B4GALT1在恶性肿瘤中的研究进展

β-1,4-半乳糖基转移酶1(beta-1,4-galactosyltransferase 1, B4GALT1)在胚胎及神经系统发育、免疫及炎症反应、肿瘤的发生发展等多种生物学活动中都有重要作用。B4GALT1通过两种方式参与恶性肿瘤的发生、发展、转移和预后:一是发挥半乳糖基转移酶活性,调节糖基化反应;二是作为细胞表面受体介导生物学功能。本文就B4GALT1在恶性肿瘤中的研究进展进行综述。

C1GALT1基因在胃癌组织中的表达及其对胃癌BGC-823细胞生物学行为的影响

目的探讨C1GALT1在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞BGC-823生物学行为的影响。方法采用生物信息学、qRT-PCR和Western blot法分析C1GALT1 mRNA和蛋白在胃癌组织和正常胃黏膜组织、胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中的表达,以C1GALT1 cDNA序列为靶点设计siRNA瞬时转染BGC-823细胞,采用Transwell实验检测C1GALT1-siRNA对胃癌BGC-823细胞迁移和侵袭能力的影响。运用Western blot法检测BGC-823细胞在转染C1GALT1-siRNA后上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达。结果C1GALT1在胃癌组织和细胞(BGC-823、SGC-7901、MGC-803)中呈高表达(P<0.05);干扰BGC-823细胞中C1GALT1表达后,BGC-823细胞迁移和侵袭能力均下降(P<0.05),上皮细胞标志物E-cadherin和Claudin-1蛋白表达水平均升高,间充质细胞标志物vimentin和Slug蛋白表达水平均下降(P<0.05)。结论C1GALT1在胃癌组织和细胞中高表达,C1GALT1基因沉默后能抑制胃癌细胞BGC-823的迁移和侵袭能力,其机制可能与EMT相关。

长链非编码RNA B3GALT5-AS1抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭及体内致瘤性

目的探究过表达长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)B3GALT5-AS1对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancers,NSCLC)生长和侵袭能力的影响。方法qRT-PCR检测临床样本中B3GALT5-AS1的表达。A549细胞分对照组、pcDNA-scramble组、pcDNA-B3GALT5-AS1组,按分组分别转染pcDNA-scramble和pcDNA-B3GALT5 AS1载体。菌落形成实验评估A549细胞集落形成能力,qRT-PCR检测Ki67和Survivin的mRNA表达;流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹检测P27、P53、VEGF和Vimentin蛋白表达。转染pcDNA-scramble和pcDNA-B3GALT5-AS1的A549细胞分别皮下注射裸鼠,检测瘤组织体积和重量;qRT-PCR检测B3GALT5-AS1的表达水平;免疫组化检测Ki67和VEGF的表达。结果肺癌组织中B3GALT5-AS1 mRNA相对表达量明显低于邻近正常组织(P<0.05)。与对照组比较,过表达B3GALT5-AS1 A549细胞集落形成能力降低(P<0.05),Survivin和Ki67表达量明显下调(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),侵袭细胞数目明显减少(P<0.05),P27和P53蛋白表达显著上调(P<0.05),VEGF和Vimentin蛋白表达显著下调(P<0.05)。体内异种移植实验结果显示,与pcDNA-scramble组比较,过表达B3GALT5-AS1明显减小肿瘤体积和重量(P<0.05),瘤组织中Ki67和VEGF阳性细胞数目明显减少(P<0.05)。结论过表达B3GALT5-AS1明显抑制NSCLC细胞的增殖和侵袭并促进凋亡,而且体内阻滞瘤组织的生长,在NSCLC起到抗癌作用。

