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Phosphodiesterase 9 localization in cytoplasm and nucleus:the gateway to selective targeting in neuroprotection?
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作者 Giovanni Ribaudo Matteo Giannangeli +1 位作者 Margrate Anyanwu Alessandra Gianoncelli 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS 2025年第6期1701-1702,共2页
The umbrella term"neurodege ne rative disorders"(NDDs) refers to several conditions characterized by a progressive loss of structure and function of cells belonging to the nervous system.Such diseases affect... The umbrella term"neurodege ne rative disorders"(NDDs) refers to several conditions characterized by a progressive loss of structure and function of cells belonging to the nervous system.Such diseases affect more than 50million people worldwide.Neurodegenerative disorders are characterized by sundry factors and pathophysiological mechanisms that a re challenging to be fully profiled.Many of these rely on cell signaling pathways to preserve homeostasis,involving second messengers such as cyclic adenosine monophosphate (cAMP)and cyclic guanosine 3',5'-monophosphate(cGMP).Their ability to control the duration and amplitude of the signaling cascade is given by the presence of several common and uncommon effectors.Protein kinases A and G (PKA and PKG),phosphodiesterases (PDEs),and scaffold proteins are among them. 展开更多
关键词 gateway HOMEOSTASIS preserve
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Ancient Zhenyuan, Gateway to East Guizhou
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作者 MENG JIAXIN 《China Today》 2024年第1期76-80,共5页
This ancient city has a history going back over 2,000 years.It has witnessed the fusion of multiple ethnic cultures including the Miao,Dong,and Han,and hosts a number of cultural heritage sites.THE old town of Zhenyua... This ancient city has a history going back over 2,000 years.It has witnessed the fusion of multiple ethnic cultures including the Miao,Dong,and Han,and hosts a number of cultural heritage sites.THE old town of Zhenyuan is located in Zhenyuan County,Qiandongnan Miao and Dong Autonomous Prefecture in southwest China’s Guizhou Province.Covering an area of just around three square kilometers,it sits on the banks of the Wuyang River and is surrounded by mountains.Zhenyuan has been a county for more than 2,281 years and was the prefectural capital during the Yuan(1271-1368)and Qing(1644-1911)dynasties.It is a multicultural region,with Miao,Dong,and other ethnic minorities making up nearly half of the population. 展开更多
关键词 GUIZHOU gateway SOUTHWEST
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The Design of Multi-Connector IoT Central Gateway Based on Raspberry Pi and Docker
3
