附子理中汤联合骨髓间充质干细胞调控变应性鼻炎大鼠鼻黏膜T-bet和GATA3 mRNA表达的研究

目的研究附子理中汤联合骨髓间充质干细胞(MSCs)对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜T盒转录因子(T-bet)、锌指蛋白3(GATA3)mRNA表达的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为5组,每组8只。对照组大鼠不造模、不干预;模型组、MSCs组、附子理中汤组、附子理中汤+MSCs组大鼠均进行变应性鼻炎造模,其中模型组造模后不治疗,MSCs组造模后给予骨髓MSCs尾静脉注射1次,附子理中汤组造模后给予附子理中汤连续灌胃14 d,附子理中汤+MSCs组造模后给予骨髓MSCs尾静脉注射1次和附子理中汤连续灌胃14 d。比较各组大鼠干预前后的行为学积分;干预结束后ELISA法检测鼻腔灌洗液中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-13(IL-13)、干扰素-γ(IFN-γ)水平,qRT-PCR法检测鼻黏膜组织中T-bet和GATA3 mRNA表达情况。结果MSCs组、附子理中汤组和附子理中汤+MSCs组大鼠干预后行为学积分均明显低于干预前及模型组(P均<0.05),且附子理中汤+MSCs组大鼠干预后行为学积分均明显低于MSCs组和附子理中汤组(P均<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-13水平和鼻黏膜组织中GATA3 mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05),鼻腔灌洗液中IFN-γ水平和鼻黏膜组织中T-bet mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05)。与模型组比较,MSCs组、附子理中汤组和附子理中汤+MSCs组大鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-13水平和鼻黏膜组织中GATA3 mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05),附子理中汤组和附子理中汤+MSCs组大鼠鼻腔灌洗液中IFN-γ水平和鼻黏膜组织中T-bet mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05),MSCs组大鼠鼻腔灌洗液中IFN-γ水平和鼻黏膜组织中T-bet mRNA相对表达量均无明显变化(P均>0.05);且附子理中汤+MSCs组大鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-13水平和鼻黏膜组织中GATA3 mRNA相对表达量均明显低于MSCs组(P均<0.05),鼻腔灌洗液中IFN-γ水平和鼻黏膜组织中T-bet mRNA相对表达量均明显高于MSCs组(P均<0.05)。结论附子理中汤联合骨髓MSCs能上调T-bet mRNA和下调GATA3 mRNA表达,进而调节Th1/Th2细胞的平衡,抑制炎症反应,改善变应性鼻炎症状。

GATA3介导miR-21/PTEN轴对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭的影响

目的分析GATA结合蛋白3(GATA3)介导微小RNA-21(miR-21)/人类第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)轴对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭的影响。方法取HEC-1-A细胞,进行转染分组,分为对照组、GATA3空载质粒组、GATA3过表达质粒组、GATA3 siRNA阴性对照组、GATA3 siRNA组。检测各组细胞中GATA3、miR-21、PTEN表达量、增殖情况、凋亡率、迁移、侵袭。结果与hEEC组相比,HEC-1-A组、HEC-1-B组、Ishikawa组细胞中GATA3、miR-21表达水平升高,PTEN表达水平降低(P<0.05)。与GATA3空载质粒组相比,GATA3过表达质粒组GATA3、miR-21 mRNA表达量、增殖率、迁移距离、侵袭细胞数、Vimentin水平升高,PTEN mRNA表达量、凋亡率、Caspase-9、Bax、E-cadherin水平降低(P<0.05);与GATA3 siRNA阴性对照组相比,GATA3、miR-21 mRNA表达量、增殖率、迁移距离、侵袭细胞数、Vimentin水平降低,PTEN mRNA表达量、凋亡率、Caspase-9、Bax、E-cadherin水平升高(P<0.05)。结论下调GATA3表达,可对miR-21/PTEN轴进行调节,使HEC-1-A细胞的增殖减慢,促进HEC-1-A细胞的凋亡。

