自噬激活对带状疱疹后神经痛模型小鼠脊髓背角GABA能神经元凋亡的影响

目的探讨不同自噬程度对带状疱疹后神经痛(postherpetic neuralgia,PHN)模型小鼠脊髓背角GABA能神经元凋亡的影响。方法使用SPSS 19.0的随机数字发生器将48只昆明小鼠,6~8周龄,体重18~22 g,随机分为树脂毒素+自噬诱导剂组(PHN+Rapa组)、树脂毒素组(PHN组)、树脂毒素+自噬抑制剂组(PHN+3-MA组)和空白对照组(C组),每组12只。C组不做任何处理,其余各组均腹腔注射0.2μg/g树脂毒素(resiniferatoxin,RTX)制备PHN模型。在构建模型成功后,PHN+Rapa组给予1μg·kg-1·d-1的自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rapa),PHN组给予生理盐水,PHN+3-MA组给予2μg·kg-1·d-1的自噬抑制剂3-MA,连续14 d腹腔注射。检测机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)、热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)至稳定后处死各组小鼠,采用荧光Tunel法检测脊髓凋亡细胞数;提取脊髓L4~6节段组织,采用Western blot法检测抑凋亡蛋白bcl-2、促凋亡Bax和自噬相关蛋白LC3的相对表达量;免疫荧光标记脊髓背角GABA能神经元数。结果与C组比较,PHN+Rapa组、PHN组和PHN+3-MA组的LC3-II/I和Bax的蛋白相对表达量均明显升高,凋亡细胞数量明显增多,bcl-2蛋白相对表达量明显降低,脊髓背角GABA能神经元数明显减少(P<0.05);与PHN组比较,PHN+Rapa组的LC3-II/I比值和Bax的蛋白相对表达量,凋亡细胞数量明显增多,bcl-2蛋白相对表达量明显降低,脊髓背角GABA能神经元数明显减少(P<0.05)。与PHN组比较,PHN+3-MA组的LC3-II/I比值和Bax的蛋白相对表达量明显降低,凋亡细胞数量明显减少,bcl-2蛋白相对表达量明显升高,脊髓背角GABA能神经元数明显增多(P<0.05)。结论自噬过度激活可能是导致带状疱疹后神经痛脊髓背角GABA能神经元凋亡的机制之一。

单耳堵塞对蝙蝠下丘GABA阳性反应神经元的影响

已有的研究表明，单耳堵塞可以使中脑下丘神经元的听空间反应特性改变，而神经元听空间特性的形成与中枢中的周边抑制有关，是神经元的兴奋性中心区域与抑制性周边区域相互作用的结果［１］。γ－氨基丁酸（Ｇａｍｍａ－ａｍｉｎｏｂｙｔｒｉｃａｃｉｄ，ＧＡＢＡ）作为中...

两种诱导骨髓间充质干细胞向GABA能神经元分化的比较

目的比较两种体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向γ-氨基丁酸(GABA)能神经元分化的效果。方法从SD大鼠股骨骨髓中分离出BMSCs,进行培养、鉴定。用两种不同的方法进行诱导,方法一设为对照组:碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、全反式维甲酸(ATRA)诱导;方法二设为实验组:ATRA、N5,O2'-二丁酰腺苷3':5'-环磷酸(Bt2环磷腺苷)(Bt2CAMP)诱导。对分化细胞进行形态学观察和免疫荧光染色。结果两组细胞均出现类似神经细胞的形态变化,实验组细胞变化更明显。两组细胞均能表达nestin和GABA能神经元标记GAD-67,对照组与实验组表达GAD-67的阳性率分别为33.13%±5.12%和41.06%±6.32%,两组相比较具有统计学意义(P<0.05)。结论实验组定向分化为GABA能神经元的效率高于对照组。