作者 Jie Wang 《Journal of Electronic Research and Application》 2024年第5期66-71,共6页
With the vigorous development of Internet of Things(IoT)technology,the demand for communication and data exchange between different types of IoT devices is increasing day by day.To solve the problems of diversity and ... With the vigorous development of Internet of Things(IoT)technology,the demand for communication and data exchange between different types of IoT devices is increasing day by day.To solve the problems of diversity and complexity of communication protocols between devices,this paper proposes a design scheme of a multi-connector IoT central gateway based on Raspberry Pi and Docker.Through the research and application of related technologies,by integrating multiple communication interfaces and utilizing containerization technology,an efficient,flexible,and scalable IoT central gateway has been realized,which can support the connection and data interaction of multiple communication protocols and provide strong support for the stable operation and development of the IoT system. 展开更多
关键词 Internet of Things Raspberry Pi DOCKER CONNECTOR Central gateway
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A Duty Cycle-Based Gateway Selection Algorithm for LoRaWAN Downlink Communication
4
作者 Mohammad Al Mojamed 《Computer Systems Science & Engineering》 SCIE EI 2023年第6期2953-2970,共18页
Long Range Wide Area Network(LoRaWAN)has been developed to meet the requirements for the enormous device-to-device communication of Inter-net of Things(IoT)networks,which consist of a large number of participating dev... Long Range Wide Area Network(LoRaWAN)has been developed to meet the requirements for the enormous device-to-device communication of Inter-net of Things(IoT)networks,which consist of a large number of participating devices spread over large coverage areas with low data rates and low power con-sumption.It supports communications in both directions,uplink,and downlink directions.However,the downlink communication in the current LoRaWAN raises the bottleneck issue at gateways due to the used gateway selection algo-rithm.This paper proposes a novel gateway selection algorithm based on the duty cycle time-off values for the existing gateways,Duty Cycle Gateway Selection(DCGS),to direct acknowledgment packets as downlink traffic towards the most suitable gateway.Thus,the proposed system avoids subsequent retransmission of previously sent traffic that leads to excessive traffic overloading the network.The proposed system avoids exhausting a gateway duty cycle with downlink traffic by distributing the downlink traffic among available gateways based on the duty cycle time off.DCGS is evaluated using FloRa and INET frameworks in the well-known network simulator OMNeT++.The result shows the superior perfor-mance of the proposed approach over the existing Signal-to-Noise ratio(SNR)based selection mechanism.It clearly indicates that the DCGS maintains a better confirmed packet delivery rate while reducing number of retransmissions,colli-sions,and power consumption. 展开更多