西藏地区膀胱尿路上皮癌患者GATA-3和H3K27me3的表达及其临床意义

目的探讨西藏地区膀胱尿路上皮癌(bladder urothelial carcinoma,BUC)患者膀胱组织中GATA-3和H3K27me3的表达及其临床意义。方法回顾性收集西藏自治区人民医院2016年1月—2021年12月间行膀胱癌手术的BUC患者的临床资料及其病理组织,以经尿道膀胱黏膜活检术获取的正常膀胱组织作为对照,采用免疫组化染色方法检测BUC和正常膀胱组织中GATA-3和H3K27me3的表达水平,同时结合临床病理特征分析GATA-3和H3K27me3在藏族BUC患者中的表达差异。结果共入选BUC患者70例,其中男性51例,女性19例,平均年龄(60.5±12.0)岁,收集同期正常膀胱组织标本20份,均来自于藏族患者。免疫组化检测结果显示,GATA-3在BUC及正常膀胱组织中高表达率分别为70.0%(49/70)和100%(20/20),GATA-3高表达与男性、病理分级低、组织非浸润相关(P均<0.05);H3K27me3在BUC及正常膀胱组织中高表达率分别为45.7%(32/70)和20.0%(4/20),H3K27me3高表达仅与男性相关(P=0.011)。结论GATA-3在西藏地区BUC患者膀胱组织中表达下调,且随着肿瘤级别的升高表达显著下调,提示GATA-3可能参与BUC发生、发展并与其恶性程度相关,为临床诊疗及判断疾病预后提供了参考。H3K27me3在西藏地区BUC患者膀胱组织中表达上调,提示H3K27me3有望成为诊断BUC的新型免疫标志物。

1α,25-二羟基维生素D_(3)对哮喘小鼠SIRT1、GATA-3表达及气道炎症水平的影响

目的探究1α,25-二羟基维生素D_(3)对哮喘小鼠气道炎症变化的影响及可能机制。方法将24只SPF级BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、哮喘+1α,25-二羟基维生素D_(3)(哮喘+VD_(3))组,每组8只。哮喘组和哮喘+VD_(3)组小鼠于第1、8、15天给予卵清蛋白(OVA)混悬液0.2 ml致敏,对照组给予生理盐水0.2 ml;哮喘组和哮喘+VD_(3)组于第22~28天使用1%OVA雾化吸入激发,对照组给予等量生理盐水雾化吸入,每次雾化30 min,1次/d,连续激发7 d;哮喘+VD_(3)组每次雾化前30 min给予1α,25-二羟基维生素D_(3)注射液(4μg/kg),对照组和哮喘组给予等量生理盐水。最后一次激发后麻醉处理采集小鼠血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织标本。采用HE染色和PAS染色观察肺组织病理学改变及气道黏液水平的变化;ELISA法检测血清IgE及BALF中炎性因子白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13水平;免疫组化、Western blotting检测小鼠肺组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)和GATA结合蛋白-3(GATA-3)的表达情况。采用Pearson直线相关分析肺组织SIRT1、GATA-3表达水平(SIRT1、GATA-3的平均OD值)与小鼠血清IgE及BALF中IL-4、IL-5、IL-13浓度的相关性。结果与对照组比较,哮喘组小鼠肺组织气管及伴行血管周围炎性细胞浸润明显增多,其中以嗜酸性粒细胞为主,支气管管腔狭窄,气道黏膜上皮增生,气管内黏液分泌增多;哮喘+VD_(3)组小鼠上述改变较哮喘组减轻。与对照组比较,哮喘组小鼠血清IgE和BALF中IL-4、IL-5、IL-13等炎性因子水平及肺组织中GATA-3表达均增高(P<0.05),肺组织中SIRT1表达降低(P<0.05);与哮喘组比较,哮喘+VD_(3)组小鼠血清IgE和BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平及肺组织GATA-3表达均降低(P<0.05),肺组织SIRT1表达增高(P<0.05)。相关性分析结果显示,小鼠肺组织SIRT1表达水平与GATA-3表达量、血清IgG及BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平均呈负相关(P<0.05);小鼠肺组织GATA-3表达水平与血清IgG及BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平均呈正相关(P<0.05)。结论1α,25-二羟基维生素D_(3)可缓解哮喘小鼠的气道炎症,其机制可能是通过上调肺组织中SIRT1的表达,抑制GATA-3的表达,进而降低炎性因子(IL-4、IL-5、IL-13)水平。