Galt基因编辑小鼠的肠道菌群分析

目的:本研究旨在分析半乳糖-1-磷酸尿苷转移酶(Galactose-1-Phosphateuridylyltransferase, Galt)基因编辑后对小鼠肠道菌群的影响。方法:基于前期构建的Galt基因编辑小鼠模型,通过16S rRNA基因测序技术,对比野生型(Wild type, WT)和Galt基因编辑小鼠肠道内容物中的菌群组成。结果:结果显示,Galt基因编辑小鼠肠道菌群多样性下降,菌群丰富度减少;物种组成也发生显著性变化。Galt基因编辑组中厚壁菌门占比由69.836%降低45.096%,拟杆菌门占比由15.824%增加到37.672%,变形菌门的相对丰度由1.82%增加到13.175%,脱硫弧菌门的相对丰度由5.42%降低到0.36%。在属水平上,未分类的木楠科属和嗜冷杆菌属相对丰度在Galt基因编辑组中上调,萄球菌属和脱硫弧菌属在WT组中上调。进一步对两组小鼠KEGG功能差异分析,结果显示小鼠碳水化合物运输和代谢,能量产生和转化,氨基酸运输和代谢以及与复制,重组和修复相关的基因方面等功能上存在差异。结论:Galt基因编辑对小鼠肠道菌群的丰富度、组成和功能有影响。

双价痢疾菌苗不同途径免疫小鼠对脾细胞及GALT中ASC影响的实验研究

目的：观察侵袭蛋白表达阴性（FSM-2117）和阳性（FS-5416）的两株双价痢疾菌苗经不同途径免疫小鼠后，脾细胞和粘膜相关淋巴组织（gut associated lymphoid tissues，GALT）中抗体分泌细胞（antibody secreting cell，ASC）的变化，以探讨免疫途径及侵袭蛋白表达与否对痢疾菌苗免疫效果的影响。方法： BALB／c小鼠随机分为 3组，每组 20只， FSM－2ll7或 FS-5416 4 x10^7CFU分别经滴鼻、灌胃及肠内注射3种途径免疫小鼠，间隔2w，第3次免疫后7d活杀分离脾、小肠pp及MIN淋巴细胞，采用BA－ELISASPOT法检测其中特异性抗福氏、宋内氏LPSIgA和IgG分泌细胞。结果：滴鼻途径及小肠内免疫都能够诱生脾细胞特异性IgA-ASC、IgG-ASC显著升高（P＜0．01）；仅滴鼻免疫组Ipa+株较Ipa-株升高显著（P＜0．01）。滴鼻和小肠内免疫同时诱生肠GALT中派伊尔小结（Payer's patch,PP)和肠系膜淋巴结（mesenteric lymph node,MLN)淋巴细胞ASC显著升高（P＜0．05，P＜0．01），但株间比较无统计学差异。而同等剂量的灌胃免疫未能诱发脾细胞及GALT特异性ASC升高。结论：鼻粘膜和小肠内免疫可以有效地诱导脾脏和GALT淋巴细胞的免疫反应，且显著降低免疫原用量（本实验滴鼻剂量为常规灌胃的1/20），是一个安全有效的免疫途径。研?

人类新型β3半乳糖基转移酶基因β3GalT7的克隆和鉴定

从人肺cDNA文库中克隆到人类β3-半乳糖基转移酶家族中的一个新成员β3GalT7(AY277592,EC2.4.1.-),并对其进行了鉴定. 该基因定位在人类染色体19q13.2. 它包含一个1 191 bp的开放阅读框(ORF). 编码的蛋白质包括一个信号肽和一个半乳糖基转移酶结构域,分子质量和等电点分别为43.3 ku和8.37. 从原核表达中获得的融合蛋白的分子质量和预测相符. RNA印迹杂交显示β3GalT7在肺、喉和回肠组织中高表达,而在舌、乳房、子宫、睾丸等组织中表达较低. 此外半定量RT-PCR显示β3GalT7在人类不同的肿瘤细胞中转录水平有明显差异.

