼠G1/S细胞周期转换的调控作用

目的:观察温心方对动脉粥样硬化(AS)大鼠第一间歇期/合成期(G1/S)细胞周期转换关键靶点的作用,揭示温心方治疗AS的作用机制。方法:无特定病原体(SPF)级Wistar大鼠90只,随机分为正常组6只和造模组84只,模型组给予高脂饲料(4%胆固醇,0.5%胆酸钠,0.2%丙基硫氧嘧啶,10%猪油,5%白糖,80.3%基础饲料)喂养60 d,每7 d腹腔注射40万U·kg^(-1)维生素D3,连续3次。成模大鼠随机分为模型组、温心方高、中、低剂量组及瑞伐舒他汀组,每组6只,温心方高、中、低剂量组及瑞伐舒他汀组分别给予24,12,6 g·kg^(-1)温心方水煎剂及1.8 mg·kg^(-1)瑞舒伐他汀灌胃治疗30 d,模型组灌胃等量蒸馏水。治疗后观察各组大鼠一般情况,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),总胆固醇(CHO),计算粥样硬化指数(AI),苏木素-伊红染色观察冠状动脉及主动脉病理形态,蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测主动脉E2F转录因子1(E2F1),磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白(p-Rb),细胞分裂周期因子25(Cdc25),细胞周期素E(CyclinE),细胞周期素D1(CyclinD1)蛋白及mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠冠状动脉及主动脉内膜增厚,平滑肌增殖,粥样斑块形成,HDL-C水平显著降低(P<0.01),LDL-C,CHO,AI水平显著升高(P<0.01),主动脉E2F1,Cdc25,p-Rb,CyclinE,CyclinD1蛋白及基因表达均有所上升(P<0.05);与模型组比较,温心方各剂量组及瑞伐舒他汀组大鼠冠状动脉及主动脉内膜增生及管腔变窄不明显,LDL-C,CHO,AI水平显著降低(P<0.01),主动脉E2F1,Cdc25,p-Rb,CyclinE,CyclinD1蛋白及基因表达均有不同程度的下降(P<0.05)。结论:温心方可显著抑制AS大鼠主动脉G1/S细胞周期关键调控蛋白及基因表达,调控G1/S细胞周期转换,减轻血管平滑肌及内膜增生。