缺血性脑卒中患者血清TIM-3、GATA-3与颅内动脉斑块稳定性的关系

目的探讨缺血性脑卒中患者血清T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(TIM-3)、GATA结合蛋白-3(GATA-3)与颅内动脉斑块稳定性的关系。方法选取2021年4月—2023年4月海南医学院第一附属医院收治的124例缺血性脑卒中患者作为研究对象,根据高分辨率磁共振(HRMRI)颅内动脉管壁成像检查结果分为无斑块组19例、稳定斑块组28例、不稳定斑块组77例。采用酶联免疫吸附试验检测血清TIM-3、GATA-3水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清TIM-3、GATA-3对缺血性脑卒中患者颅内的动脉斑块稳定性的预测价值;采用多因素逐步Logistic回归分析探究影响缺血性脑卒中患者颅内动脉斑块稳定性的因素。结果无斑块组、稳定斑块组、不稳定斑块组患者的高血压患病率、颅内动脉狭窄程度构成比、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、同型半胱氨酸(Hcy)、C反应蛋白(CRP)水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。无斑块组、稳定斑块组、不稳定斑块组患者血清TIM-3、GATA-3水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);稳定斑块组、不稳定斑块组血清TIM-3水平高于无斑块组(P<0.05),不稳定斑块组血清TIM-3水平高于稳定斑块组(P<0.05);稳定斑块组、不稳定斑块组血清GATA-3水平低于无斑块组(P<0.05),不稳定斑块组血清GATA-3水平低于稳定斑块组(P<0.05)。ROC曲线结果显示,TIM-3联合GATA-3预测缺血性脑卒中患者颅内动脉斑块稳定性的曲线下面积(AUC)最大,为0.903(95%CI:0.846,0.957),特异性为85.7%(95%CI:0.832,0.943),敏感性为84.0%(95%CI:0.795,0.892)。多因素逐步Logistic回归分析显示,颅内动脉狭窄程度高[O^R=2.016(95%CI:1.419,2.863)]、高水平Hcy[O^R=2.323(95%CI:1.567,3.445)]、TIM-3≥393.78 ng/L[O^R=3.022(95%CI:1.903,4.800)]、GATA-3≤38.49ng/L[O^R=2.497(95%CI:1.645,3.790)]是缺血性脑卒中患者颅内动脉斑块不稳定的独立危险因素(P<0.05)。结论高水平TIM-3、低水平GATA-3与缺血性脑卒中患者颅内动脉斑块稳定性下降有关,且两项指标可作为预测患者颅内动脉斑块稳定性的血清标志物。

子宫内膜癌组织中LncRNA GATA3-AS1、miR-362-3p表达与病理参数和预后的关系

目的探讨子宫内膜癌组织中长链非编码核糖核酸GATA结合蛋白3反义RNA1(LncRNA GATA3-AS1)、微小核糖核酸-362-3p(miR-362-3p)表达与病理参数和预后的关系。方法回顾性选取2018年1月—2021年12月安徽医科大学附属巢湖医院妇产科收治的子宫内膜癌患者101例为研究对象。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测LncRNA GATA3-AS1、miR-362-3p mRNA表达水平;Pearson相关分析子宫内膜癌组织中LncRNA GATA3-AS1与miR-362-3p的相关性;Kaplan-Meier法分析LncRNA GATA3-AS1、miR-362-3p表达对子宫内膜癌患者生存预后的影响;多因素Cox回归分析子宫内膜癌患者预后的影响因素。结果子宫内膜癌患者癌组织中LncRNA GATA3-AS1表达高于癌旁组织,miR-362-3p表达低于癌旁组织(t/P=17.642/<0.001、18.153/<0.001);子宫内膜癌组织中LncRNA GATA3-AS1表达与miR-362-3p表达呈负相关(r=-0.691,P<0.001);FIGO分期ⅢA期、肌层浸润深度>1/2、有淋巴结转移的子宫内膜癌组织中LncRNA GATA3-AS1表达高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、肌层浸润深度≤1/2、无淋巴结转移,而miR-362-3p表达低于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、肌层浸润深度≤1/2、无淋巴结转移(LncRNA GATA3-AS1:t/P=16.168/<0.001、9.423/<0.001、20.066/<0.001;miR-362-3p:t/P=12.563/<0.001、8.139/<0.001、5.923/<0.001)。LncRNA GATA3-AS1高表达组3年总生存(OS)率为63.46%(33/52),低于低表达组的80.85%(38/47)(Log-rankχ^(2)=4.431,P=0.032);miR-362-3p低表达组3年OS率为62.00%(31/50),低于高表达组的81.63%(40/49)(Log-rankχ^(2)=5.240,P=0.022)。FIGO分期ⅢA期、肌层浸润深度>1/2、淋巴结转移、LncRNA GATA3-AS1高是影响子宫内膜癌患者预后的独立危险因素[HR(95%CI)=1.637(1.135~2.362)、1.667(1.085~2.561)、1.881(1.169~3.029)、1.675(1.164~2.412)],miR-362-3p高是独立保护因素[HR(95%CI)=0.649(0.495~0.851)]。结论子宫内膜癌组织中LncRNA GATA3-AS1表达上调,miR-362-3p表达下调,且与恶性病理参数以及不良预后有关。LncRNA GATA3-AS1可能通过负性调控miR-362-3p参与子宫内膜癌进展。