对GALT算法的理论性分析

GALT(GreatestAvailableLogicalTime,最大可能逻辑时间)算法是HLA(HighLevelArchitecture,高层体系结构)接口规范中时间管理服务能否实现的关键技术。不合理的GALT算法会导致死锁或破坏HLA时间管理的原则,从而导致整个仿真无法向前推进,或产生过去时刻的消息。分析了Frederick算法和身高测量法的死锁问题,给出了Frederick算法造成死锁的一个充分条件,重点讨论了它们遵守时间管理原则的情况。一个好的GALT算法,必须在确保不违反时间管理原则的基础上,才能最终解决死锁问题。

TNF-α与β1,4-GalT-Ⅰ在膝骨关节炎滑膜炎症过程中的关系研究

目的探讨TNF-α与β1, 4-GalT-Ⅰ在膝骨关节炎(KOA)滑膜炎症过程中的关系。方法选取我院2016年3月至2018年2月诊断为KOA的15例患者作为观察组,选取同期15例健康检查者作为对照组,检测两组研究对象的滑膜组织TNF-α与β1, 4-GalT-Ⅰ的表达水平,并培养FLS,以酶联免疫吸附试验检测TNF-α的表达,以Real-time PCR检测β1, 4-GalT-Ⅰ的表达。结果观察组的TNF-α与β1, 4-GalT-Ⅰ相对表达量均明显高于对照组(P <0.05)。不同剂量TNF-α组的FLS,其β1, 4-GalT-Ⅰ相对表达量与对照组比较有统计学差异(P <0.05)。结论在KOA滑膜炎症过程中, TNF-α与β1, 4-GalT-Ⅰ参与了滑膜炎症的发生发展, TNF-α可能通过调控β1, 4-GalT-Ⅰ的表达参与KOA滑膜炎症。

糖基转移酶β3GnT8/β3GalT7在多种肿瘤细胞中的表达

目的:探讨一种新的糖基转移酶β3GnT8/β3GalT7在多种肿瘤细胞中的mRNA表达情况。方法:运用半定量RT-PCR方法研究人β3GnT8/β3GalT7基因在11种恶性肿瘤细胞中的表达谱。结果:β3GnT8/β3GalT7基因在多种肿瘤细胞株中都有表达,在A549细胞中的表达最高,在SGC7901细胞中中度表达,在白血病细胞中的表达较低。结论:β3GnT8/β3GalT7基因在11种肿瘤细胞中的表达有显著差异。

小鼠肝癌及肝正常组织B4GalT糖基转移酶家族mRNA表达差异及其对细胞膜相关糖链的影响

探讨肝癌模型鼠与正常小鼠肝组织B4GalT(β-1,4-半乳糖转移酶)家族mRNA表达差异以及对细胞膜相关糖链的影响.采用RT-PCR方法检测肝癌模型鼠和正常对照小鼠肝癌组织中B4GalT家族7个成员以及唾液酸α-2,3转移酶ST3GalⅢ、ST3GalⅣ、ST3GalⅥ、α-1,6-岩藻糖转移酶FUT8 mRNA表达差异,应用凝集素芯片检测细胞膜表面半乳糖、岩藻糖、唾液酸表达情况.结果显示:与正常对照组相比,肝癌模型鼠肝组织中B4GalT-1和B4GalT-3、ST3GalⅣ和ST3GalⅥ、FUT8呈现高表达,肝癌细胞膜半乳糖、岩藻糖、唾液酸类型糖链增加,提示B4GalT-1和B4GalT-3与肝癌细胞膜半乳糖链增加相关.由于细胞Galβ-1,4-GlcNAc糖表位在ST3GalⅢ、ST3GalⅣ或ST3GalⅥ催化下与唾液酸α-2,3连接生成s-lewis x抗原前体,本实验中B4GalT-1和B4GalT-3与ST3GalⅣ、ST3GalⅤ、FUT8 mRNA表达具有相关性,提示B4GalT-1和B4GalT-3可能与ST3GalⅣ、ST3GalⅥ以及FUT4协同作用,导致肝癌细胞膜半乳糖、岩藻糖、唾液酸类型糖链增加.

