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CA-4类衍生物LGD5诱导人宫颈癌HeLa细胞发生G2/M周期阻滞和凋亡的机制研究
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作者 庞丽丽 胡莹 +2 位作者 罗洁 涂勤 陈岷 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1100-1109,共10页
目的:探究微管抑制剂CA-4类衍生物LGD5对人宫颈癌HeLa细胞的作用机制。方法:选用HeLa细胞,分为空白组、CA-4阳性对照组、不同浓度的LGD5组成实验组。采用MTT法考察LGD5对HeLa细胞的生长抑制情况并确定实验浓度,采用倒置显微镜和吖啶橙... 目的:探究微管抑制剂CA-4类衍生物LGD5对人宫颈癌HeLa细胞的作用机制。方法:选用HeLa细胞,分为空白组、CA-4阳性对照组、不同浓度的LGD5组成实验组。采用MTT法考察LGD5对HeLa细胞的生长抑制情况并确定实验浓度,采用倒置显微镜和吖啶橙染色观察用药前后HeLa细胞形态学变化及细胞凋亡情况,采用DAPI免疫荧光染色考察LGD5对微管的作用,采用PI流式细胞术考察LGD5对细胞周期的影响,采用蛋白免疫印迹法考察LGD5对细胞周期蛋白和凋亡相关蛋白的影响。结果:MTT实验结果显示LGD5抑制HeLa细胞的生长抑制具有时间依赖性和剂量依赖性。定时拍照和吖啶橙染色观察到LGD5诱导HeLa细胞发生凋亡,并产生明显的染色质凝集和凋亡小体。DAPI染色观察到LGD5抑制HeLa细胞的微管聚合。PI流式细胞术结果显示LGD5诱导HeLa细胞发生G2/M周期阻滞,在12 h内具有时间依赖性和剂量依赖性,且差异有统计学意义(P<0.01),24 h以后引起细胞凋亡且具有时间依赖性;Western blot结果显示,LGD5下调Cdc2和Cdc25C,上调p-Cdc2、Cyclin B1和p-histone H3,进一步验证LGD5诱导HeLa细胞发生G2/M周期阻滞,除此之外,LGD5使HeLa细胞Caspase 3表达增加,上调Caspase 9和Bax,下调Pro-caspase 9和Bcl-2,说明LGD5诱导HeLa细胞凋亡与线粒体途径有关。结论:CA-4类衍生物LGD5可抑制HeLa细胞的微管聚合,诱导其发生G2/M周期阻滞,进而通过线粒体途径诱导细胞发生凋亡。 展开更多
关键词 CA-4 微管 肿瘤 g2/m细胞周期阻滞 细胞凋亡 作用机制
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RRM2通过干扰前列腺癌细胞G2/M周期促进肿瘤进展 被引量:1
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作者 周亮 潘玉龙 +3 位作者 乔超 陈永江 卓晖 李强 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2023年第4期351-358,共8页
目的探讨RRM2基因对前列腺癌的影响及机制。方法下载TCGA前列腺癌表达谱数据,分析RRM2基因与前列腺癌临床病理的相关性及生存预后情况;前列腺癌组织芯片(55例)及良性组织标本(38例)进行免疫组化染色验证RRM2在前列腺癌组织中的表达情况... 目的探讨RRM2基因对前列腺癌的影响及机制。方法下载TCGA前列腺癌表达谱数据,分析RRM2基因与前列腺癌临床病理的相关性及生存预后情况;前列腺癌组织芯片(55例)及良性组织标本(38例)进行免疫组化染色验证RRM2在前列腺癌组织中的表达情况;生物信息学方法了解RRM2对前列腺癌影响的生物学过程;进一步通过Western blot(WB)、流式细胞术验证RRM2影响前列腺癌进程的生物学过程。结果TCGA数据库和免疫组化结果显示RRM2在前列腺癌中上调表达,且其表达关系和前列腺癌临床分期、病理分级、转移正相关(P<0.05)。高表达RRM2预示患者较差的生存预后。生物信息学显示RRM2共表达正相关基因主要涉及细胞周期通路、嘧啶核苷酸代谢、RNA转运等生物学过程,其中细胞周期途径显著富集。RRM2和细胞周期CDK1、PCNA分子相关性较高。WB实验结果显示干扰RRM2后可减少前列腺癌DU145和LNCap细胞系CDK1和PCNA蛋白表达;流式细胞术实验显示干扰RRM2后前列腺癌DU145和LNCap细胞周期阻滞在G2/M期。结论RRM2干扰前列腺癌细胞G2/M周期,促进了肿瘤进展。 展开更多
关键词 前列腺癌 RRm2 细胞周期g2/m CDK1 PCNA
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基于TCGA数据库的肺腺癌G2/M检查点基因预后模型的建立与应用
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作者 周而乐 佟美辰 +3 位作者 崔敏 苏娜娜 李红 曹璋 《滨州医学院学报》 2023年第2期88-94,共7页
目的基于癌症基因组图谱(TCGA)数据库建立肺腺癌(LUAD)的G2/M检查点相关基因风险预后模型。方法通过TCGA数据库获取并整合了LUAD基因表达数据及临床数据,根据Reactome定义的G2/M检查点相关基因集筛选出影响预后的G2/M检查点相关基因,通... 目的基于癌症基因组图谱(TCGA)数据库建立肺腺癌(LUAD)的G2/M检查点相关基因风险预后模型。方法通过TCGA数据库获取并整合了LUAD基因表达数据及临床数据,根据Reactome定义的G2/M检查点相关基因集筛选出影响预后的G2/M检查点相关基因,通过单因素和多因素COX分析建立风险预后模型,对模型高、低风险组进行生物学标志基因集和KEGG通路富集的差异分析并进行免疫相关性分析。结果预后模型由7个基因组成,该模型生存预测性能的AUC值为0.726。高风险组的总体生存率明显低于低风险组(P<0.05)。细胞增殖的相关通路在高风险组中富集。风险评分的增高与多种免疫细胞的浸润比例存在一定相关性(P<0.05)。结论由7个基因组成的风险预测模型可作为独立预测因子来有效预测LUAD的预后。 展开更多