关键词 LoRa LoRaWAN gateway selection IOT DOWNLINK LPWAN
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An Optimal Cluster Head and Gateway Node Selection with Fault Tolerance
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作者 P.Rahul B.Kaarthick 《Intelligent Automation & Soft Computing》 SCIE 2023年第2期1595-1609,共15页
In Mobile Ad Hoc Networks(MANET),Quality of Service(QoS)is an important factor that must be analysed for the showing the better performance.The Node Quality-based Clustering Algorithm using Fuzzy-Fruit Fly Optimiza-ti... In Mobile Ad Hoc Networks(MANET),Quality of Service(QoS)is an important factor that must be analysed for the showing the better performance.The Node Quality-based Clustering Algorithm using Fuzzy-Fruit Fly Optimiza-tion for Cluster Head and Gateway Selection(NQCAFFFOCHGS)has the best network performance because it uses the Improved Weighted Clustering Algo-rithm(IWCA)to cluster the network and the FFO algorithm,which uses fuzzy-based network metrics to select the best CH and entryway.However,the major drawback of the fuzzy system was to appropriately select the membership func-tions.Also,the network metrics related to the path or link connectivity were not considered to effectively choose the CH and gateway.When learning fuzzy sets,this algorithm employs a new Continuous Action-set Learning Automata(CALA)approach that correctly modifies and chooses the fuzzy membership functions.Despite the fact that it extends the network’s lifespan,it does not assist in the detection of defective nodes in the routing route.Because of this,a new Fault Tolerance(NQCAEFFFOCHGS-FT)mechanism based on the Distributed Connectivity Restoration(DCR)mechanism is proposed,which allows the net-work to self-heal as a consequence of the algorithm’s self-healing capacity.Because of the way this method is designed,node failures may be utilised to rebuild the network topology via the use of cascaded node moves.Founded on the fractional network information and topologic overhead related with each node,the DCR is suggested as an alternative to the DCR.When compared to the NQCAFFFOCHGS algorithm,the recreation results display that the proposed NQCAEFFFOCHGS-FT algorithm improves network performance in terms of end-to-end delay,energy consumption,Packet Loss Ratio(PLR),Normalized Routing Overhead(NRO),and Balanced Load Index(BLI). 展开更多
关键词 Hybrid-manet cluster head gateway node failure fault tolerance distributed connectivity restoration