B4GALT7基因变异型Ehlers-Danlos综合征一例及文献复习

Ehlers-Danlos综合征是一类复杂的遗传性结缔组织疾病,是由多个基因突变引起的粘多糖合成障碍,影响细胞外基质的功能,以关节活动度过大、皮肤松弛和组织脆性为显著特征。其中B4GALT7基因突变引起的Ehlers-Danlos患者还可表现出身材矮小、前臂骨骼和关节的异常、弯曲的四肢等,这一型患者目前报道的仅有8例。本文报道一例国内确诊的B4GALT7基因突变患者,运用二代测序技术发现两个新的氨基酸突变p.(Arg141Gln)和p.(Arg234His)。同时进行文献回顾,与之前报道病例的临床表型和基因型进行比较,明确该型Ehlers-Danlos综合征常见的共同特征、诊断标准、致病基因,进一步比较不同突变位点引起的临床表现,尝试对B4GALT7基因不同位点突变对蛋白质功能的影响进行解释,帮助临床医生提高对这一罕见疾病的认识,提高诊断率,改善患者的预后。

基于C1GALT1/Cosmc 通路研究雷公藤多苷对IgA肾病大鼠肠道菌群及免疫功能的影响

目的:基于核心1β1,3-半乳糖基转移酶(C1GALT1)及其伴侣蛋白Cosmc(C1GALT1/Cosmc通路)研究雷公藤多苷(TWM)对IgA肾病(IgAN)大鼠肠道菌群及免疫功能的影响。方法:构建IgAN大鼠模型,随机分为模型组(IgAN组)、地塞米松(Dex)组和TWM组,另设正常饲养大鼠为正常对照(NC)组。采用全自动生化分析仪测定各组大鼠血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、24 h尿总蛋白量(UTP)及24 h尿红细胞数;ELISA法检测各组大鼠血清IgA1水平及血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、B细胞活化因子(Baff)和白细胞介素17(IL-17)水平;蚕豆凝集素亲和ELISA法检测半乳糖缺乏IgA1(Gd-IgA1)水平;选择性细菌培养基培养肠道菌落;流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)占CD4+T细胞比例(简称Treg比例);Western blot法检测肠黏膜组织C1GALT1和Cosmc的蛋白表达。结果:与NC组比较,IgAN组大鼠24 h UTP和尿红细胞数,SCr和BUN水平,血清IgA1和Gd-IgA1水平,肠道肠杆菌、肠球菌和拟杆菌数量,以及血浆TNF-α、Baff和IL-17水平均显著增加(P<0.05),而双歧杆菌和乳酸杆菌数量、PBMC中Treg比例及肠黏膜组织中C1GALT1和Cosmc蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与IgAN组比较,Dex组和TWM组大鼠24 h UTP和尿红细胞数,SCr和BUN水平,血清IgA1和Gd-IgA1水平,肠道肠杆菌、肠球菌和拟杆菌数量,以及血浆TNF-α、Baff和IL-17水平均显著降低(P<0.05),且TWM组低于Dex组(P<0.05),双歧杆菌和乳酸杆菌数量、PBMC中Treg比例及肠黏膜组织中C1GALT1和Cosmc蛋白表达水平显著增加(P<0.05),且TWM组高于Dex组(P<0.05)。结论:TWM可通过促进C1GALT1/Cosmc通路激活降低IgAN大鼠IgA异常糖基化水平,并减轻IgAN大鼠肠道菌群紊乱及免疫功能失调,从而发挥治疗效果。