关键词 肺腺癌 g2/m检查点相关基因 预后 癌症基因组图谱
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一种兼容5G模块和SSD的M.2 KEY B接口设计 被引量:1
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作者 张绮文 蔡阳 +1 位作者 庞观士 陈志列 《机电工程技术》 2023年第6期254-256,共3页
为解决M.2 KEYB接口兼容性、减少板内空间的问题,根据M.2 KEYB的规范,分析每个PIN定义的信号特性,使USB3.0信号和SATA信号互不干涉,对USB3.0模块和SATA模块与M.2 KEYB接口的兼容性开展设计。检测M.2 KEYB接口接入模块类型,根据检测模块... 为解决M.2 KEYB接口兼容性、减少板内空间的问题,根据M.2 KEYB的规范,分析每个PIN定义的信号特性,使USB3.0信号和SATA信号互不干涉,对USB3.0模块和SATA模块与M.2 KEYB接口的兼容性开展设计。检测M.2 KEYB接口接入模块类型,根据检测模块的类型切换接口的工作电压。利用基本输入输出系统配置一个GPIO信号控制M.2 KEYB接口的供电电压,当接入USB3.0模块时,设计GPIO为高电平,供电电压为3.3 V;当接入SATA模块时,设计GPIO为低电平,供电电压为3.6 V。采用5G模块试验对USB3.0模块进行论证,SATA模块用固态硬盘进行验证。结果表明:所提出的M.2 KEYB接口设计方法,能够很好地兼容USB3.0模块和SATA模块。 展开更多
关键词 m.2 KEYB BIOS 5g 固态硬盘
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G2/M期P53/CDK1通路对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响 被引量:9
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作者 张瑞涛 史惠蓉 +3 位作者 任芳 曹媛 姬鹏程 王文文 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第4期502-508,共7页
目的探讨细胞周期G2/M期P53-P21WAF1-细胞周期依赖激酶1(cyclin dependent kinases 1,CDK1)通路与上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的关系。方法分别将CDK1、p53基因特异性shRNA质粒及阴性对照质粒转染卵巢上皮性癌SK-OV-3、OVCAR-3细胞,MTT... 目的探讨细胞周期G2/M期P53-P21WAF1-细胞周期依赖激酶1(cyclin dependent kinases 1,CDK1)通路与上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的关系。方法分别将CDK1、p53基因特异性shRNA质粒及阴性对照质粒转染卵巢上皮性癌SK-OV-3、OVCAR-3细胞,MTT法、TUNEL法和FCM法分别检测细胞增殖、凋亡和细胞周期分布情况,Western blot法分别检测各组细胞中CDK1、磷酸化CDK1(Thr14/Tyr15)、P53、p-P53(ser15)、P21WAF1、Cyclin B1以及增殖和凋亡相关蛋白Ki-67、Survivin、Caspase3蛋白的表达。结果分别沉默CDK1、p53基因后,SK-OV-3和OVCAR-3细胞增殖受到抑制、凋亡增加、G2期细胞数目增加;Ki-67、Survivin蛋白表达减少,cleaved-Caspase3蛋白表达增加。此外,沉默p53基因可引起p-P53(ser15)和P21WAF1蛋白表达减少、p-CDK1(Thr14/Tyr15)蛋白表达升高。结论 G2/M检验点P53/CDK1信号通路可能参与卵巢癌上皮性细胞增殖和凋亡的调节。 展开更多
关键词 g2/m检验点 细胞周期依赖激酶1 卵巢上皮性癌 增殖 凋亡
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CHK1-CDK1通路介导的G2/M检验点对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响 被引量:3
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作者 张瑞涛 史惠蓉 +4 位作者 任芳 王文文 姬鹏程 刘传娜 陈晨 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2018年第2期159-165,共7页