乳腺癌组织中EGFR、GATA-3、E-Cad的表达及其与预后的关系

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)、GATA结合蛋白3(GATA-3)、上皮性钙黏附蛋白(E-cad)在乳腺癌组织内的表达及其与患者预后的关系。方法选取89例乳腺癌患者,术中采集所有患者的癌组织与癌旁正常组织(距离病灶边缘≥3 cm),将其分别纳入观察组、对照组,统计对比2组EGFR、GATA-3、E-Cad阳性表达差异。另随访1年,统计对比不同EGFR、GATA-3、E-Cad表达患者的生存率。结果观察组EGFR、GATA-3阳性表达率高于对照组,E-Cad阳性表达率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);EGFR、GATA-3、E-Cad表达与患者肿瘤的分化程度、淋巴结转移、临床分期有关,差异有统计学意义(P<0.05)。EGFR、GATA-3阳性表达患者的生存率低于阴性表达患者,E-Cad阴性表达患者的生存率低于阳性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论EGFR、GATA-3在乳腺癌组织内呈高表达,E-Cad呈低表达,三者表达与乳腺癌患者的生存率具有紧密联系。

襄五脂素对哮喘大鼠Th1/Th2失衡和GATA-3的影响

目的探讨襄五脂素对哮喘动物模型的治疗作用及其机制。方法将大鼠随机分为5组,每组12只:对照组、模型组、低、中、高剂量组。除对照组之外,其他组大鼠均使用卵白蛋白(OVA)诱导构建哮喘大鼠模型。低、中和高剂量组大鼠分别灌胃10,20,40 mg/kg襄五脂素,对照组和模型组大鼠灌胃等体积的0.1%二甲基亚砜(DMSO)溶剂,共给药7 d。采用苏木素伊红(HE)和过碘酸-雪夫(PAS)染色观察大鼠肺组织形态和杯状细胞化生。ELISA法检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-12、IL-4、IL-5、IL-13的水平。流式细胞术检测脾脏Th1/Th2细胞亚群。qRT-PCR检测大鼠肺组织中E-cadherin、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、N-cadherin和vimentin的mRNA表达水平。Western blot检测大鼠肺组织中E-cadherin、α-SMA、N-cadherin、vimentin、p-p38(Thr180+Tyr182)、p38、GATA-3和Histone H3(细胞核内参蛋白)蛋白表达水平。结果与模型组比较,低、中和高剂量组大鼠的肺组织形态好转,炎性细胞、杯状细胞和黏液分泌减少;肺组织中E-cadherin的mRNA和蛋白相对表达量升高(P<0.05),α-SMA、N-cadherin和vimentin的mRNA和蛋白相对表达量降低(P<0.05),p-p38(Thr180+Tyr182)/p38比值和GATA-3/Histone H比值降低(P<0.05);BALF中IFN-γ和IL-12水平以及IFN-γ/IL-4比值均升高(P<0.05),IL-4、IL-5和IL-13水平降低(P<0.05);脾脏中CD4^(+)IFN-γ^(+)(Th1)细胞数量和Th1/Th2比值升高(P<0.05),CD4^(+)IL-4(Th2)细胞数量降低(P<0.05)。结论襄五脂素对哮喘大鼠具有显著治疗作用,可纠正哮喘大鼠Th1/Th2失衡并下调肺组织中p38介导的GATA-3磷酸化。

妊娠期胎膜早破患者血清GATA-3及MIP-3Α水平对羊膜腔内感染的诊断价值

目的探讨妊娠期胎膜早破患者血清GATA结合蛋白-3(GATA-3)联合巨噬细胞炎性蛋白-3α(MIP-3α)水平对羊膜腔内感染的诊断价值。方法回顾性分析,选取2021年10月至2023年8月在渭南市中心医院治疗的123例妊娠期胎膜早破患者作为研究对象,将是否发生羊膜腔内感染分为感染组(53例)和未感染组(70例)。感染组年龄(27.65±3.58)岁,孕周(36.47±3.04)周;未感染组年龄(27.71±3.69)岁,孕周(37.52±3.27)周。对比两组患者产前血清GATA-3和MIP-3α水平。受试者工作特征曲线(ROC)评估GATA-3、MIP-3α水平对妊娠期胎膜早破患者发生羊膜腔内感染的诊断价值,多因素logistic回归分析影响妊娠期胎膜早破患者发生羊膜腔内感染的危险因素。统计学方法采用t检验、χ^(2)检验。结果感染组血清GATA-3水平低于未感染组[(261.35±27.87)ng/L比(292.87±29.53)ng/L],MIP-3α水平高于未感染组[(38.84±6.33)μg/L比(29.61±5.62)μg/L],差异均有统计学意义(t=6.005、8.540,均P<0.05)。GATA-3、MIP-3α预测胎膜早破合并羊膜腔内感染的曲线下面积(AUC)分别为0.789、0.855,截断值分别为276.74 ng/L、36.04μg/L,特异度分别为77.4%、88.6%,灵敏度分别为75.7%、71.7%,二者联合检测的AUC为0.924,特异度为94.3%,灵敏度为81.1%。GATA-3≤276.74 ng/L、MIP-3α≥36.04μg/L、有流产及引产史、未足月胎膜早破是妊娠期胎膜早破患者发生羊膜腔内感染的独立风险因素(均P<0.05)。结论血清GATA-3、MIP-3α水平异常是影响胎膜早破患者并发羊膜腔内感染的危险因素,对于羊膜腔内感染的诊断具有较高价值。