C1GALT1基因rs1047763单核苷酸多态性与维吾尔族人群IgA肾病易感性的关系

目的探讨β1,3-半乳糖基转移酶(C1GALT1)基因rs1047763单核苷酸多态性与维吾尔族人群IgA肾病(IgAN)易感性的关系。方法选择IgAN患者90例(IgAN组),体检健康者90例(对照组),均为维吾尔族人。采用直接测序法检测两组C1GALT1基因rs1047763位点的多态性及分布,直接计数法计算其基因型、基因频率及等位基因型、等位基因型频率,并对基因型进行Hardy-Weinberg平衡检验。结果 IgAN组C1GALT1基因rs1047763位点的AA、AG、GG基因型频率分别为21.10%、47.80%、31.10%,对照组分别为17.80%、40.00%、42.20%;组间两两比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。分层分析显示,IgAN组中的A等位基因频率、AG基因型频率明显高于对照组,未发现其与维吾尔族人群的IgAN易感性相关。结论 C1GALT1基因rs1047763位点的SNP可能与维吾尔族人群的IgAN易感性无相关性。

中国彝族人群p表型家系分析及新A4GALT等位基因鉴定

目的研究一个彝族家系P1Pk血型系统中罕见p表型的分子遗传机制。方法对34例家系成员样本进行血型血清学鉴定;红细胞稀有血型基因分型采用荧光定量PCR法;同时采用Sanger测序法分析α1,4-半乳糖基转移酶(α-1,4-galactosyltransferase,A4GALT)基因和β1,3-N乙酰半乳糖胺转移酶(β-1,3-N-acetylgalactosyltransferase,B3GALNT1)基因的多态性。结果先证者及其哥哥均为罕见的p表型,血清中均含有能与所有非p表型红细胞凝集并致其溶血的抗-PP1P~K抗体,其他家系成员为正常的P1或P2表型。基因测序发现,34例彝族家系成员中有2例A4GALT基因编码区存在456-457insACACCCC(Bank IT:MG812384)纯合突变,6例456-457insACACCCC杂合突变,7例109A>G和987G>A杂合突变,3例IVS+228C>T杂合突变;所有家系成员B3GALNT1序列均与参考序列一致。456-457insACACCCC突变导致开放阅读框移码,并提前形成终止密码子,产生无效等位基因。结论在一个彝族家系中发现2例p表型,并首次鉴定A4GALT新等位基因456-457insACACCCC,是p表型的分子遗传基础。

骨髓基质细胞中B4GALT1对与其共培养的人急性髓系白血病细胞株增殖的影响

目的:探讨骨髓基质细胞糖基转移酶B4GALT1的表达对造血细胞增殖的影响及其上游调控机制。方法:在人骨髓来源基质细胞HS5中过表达B4GALT1,并与急性髓系白血病细胞KG1a共培养,采用流式细胞术检测其对造血细胞增殖的影响;应用双荧光素酶报告基因检测、实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法对调控基质细胞B4GALT1表达的上游转录因子进行预测和验证。结果:HS5中过表达B4GALT1能显著促进共培养体系中KG1a的增殖。基质细胞中B4GALT1表达与上游c-Jun表达呈正相关,并通过JNK/c-Jun抑制剂进行了验证。结论:糖基转移酶及其引起的相应糖基化差异在造血微环境中起到的调控作用,其作用机制有待更深入的研究。

基于CRISPR/cas9系统高效编辑小鼠Galt基因

GALT基因突变是人类I型半乳糖血症的主要病因。拟通过CRISPR/cas9系统打靶小鼠Galt基因以模拟人GALT基因突变,从而为建立精准模拟I型半乳糖血症的动物模型奠定基础。首先分析了我国I型半乳糖血症GALT基因的致病突变位点,并将其定位在小鼠Glat基因上,作为小鼠Galt基因的拟突变位点,然后根据拟突变位点区域的序列设计了sgRNA导向序列,构建sgRNA表达质粒,将其与cas9表达质粒共转染小鼠3T3细胞,通过嘌呤霉素和杀稻瘟菌素筛选阳性转染细胞,提取阳性细胞基因组DNA,PCR扩增打靶位点的DNA片段,通过TA克隆测序鉴定基因编辑情况并分析编辑效率。结果表明,3个sgRNA导向序列均可以通过CRISPR/Cas9系统高效编辑小鼠Galt基因,编辑效率为100%。