目的:探讨检查点激酶1(CHK1)-细胞周期依赖激酶1(CDK1)信号通路异常与上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的关系。方法:分别将CDK1、CHK1基因特异性shRNA质粒及阴性对照质粒转染卵巢上皮性癌SK-OV-3、OVCAR-3细胞,分别采用MTT法和流式细胞术检... 目的:探讨检查点激酶1(CHK1)-细胞周期依赖激酶1(CDK1)信号通路异常与上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的关系。方法:分别将CDK1、CHK1基因特异性shRNA质粒及阴性对照质粒转染卵巢上皮性癌SK-OV-3、OVCAR-3细胞,分别采用MTT法和流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡情况,分别采用RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中CDK1和CHK1的表达情况,采用Western blot法检测各组细胞中p-CDK1、Cyclin B1、p-CHK1(ser345)、CDC25C、p-CDC25C以及增殖和凋亡相关蛋白PCNA、Ki-67、Caspase8、Cleaved-Caspase3的表达情况。结果:分别沉默CDK1、CHK1基因后,SK-OV-3和OVCAR-3细胞增殖受到抑制、凋亡率增加;PCNA、Ki-67蛋白表达减少,Caspase8、Cleaved-Caspase3蛋白表达增加(P<0.05)。此外,沉默CHK1基因可引起p-CHK1和p-CDC25C表达减少、p-CDK1蛋白表达升高(P<0.05)。结论:CHK1-CDK1信号通路介导的G2/M检验点参与调节卵巢癌细胞的增殖和凋亡。 展开更多
关键词 细胞周期依赖激酶1 g2/m检验点 卵巢上皮性癌 增殖 凋亡
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Skp2参与HeLa细胞G_2/M周期检查点的调控 被引量:3
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作者 钱俊杰 孙国敬 +5 位作者 孟祥兵 宋宜 梅柱中 刘斌 董燕 孙志贤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期575-580,共6页
具癌基因特性的Skp2在大多数肿瘤组织和肿瘤细胞中异常高表达,它作为SCFSkp2复合物的底物识别亚基调控p27KIP蛋白的稳定性而促进细胞G1/S期转换.为进一步明确Skp2与G2/M周期检查点的关系,在HeLa细胞中过表达Skp2以及通过反义寡核苷酸抑... 具癌基因特性的Skp2在大多数肿瘤组织和肿瘤细胞中异常高表达,它作为SCFSkp2复合物的底物识别亚基调控p27KIP蛋白的稳定性而促进细胞G1/S期转换.为进一步明确Skp2与G2/M周期检查点的关系,在HeLa细胞中过表达Skp2以及通过反义寡核苷酸抑制Skp2表达.结果发现:Skp2能促进细胞周期运转,表现为S期细胞增多和G2/M期细胞减少,其中F-box结构域具有重要的功能意义;反义寡核苷酸抑制Skp2表达后,HeLa细胞发生显著的G2/M期阻滞;MTT检测结果表明,400nmol/L的Skp2的反义寡核苷酸能明显抑制HeLa细胞的增殖活性;Western印迹结果表明,HeLa细胞中Skp2可能通过负调控p21WAF的稳定性来参与G2/M检查点调控,这在用放线菌素D处理HeLa细胞的实验中得到验证.这些结果初步揭示了Skp2参与HeLa细胞G2/M周期检查点调控的分子机制. 展开更多
关键词 SKP2 g2/m周期检查点 p21^WAF
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金雀异黄素抑制人胃癌细胞增殖与G_2/M期阻滞作用的体外研究 被引量:5
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作者 崔洪斌 宋丹凤 +2 位作者 那晓琳 迟晓星 金滨峰 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期10-13,共4页
目的 : 研究金雀异黄素 (genistein,Gen)对人胃癌 SGC-790 1细胞增殖抑制作用及对细胞周期的影响。方法 : 采用3H-Td R掺入液闪计数法观察 Gen对人胃癌细胞增殖影响 ,流式细胞仪分析细胞周期分布 ,免疫组化和 Western Blotting分别检... 目的 : 研究金雀异黄素 (genistein,Gen)对人胃癌 SGC-790 1细胞增殖抑制作用及对细胞周期的影响。方法 : 采用3H-Td R掺入液闪计数法观察 Gen对人胃癌细胞增殖影响 ,流式细胞仪分析细胞周期分布 ,免疫组化和 Western Blotting分别检测 cyclin B、P2 1 waf1 / cip1 蛋白表达情况。结果 :  Gen对胃癌细胞生长有显著抑制作用 ,使细胞生长停滞于 G2 / M期 ,并使细胞cyclin B、P2 1 waf1 / cip1蛋白表达增加 ,且呈剂量 -效应关系。结论 :  Gen在此剂量下抑制胃癌细胞增殖、诱导 G2 / M期阻滞与其稳定 cyclin B蛋白和上调 P2 1 waf1 / cip1 展开更多
关键词 金雀异黄素 胃癌细胞 抑素增殖 g2/m期阻滞
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Gadd45介导抑癌基因BRCA1诱导的G_2/M期阻滞 被引量:8
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作者 宋咏梅 童彤 +4 位作者 付明 董立佳 金顺钱 吴旻 詹启敏 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第5期517-521,共5页
