家蝇与大鼠GABA受体抑制剂的药效团模型及其3D-QSAR研究

采用 DISCOtech方法 ,用 7个大鼠 γ-氨基丁酸 (GABA) A 受体抑制剂和 1 1个家蝇 GABAA 受体抑制剂分别建立了其药效团模型 ;用 Co MFA方法建立了 2 2个大鼠 GABAA 受体抑制剂和 2 9个家蝇 GABAA 受体抑制剂的 3 D-QSAR模型 ,模型的交叉验证相关系数分别为 0 .5 2 6和 0 .679,验证了药效团模型的合理性 。

安定对大鼠脊髓损伤的保护作用及GABA_A受体拮抗剂对此作用的影响

应用大鼠脊髓挤压伤模型来研究安定对大鼠挤压伤模型脊髓损伤后的保护作用,及GABAA受体拮抗剂bicuculline对此作用的影响。实验大鼠分为对照组、安定组、安定联合bicuculline组及bicuculline组,应用大鼠脊髓挤压伤模型观察药物作用72h后各组大鼠脊髓损伤体积变化。结果显示对照组大鼠脊髓损伤体积为(18.21±1.14)mm3;安定组大鼠脊髓损伤体积为(12.11±1.61)mm3,明显小于对照组(P<0.01);安定联合bicuculline组大鼠脊髓损伤体积为(16.34±1.59)mm3,大于安定组(P<0.01),但仍小于对照组(P<0.01);bicuculline组大鼠脊髓损伤体积为(18.45±1.98)mm3;与对照组相比无明显差异(P>0.05)。结论安定可明显减轻大鼠脊髓挤压损伤后的脊髓损伤程度,而GABAA受体拮抗剂bicuculline可拮抗此作用,说明安定通过与GABAA受体结合,可提高GABA与GABAA受体的结合力,从而上调GABA的抑制作用,减少谷氨酸的兴奋性毒性作用以达到保护脊髓的作用。

咖啡因对大鼠背根神经节急性分离神经元GABA-激活电流的抑制作用

应用全细胞膜片钳记录技术,在大鼠新鲜分离背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元上,观察预加咖啡因对GABA-激活电流(I_(GABA))的调制作用。实验中,大部分受检细胞(97.4%,113/116)对外加GABA敏感。1～1000μmol/L GABA引起一剂量依赖性、有明显去敏感作用的内向电流。在受检的108个DRG细胞中,约有半数(53.7%,58/108)对胞外加咖啡因(0.1～100μmol/L)敏感,产生一幅值很小的内向电流。预加咖啡因(0.1～100μmol/L)30s后再加GABA能明显抑制GABA(100μmol/L)激活电流的幅值。预加咖啡因后GABA量效曲线明显下移;GABA-激活电流的最大值较之对照下降约57%;而K_d值(30μmol/L)几乎不变,表示此种抑制为非竞争性的。预加安定(diazepam,1μmol/L)对GABA(100μmol/L)激活电流有增强作用,而预加咖啡因(10μmol/L)有拮抗安定增强I_(GABA)的作用。胞内透析H-8后,几乎可以完全消除咖啡因对I_(GABA)的抑制作用。已知GABA作用于初级感觉神经元能引起初级传入去极化,因而实验结果提示,咖啡因有可能在初级传入末梢产生对抗突触前抑制的效应。

GABA_A受体与地西泮的缺血后脑保护作用有关

研究GABAA受体是否参与地西泮的缺血后脑保护作用。SD雄性大鼠24只,用光化学法制作脑梗死模型。根据给药的不同将动物随机分为4组,每组6只。地西泮组腹腔注射地西泮10mg/kg;地西泮+bicuculline组腹腔注射地西泮10mg/kg和bicuculline2.1mg/kg;bicuculline组腹腔单独注射bicuculline2.1mg/kg;对照组腹腔注射等量的生理盐水。从术前24h开始注射,每8h一次,直至处死。术后动物存活24h,然后在深麻下灌流固定、取脑、切片。在Nissl染色的切片上计算最大脑梗死面积,用TUNEL染色计数梗死区凋亡细胞数。地西泮组最大脑梗死面积和TUNEL阳性细胞数明显少于其它三组(P<0.01)。地西泮的脑保护作用可被GABAA受体拮抗剂bicuculline部分抵消,因而地西泮可能部分通过GABAA受体发挥脑保护作用。