miR-199b-5p调控C1GALT1对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 C1GALT1已被报道在多种癌症中呈现高表达,miR-199b-5p对肿瘤的发生有抑制作用,但在胃癌中的作用机制尚不明确。文章旨在探讨miR-199b-5p通过调控C1GALT1对胃癌BGC-823细胞增殖、迁移和侵袭影响。方法 利用生物信息学分析C1GALT1在胃癌中的表达情况。细胞进行分组(1)SiRNA转染:空白对照组1、Si-NC组、Si组(3、5、8μM);(2)双荧光素酶实验分组:MI-NC+h-C1GALT1-3UTR-wt组、MI+h-C1GALT1-3UTR-wt组、MI-NC+h-C1GALT1-3UTR-mu组、MI+h-C1GALT1-3UTR-mu组;(3)miRNA转染:MI组、 MI-NC组、空白对照组2;IN组、IN-NC组,空白对照组3;(4)共转染:空载体组、Si-C1GALT1组、Si-C1GALT1+miR-199b-5p inhibitor。Western blot检测SiRNA抑制C1GALT1的表达,CCK8法、细胞划痕和Transwell实验分别检测SiRNA干扰C1GALT1对胃癌BGC-823细胞的增殖、迁移和侵袭能力。预测能与其存在负向调控的miRNAs,双荧光素酶报告基因实验验证C1GALT1与miR-199b-5p之间的靶向关系。转染miR-199b-5pmimics/inhibitor后用Western blot检测转染后C1GALT1的表达情况,CCK8法、细胞划痕和Transwell实验分别检测miR-199b-5p对胃癌BGC823细胞的增殖、迁移和侵袭能力。通过Si-C1GALT1和miR-199b-5p inhibitor共转染检测其对胃癌BGC-823细胞的增殖、迁移和侵袭能力影响。结果 生物信息学提示C1GALT1在胃癌中存在高表达,通过SiRNA抑制C1GALT1表达后,发现C1GALT1低表达会使胃癌BGC-823细胞增殖、迁移和侵袭能力[(0.270±0.005)%、(534.0±24.1)个、(156.0±42.5)个]低于空白对照组1[(0.519±0.012)%、(783.0±12.8)个、(460.0±19.4)个]与Si-NC组[(0.523±0.001)%、(744.0±8.6)个、(477.0±26.9)个],差异具有统计学意义(P<0.05)。双荧光素报告显示,miR-199b-5p能靶向结合C1GALT1。miR-199b-5p mimics降低BGC-823细胞中C1GALT1表达水平(P<0.01);miR-199b-5p inhibitor提高BGC-823细胞中C1GALT1表达水平(P<0.05)。miR-199b-5p mimics组BGC-823细胞的增殖,迁移和侵袭能力[(0.256±0.002)%、(145±5.7)个、(368±57.6)个]与空白对照组2[(0.529±0.003)%、(651.0±35.7)个、(668.0±21.5)个]和miR-199b-5p mimic NC组[(0.514±0.004)%、(641.0±17.3)个、(662.0±36.1)个]相比均降低(P<0.05);miR-199b-5p inhibitor组BGC-823细胞的增殖,迁移和侵袭能力[(0.984±0.001)%、(1 089.0±114.4)个、(894.0±15.4)个]与空白对照组3[(0.529±0.003)%、(651.0±35.7)个、(668.0±21.5)个]和miR-199b-5p inhibitor NC[(0.532±0.011)%、(630.0±17.7)个、(672.0±48.5)个]相比均提高(P<0.05)。Si-C1GALT1和miR-199b-5p inhibitor共转染可部分逆转Si-C1GALT1对胃癌BGC-823细胞增殖、迁移和侵袭抑制作用。结论 miR-199b-5p可能通过调控C1GALT1抑制胃癌BGC-823细胞的增殖,迁移和侵袭。