背景与目的:目前已经肯定,抑癌基因BRCA1是细胞周期监测点调控的重要因子,但BRCA1在细胞周期阻滞中的作用机制尚不完全清楚。本研究的目的是探讨Gadd45在BRCA1诱导的细胞周期阻滞中所起的作用。方法:应用转染、流式细胞仪细胞筛选(分选)... 背景与目的:目前已经肯定,抑癌基因BRCA1是细胞周期监测点调控的重要因子,但BRCA1在细胞周期阻滞中的作用机制尚不完全清楚。本研究的目的是探讨Gadd45在BRCA1诱导的细胞周期阻滞中所起的作用。方法:应用转染、流式细胞仪细胞筛选(分选)、Westernblot检测分析BRCA1诱导Gadd45的表达;利用CAT酶活性测定的方法检测外源BRCA1对Gadd45启动子所起作用;以流式细胞周期分析方法检测反义Gadd45转染对BRCA1诱导的细胞G2/M期阻滞的影响;采用细胞生长集落形成分析反义Gadd45转染HeLa、HCT116细胞在BRCA1诱导的细胞生长抑制过程所起的作用。结果:外源转染BRCA1可诱导Gadd45蛋白的表达;BRCA1激活Gadd45启动子的转录;反义Gadd45可显著阻遏BRCA1诱导细胞G2/M期阻滞;反义Gadd45转染可明显降低BRCA1对HeLa、HCT116细胞集落形成的抑制作用。结论:Gadd45作为BRCA1的下游调控基因,在BRCA1诱导的细胞G2/M期阻滞过程和生长抑制中起介导作用。 展开更多
关键词 gadd45介导 抑癌基因 BRCAl诱导 g2/m期阻滞 作用机制
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大蒜素对人胃癌细胞SGC-7901及BGC-823G_2/M期的阻滞调节机制 被引量:9
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作者 柳星 马锐 +2 位作者 陈威 白雪蕾 袁媛 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第20期2409-2412,共4页
目的:研究大蒜素对人胃癌细胞SGC-7901及BGC-823G2/M期阻滞作用及其调节机制.方法:应用MTT法测定大蒜素对人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823细胞增殖抑制率及72h的IC50.通过流式细胞仪检测IC50浓度的大蒜素对SGC-7901和BGC-823细胞周期的影... 目的:研究大蒜素对人胃癌细胞SGC-7901及BGC-823G2/M期阻滞作用及其调节机制.方法:应用MTT法测定大蒜素对人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823细胞增殖抑制率及72h的IC50.通过流式细胞仪检测IC50浓度的大蒜素对SGC-7901和BGC-823细胞周期的影响.应用免疫组化染色检测大蒜素作用前后SGC-7901和BGC-823细胞CDC2和CyclinB蛋白表达.结果:不同浓度的大蒜素可以抑制人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823的增殖,且随着大蒜素浓度的增大,抑制率逐渐增高.大蒜素抑制SGC-7901细胞增殖50%的药物浓度(IC50):72h为23mg/L;大蒜素抑制BGC-823细胞增殖50%的药物浓度(IC50):72h为35mg/L.大蒜素作用于两种细胞,其细胞周期均发生了明显的变化,主要表现为G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞增多(SGC-7901细胞24,48hvs对照:26.47±2.54%,28.88±2.75%vs24.30±2.74%,P<0.01;BGC-823细胞24,48hvs对照:22.78±1.45%,24.87±1.61%vs20.32±1.34%,P<0.01),S期细胞无明显变化.未经大蒜素处理的两种细胞,CDC2和CyclinB蛋白表达均为阳性,大蒜素处理后,CDC2和CyclinB蛋白表达下降.SGC-7901细胞经23mg/L大蒜素处理后,CDC2蛋白相对阳性表达率为87.2%;CyclinB蛋白相对阳性表达率为59.3%.BGC-823细胞CDC2蛋白在35mg/L大蒜素作用后,相对阳性表达率为84.4%;CyclinB蛋白相对阳性表达率为62.8%,与对照组相比均有显著性差异(P<0.01).结论:大蒜素使人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823停滞于G2/M期,其机制是通过CDC2和CyclinB蛋白表达下降实现的. 展开更多
关键词 大蒜素 SgC-7901 BgC-823 g2/m期阻滞 CDC2 CyclinB 人胃癌细胞SgC-7901 BgC-823细胞 阻滞作用 m
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不同浓度Nocodazole对Hela细胞G_2/M期同步化的调节作用 被引量:5
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作者 徐秋芳 余克花 +6 位作者 易婷 黎帆 刘发娣 应颖 邹伟文 何平 黄孝天 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期284-287,共4页