嗅神经鞘细胞在体外培养时对GABA能神经元的作用

目的 研究嗅神经鞘细胞 (OECs)在培养状态下对GABA能神经元的存活及突起生长的影响。 方法 用原代培养的方法 ,分别进行OECs和脊髓神经元的培养 ,培养 6d后 ,将OECs接种在Millipore细胞培养板的内嵌培养皿中 ,然后置入脊髓神经元的培养板中 ,使两者进行不接触的联合培养 ,培养进行至 6d ,分别作GABA免疫细胞化学染色 ,观察突起生长情况以及GABA阳性细胞计数。 结果 与OECs联合培养组 (实验组 )GABA能神经元存活为 39 7± 6 3,对照组为 2 7 6± 2 7(P <0 0 5 ) ,并且实验组GABA能神经元染色较对照组深 ,突起长度(6 30± 112 μm)较对照组长 (2 70± 97μm) (P <0 0 1)。 结论 在体外培养状态下 ,OECs对GABA能神经元有明显的促进作用。

ERK激活对SDF-1引起的大鼠海马神经元GABA分泌抑制的影响

目的:观察细胞外调节激酶(ERK)信号通路激活对基质细胞衍生因子(SDF-1)引起离体培养的大鼠海马神经元γ-氨基丁酸(GABA)分泌的影响。方法:新生SD大鼠海马神经元离体培养,Western blot法观察ERK1/2信号通路的磷酸化水平;ELISA法和RT-PCR技术检测ERK1/2特异性阻断剂PD98059作用于离体培养的海马神经元后GABA分泌的改变;谷氨酸脱羧酶(GAD65/67)和γ-氨基丁酸转运体(GAT)的蛋白表达量及GAD65和GAT-1 mRNA表达水平。结果:SDF-1作用于海马神经元可引起ERK1/2磷酸化水平明显升高,同时加用CXCR4受体阻断剂AMD3100,可阻断SDF1引起的ERK1/2激活;SDF-1可明显抑制离体培养的海马神经元GABA的分泌,同时加用ERK1/2特异性抑制剂PD98059,可部分逆转SDF-1对GABA分泌的抑制作用;SDF-1作用于离体培养的海马神经元,可抑制谷氨酸脱羧酶GAD65和GABA转运体GAT-1 mRNA的生成;ERK抑制剂PD98059可有效翻转SDF-1的作用。Western blot结果发现SDF-1可抑制海马神经元GAT-1和GAD65/67蛋白的表达,加用ERK1/2抑制剂可部分恢复GAT-1和GAD65/67蛋白合成。结论:SDF1作用于离体培养的海马神经元CXCR4,通过激活ERK1/2信号通路进而抑制GAD蛋白表达,可能是其介导GABA分泌抑制的通路之一。

大鼠耳蜗螺旋神经节细胞GABA_A受体α_2 mRNA的表达及意义

目的 研究大鼠耳蜗螺旋神经节细胞中γ-氨基丁酸 (γ- aminobutyric acid,GABA) A受体α2 m RNA的表达并探讨其意义。方法 采用大鼠耳蜗石蜡切片 ,地高辛标记的 GABAAα2 c DNA探针 (5 4 9个碱基 ) ,抗地高辛的碱性磷酸酶检测系统 ,碱性磷酸酶显色剂 ,原位杂交检测大鼠耳蜗螺旋神经节细胞中 GABAAα2 m RNA受体的表达。结果 大鼠耳蜗中螺旋神经节细胞及其纤维均显示阳性杂交信号 ,表达 GABAAα2 受体 m RNA。骨螺旋板等其他结构不表达。作为阳性组织对照的小脑蒲肯野氏细胞和颗粒细胞的胞体及轴突表达 GABAAα2 受体。嗅上皮雌激素受体 c DNA探针阴性对照、无探针空白对照及无地高辛抗体对照的耳蜗螺旋神经节细胞及小脑组织均不表达GABAAα2 受体。结论 GABAAα2 受体位于听觉传导通路的第一级神经元——所有的 型螺旋神经节细胞及其纤维 ,强烈支持 GABA作为其递质 。

