安神补脑液对失眠大鼠模型海马组织内GABA_ARα1、GABA_ARγ2、NKCC1表达的影响

目的观察安神补脑液(ASBN)对失眠大鼠海马体γ-氨基丁酸受体(GABA)、钠-钾-氯协同转运蛋白表达的影响及其催眠作用机制。方法采用腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)复制大鼠失眠模型,将复制成功的失眠模型大鼠随机分为氟西汀(Fluoxetine)组,模型组,ASBN高、中、低剂量(ASBN-H、M、L)组,另取15只正常大鼠作为正常组。各给药组连续7 d给予相应药物口服灌胃,模型组和正常组连续灌胃7 d 0.9%生理盐水,观察各组大鼠的一般活动状态。采用qPCR检测海马体中GABA_ARγ2和Na+-K+-Cl-协同转运蛋白(NKCC1)的表达,采用免疫组化染色(IHC)-P检测大鼠海马体中GABA_ARα1的表达。结果ASBN可提高海马体中GABA_ARα1、GABA_ARγ2表达,降低NKCC1表达。结论ASBN可以通过调节失眠大鼠海马体中GABA_ARα1、GABA_ARγ2和NKCC1表达量来改善大鼠的睡眠状态。

毒鼠强中毒大鼠脑神经元GABA_A α1受体的检测

目的探讨GABAAα1受体在毒鼠强中毒大鼠脑组织中的变化及其机制。方法选择健康Sprague-Daw-ley大白鼠30只,分成5组,每组6只;分别以2.0 LD50、1.0 LD50、1/2 LD50、1/10 LD50毒鼠强量,采用灌胃染毒方法制作毒鼠强中毒模型,并以健康大鼠灌服生理盐水为对照;断颈处死大鼠,提取脑皮质、海马及脑干脑桥等脑组织进行免疫组织化学染色,观察GABAAα1受体阳性染色神经元的变化。结果不同LD50量染毒大鼠的皮层、海马及脑干,其GABAAα1受体免疫组化阳性染色神经元较对照组组减少,其中以1.0 LD50、1/2LD50组减少最为显著;相同染毒剂量,以脑干组织减少最多。结论GABAAα1受体表达下降与毒鼠强中毒机制相关。

一种非苯二氮[艹卓]点的新型催眠物质活性研究

目的采用膜电位高通量筛选技术进行化合物库筛选及活性研究,以期发现不同于苯二氮[艹卓]类结构的新型催眠物质。方法采用高通量实时荧光膜电位检测方法对化合物库进行筛选,获得候选化合物;通过膜片钳电生理和放射配基受体结合检测技术进行体外活性评价;采用戊巴比妥钠阈下睡眠检测和小鼠自发活动进行体内活性评价。结果通过膜电位检测方法从2288个化合物中筛选得到EC50值低于阳性对照地西泮[EC50=(4.43±0.41)μmol·L^-1]的化合物A11[EC50=(1.98±0.47)μmol·L^-1];通过膜片钳检测其体外活性EC50=(20.47±0.45)μmol·L^-1;[3H]-氟硝西泮受体结合检测技术表明该化合物为非苯二氮[艹卓]类化合物;戊巴比妥钠阈下睡眠时间检测实验表明化合物A11可明显缩短睡眠潜伏期(P<0.05),延长睡眠持续时间;A11在0.5、1、2 mg·kg^-1剂量下对90 min后小鼠自发活动有明显抑制作用(P<0.05,P<0.01)。结论本研究基于GABAAR高通量筛选获得的化合物A11具有较强的睡眠活性,可能是一种不同于苯二氮[艹卓]类药物作用位点的新型催眠物质。