目的观察不同浓度有丝分裂阻滞剂Nocodazole对Hela细胞株G_2/M期同步化的调节作用及其对纺锤体结构的影响。方法分别以3.0、1.0、0.3μmol/L Nocodazole处理Hela细胞(Nocodazole 3.0、1.0、0.3μmol/L处理组)18 h。于Nocodazole撤除后0... 目的观察不同浓度有丝分裂阻滞剂Nocodazole对Hela细胞株G_2/M期同步化的调节作用及其对纺锤体结构的影响。方法分别以3.0、1.0、0.3μmol/L Nocodazole处理Hela细胞(Nocodazole 3.0、1.0、0.3μmol/L处理组)18 h。于Nocodazole撤除后0(处理18 h)、3、6、9 h时间点收集细胞,流式细胞仪检测G_2/M期细胞百分比;间接免疫荧光染色激光共聚焦显微镜观察细胞有丝分裂器纺锤体α-微管蛋白(α-tubulin)排列。以不添加Nocodazole处理的Hela细胞作为对照组。结果Nocodazole处理18 h,Nocodazole 3.0、1.0、0.3μmol/L处理组Hela细胞G_2/M期细胞百分比分别为55.95%、51.09%和47.81%,均显著高于对照组的9.54%(P<0.05)。在Nocodazole撤除后3、6、9 h时间点,Nocodazole 3.0μmol/L和1.0μmol/L处理组G_2/M期细胞百分比无明显变化;而Nocodazole 0.3μmol/L处理组G_2/M期细胞百分比下降明显(30.43%、12.91%、10.23%),撤除后6 h时间点的G_2/M期细胞百分比与对照组比较差异已无统计学意义(P>0.05)。α-tubulin荧光染色激光共聚焦显微镜观察显示,Nocodazole撤除后Nocodazole 0.3μmol/L处理组G_2/M期细胞微管迅速再聚合形成两极纺锤体且纺锤丝结构清晰。结论Nocodazole对Hela细胞G_2/M期同步化具有调节作用;药物撤离后,0.3μmol/L Nocodazole处理组细胞周期恢复迅速且对纺锤体结构影响最小。 展开更多
关键词 NOCODAZOLE HELA细胞 细胞周期 纺锤体 g2/m
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His-tag不影响RSV重组蛋白G1F/M2的免疫原性 被引量:9
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作者 曾瑞红 王卫华 +3 位作者 房桂珍 龚伟 梅兴国 魏林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1066-1070,共5页
目的:观察His-tag是否影响RSV重组蛋白G1F/M2的免疫原性。方法:PCR扩增G1和F/M2基因片段,插入表达载体pET-His和pET-DsbA-His中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用Ni+螯合亲和层析法纯化得His-G1F/M2和DsbA-His-G1F/M2,将后者用... 目的:观察His-tag是否影响RSV重组蛋白G1F/M2的免疫原性。方法:PCR扩增G1和F/M2基因片段,插入表达载体pET-His和pET-DsbA-His中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用Ni+螯合亲和层析法纯化得His-G1F/M2和DsbA-His-G1F/M2,将后者用凝血酶消化,再经Ni+螯合亲和层析法纯化得G1F/M2,将His-G1F/M2和G1F/M2免疫BALB/c小鼠,用ELISA测定抗体滴度,MTT法测定细胞毒性T细胞活性(CTL)。结果:两种蛋白在BALB/c小鼠中诱导的RSV特异性抗体和CTL活性无显著差异。结论:His-tag不影响RSV重组蛋白G1F/M2的免疫原性。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 HIS-TAg 重组蛋白g1F/m2 免疫原性
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二烯丙基二硫化物诱导G2/M期阻滞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响 被引量:9
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作者 张瑞涛 史惠蓉 +2 位作者 任芳 刘哲颖 姬鹏程 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期43-52,共10页
目的探讨二烯丙基二硫化物(DADS)诱导G2/M期阻滞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制。方法将不同浓度的DADS分别处理卵巢癌SK-OV-3和OVCAR-3细胞,采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,裸鼠移植模型观察体... 目的探讨二烯丙基二硫化物(DADS)诱导G2/M期阻滞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制。方法将不同浓度的DADS分别处理卵巢癌SK-OV-3和OVCAR-3细胞,采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,裸鼠移植模型观察体内抑瘤效果。进而应用流式细胞术检测细胞周期分布的变化,Western blot检测细胞中G2/M检验点相关信号通路、增殖和凋亡相关蛋白的表达。结果 MTT法检测显示,不同浓度的DADS作用SK-OV-3 (F=247. 86,P=0. 000)和OVCAR-3细胞(F=302. 54,P=0. 000)后,随着DADS浓度增高,细胞增殖抑制率明显升高,呈浓度依赖性。DADS处理24 h时SK-OV-3 (F=335. 12,P=0. 000)和OVCAR-3细胞(F=347. 43,P=0. 000)的增殖抑制率明显高于处理12 h和48 h时的细胞抑制率,呈明显的时间依赖性。流式细胞术检测结果显示,不同浓度的DADS作用SK-OV-3、OVCAR-3细胞后,随着DADS浓度的增高,细胞凋亡率明显升高,呈明显的浓度依赖性(P <0. 