黄芪莪术不同比例配伍后莪术4种挥发性成分的含量变化研究

目的:探究黄芪莪术不同配伍比例中,莪术挥发油中抗肿瘤活性成分含量的变化。方法:水蒸气蒸馏法对挥发油进行提取,运用气相色谱法,测定单味莪术及黄芪莪术配伍比例为1∶1、2∶1、3∶1、5∶1、1∶2中β-榄香烯、莪术醇、吉马酮、新莪术二酮的含量。采用HP-5气相色谱柱,程序升温法,进样口温度为250℃,FID检测器温度为280℃;内标物质是水杨酸甲酯。结果:β-榄香烯、莪术醇、吉马酮、新莪术二酮4种挥发油分别在0.0030~0.1920 mg·mL^(-1)(r=0.9969)、0.0233~2.9790 mg·mL^(-1)(r=0.9993)、0.0059~0.3760 mg·mL^(-1)(r=0.9994)、0.0175~1.1180 mg·mL^(-1)(r=0.9943)范围呈良好的线性关系,黄芪、莪术以2∶1的比例配伍时,各成分溶出量最高。结论:随着黄芪莪术配伍比例的不同,挥发油中抗肿瘤成分含量有所变化,以2∶1、3∶1的配伍比例为佳,为临床应用和药效学研究提供依据。

咽炎片挥发油质量评价

目的评价咽炎片挥发油质量。方法建立GC指纹图谱,进行化学计量学分析,测定薄荷脑含量。结果5个企业20批样品指纹图谱中有8个共有峰,相似度均在0.85以上。各批样品聚为2类,质量差异标志物有3个,其中2个为薄荷脑和异薄荷酮。薄荷脑在0.05105~1.021μg范围内线性关系良好(r=1.0000);平均加样回收率为103.6%,RSD为2.9%。结论色谱技术结合化学计量学可有效评价各企业咽炎片挥发油质量。

QuEChERS/气相色谱-质谱法同时测定砂仁中樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯含量

目的建立同时测定砂仁中樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯含量的QuEChERS/气相色谱-质谱(QuEChERS/GC-MS)法。方法样品用无水乙醇提取,经N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷键合硅胶、石墨化炭黑和硫酸镁吸附净化处理。色谱柱为HP-5 MS型色谱柱(30 m×0.25 mm,0.25μm),程序升温,流速为1.0 mL/min,分流进样,分流比为20∶1,电子轰击离子源,选择性监测、全扫描模式,定量特征离子质荷比为95。比较QuEChERS/GC-MS法和气相色谱-氢火焰离子化检测器(GC-FID)法含量测定结果的相对相差值,考察方法的可靠性。结果樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯的质量浓度分别在50~2000μg/mL、5~200μg/mL、100~5000μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(R2≥0.997,n=6);检测限均为0.005 mg/kg,定量限均为0.015 mg/kg;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均低于3.0%;50%,100%,200%水平的加样回收率为93.37%~105.37%,RSD为1.38%~2.85%(n=6)。QuEChERS/GC-MS法和GC-FID法测定樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯含量的相对相差值分别为4.76%,4.64%,3.67%。结论该方法操作简便、灵敏度高、重复性好、结果准确,可用于砂仁中樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯的含量测定。

基于柱前衍生GC-MS法比较不同工艺制备黄精的氨基酸含量

建立了柱前衍生GC-MS法测定黄精中15种氨基酸含量的方法。测定经不同工艺制备的黄精鲜品、干品及炮制品样品中氨基酸的含量,并运用多元数据统计对这3种不同黄精样品中的氨基酸进行综合分析。结果表明:三种黄精制品中的15种氨基酸在33min内有良好的分离效果,在线性范围内线性关系良好(r:0.9983〜0.9999),平均加样回收率为95.66%〜105.55%(n=6)。说明该方法能准确测定黄精中多种氨基酸的含量,且黄精鲜品氨基酸含量明显高于干品及炮制品。聚类及正交偏最小二乘法-判别分析结果表明,黄精鲜品、干品和炮制品可以明显聚为不同三类,说明上述三种黄精制品的氨基酸含量有明显差异性,并筛选出赖氨酸、组氨酸、甘氨酸和络氨酸作为区分黄精鲜品、干品和炮制品的标志物。

油茶象甲Curculio chinensis基因组Survey测序分析

油茶象甲Curculio chinensis Chevrolat是危害中国特有木本油料树种——油茶的专性蛀果害虫,也是中国林业危险性有害生物之一,在中国不同油茶产区均有分布,对油茶的为害呈加重趋势。为了深入研究其遗传基础和寄主适应性,确定适合鞘翅目象甲科基因组测序研究策略,首先采取Survey测序,之后做深度基因组测序和大规模种群测序。研究采用二代高通量测序技术(MGISEQ-2000),测定了油茶象甲基因组大小,并估计该物种基因组的杂合度、重复率和GC含量。结果显示:油茶象甲基因组大小约为1356.82 Mb,测序深度达到50×;K-mer分析油茶象甲基因组虽然具有杂合峰,但杂合率较低,为1.20%;基因组重复序列含量约为77%。该研究结果对于揭示油茶象甲适应性进化具有重要意义,可为后续构建完整基因组和多种群基因组测序提供策略选择依据。