GABA_A受体在爪蟾卵母细胞的表达

目的 将鼠源γ 氨基丁酸A型 (GABAA)受体表达于爪蟾卵母细胞膜上并行功能测定。方法 微量注射仪将纯化的大鼠脑mRNA注入准备好的爪蟾卵母细胞内并于 19℃温浴 48h以上使其表达 ;使用常规双电极电压钳记录卵母细胞表达的受体特性。结果 爪蟾卵母细胞注射大鼠脑mRNA 48h后有GABAA 受体的表达 ,此受体具有天然GABAA 受体的氯通道特性。结论 爪蟾卵母细胞具有表达外源GABAA 受体的特性 ,是研究GABAA 受体生理和药理功能的一种重要工具。

咪唑安定对大鼠海马CA1区锥体神经元GABA_A受体的作用

目的 :研究咪唑安定 (midazolam ,MZ)对急性分离大鼠海马CA1区锥体神经元γ 氨基丁酸受体A型(GABAA)的作用。方法 :采用制霉菌素穿孔膜片钳技术。结果 :无GABA时 ,MZ不能单独诱发内向电流 ;GABA能诱发可被GABAA 受体拮抗剂荷包牡丹碱 (bicuculline,BIC)阻断的电流IGABA,0 0 1～ 30 μmol/L能增强IGABA,使GABA浓度效应曲线平行左移 ,但不改变IGABA的最大反应值 ,用标准细胞外液洗脱后 ,电流可恢复至给药前水平。结论 :MZ不能直接激活GABAA 受体 ,但能通过增强GABA的作用调控该受体 ;海马CA1区的GABAA

GABA_A和GABA_B受体介导的蟾蜍背根神经节神经元胞体膜反应

实验在蟾蜍离体背根神经节(DRG)标本进行细胞内记录。浴槽滴加10^(-4)-10^(-3)mol/LGABA引起膜电位改变如下:(1)去极化(79/100);(2)双相反应;先为去极化,继后为超极化(10/100);(3)无反应(11/100)。以上去极化反应均可为荷包牡丹碱所阻断。GABA-去极化时膜电导增加,逆转电位值为-15——25mV。低Cl^-和高Cl^-任氏液分别使GABA-去极化反应增大和减小。10^(-4)mol/Lbaclofen不引起膜电位改变。在GABA-去极化期间,观察到大部分细胞的动作电位时程(ApD)缩短。ApD的此种变化可为baclofen所模拟,但不为荷包牡丹碱所阻断。结果提示:蟾蜍DRG神经元胞体膜有GABA_A和GABA_B受体共存,前者介导膜电位的改变,后者介导ApD的缩短。本文并联系到初级传入终末的突触前抑制的产生机制进行了讨论。

锌离子对急性分离的大鼠骶髓后连合核神经元GABA_A受体介导电流的抑制作用(英文)

采用制霉菌素穿孔膜片箝技术，研究了锌离子（Zn2+）对急性分离的大鼠骶髓后连合核神经元GABAA受体介导电流的作用。结果表明：（1）在箝制电压为-40mV时，GABA可通过GABAA受体介导产生内向电流；（2）此电流可被Zn2+呈非电压依赖性可逆地阻断；（3）在Zn2+存在的情况下，GABA的浓度-效应曲线平行右移。上述结果提示，Zn2+可能通过变构调控机制对GANAA介导的反应产生抑制作用。