05)。DADS处理24 h时SK-OV-3和OVCAR-3细胞的凋亡率明显高于处理12和48 h时,呈明显的时间依赖性(P <0. 05)。与空白处理组相比,腹腔注射DADS溶液可明显抑制卵巢癌细胞的裸鼠移植瘤体积(F=548. 23,P=0. 000; F=311. 84,P=0. 000)。将30 mg/L的DADS作用于SK-OV-3和OVCAR-3细胞24 h后,与空白处理细胞相比,DADS处理后的SK-OV-3和OVCAR-3细胞中处于G2期的细胞百分率明显增加(F=375. 11,P=0. 000; F=256. 48,P=0. 000)。将30 mg/L DADS分别作用于SK-OV-3和OVCAR-3细胞24 h后,p-Chk1 (ser345)(F=108. 89,P=0. 013; F=97. 58,P=0. 018)、p-CDC25C (ser216)(F=87. 25,P=0. 025; F=114. 25,P=0. 009)、p-P53 (ser15)(F=112. 41,P=0. 011; F=255. 87,P=0. 000)、P21WAF1 (F=246. 38,P=0. 001; F=141. 36,P=0. 005)和p-CDK1 (Thr14/Tyr15)蛋白(F=298. 12,P=0. 000; F=233. 15,P=0. 000)的表达明显增加,CDK1 (F=308. 24,P=0. 000; F=257. 55,P=0. 000)和Cyclin B1蛋白(F=223. 15,P=0. 001; F=241. 28,P=0. 000)的表达明显减少,增殖和凋亡相关蛋白PCNA (F=77. 36,P=0. 031; F=157. 28,P=0. 001)、Ki-67 (F=205. 64,P=0. 007; F=315. 22,P=0. 000)和Survivin蛋白(F=122. 13,P=0. 013; F=188. 24,P=0. 000)表达明显减少,Cleaved-caspase3蛋白表达明显增加(F=86. 46,P=0. 023; F=99. 11,P=0. 009)。结论 DADS可抑制卵巢癌细胞增殖,诱导其凋亡;其分子机制可能与G2/M检验点Chk1-CDC25C和P53-P21WAF1通路激活、CDK1活性降低、CDK1和CyclinB1蛋白表达减少,最终导致卵巢癌细胞G2/M期阻滞有关。 展开更多
关键词 二烯丙基二硫化物 卵巢上皮性癌 g2/m期阻滞 增殖 凋亡
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氯化两面针碱体外诱导人口腔鳞癌KB细胞G_2/M期阻滞及凋亡的研究 被引量:10
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作者 刘华钢 王博龙 +1 位作者 秦三海 杨斌 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期2104-2106,共3页
目的探讨氯化两面针碱对人口腔鳞癌KB细胞周期和凋亡的影响及相互关系。方法应用MTT比色法测定氯化两面针碱对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测氯化两面针碱对细胞周期的影响;Hoechst33258检测细胞凋亡;透射电镜观察细胞超微结... 目的探讨氯化两面针碱对人口腔鳞癌KB细胞周期和凋亡的影响及相互关系。方法应用MTT比色法测定氯化两面针碱对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测氯化两面针碱对细胞周期的影响;Hoechst33258检测细胞凋亡;透射电镜观察细胞超微结构。结果氯化两面针碱在体外呈浓度依赖性显著抑制KB细胞的生长,48hIC_(50)为(2.36±0.22)μg/ml;与空白组相比,经3μg/ml氯化两面针碱作用,G_2/M期细胞比例显著增多;6μg/ml时凋亡细胞比例最高,可见典型的核染色质凝集、碎裂;9μg/ml时,细胞凋亡率明显下降,同时镜下可见大量坏死细胞。结论氯化两面针碱抗KB细胞的方式与其剂量密切相关,低浓度时以G_2/M期阻滞为主,中浓度时诱导凋亡,高浓度时则致其坏死。 展开更多
关键词 氯化两面针碱 g2/m期阻滞 凋亡 坏死 KB细胞
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与细胞周期G_2/M期进程相关的H2AX磷酸化 被引量:7
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作者 涂文志 尚增甫 +5 位作者 李兵 刘晓丹 王豫 徐勤枝 让蔚清 周平坤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期339-345,共7页