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Widening the Gateway--China aims to foster internationally competitive manufacturing within an open environment
6
作者 Mei Xinyu 《China Report ASEAN》 2023年第12期50-51,共2页
A mong the eight major steps China announced at the Third Belt and Road Forum for International Cooperation to support high-quality Belt and Road cooperation,the cancelation of all restrictions on foreign investment a... A mong the eight major steps China announced at the Third Belt and Road Forum for International Cooperation to support high-quality Belt and Road cooperation,the cancelation of all restrictions on foreign investment access in the manufacturing sector is the most striking measure,or at least one of the most eye-catching. 展开更多
关键词 INVESTMENT COMPETITIVE gateway
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Gateway技术构建酵母双杂分析用辣椒cDNA文库 被引量:10
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作者 邱爱连 刘林林 +5 位作者 蔡汉阳 朱万里 黄木坤 陈雄 何水林 张健 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期791-796,共6页
构建cDNA文库是利用酵母双杂交技术开展特定cDNA分离的重要基础工作。利用Gateway技术,在成功提取辣椒总RNA并分离mRNA的基础上,合成了3种读码框的双链cDNA,通过BP反应构建其相应的入门文库,再通过LR反应将cDNA迅速且定向地重组到酵母... 构建cDNA文库是利用酵母双杂交技术开展特定cDNA分离的重要基础工作。利用Gateway技术,在成功提取辣椒总RNA并分离mRNA的基础上,合成了3种读码框的双链cDNA,通过BP反应构建其相应的入门文库,再通过LR反应将cDNA迅速且定向地重组到酵母双杂分析用目的载体pDESTTM22上,构建成高质量目的文库。经检测入门文库和目的文库滴度均达到(4.0~5.0)×106cfu/mL,文库总容量为(2.4~3.0)×107cfu,平均插入片段大小为1250bp,其质量完全满足于进一步利用酵母双杂体系分析目的基因互作蛋白cDNA。 展开更多
关键词 辣椒 入门文库 目的文库 gateway 酵母双杂
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利用Gateway克隆技术大规模克隆拟南芥转录因子 被引量:19
8
作者 梅文倩 宋文强 +2 位作者 潘怡 巩威 朱玉贤 《分子植物育种》 CAS CSCD 2004年第3期358-364,共7页
随着越来越多基因组全序列的测定完成,基因组的研究进入了功能研究阶段。功能基因组的研究需要把大量基因连入不同载体,传统的酶切连接构建载体的方法不能满足这种大规模克隆的需要。Gateway技术是一种高效的大规模克隆系统,而且对载体... 随着越来越多基因组全序列的测定完成,基因组的研究进入了功能研究阶段。功能基因组的研究需要把大量基因连入不同载体,传统的酶切连接构建载体的方法不能满足这种大规模克隆的需要。Gateway技术是一种高效的大规模克隆系统,而且对载体和宿主没有依赖性。本文利用Gateway大规模克隆技术将16个拟南芥转录因子的ORF克隆入植物表达载pPTV和酵母表达载体pYTV中,酵母融合表达实验和West-ern-blot检测证明了该克隆途径的可行性,并且得到的His-Tag融合蛋白,为拟南芥转录因子的大规模蛋白质组学研究奠定了良好的基础,同时基因序列的聚类分析为将来进一步的功能研究提供了有利信息。 展开更多
关键词 gateway克隆技术 拟南芥 转录因子 聚类分析 功能基因组
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使用与Gateway技术兼容的T载体获得入门克隆 被引量:10
9
作者 陈其军 安瑞 +2 位作者 周海梦 陈珈 王学臣 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第10期951-954,共4页
与Gateway技术兼容的农杆菌双元载体系统已开始应用于植物功能基因组的研究 ,但应用这些载体系统的一个瓶颈问题 ,是如何简单、经济和高效地将PCR产物或其他来源的目的DNA片段构建到入门载体上获得入门克隆 .为此 ,将传统的TA克隆技术与... 与Gateway技术兼容的农杆菌双元载体系统已开始应用于植物功能基因组的研究 ,但应用这些载体系统的一个瓶颈问题 ,是如何简单、经济和高效地将PCR产物或其他来源的目的DNA片段构建到入门载体上获得入门克隆 .为此 ,将传统的TA克隆技术与Gateway重组克隆技术进行整合 ,构建了与Gateway技术兼容的两种TA克隆载体 ,用于在克隆PCR产物或其他来源的目的DNA片段的同时获得入门克隆 .利用兼容Gateway技术的TA克隆载体有效地解决了上述瓶颈问题 . 展开更多
关键词 gateway克隆技术 TA克隆技术 入门载体 T载体 入门克隆
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Gateway~技术构建交链孢菌JH505 cDNA文库 被引量:12