GABA对大鼠伏隔核痛反应神经元电活动的影响

目的在50只成年Wister大鼠上,观察了侧脑室(icv)注射GABA(γ氨基丁酸)后,伏隔核(NAc)痛反应神经元放电的变化和荷包牡丹碱(Bic)对GABA作用的阻断效应,从而进一步研究GABA与NAc在痛觉调制中的作用。方法采用icv注射,电脉冲强直刺激坐骨神经作为伤害性痛刺激,玻璃微电极细胞外记录痛反应神经元放电的变化。结果(1)icv注入GABA能够使正常大鼠NAc中痛兴奋神经元(PEN)痛诱发放电频率减少、潜伏期延长,而使痛抑制神经元(PIN)痛诱发放电频率增加、诱发放电完全抑制时程缩短;(2)icv注入GABAA受体拮抗剂Bic能够阻断GABA的上述效应。结论(1)外源性GABA可使正常大鼠NAc中痛反应神经元对伤害性刺激的反应减弱,表现为镇痛效应;(2)GABA的这种镇痛作用主要是通过GABAA受体介导的。该结果揭示,GABA和NAc在痛觉调制中具有非常重要的作用。

出生前人脑海马结构含GABA神经元的分布和发育

本实验采用免疫细胞化学方法研究了１４～３８ 周人胎海马结构含ＧＡＢＡ 神经元的分布和发育。主要结果有：（１）早在１４周时便有许多含ＧＡＢＡ 神经元分布于海马和齿状回各部；（２）１４～２２ 周海马脑室带和中间带含ＧＡＢＡ 神经元的密度逐渐减少，２２ 周及以后这两部位仅见少量含ＧＡＢＡ 神经元，其它层含ＧＡＢＡ 神经元的密度在出生前发育过程中呈现先逐渐减少，后逐渐增加，最后又下降的规律；（３）在各发育阶段，含ＧＡＢＡ 神经元主要分布于海马的锥体层、始层以及齿状回的多形层和门区，而含ＧＡＢＡ 神经元的密度由ＣＡ１ 区向ＣＡ３ 区逐渐降低；（４）许多含ＧＡＢＡ 纤维出现于１４～２２ 周海马分子腔隙层及１８～３８ 周海马始层；（５）在各发育阶段，海马伞内可见许多含ＧＡＢＡ 纤维和少量含ＧＡＢＡ 神经元。以上结果提示：人类海马结构在胚胎时期含ＧＡＢＡ 神经元的出现和分化较早，且在发育过程中至少部分含ＧＡＢＡ 神经元和纤维的存在是暂时性的；至少部分传出纤维含有ＧＡＢＡ。

马桑内酯致痫大鼠海马区GABA和Glu在神经元和神经胶质内时空变化研究

目的观察马桑内酯致癫痫鼠脑海马内不同时间段兴奋性神经递质谷氨酸与抑制性神经递质γ-氨基丁酸在神经元与神经胶质之间的时空变化情况。方法采用免疫细胞化学方法对癫痫发生不同时间段的鼠脑海马区进行GABA和Glu的标记。结果癫痫发作前期及间歇期,海马区GABA和Glu在神经胶质内聚集明显,而癫痫发作期,GABA和Glu在神经元内聚集明显。结论癫痫发作过程中,GABA和Glu存在一个从神经胶质转移到神经元后再转移到神经胶质的过程,这个时空变化提示可以从阻断这种转移方面开辟癫痫治疗的新途径。

海马神经元活化产物对大鼠GABA(α_1)受体表达的影响

目的 :通过研究体外培养的海马神经元被戊四氮活化后的产物与癫痫的关系 ,探讨惊厥发作前癫痫形成的机制。方法 :将神经元活化产物注入大鼠的侧脑室 ,观察大鼠行为、脑电图及GABA(α1)受体免疫组织化学反应的改变。结果 :实验组注射神经元活化产物后 10～ 30min大部分大鼠出现 2～ 3级惊厥反应 ,EEG呈短程、中高幅尖波、尖慢复合波 ;对照组行为及EEG未见异常 ,实验组GABA(α1)受体免疫组化反应呈阳性的细胞明显少于对照组。结论 :神经元活化产物具有致痫作用 ,可通过抑制GABA(α1)

GABA神经元在金黄地鼠视觉中枢的分布

本文用免疫细胞化学技术研究了GABA在金黄地鼠视觉中枢的分布特征,同时用统计学方法作了定量分析,结果表明:GABA阳性神经元分布在整个视皮层和上丘中,呈不均匀分布,外膝体中GABA阳性神经元密度较低.视皮层中GABA阳性神经元密度为781mm^2,占视皮层细胞总数的19.7%,上丘中其密度为812/mm^2,占22.3%,视皮层Ⅰ层中GABA阳性神经元为52%,上丘表层(浅灰层及视觉层GABA阳性神经元为56%,GABA阳性神经元包括不同类型的细胞.在视皮层中可观察到GABA免疫疫应阳性的锥体细胞.