含GABA_A受体α_6亚单位mRNA神经元在大鼠脑内的生后发育

用原位杂交组织化学方法观察了大鼠小脑皮质和耳蜗核中含ＧＡＢＡＡ受体α６亚单位ｍＲＮＡ神经元的生后发育过程。结果发现小脑在生后发育中，杂交信号在生后第５ｄ最早出现于内颗粒层，在生后第２１ｄ达到高峰并持续至成年期。但在外生发展始终未见到阳性信号。在耳蜗核中，α６亚单位ｍＲＮＡ到生后第７ｄ方出现，其表达水平在此后的阶段内迅速增加，从生后第１４ｄ开始，杂交信号的增强趋于缓慢，至生后第３ｗ达到成年水平。α６亚单位ｍＲＮＡ在小脑及耳蜗核的生后发育早期即有较强表达，提示其与上述两个系统的成熟过程有关。

GABA_A和GABA_C受体各亚单位基因在鲫鱼视网膜内的分布──原位杂交组织化学法研究

应用原位杂交组织化学技术，利用同位素［￣（３５）Ｓ］－ｄＡＴＰ标记的寡核苷酸探针，在鲫鱼视网膜观察了含ＧＡＢＡＡ受体α１、α３、α４、α６，β１－３，γ１－２及ＧＡＢＡＣ受体ρ１亚单位ｍＲＮＡ的神经元分布。在外核层，所有测试的亚单位均无表达；而在内核层和神经节细胞层，除α４和γ２亚单位外，均有不同程度的表达。在不同区域标记神经元的数量和标记强度各不相同，α１亚单位广泛分布在内核层的远端、中部及神经节细胞层，呈强阳性；α３亚单位相对稀少，主要分布在内核层近端和神经节细胞层，呈中等阳性；α４和α６亚单位几乎无阳性表达，仅α６亚单位在神经节细胞层呈弱阳性。β１和β２亚单位在内核层及神经节细胞层呈中等阳性；β３亚单位主要分布在内核层，在神经节细胞层标记细胞较少，呈弱阳性。γ１亚单位分布在整个内核层，在神经节细胞层有零星阳性表达。ＧＡＢＡＣ受体主要分布在内核层，ρ１亚单位主要分布在内核层的远端及中间部分，呈强阳性，而在神经节细胞层表达相对较弱。这种独特的表达型式与其功能密切相关。

药物对小白鼠不同脑区GABA_A受体与外源性GABA_A结合的影响

用同位素示踪法测定药物对小鼠四个不同脑区的GABA_A受体与外源性GABA结合的影响。GABA_A受体颉颃剂Picrotoxin,bicuculline,青霉素,和GABA-T抑制剂AOAA均使大脑皮层的受体结合显著增加,中枢兴奋剂戊四唑使之显著地减少。AOAA使海马的受体结合显著增加,戊四唑及安定使之显著减少。蝎毒使下丘脑的受体结合显著增加,而戊四唑使之显著减少。AOAA、蝎毒、bicuculline、picrotoxin使小脑的受体结合显著增加。

Zn^(2+)对爪蟾卵母细胞表达鲫鱼脑GABA受体的调制作用

爪赡卵母细胞注射鲫鱼（Caressescaresses）脑mRNA后表达的CABA受体中约85％为GABAA受体。约15％的成分为GABAC受体。本文利用双电极电压箝方法结合药物灌流研究了Zn2＋对这两型受体的作用。我们观察到Zn2＋对它们的调制都是抑制性的、可逆的。然而，与GABAA受体相比，GABAC受体对Zn2＋不太敏感。其中Zn2＋抑制鲫鱼脑GABAA受体的IC50＝48．4±10．1μmol／L，而它调制GABAC受体的IC50却高达255．6±21．5μmol／L。