10
作者 龙松华 张宁 +2 位作者 邱德文 黎定军 黄炜 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期963-965,共3页
Gateway○R技术构建cDNA文库,利用λ噬菌体的位点特异性重组,避免使用限制性内酶切割cDNA,能够解决常规方法构建cDNA文库的技术缺陷。首次应用Gateway○R技术构建交链孢菌cDNA文库,经检测cDNA入门文库的滴度达到1×107cfumL,文库总... Gateway○R技术构建cDNA文库,利用λ噬菌体的位点特异性重组,避免使用限制性内酶切割cDNA,能够解决常规方法构建cDNA文库的技术缺陷。首次应用Gateway○R技术构建交链孢菌cDNA文库,经检测cDNA入门文库的滴度达到1×107cfumL,文库总容量为9×107cfu,平均插入片段为1510bp。通过LR重组把入门文库转换为表达文库,表达文库的滴度为1.58×106cfu/mL,文库总容量为6.32×106cfu,平均插入片段大小为1680bp。表达文库的构建为进一步克隆植物激活蛋白基因打下了基础。 展开更多
关键词 gateway技术 交链孢菌 激活蛋白 cDNA入门文库 CDNA表达文库
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Gateway技术构建结缕草低温和干旱诱导cDNA文库及其质量鉴定 被引量:11
11
作者 王舟 宗俊勤 +1 位作者 郭海林 刘建秀 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期911-917,共7页
为研究结缕草(Zoysia japonica)胁迫响应信号转导途径中的关键基因,揭示结缕草抗逆分子机制,建立结缕草功能基因组学研究基础平台,以经低温、干旱处理的结缕草为材料,采用Gateway技术构建了首个结缕草低温和干旱诱导的标准cDNA文库。文... 为研究结缕草(Zoysia japonica)胁迫响应信号转导途径中的关键基因,揭示结缕草抗逆分子机制,建立结缕草功能基因组学研究基础平台,以经低温、干旱处理的结缕草为材料,采用Gateway技术构建了首个结缕草低温和干旱诱导的标准cDNA文库。文库质量分析表明,未扩增的原始文库滴度1.76×106 pfu.mL-1,库容7.04×106 pfu,插入片段平均大小大于1kb,重组率90%。文库质量优良,可能包含大量新基因,不仅能为结缕草功能基因组分析提供必要资源,也可为后期进行高通量EST测序、发掘新抗逆相关基因、制作基因芯片等研究奠定基础。 展开更多
关键词 结缕草 CDNA文库 低温胁迫 干旱胁迫 构建 gateway技术
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单子叶植物RNA干扰和过表达Gateway载体的构建 被引量:10
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作者 毕惠惠 王根平 +1 位作者 王成社 夏兰琴 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期115-123,共9页
基因枪和农杆菌介导的遗传转化是目前常用的两种单子叶植物遗传转化方法。载体的发展和改良是提高植物遗传转化效率的重要基础,RNA干扰载体和过表达载体是目前通过遗传转化研究植物基因功能的主要工具。Gateway克隆技术是一种基于lambd... 基因枪和农杆菌介导的遗传转化是目前常用的两种单子叶植物遗传转化方法。载体的发展和改良是提高植物遗传转化效率的重要基础,RNA干扰载体和过表达载体是目前通过遗传转化研究植物基因功能的主要工具。Gateway克隆技术是一种基于lambda噬菌体特异位点重组特性的通用克隆技术,该技术可以将大批目的基因方便、快捷地连接到受体载体上。本文利用Gateway技术结合传统酶切、连接方法,构建了适用于单子叶植物基因枪和农杆菌转化的RNA干扰Gateway载体pAHC-PSK-RNAi、pClean-G185-RNAi和过表达Gateway载体pAHC-PSK-OE和pClean-G185-OE,为利用基因枪和农杆菌介导的遗传转化,在小麦和水稻等单子叶植物中进行规模化基因功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 单子叶植物 遗传转化 RNA干扰 过表达 gateway
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基于Gateway技术的低成本植物双分子荧光互补分析系统 被引量:6
13
作者 周洁 王栩鸣 +5 位作者 陈斌 陈娟 杨勇 余初浪 严成其 陈剑平 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期1024-1030,共7页
创制基于Gateway重组技术的双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)载体,同时创制低成本低克隆背景的Gateway入门载体。利用入门载体,采用Gateway技术快速将目标基因重组到BiFC目标载体,并采用农杆菌注射侵染... 创制基于Gateway重组技术的双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)载体,同时创制低成本低克隆背景的Gateway入门载体。利用入门载体,采用Gateway技术快速将目标基因重组到BiFC目标载体,并采用农杆菌注射侵染烟草的方法观察荧光互作结果。构建的Gateway入门载体,由于带有ccdB基因,非线性化的载体无法在ccdB敏感菌株中生长,因此消除了载体本身的背景。同时由XcmⅠ酶切后产生的T突出,可以很好地与PCR产物结合,连接效率和普通商业化T载体一致。此外,由于载体可由实验室自行制备且采用了TA克隆,创制入门克隆的成本大大降低。借助该研究改造的BiFC目标载体,目的基因能快速地重组到目的载体用于基因互作鉴定。利用本研究构建的Gateway系统,能够以较低成本快速的进行基因克隆和互作研究。 展开更多
关键词 入门载体 BIFC 基因互作 gateway