GABA对大鼠下丘脑薄片室旁核神经元放电活动的影响

目的:观察γ-氨基丁酸 (GABA )对室旁核神经元 (PVN)放电活动的影响 ,并探讨其作用机理。 方法 :用玻璃微电极细胞外记录了 GABA对 6 0个大鼠脑薄片 111个室旁核神经元 (PVN)放电活动的影响。结果:GA-BA可以使 98个 PVN中的 73%放电频率明显减少甚至停止 ,具有浓度依赖性 ,此反应可以部分被 GABAA 受体的竞争性拮抗剂荷包牡丹碱所拮抗。另外 GABAB受体的选择性激动剂苯氯丁氨酸也可明显抑制 PVN的放电活动。结论:GABA对室旁核神经元的放电活动具有明显的抑制作用 ,是通过 GABAA 和

体外培养新生大鼠海马神经元GABA-A受体通道的电生理学特性

目的研究体外培养大鼠海马神经元在发育过程中,GABA-A受体离子通道的电生理学特性的变化规律。方法用膜片钳记录仪在体外培养的不同时期,记录大鼠海马神经元GABA-A受体离子通道全细胞通道电流、电导的变化。结果海马神经元GABA-A受体全细胞离子通道平均电流,在培养的第3天、第7天、第10天分别为12.04±3.12、18.21±3.68和20.15±4.03 pA,相对于第3天,第7天和第10天分别增加了50%和70%。平均电流从10%到90%的上升时间为2.93±0.23 ms,电流衰减呈现单指数衰减,衰减的时间常数为16.39±4.23ms。离子通道电导,在膜电位钳制于氯反转电位以下时为20.60±2.46 pS,反转电位以上时为50.83±8.51 pS。结论体外培养海马神经元的GABA-A受体全细胞离子通道平均电流随培养时间延长逐渐增加,到培养10时达最大,同时离子通道电导在不同钳制电位下显著不同。

封闭环境对C57BL/6J小鼠听功能及听皮层GABA能神经元凋亡的影响

目的探讨封闭环境对老年性聋动物模型C57BL/6J小鼠听皮层GABA能神经元凋亡的影响。方法构建封闭环境,将2、10月龄C57BL/6J小鼠(实验组,各20只)放入其中,并将另2、10月龄C57BL/6J小鼠各20只设立为开放环境对照组,饲养2月后比较不同环境各组动物ABR反应阈变化,免疫荧光法及tunel法检测听皮层GABA能神经元凋亡水平。结果实验组各频率ABR阈值明显高于对照组,尤其以高频明显(P<0.05);tunel检测证实实验组动物听皮层GABA能神经元凋亡显著增多。结论封闭环境能促进老年性聋动物模型C57BL/6J小鼠听皮层GABA能神经元的凋亡,可能是老年性聋的重要环境因素。

猕猴颈髓的GABA能神经元分布

应用免疫组织化学方法观察猕猴颈髓的γ-氨基丁酸 (GABA)能神经元的分布。观察结果 :除第 层外 ,在脊髓 Rexed - 层可见 GABA样免疫反应的胞体和纤维 ,标记的 GABA胞体为卵圆形、三角形和多角形 ,可分为大、中、小型 ,在 、 、 、 、 层 GABA阳性胞体较多。 GABA阳性纤维以后角处最多。白质内也有 GABA免疫反应阳性的胶质细胞和神经纤维。结果提示