γH2AX焦点(foci)被普遍当做DNA双链断裂(DSB)损伤的分子标志物.为探讨细胞周期进程相关的H2AX磷酸化规律特征,采用胸腺嘧啶双阻滞结合噻氨酯哒唑(nocodazole)的后续处理,将HeLa细胞同步于有丝分裂的前中期.然后,用流式细胞仪检测细胞... γH2AX焦点(foci)被普遍当做DNA双链断裂(DSB)损伤的分子标志物.为探讨细胞周期进程相关的H2AX磷酸化规律特征,采用胸腺嘧啶双阻滞结合噻氨酯哒唑(nocodazole)的后续处理,将HeLa细胞同步于有丝分裂的前中期.然后,用流式细胞仪检测细胞周期、Western印迹和免疫荧光法,观察γH2AX表达和γH2AX焦点的形成.结果显示,细胞进入G2/M期和有丝分裂过程中,γH2AX水平显著增加;在无DNA DSB发生的情况下,部分M期细胞中也存在大量的γH2AX焦点.随着细胞完成有丝分裂从M期退出再进入G1期,γH2AX的表达水平逐渐降低.这种γH2AX表达变化特征与G2/M期密切关联的PLK1和Cyclin B1的表达规律相类似.在4 Gy大剂量照射下,HeLa细胞于照后8到12 h出现明显的G2/M期阻滞.γH2AX焦点数在照后1 h达高峰,随后降低,照后8 h又上升,出现了第2个峰值.与之不同的是,在1 Gy低剂量照射下,细胞的G2/M期阻滞微弱,γH2AX焦点数在照后0.5 h最高,随后下降,且无反弹,符合DNA DSB的修复动力学特征.因此,将γH2AX当做DNA DSB分子标志物时,还需要考虑细胞周期变化的影响.γH2AX适合作为1 Gy以下照射的DNA双链断裂损伤的分子标志. 展开更多
关键词 γH2AX 细胞周期 g2/m阻滞 DNA双链断裂 分子标志物
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混合服务方式下的M_1+M_2/G/1轮询系统的平均运行周期 被引量:11
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作者 王智 于海斌 +1 位作者 宋叶琼 孙优贤 《通信学报》 EI CSCD 北大核心 2002年第7期8-18,共11页
本文给出了混合服务方式下的M1+M2 /G/1轮询系统平均运行周期的解析表达式。通过分析现有局域网协议模型的局限性,本文提出了更接近实际局域网协议的两类信息轮询系统模型,即M1+M2 /G/1系统;并且求解出该模型的平均运行周期的解析表达... 本文给出了混合服务方式下的M1+M2 /G/1轮询系统平均运行周期的解析表达式。通过分析现有局域网协议模型的局限性,本文提出了更接近实际局域网协议的两类信息轮询系统模型,即M1+M2 /G/1系统;并且求解出该模型的平均运行周期的解析表达式以及不同稳定条件下的修正解析表达式; 最后通过仿真验证了理论结果的正确性。 展开更多
关键词 m1+m2/g/1 轮询系统 混合式服务 穷尽式服务 限定式服务 平均运行周期 局域网
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葫芦素E通过诱导G_2/M周期阻滞抑制人肝癌细胞增殖 被引量:5
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作者 李艳春 张鹏飞 +3 位作者 罗杞瑜 邓意辉 马恩龙 景永奎 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期388-391,共4页
目的研究葫芦素E(cucurbitacin E,CuE)体外对人肝癌BEL7402和HepG2细胞的增殖抑制作用及机制。方法MTT法检测不同浓度CuE体外对BEL7402和HepG2细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测CuE对细胞周期分布的影响;Western blot法检测CuE对细胞... 目的研究葫芦素E(cucurbitacin E,CuE)体外对人肝癌BEL7402和HepG2细胞的增殖抑制作用及机制。方法MTT法检测不同浓度CuE体外对BEL7402和HepG2细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测CuE对细胞周期分布的影响;Western blot法检测CuE对细胞周期调节蛋白cy-clinB1、Cdc25C、Cdk1及p21表达的影响。结果CuE作用72 h可剂量依赖性地抑制BEL7402和HepG2细胞增殖;CuE(100 nmo.lL-1)作用12、24 h后可使BEL7402和HepG2细胞周期阻滞于G2/M期,并可下调Cdk1蛋白的表达,上调p21蛋白的表达。结论CuE体外可抑制人肝癌BEL7402和HepG2细胞的增殖,其增殖抑制作用与诱导G2/M周期阻滞有关。 展开更多
关键词 葫芦素E 肝癌细胞 g2/m阻滞
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DADS对Chk1/2基因高表达人胃癌MGC803细胞G_2/M期的影响 被引量:6
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作者 夏红 向姝霖 +5 位作者 曾颖 陆丽峰 刘芳 凌晖 苏波 苏琦 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期199-204,共6页
目的在建立Chk1/2基因高表达人胃癌MGC803细胞基础上,探讨DADS对Chk1/2高表达MGC803细胞G_2/M期的作用。方法分别采用集落形成实验、流式细胞术、RTPCR、Western blot等方法,检测DADS对Chk1/2高表达MGC803细胞增殖、细胞周期分布、Chk1... 目的在建立Chk1/2基因高表达人胃癌MGC803细胞基础上,探讨DADS对Chk1/2高表达MGC803细胞G_2/M期的作用。方法分别采用集落形成实验、流式细胞术、RTPCR、Western blot等方法,检测DADS对Chk1/2高表达MGC803细胞增殖、细胞周期分布、Chk1与Chk2 mRNA与蛋白、p-Chk1与p-Chk2及CDC25C与cyclinB1的表达。结果软琼脂集落形成实验显示,30 mg·L^(-1)DADS作用Chk1与Chk2高表达MGC803细胞组集落形成率均明显低于对照组与空载体组(P<0.05)。流式细胞术显示,30 mg·L^(-1)DADS作用12、24、36、48 h后,Chk1/MGC803细胞G_2/M期分别为41.3%、57.4%、68.9%、42.9%,较MGC803细胞与Chk2/MGC803细胞明显增加(P<0.05)。而Chk2/MGC803细胞与MGC803细胞差异没有显著性(P>0.05)。RT-PCR显示,Chk1/MGC803与Chk2/MGC803细胞Chk1与Chk2mRNA水平较对照组无明显变化;并且,Western blot显示,Chk1与Chk2总蛋白及p-Chk2的表达无明显改变,但pChk1呈时间依赖性上调,CDC25C与cyclinB1呈时间依赖性下调(P<0.05)。结论 DADS可阻滞Chk1/MGC803细胞于G_2/M期,与上调磷酸化Chk1和下调CDC25C与cyclinB1有关。 展开更多