哮喘患儿转录因子T-bet/GATA-3 mRNA比值及其与Th1/Th2平衡间的关系

【目的】研究转录因子T-bet/GATA-3在小儿哮喘发病以及Th1/Th2失衡中的作用。【方法】本实验拟通过半定量RT-PCR检测部分哮喘患儿外周血单个核细胞(PBMC)中T-bet、GATA-3 mRNA表达情况,同时采用三色荧光流式细胞仪检测哮喘患儿的Th1、Th2细胞数量,并对T-bet、GATA-3 mRNA表达水平与Th1、Th2细胞比率进行相关分析,了解T-bet/GATA-3对哮喘患儿的Th细胞分化的调节作用。【结果】哮喘患儿外周血淋巴细胞转录因子T-bet mRNA表达水平显著低于正常对照组,其中哮喘发作组显著低于缓解组(P<0.05);转录因子GATA-3 mRNA表达水平显著高于正常对照组,哮喘发作组又显著高于缓解组(P<0.05)。哮喘患儿外周血淋巴细胞亚群Th1百分率显著低于正常对照组,其中哮喘发作组又显著低于缓解组(P<0.05);Th2细胞百分率显著高于正常对照组,哮喘发作组又显著高于缓解组(P<0.05)。哮喘患儿T-bet mRNA表达量与Th1细胞比率呈正相关(r=0.731),与Th2细胞比率呈负相关(r=-0.685);GATA-3 mRNA表达量与Th1细胞比率呈负相关(r=-0.692),与Th2细胞比率呈正相关(r=0.717);T-bet/GATA-3 mRNA比值与Th1细胞比率呈正相关(r=0.793),与Th2细胞比率呈负相关(r=-0.639),与Th1/Th2比值呈正相关(r=0.801)。【结论】哮喘患儿T-bet/GATA-3 mRNA表达水平失调,与哮喘患儿Th1/Th2失衡密切相关,可作为衡量Th1/Th2平衡的新指标。

咳喘停贴剂穴位贴敷对慢性哮喘气道炎症大鼠肺组织T-bet、GATA-3 mRNA表达的影响

目的观察咳喘停贴剂穴位贴敷治疗对慢性哮喘气道炎症大鼠以Th1/Th2为主的上游特异性转录因子表达的影响。方法将50只Wistar雄性大鼠随机分成5组,每组10只,分别为正常组(A)、哮喘模型组(B)、地塞米松组(C)、假穴位贴敷组(D)、穴位贴敷组(E)。B、C、D、E组以卵蛋白(OVA)致敏和激发制作慢性哮喘气道炎症模型,观察治疗后各组大鼠肺组织Th1/Th2上游特异转录因子T-bet、GATA-3mRNA表达的差异性。结果与正常组比较,哮喘模型组、假穴位贴敷组T-bet mRNA含量降低,GATA-3mRNA含量升高,T-bet/GATA-3比值下降(P<0.05);地塞米松组、穴位贴敷组则差异无统计学意义。与哮喘模型组比较,地塞米松组、穴位贴敷组T-bet mRNA均升高,GATA-3mRNA均降低,T-bet/GATA-3比值均升高(P<0.05);假穴位贴敷组则差异无统计学意义。地塞米松组、穴位贴敷组之间差异无统计学意义。结论咳喘停贴剂穴位贴敷治疗慢性哮喘气道炎症,可通过增加Th1相关T-bet mRNA的表达,降低Th2相关GATA-3 mRNA的表达来调节Th1/Th2的失衡,从而起到改善慢性气道炎症的作用。咳喘停贴剂穴位贴敷治疗的疗效与地塞米松相似。