含GABA_A受体α_6亚单位神经元在大鼠脑内的分布──原位杂交组织化学技术观察

本实验应用原位杂交组织化学技术对ＧＡＢＡＡ受体的α６亚单位的ｍＲＮＡ在大鼠脑内的分布状况进行了观察。除得到与以往的报道相同的结果即发现小脑浦肯野氏细胞含α６亚单位ｍＲＮＡ外，还发现此ｍＲＮＡ也分布于耳蜗核。在背侧耳蜗核，标记神经元主要见于颗粒细胞层和中央区内；而在腹侧耳蜗核，标记神经元只见于颗粒细胞层。这些结果表明α６亚单位是耳蜗核中某些神经元的ＧＡＢＡＡ受体的重要组成成分。另外，在耳蜗核旁胶质成分区中也见到一些标记细胞，其意义有待进一步研究。

X线照射对实验性癫痫大鼠脑皮层GABA和GABA_A受体的影响

目的:探讨癫痫大鼠放射治疗中GABA及其受体的作用机制并选择合理放射剂量.方法:利用慢性点燃癫痫大鼠对照组、1组、3组进进行0、24、6Gy的X线放射,对2组、4组和5组12Gy的X线放射,每组10只,对照组和1～3组于放射后1h断头取脑,4组于放射后1d、5组于放射后1周进行断头取脑,并观察5组其放射后癫痫发作情况,用氨基酸分析仪测定各组癫痫大鼠额叶皮层内的GABA含量变化,利用免疫组织化学的方法观察抗GABAA受体阳性率. 结果:5组于照射后1周内癫痫在鼠未出现诱发癫痫发作.1组的GABA含量为254.16±44.68ng,GABAA受体阳性率为39.56%±7.22%,均明显高于对照组,12Gy照射后1h、24h、1周后均较对照组间GABA含量高,其中以24h最为明显,分别为252.09±33.89ng, 348.73±56.00ng 和258.02±62.95ng.抗GABAA受体阳性率在照射后1周内基本稳定于较高水平. 结论:放射治疗癫痫主要是通过发生快速而持续的GABA与GABAA受体变化发生作用,癫痫大鼠接受12Gy的放射治疗较为合理.

青霉素惊厥与脑中GABA_A和GABA_B受体亲和力的关系

脑室微量注射青霉素(11.9 mg·ml^(-1),15μI)制作小白鼠惊厥模型;并以同位素示踪法研究大脑皮层、小脑、海马、下丘脑四个脑区 GABA_A和 GABA_B 受体亲和力的变化。结果显示,青霉素惊厥时大脑皮层和小脑 GABA_A 受体亲和力显著减弱,而海马、下丘脑 GABA_A 受体亲和力无变化;青霉素惊厥使四个脑区中 GABA_B 受体均显著下降。提示,除了海马和下丘脑的 GABA_A 受体以外,四个脑区的 GABA_A和 GABA_B 受体均参与了青霉素的致惊厥过程。青霉素可能通过竞争内源性 GABA与 GABA_A 和 GABA_B 受体的结合,阻断了 GABA 介导的突触前和突触后抑制效应并增加了兴奋性递质的释放,显示了惊厥效应。

缓激肽抑制大鼠DRG分离神经元的GABA激活电流

本文应用全细胞膜片箝技术在新鲜分离的大鼠背根神经节（DRG）神经元上研究缓激肽（BK）对γ-氨基丁酸（GABA）反应的调制作用。结果发现：在34个对GABA反应的细胞中有31个细胞对BK敏感。在对BK敏感并引起内向电流的27个细胞中预加BK，对GABA-激活电流具有明显的抑制作用，如10-6mol／L的BK可抑制GABA（10-4mol／L）激活电流30％。BK可将GABA量效曲线明显下移，并抑制其最大反应达1／3以上，而不改变其Kd值。结果提示：BK能非竞争性地抑制GABA反应。