关键词 二烯丙基二硫 人胃癌细胞 g2/m Chk1/Chk2激酶 CDC25C CYCLINB1
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二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞G2/M期检查点Chk1与Chk2的影响 被引量:5
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作者 陆丽峰 苏波 +5 位作者 姜浩 戴文香 向姝霖 唐海林 凌晖 苏琦 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期79-84,共6页
目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌MGC803细胞G2/M期检查点Chk1与Chk2的影响。方法流式细胞术检测细胞周期改变;Northern blot、Westernblot与免疫细胞化学检测DADS处理MGC803细胞的Chk1与Chk2表达。结果流式细胞... 目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌MGC803细胞G2/M期检查点Chk1与Chk2的影响。方法流式细胞术检测细胞周期改变;Northern blot、Westernblot与免疫细胞化学检测DADS处理MGC803细胞的Chk1与Chk2表达。结果流式细胞术分析显示,30 mg.L-1DADS呈时间依赖性阻滞MGC803细胞在G2/M期(P<0.05);Northern blot检测表明,DADS不同时间作用MGC803细胞后,Chk1与Chk2 mRNA表达与未处理组差异无显著性(P>0.05);免疫细胞化学发现Chk1与Chk2表达与未处理组无明显改变(P>0.05);Western blot DADS在不同时间对MGC803细胞Chk1与Chk2总蛋白表达无改变(P>0.05),而磷酸化的Chk1表达呈时间依赖性增加(P<0.05),但磷酸化的Chk2无明显改变(P>0.05)。结论 DADS阻滞MGC803细胞G2/M期与磷酸化Chk1有关。 展开更多
关键词 二烯丙基二硫 人胃癌mgC803细胞 g2/m 检查点 CHK1 CHK2
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蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞凋亡前G_2/M期阻滞及机制 被引量:12
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作者 孙国敬 钱俊杰 +5 位作者 孟祥兵 宋宜 张枫 梅柱中 董燕 孙志贤 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1144-1148,共5页
背景和目的:蛋白酶体(proteasome)抑制剂能够诱导多种肿瘤细胞凋亡,是一种潜在的有应用前景的抗肿瘤剂。本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂MG132(Z-Leu-Leu-Leu-CHO)诱导白血病细胞HL-60凋亡和G2/M期阻滞的机制。方法:采用荧光显微镜观察、... 背景和目的:蛋白酶体(proteasome)抑制剂能够诱导多种肿瘤细胞凋亡,是一种潜在的有应用前景的抗肿瘤剂。本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂MG132(Z-Leu-Leu-Leu-CHO)诱导白血病细胞HL-60凋亡和G2/M期阻滞的机制。方法:采用荧光显微镜观察、流式细胞术和免疫印迹研究测定MG132诱导HL-60细胞凋亡和周期阻滞及机制。结果:2μmol/L的MG132能够有效地诱导HL-60细胞凋亡,用药后24h就显现有细胞凋亡;在MG132诱导HL-60细胞凋亡出现之前有一个明显的G2/M期阻滞,加MG132后12h时G2/M期时相百分比为63.42±2.02;24h时加MG132组细胞凋亡为16.67±1.48,与对照组G2/M期时相百分比为7.29±3.01及细胞凋亡为0相比,两者之间有显著性差别(P<0.01);咖啡因CAF能够减少MG132诱导HL-60细胞出现的G2/M期阻滞,同时也减少凋亡细胞的比例;细胞周期检查点的负调控因子p21waf/cip1蛋白在加MG132处理后3h有明显的表达,但并未能检测到p53和p27蛋白。结论:MG132诱导HL-60细胞凋亡之前有一个明显的G2/M期阻滞,p21蛋白表达明显上调提示:是p21waf/cip1而不是p53或其同源蛋白参与了其中的调控。 展开更多
关键词 HL-60细胞 g2/m期阻滞 诱导 细胞凋亡 蛋白酶体抑制剂 P21蛋白 表达 负调控因子 荧光显微镜 凋亡细胞
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