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应用Gateway技术构建水稻OsDAD1基因的RNA干涉载体 被引量:16
14
作者 徐化学 熊建华 傅彬英 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第1期133-136,共4页
近年来,RNA干涉广泛应用于植物基因功能研究。Gateway技术是通过采用多重载体高效构建目标基因及任何DNA片段克隆和表达载体的研究平台,该技术以λ噬菌体的位点特异性重组体系为基础,两端具有重组位点的DNA片段或目标基因可以非常容易... 近年来,RNA干涉广泛应用于植物基因功能研究。Gateway技术是通过采用多重载体高效构建目标基因及任何DNA片段克隆和表达载体的研究平台,该技术以λ噬菌体的位点特异性重组体系为基础,两端具有重组位点的DNA片段或目标基因可以非常容易地被重组克隆到含同源重组位点的载体上。这种以重组为基础的克隆体系目前已被广泛应用于分子生物学中来分析基因的功能。本文应用Gateway技术体系替代传统载体构建方法,构建了水稻基因OsDAD1的RNA干涉载体,从而证明了Gateway技术的可行性。 展开更多
关键词 RNA干涉 载体 gateway OsDAD1基因
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利用Gateway技术构建黄瓜HPL基因的RNA干扰载体 被引量:3
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作者 王聪颖 陈书霞 +5 位作者 陈巧 郝丽宁 孟焕文 万旭花 申晓青 程智慧 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期152-158,共7页
为探讨黄瓜脂氢过氧化物裂解酶基因(HPL)下调表达对黄瓜果实挥发性醛类物质合成的影响,设计1对特异引物,以黄瓜pDONR201-HPL质粒为模板,通过PCR扩增出323bp的片段。利用基于同源重组原理的Gateway技术,将扩增的片段通过BP反应连接到入... 为探讨黄瓜脂氢过氧化物裂解酶基因(HPL)下调表达对黄瓜果实挥发性醛类物质合成的影响,设计1对特异引物,以黄瓜pDONR201-HPL质粒为模板,通过PCR扩增出323bp的片段。利用基于同源重组原理的Gateway技术,将扩增的片段通过BP反应连接到入门载体pDONR201中。对扩增出的323bp的片段进行测序,测序结果显示该序列与原序列同源性为100%。在此基础上,通过LR反应将目的片段插入过表达的植物RNA干涉载体pHellsgate8,构建黄瓜HPL基因的RNAi表达载体pHellsgate8-HPLi,分别经限制性内切酶XhoⅠ、XbaⅠ酶切后获得323bp的片段,与预期结果一致。采用热击法将pHellsgate8-HPLi转化农杆菌GV3101,经菌液PCR扩增获得323bp的目的条带,表明RNAi表达载体pHellsgate8-HPLi已成功转入农杆菌中。 展开更多
关键词 黄瓜 HPL基因 RNAi干扰 克隆载体 表达载体 gateway技术
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利用gateway技术构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库 被引量:4
16
作者 李梦辉 刘连瑞 +6 位作者 涂浩 黄经纬 张振超 徐立新 严若峰 李祥瑞 宋小凯 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期630-635,共6页
[目的]为了寻找可用于研制高效重组疫苗的抗原基因,利用gateway技术构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库。[方法]首先从新鲜分离的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊中提取总RNA并分离纯化mRNA,用Clone MinerTMⅡcDNA文库构建试剂盒构建... [目的]为了寻找可用于研制高效重组疫苗的抗原基因,利用gateway技术构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库。[方法]首先从新鲜分离的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊中提取总RNA并分离纯化mRNA,用Clone MinerTMⅡcDNA文库构建试剂盒构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA初级文库,然后将cDNA从初级文库重组到p VAX1.0上,构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库,最后用7个已知巨型艾美耳球虫基因的引物鉴定文库。[结果]构建的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA初级文库总容量为0.92×107CFU,插入片段平均大小为1.63 kb;表达文库总容量为2.32×107CFU,插入片段平均大小为1.64 kb。两种文库的阳性重组率均为100%。能用特异性引物从该表达文库扩增出7个已知的巨型艾美耳球虫基因。[结论]该文库质量高,代表性强,为进一步筛选免疫保护性抗原基因奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 巨型艾美耳球虫 孢子化卵囊 gateway技术 CDNA表达文库
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Gateway技术快速构建百合双价抗病毒RNAi表达载体 被引量:5
17
作者 徐品三 白建芳 +1 位作者 刘纪文 李焕改 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第4期144-147,共4页