培养大鼠颈上神经节神经元γ-氨基丁酸电流的全细胞记录

在培养的大鼠颈上神经节神经元上，用全细胞膜片钳技术记录γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）所激活的通道电流。当膜电位钳制在－６０ｍＶ时，压力喷射ＧＡＢＡ２０μｍｏｌ／Ｌ引起的峰电流为７３６±４８４ｐＡ（ｎ＝３１）。对ＧＡＢＡ电流与膜电位的关系的分析表明，当膜电位钳制在正负水平时，ＧＡＢＡ分别引起外向及内向电流，但外向电流的斜率稍大于内向电流，即存在轻度外向整流。电流的反转电位接近０ｍＶ。为了确定ＧＡＢＡ受体通道对Ｃｌ－的通透性，观察了改变细胞内Ｃｌ－浓度对ＧＡＢＡ电流的反转电位的影响。结果发现，所测的反转电位与用Ｇｏｏｄｍａｎ—Ｈｏｄｇｋｉｎ—Ｋａｔｚ方程预测的结果相符，提示ＧＡＢＡ受体对Ｃｌ－具有选择通透性，可能属ＧＡＢＡＡ受体。

大鼠三叉神经尾侧亚核内GABA_A受体和GABA、GAD的分布

免疫细胞化学方法观察了GABAA受体（GABAAR）亚单位、GABA和GAD在大鼠三叉神经尾测亚核内的分布及其匹配关系。结果表明：GABAARα亚单位免疫阳性纤维主要分布于二层内侧都（Ⅱi），而GABAARβ亚单位免疫阳性纤维在鳖个Ⅱ层和Ⅲ层均有密集分布．GABAA的α亚单位免疫阳性胞体只在Vc的Ⅰ、Ⅲ层有散在分布．GABAAR的β亚单位免疫阳性胞体在Vc的Ⅲ层有密集分布．GABAA及其合成酶GAD免疫阳性终末在Vc浅层有密集分布。以上结果表明GABAR其合成酶GAD与GABAAR的分布总体上是相互匹配的，但GABAR各亚单位在Vc内的分布在在差异，提示Vc内的GABAA可能通过作用于CABAAR的不同亚单位而产生多种生理功能。

安定、氟安定对刺激家兔中脑诱发升压反应的抑制作用

32只家兔,用α-氯醛糖和氨基甲酸乙酯麻醉,肌肉麻痹行人工呼吸。观察安定或氟安定对刺激中脑导水管周围灰质背侧部(dPAG)所引起升压反应的影响。当静脉注射安定或氟安定注入侧脑室,使刺激中脑诱发的升压反应受抑,表现为收缩压增量(ΔSBP)和平均压增量(ΔMBP)减小。微量注射氟安定到双侧延髓腹外侧头端区(rVLM),也出现升压反应受到抑制,降低ΔSBP和ΔMBP;而于双侧腹外侧尾端区(cVLM)微量注射相同剂量氟安定则无抑制作用。在rVLM用GABA_A受体阻断剂荷包牡丹碱预处理,可阻断氟安定对升压反应的抑制作用。 结果表明:安定、氟安定可抑制刺激中脑诱发的升压反应,这作用可能是通过激活rVLM处GABA_A受体而实现的。

GABA对鲫鱼视网膜视锥水平细胞的选择性压抑

本工作应用细胞内记录技术，在灌流的鲫鱼视网膜的标本上，研究了γ-氨基丁酸（GABA）对视杆水平细胞和视锥水平细胞的影响。结果表明，在GABA（05～5mmol／L）的作用下，L型视锥水平细胞暗中膜电位超极化，对光反应减小；GABAA受体的特异性拮抗剂荷包牡丹碱在70％的细胞上能阻断上述GABA的效应。进而，在用CO2+阻断光感受器至水平细胞的突触前输入后再施加GABA，60％的L型水平细胞膜电位无变化，提示GABA的作用主要由位于视锥终末上的GABAA受体介导。GABA对视杆水平细胞的膜电位和光反应均无明显影响。