泡球蚴感染小鼠肝组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17 mRNA表达水平的研究

目的:研究泡球蚴感染小鼠肝组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17mRNA表达水平的变化特点,初步探讨Th17细胞与Th1/Th2在棘球蚴感染中的相互关系。方法:通过腹腔接种多房棘球绦虫的幼虫原头蚴混悬液制备泡球蚴感染小鼠模型,持续观察10个月,分别在感染2天、8天、1月、3月、6月和10月处死小鼠,收集肝脏组织。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组小鼠肝脏组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17 mRNA的表达水平。结果:T-bet mRNA的表达水平在感染早期开始增高,1月时达高峰后又开始缓缓下降至感染前水平;GATA-3 mRNA的表达水平在感染1月时明显升高,随后一直保持较高的表达水平;ROR-γt mRNA的表达水平在感染早期开始增高,感染1月时达到高峰,随后缓慢下降。IL-17 mRNA表达水平自感染早期开始持续性增高,到感染3月时达高峰,之后又逐渐降低至感染前水平。各组小鼠肝组织ROR-γt mRNA表达水平与T-bet mRNA表达水平呈正相关(r=0.67),IL-17 mRNA表达水平与ROR-γt mRNA表达水平有相关性(r=0.35),P值均<0.05。结论:泡球蚴感染宿主早期,主要以Th1型和Th17型细胞免疫为主,感染中后期出现Th1向Th2转化,机体呈现出以Th2细胞为主的优势应答。

环孢菌素A对慢性再生障碍性贫血患者T-bet、GATA-3、相关信号分子、细胞因子及Th1/Th2的影响

本研究探讨转录因子T-bet、GATA-3及相关信号通路在慢性再生障碍性贫血(CAA)免疫发病中的作用,从Th细胞失衡、转录因子及相关信号通路水平研究环孢菌素(CsA)治疗慢性AA的免疫调节机理。采用实时荧光定量PCR(real-time FQ-PCR)检测慢性AA患者治疗前和CsA治疗6月后外周血单个核细胞(PBMNC)T-bet、GATA-3及STAT4、STAT6mRNA表达;采用流式细胞术、酶联免疫吸附法(ELISA)检测慢性AA患者治疗前和CsA治疗6月后外周血Th1、Th2比例及PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12、IL-4水平,并与正常人进行比较。结果表明:慢性AA患者PBMNC T-bet、STAT4mRNA表达、T-bet/GATA-3比值、Th1比例、Th1/Th2比值、PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12表达均明显高于正常组(p<0.01),经CsA治疗6月后,患者T-bet、STAT4表达、T-bet/GATA-3比值、Th1比例、IFN-γ、IL-12表达均有所下降,但T-bet、STAT4、T-bet/GATA-3比值、Th1比例、IFN-γ表达仍未达到正常水平,GATA-3、STAT6mRNA表达、Th2比例、IL-4表达在治疗前后与正常人比较均无明显差异(p>0.05)。结论:IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路的异常活化及Th平衡向Th1型偏移在AA免疫异常的发病过程中起到关键的作用;CsA能通过下调IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路的异常活化及纠正Th1过度极化而减轻AA异常亢进的细胞免疫,解除造血抑制。

变应性鼻炎小鼠模型鼻黏膜组织重塑和转录因子T-bet/GATA-3的表达

【目的】建立变应性鼻炎小鼠模型,了解鼻黏膜组织重塑情况,探讨核因子T-bet/GATA-3比值在变应性鼻炎免疫失衡中的意义。【方法】建立卵清蛋白(OVA)诱导的变应性鼻炎小鼠模型;20只BALB/c小鼠随机分为正常组和实验组。HE染色观察呼吸道黏膜炎症变化;ELISA法(酶联免疫吸附法)检测血浆中白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)的水平;Western blot法检测T-bet、GATA-3蛋白在鼻黏膜组织的表达。【结果】变应性鼻炎小鼠鼻和支气管黏膜均存在组织重塑。与正常组相比,实验组鼻黏膜出现上皮脱落,杯状细胞增生,鳞状上皮组织转化,上皮坏死,固有层和黏膜下层腺体增生,血管扩张,组织水肿,并见特征性的嗜酸性粒细胞浸润。实验组血浆中IL-4和IFN-γ的水平分别是(16.5±4.1)pg/mL和(6.5±1.1)pg/mL,而对照组分别是(7.3±1.7)pg/mL,和(11.4±3.3)pg/mL;实验组血浆中IL-4的含量明显高于对照组,差异具有显著性(P<0.05),而IFN-γ的量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组鼻黏膜T-bet/GATA-3蛋白表达量的比值(0.62±0.17),明显高于实验组(0.12±0.03;P<0.05)。【结论】变应性鼻炎小鼠模型鼻黏膜存在组织重塑,可能与转录因子T-bet/GATA-3表达失衡导致下游Th1/Th2细胞免疫失衡和细胞因子IL-4/IFN-γ分泌失调有关。