为获得适合转化百合的双价RNAi表达载体,以感病百合叶片的总RNA为模板,分别扩增400bp左右的LSV和LMoVCP基因。通过重叠延伸PCR技术获得长约800bp的LSV-LMoV融合基因。利用Gateway技术,通过BP反应及LR反应将LSV-LMoV融合基因克隆到双元载... 为获得适合转化百合的双价RNAi表达载体,以感病百合叶片的总RNA为模板,分别扩增400bp左右的LSV和LMoVCP基因。通过重叠延伸PCR技术获得长约800bp的LSV-LMoV融合基因。利用Gateway技术,通过BP反应及LR反应将LSV-LMoV融合基因克隆到双元载体pH7GWIWG2(Ⅱ),成功构建了含2种病毒基因的RNAi表达载体pH7GWIWG2(Ⅱ)-LSV-LMoV。将构建好的双价表达载体导入农杆菌EHA105,PCR和测序表明所构建的载体及获得的工程菌与预期的完全一致。 展开更多
关键词 百合无症病毒 百合斑驳病毒 RNAI载体 重叠延伸PCR gateway技术
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乳酸杆菌组成型启动子探测载体pgateway-612的构建 被引量:2
18
作者 陈家锃 崔红玉 +4 位作者 田志军 葛俊伟 安同庆 彭金美 李一经 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期849-853,共5页
为筛选适宜乳酸菌(LAB)宿主表达载体的启动子,本研究以大肠杆菌-LAB穿梭载体pPG612为基本骨架,利用GatewayTM克隆技术操作构建了LAB组成型启动子探测载体,并利用该载体筛选了短乳杆菌的S层启动子。我们利用底物X-gluC与报告基因gusA编... 为筛选适宜乳酸菌(LAB)宿主表达载体的启动子,本研究以大肠杆菌-LAB穿梭载体pPG612为基本骨架,利用GatewayTM克隆技术操作构建了LAB组成型启动子探测载体,并利用该载体筛选了短乳杆菌的S层启动子。我们利用底物X-gluC与报告基因gusA编码的蛋白酶之间的特异性显色反应筛选阳性菌落,超声破碎后的菌体蛋白经SDS-PAGE和western blot分析表明该启动子在宿主菌中具有组成型启动子活性。本研究为进一步利用表达载体及筛选其他LAB启动子奠定基础。 展开更多
关键词 乳酸菌 启动子探测载体 gateway克隆技术 X-gluC
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利用Gateway技术构建重组腺病毒载体pAd-LMP-1 被引量:4
19
作者 顾洪生 程志安 +2 位作者 李振宇 周文钰 邹小英 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第24期4425-4429,共5页
背景:目前大多采用Adeasy系统来构建和包装腺病毒载体,整个过程需要多次酶切,连接和转化筛选,并且在BJ183菌中的重组阳性率很低,还可能存在假阳性的可能,整个过程耗时、繁琐。目的:应用Gateway技术较快速构建大鼠LIM矿化蛋白1基因重组... 背景:目前大多采用Adeasy系统来构建和包装腺病毒载体,整个过程需要多次酶切,连接和转化筛选,并且在BJ183菌中的重组阳性率很低,还可能存在假阳性的可能,整个过程耗时、繁琐。目的:应用Gateway技术较快速构建大鼠LIM矿化蛋白1基因重组腺病毒载体。方法:从SD大鼠成骨细胞内提取总RNA,并设计LMP-1特异性引物进行RT-PCR,获取LMP-1基因后利用Invitrogen公司的TOPO定向克隆技术创建入门克隆pENTR/D-LMP-1,转化TOP10细菌后挑取阳性克隆摇菌提取质粒,入门克隆再与表达载体pAD/CMV/V5-DEST进行同源重组反应得到病毒载体pAD/CMV/V5-LMP-1,转化细菌后挑选阳性克隆摇菌提取重组病毒质粒,用PacⅠ内切酶线性化后用转染293A细胞后得到重组腺病毒载体。将目的基因与Genebank中LMP-1(基因号:AF095585)一致性BLAST比较,并观察重组腺病毒载体pAd-LMP-1的表达。.结果与结论:总RNA后电泳结果显示所提RNA完整,RNA纯度符合要求。成功获取大鼠LMP-1基因,入门质粒与病毒表达质粒经过酶切鉴定以及测序证明,目的基因与Genebank中LMP-1(基因号:AF095585)作BLAST比较,发现系列一致,没有突变。构建出来的腺病毒载体载体能在293A细胞中包装成功。提示利用Gateway技术构建LMP-1重组腺病毒载体相对简单、快捷地获得pAd-LMP-1。 展开更多
关键词 重组腺病毒载体 LIM矿化蛋白 gateway技术 克隆 大鼠
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Gateway技术构建小鼠血管生成素-1慢病毒表达载体及其病毒包装 被引量:2
20
作者 李秋平 马新娜 +4 位作者 张小英 许靖 章晟 王春枝 封志纯 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期866-870,共5页
目的构建携带小鼠血管生成素-1(Ang-1)基因的慢病毒载体并进行慢病毒包装。方法利用Gateway技术构建携带DsRed荧光蛋白的Ang-1慢病毒载体,经PCR及基因测序鉴定后,与辅助质粒pLV/helper-SL3、pLV/helper-SL4及pLV/helper-SL5混合采用脂... 目的构建携带小鼠血管生成素-1(Ang-1)基因的慢病毒载体并进行慢病毒包装。方法利用Gateway技术构建携带DsRed荧光蛋白的Ang-1慢病毒载体,经PCR及基因测序鉴定后,与辅助质粒pLV/helper-SL3、pLV/helper-SL4及pLV/helper-SL5混合采用脂质体法制备DNA-Lipofectamine 2000复合物,并共同转染293FT细胞进行慢病毒包装,产生相应慢病毒颗粒,通过荧光表达情况来测定病毒滴度和感染效率。结果通过PCR、基因测序证实,Ang-1慢病毒表达载体PLV.Ex3d.P/puro-CMV>Ang-1>IRES/DsRed-Express2构建成功。经转染293FT细胞包装出具高效感染力的慢病毒,经测定病毒滴度为5×108TU/ml。结论成功构建Ang-1慢病毒表达载体,并包装出具高效感染力的慢病毒颗粒,为进一步研究Ang-1基因功能及基因治疗提供实验基础。 展开更多
关键词 血管生成素-1 慢病毒 载体 gateway技术
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