双价痢疾菌苗株免疫小鼠后GALT中ASC的观测

为了观测两株菌苗ＦＳＭ－２１１７（Ｉｐａ－）、ＦＳ－５４１６（Ｉｐａ＋）免疫后所引起的肠粘膜相关淋巴组织（ＧＡＬＴ）中的免疫反应，以小鼠灌胃免疫为模型，应用ＢＡ－ＥＬＩＳＰＯＴ法检测了ＧＡＬＴ中诱导部位派伊尔小结（ＰＰ）、肠系膜淋巴结（ＭＬＮ）和抗原特异性抗体分泌细胞（ＡＳＣ），发现两菌苗株免疫小鼠后，ＰＰ结、ＭＬＮ中福氏、宋内氏抗原ＳＩｇＡ、ＩｇＧ抗体分泌细胞明显增加，尤以ＳＩｇＡ－ＡＳＣ为甚。株间差别无统计学意义。两株菌苗与对照组相比。

弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导NALT和GALT黏膜部位的免疫应答

目的观察弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导的鼻相关淋巴组织(NALT)和肠相关淋巴组织(GALT)黏膜部位的免疫应答,探讨弓形虫黏膜疫苗能否在感染起始阶段有效诱导免疫应答。方法将BALB/c小鼠随机分为免疫和对照组,免疫组小鼠以弓形虫复合黏膜疫苗20μl/只(20μgSTAg+1μgCT)滴鼻免疫2次(间隔2周),对照组PBS滴鼻。于末次滴鼻后14d颈椎脱臼处死小鼠,ELISA测定粪便和鼻咽冲洗液IgA抗体水平;计数NALT、NC及PP、IEL淋巴细胞数,免疫细胞化学法检测CD4+、CD8+T细胞亚群水平。结果免疫组小鼠粪便IgA和鼻咽冲洗液IgA抗体显著高于对照组(P<0.05)。NALT内淋巴细胞明显增生(P<0.05),其中CD4+、CD8+T细胞均有增生(P<0.01),CD4+/CD8+比值降低(P<0.05)。NC中淋巴细胞数明显升高(P<0.01),以CD4+T细胞水平为主(P<0.01)。GALT部位PP淋巴细胞增生显著(P<0.01),主要以CD4+T细胞为主;而IEL以CD8+T细胞增生为主(P<0.01),CD4+/CD8+比值降低(P<0.05)。结论弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导NALT和GALT黏膜部位免疫应答。

糖基化基因B4GALT5在胰腺癌恶性进展中的作用

目的:基于糖基化基因集在TCGA⁃GTEx联合公共数据库中挖掘与胰腺癌发生风险和不良预后显著相关的基因,利用本中心的组织样本和体外实验进行验证。方法:通过公共数据库筛选到与胰腺癌发生风险和不良预后相关的糖基化基因B4GALT5,使用本中心有临床与预后信息的组织样本进行验证。构建B4GALT5干扰和过表达的胰腺癌细胞系,通过CCK⁃8、细胞划痕和Transwell侵袭实验观察B4GALT5在体外对胰腺癌细胞恶性生物学行为的作用。结果:胰腺癌组织中B4GALT5的表达显著高于正常组织,并且B4GALT5的表达量增高与胰腺癌发生风险和不良预后呈显著正相关,与CD4+T细胞和自然杀伤T细胞浸润呈负相关。B4GALT5在胰腺癌细胞的体外增殖、运动、浸润过程中起促进作用。结论:糖基化基因B4GALT5有促进胰腺癌恶性进展的作用,可能作为新的生物标志物预测胰腺癌发生风险与不良预后。