黄芩苷对MCMV感染小鼠Th1/Th2细胞特异性转录因子TBX21/GATA-3表达的影响

目的检测黄芩苷治疗后鼠巨细胞病毒(MCMV)感染模型鼠脾细胞中TBX21、GATA-3蛋白的表达强度,进一步研究黄芩苷在调节Th1/Th2平衡中的作用。方法建立MCMV播散性感染模型,在MCMV接种后24h给予黄芩苷腹腔注射60mg/kg,1次/d,共14d,并设立安慰剂对照组和正常对照组。分别于治疗后3、7和14d取小鼠脾脏,提取脾组织蛋白,用Western blot法分别检测Th1和Th2细胞特异性转录因子TBX21和GATA-3表达强度。结果治疗后3d,黄芩苷治疗组TBX21蛋白表达水平明显高于正常对照组和安慰剂对照组(P<0.01)。治疗后7d和14d,黄芩苷治疗组TBX21蛋白表达水平明显高于正常对照组(P<0.01,P<0.05);而黄芩苷治疗组与安慰剂对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后3d,黄芩苷治疗组GATA-3蛋白表达水平明显低于正常对照组(P<0.01);而与安慰剂对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后7d和14d,GATA-3蛋白表达水平3组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论黄芩苷在MCMV急性感染早期可明显上调TBX21蛋白表达,进而促进Th1细胞免疫应答,有利于机体清除病毒,并对MCMV诱导的Th1/Th2细胞网络改变有一定调节作用。

腹腔注射干扰素γ对哮喘小鼠肺组织GATA-3及气道炎症的影响

目的:研究腹腔注射IFNγ对支气管哮喘的防治作用及其机制。方法:BALB/c小鼠随机分为三组,正常对照组(A组,12只)、哮喘模型组(B组,12只)、腹腔注射IFNγ组(C组,12只),B组、C组采用卵蛋白(OVA)和氢氧化铝建立哮喘模型,分别于第23天至第30天每次激发前腹腔注射0.25mlPBS液和IFNγ5μg,1次/d。第31天取肺泡灌洗液(BALF)测定细胞成分、IL4、IL5浓度,取血测定血浆IgE水平,观察肺组织病理学变化及GATA3的表达。结果:(1)C组BALF中的嗜酸粒细胞(EOS)(0.3±0.2)明显低于B组(21.1±6.7),P<0.01;(2)C组BALF中的IL4(3.0±2.5)和IL5(11.4±3.2)的水平明显低于B组的IL4(90.5±22.4)和IL5(55.6±10.7),P<0.01;(3)C组血浆中总IgE(24.3±7.6)和OVA特异性IgE(12.3±3.6)水平显著低于B组的IgE(67.2±9.7)和OVA特异性IgE(34.6±7.8),P<0.01;(4)HE染色示B组支气管平滑肌肥厚,黏膜充血、水肿,黏膜层增厚,并有EOS为主的炎性细胞浸润,管腔内可见黏液栓,支气管壁周围有EOS为主的炎性细胞浸润,而C组小鼠的上述炎性改变则明显减轻;(5)免疫组化显示B组肺组织中GATA3的表达明显增加,而C组GATA3的表达明显减少。结论:腹腔注射IFNγ可以抑制哮喘鼠IL4、IL5的合成、抑制EOS在气道内的炎性浸润及血浆中总IgE和OVA特异性的IgE水平,其机制可能与IFNγ阻断GATA3的表达,从而继发抑制Th2型反应有关。

CpG ODN对哮喘小鼠气道炎症及GATA-3的影响

目的观察CpGODN对支气管哮喘小鼠气道炎症及肺组织GATA-3mRNA表达的影响。方法将40只雌性BALB/C小鼠随机分为4组(每组10只):生理盐水对照组(A组);哮喘组(B组);CpGODN干预组(C组);GpCODN对照组(D组)。以鸡卵白蛋白(OVA)致敏小鼠建立哮喘模型,C组和D组在OVA激发前分别予CpGODN及对照GpCODN腹腔注射。在末次激发后24h收集各组小鼠的支气管肺泡灌洗液行白细胞计数及EOS分类计数,ELISA法检测各组小鼠BALF中IL-4、IL-5及IFN-γ水平,肺组织HE染色观察其病理变化以及用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织中GATA-3mRNA的表达。结果各组BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比、IL-4、IL-5和IFN-γ浓度分别为:A组为(7.46±1.77)×105个/mL、(0.75±0.48)%、(26.9±4.6)pg/mL、(41.7±5.1)pg/mL和(110.4±12.1)pg/mL,B组为(21.68±4.40)×105个/mL、(9.50±1.13)%、(267.6±24.5)pg/mL、(218.2±15.2)pg/mL和(47.9±9.6)pg/mL,C组为(8.98±2.23)×105个/mL、(2.90±0.86)%、(85.9±8.1)pg/mL、(63.0±9.6)pg/mL和(221.0±29.9)pg/mL,D组为(20.41±3.47)×105个/mL、(9.60±1.30)%、(260.7±15.7)pg/mL、(205.1±15.8)pg/mL和(52.2±10.7)pg/mL。B组与A组比较差异有显著性(P<0.01),C组与B组比较差异有显著性(P<0.01),D组与B组比较差异无显著性(P>0.05)。C组小鼠肺组织GATA-3mRNA的表达较B组明显减低,差异有显著性(P<0.01),D组与B组比较差异无显著性(P>0.05)。结论CpGODN可以抑制哮喘小鼠Th2型细胞因子生成,抑制肺部GATA-3mRNA的表达,减轻哮喘气道炎症。