猕猴黑质GABA能神经元的分布

采用进化程度较高的灵长类动物猕猴作为实验材料 ,在光镜下观察黑质的 GABA能神经元。在黑质网状部GABA能神经元数量多 ,以多角形和梭形为主 ,致密部的 GABA能神经元较网状部略稀少 ,胞体形态以多角形、圆形和梭形为主 ;在下丘平面还可见到许多

单眼剥夺对金黄地鼠视觉中枢GABA神经元分布的影响

用免疫细胞化学技术观察了单眼剥夺后金黄地鼠视觉中枢GABA神经元分布的变化。结果表明:单眼剥夺后,金黄地鼠视皮层和上丘的GABA阳性神经元暂时性增多,但剥夺后六个月,其数目显著减少。在单眼剥夺前和剥夺后侧膝体中GABA阳性神经元数目没有明显差异。剥夺眼对侧视皮层GABA阳性神经元数比剥夺眼同侧视皮层GABA神经元数目少。单眼剥夺后视觉中枢GABA神经元类型及形态与剥夺前没有差别。晚期单眼剥夺也能引起视觉中枢GABA神经元数量和分布的变化。以上结果表明,单眼剥夺后视觉中枢抑制神经元的结构发生了变化。

GABA对大鼠束旁核痛抑制神经元电活动的影响

目的本实验采用电生理学方法,通过观察侧脑室注射γ-氨基丁酸(GABA)、荷包牡丹碱(Bicuculline,Bic)对大鼠束旁核(PF)痛抑制神经元(PIN)电变化的影响,从而进一步研究GABA与PF在痛觉调制中的作用及其相互关系。结论本实验结果证明:1)外源性GABA可使正常大鼠PF中痛反应神经元对伤害性刺激的反应减弱,表现为镇痛效应;2)GABA的这种镇痛作用主要是通过GABAA受体介导的。该结果揭示,GABA和PF在痛觉调制中具有非常重要的作用。

脊髓蛛网膜下腔注射GABA对大鼠丘脑束旁核痛反应神经元放电的影响

本文观察了脊髓蛛网膜下腔注射GABA对大鼠丘脑束旁核痛兴奋神经元(PEN)和痛抑制神经元(PIN)放电的影响并与脑室注射GABA的作用进行了比较。结果表明,脊髓蛛网膜下腔注射GABA可引起PEN诱发放电明显增加,潜伏期缩短;PIN抑制时程延长。脑室注射GABA对神经元放电的影响与脊髓蛛网膜下腔注射GABA所得结果相反。提示,GABA作用于中枢神经系统不同部位对痛觉的影响不同。

刺激延髓背角诱发的小鼠脑干网状结构内向Vmo投射的GABA能神经元突触后反应的电生理学研究

本实验利用谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白(GAD67-GFP)基因敲入小鼠制备离体脑片,结合TMR逆行束路追踪技术,在荧光镜和红外镜头下,利用膜片钳全细胞记录的方法对电刺激延髓背角(即三叉神经脊束核尾侧亚核,Vc)诱发的小鼠小细胞网状结构(PCRt)内GABA能和TMR逆标的运动前神经元的突触后反应及其反应类型、药理学特征进行系统的研究。结果显示:(1)高频刺激(20 Hz)Vc,在PCRt内GFP和TMR双标的运动前神经元上可记录到兴奋性的突触后电流(EP-SCs),波形显示为单突触反应;(2)电压钳记录模式下,α-氨基羟甲基恶唑丙酸受体(AMPA受体)拮抗剂氨基-2-硝基喹啉-2,3-二酮(CNQX)及N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA受体)阻断剂D,L-2-氨基-5-磷酸基戊酸(AP-5)均可显著降低刺激Vc所诱发的小鼠PCRt内GFP和TMR双标神经元的EPCSs的幅值;(3)电流钳模式下,刺激Vc,在PCRt内GFP和TMR双标的神经元上记录到兴奋性突触后电位,其幅度与刺激强度在一定范围内呈正相关。以上结果提示,小鼠PCRt内向三叉神经运动核(Vmo)发出投射的GABA能运动前神经元可通过其细胞膜上AMPA受体或NMDA受体的介导,对口面部伤害性信息发挥整合和调控作用,以实现对口面部伤害性反射活动的精确调节。