平喘方对支气管哮喘小鼠肺组织microRNA126与GATA-3表达的影响

目的通过观察平喘方(麻黄、苦杏仁、紫苏子、桃仁、莱菔子、黄芩等)对支气管哮喘模型小鼠肺组织中microRNA126与GATA-3表达的影响,阐释平喘方改善气道炎症的作用机制。方法采用10%鸡卵白蛋白腹腔注射致敏和5%卵白蛋白雾化吸入激发,建立BALB/c小鼠支气管哮喘模型。40只雄性BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组和平喘方组,每组10只,治疗4周后采集小鼠肺组织,用光学显微镜观察小鼠肺组织的病理学改变。用聚合酶链式反应测定肺组织中microRNA126与GATA-3 mRNA的表达量。结果平喘方可以有效降低microRNA126,负向调控GATA-3的表达量,减轻支气管哮喘模型小鼠的症状,其作用与地塞米松组相当。结论平喘方对microRNA126的干预可能是降低GATA-3的一个切入点,从而达到抑制TH2过度表达,改善气道炎症。

转录因子T-bet和GATA-3对再生障碍性贫血免疫失衡的作用

目的探讨外周血中T-bet和GATA-3基因的表达在再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)中发病机制及意义。方法选择23例AA患者为再障组,其中重型再障(severe aplastic anemia,SAA)13例,轻型再障(mediate aplastic anemia,mAA)10例,再选择22例健康体检为对照组,对纳入对象采用流式细胞术检测其外周血Th1和Th2,同时运用RT-PCR技术检测外周血单个核细胞(PBMCs)中转录因子T-bet和GATA-3 mRNA基因表达。结果与对照组相比,再障组的lg(T-bet/β-actin)和Th1(%)升高,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01),lg(GATA-3/β-actin)和Th2(%)降低,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.05);其中SAA组的lg(T-bet/β-actin)、lg(GATA-3/β-actin)和Th1(%)、mAA组的lg(T-bet/β-actin)、Th1(%)相比对照组明显升高(P<0.05、P<0.01、P<0.01、P<0.05、P<0.05);SAA组的Th2(%)、mAA组的lg(GATA-3/β-actin)和Th2(%)相比对照组显著降低(P<0.05、P<0.01、P<0.05)。结论T-bet和GATA-3表达异常在AA发生、发展过程中发挥重要作用,可能机制为增强Th1细胞功能,抑制Th2细胞功能,导致患者免疫功能异常,最终引起再障发生。

基于T-bet/GATA-3表达研究化痰祛瘀法对哮喘小鼠气道炎症及免疫失衡的影响

目的:研究转录因子T-bet和GATA-3在哮喘模型小鼠疾病进展过程中的改变及其意义及其在Th1/Th2失衡中的作用,探讨化痰祛瘀法对支气管哮喘防治作用的机理。方法:通过卵蛋白致敏、激发建立支气管哮喘小鼠模型,于激发后7天和21天分批取材,用RT-PCR法检测肺组织匀浆中T-bet、GATA-3 mRNA表达。结果:激发7天后:与空白组比较:模型组T-bet明显降低,GATA-3明显升高,T-bet/GATA-3比值明显降低;两用药组T-bet及T-bet/GATA-3比值均明显降低,组间无明显差异。与模型组比较:两用药组T-bet均无明显变化,GATA-3均明显降低,T-bet/GATA-3比值均明显升高;组间无明显差异。哮喘激发21天后:与空白组比较:模型组T-bet明显降低,GATA-3明显升高,T-bet/GATA-3比值明显降低;两用药组T-bet及T-bet/GATA-3比值均明显降低。与模型组比较:地塞米松组T-bet无明显差异,GATA-3明显降低,T-bet/GATA-3比值明显升高;中药组T-bet明显升高,GATA-3明显降低,T-bet/GATA-3比值明显升高;两组间无明显差异。结论:BALB/c小鼠经OVA致敏及雾化激发后,使转录因子T-bet/GATA-3表达失衡,模型小鼠出现气道炎症及气道重建的相关表现,符合中医病机中的"痰瘀互结"。化痰祛瘀法对T-bet/GATA-3表达失衡具有双向纠偏的调节作用。对改善气道慢性炎症及气道重建方面,其疗效与地塞米松相近,但作用环节较对照组更为广泛,且随用药时间延长,有累加效应。