GC法同时测定藏药八味沉香散中挥发性指标成分含量

目的建立气相色谱(GC)法同时测定藏药八味沉香散中挥发性指标成分乙酸辛酯、苄基丙酮、肉豆蔻醚、去氢木香内酯含量的方法。方法采用GC法,以乙酸辛酯、苄基丙酮、肉豆蔻醚、去氢木香内酯作为指标成分,应用SH-WAX毛细管柱(30 m×0.25 mm,0.25μm),柱温程序升温,载气为氮气,进样口温度为220℃,检测器温度为240℃,分流进样,进样量为1μL。结果乙酸辛酯、苄基丙酮、肉豆蔻醚、去氢木香内酯质量浓度分别在12.44~124.43μg·mL^(-1)、2.90~29.01μg·mL^(-1)、15.95~159.45μg·mL^(-1)、15.62~156.15μg·mL^(-1)范围内与峰面积呈良好的线性关系(r≥0.9995);平均回收率分别为100.40%(RSD=1.55%)、97.80%(RSD=1.41%)、99.50%(RSD=0.77%)、99.50%(RSD=0.85%)(n=6)。结论该方法专属性、精密性、重复性、准确性好,可用于八味沉香散中挥发性指标成分的含量测定。

美洲大蠊不同发育阶段蛋白质、重金属含量测定及脂溶性成分的GC-MS分析

为促进药材资源的综合开发利用,对美洲大蠊1龄、3龄、6龄以及成虫中蛋白质和4种重金属元素含量、脂溶性成分组成进行了测试。采用凯氏定氮法测定粗蛋白含量、ICP-MS测定重金属元素含量、GC-MS测定脂溶性成分及相对含量。美洲大蠊在不同生长发育阶段的粗蛋白含量为56.61%~67.38%;砷含量≤0.2714 mg/kg;汞含量≤0.1972 mg/kg;铅含量≤0.5482 mg/kg;镉含量≤0.1222 mg/kg;从脂溶性成分中鉴定30种化合物,其中5种为4个生长发育阶段共有成分。美洲大蠊成虫体内蛋白质达63%,是优质的饲料蛋白来源。根据《饲料卫生标准》相关规定,其虫体中汞含量超标,需要对美洲大蠊养殖过程所用的饲料配方进行优化;美洲大蠊体内以棕榈酸为代表的饱和脂肪酸是其表现脂毒性的重要因素,油脂中富含抗氧化酚类物质。

活血消痛酊挥发性成分的鉴定及含量测定

目的建立鉴定活血消痛酊中挥发性成分及测定其中5种指标性成分含量的气相色谱-质谱联用(GC-MS)法。方法色谱柱为Agilent PEG20M毛细管柱(30 m×0.32 mm,0.25µm),程序升温,进样口温度为230℃,载气为高纯氦气,流速为1.0 mL/min,分流比为5∶1(V/V),进样量为1µL;采用电子轰击离子源(成分鉴定)或选择性离子监测模式(含量测定),质量扫描范围为m/z 40~500。结果共鉴定出37种挥发性成分。3-蒈烯、桉油精、β-石竹烯、丁香酚、对甲氧基肉桂酸乙酯的质量浓度分别在0.2002~40.04µg/mL、0.2026~40.52µg/mL、0.2992~59.84µg/mL、0.6010~120.20µg/mL、0.3022~60.44µg/mL范围内与待测成分离子强度线性关系良好(R2>0.9990,n=7);检测限分别为3.11,2.94,3.29,7.58,4.35 ng/mL,定量限分别为10.31,9.75,10.90,25.03,14.49 ng/mL;精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于5%(n=6);平均加样回收率分别为93.01%,91.90%,94.69%,93.42%,92.70%,RSD分别为4.98%,5.53%,5.04%,4.29%,4.83%(n=9)。20批样品中,上述5种成分的平均含量分别为1.48,2.07,3.26,8.80,3.59µg/mL。结论该方法操作简便,结果准确,重复性好,可用于活血消痛酊挥发性成分的鉴定及含量测定。

通过量效关系评价CO_(2)超临界提取肉豆蔻挥发油质量

目的:气相色谱-三重四极杆质谱(GC-MS/MS)法定量分析16批次肉豆蔻挥发油中4-萜烯醇、α-蒎烯、甲基丁香酚、榄香素、黄樟素和肉豆蔻醚,结合抗炎活性量效分析,对肉豆蔻的药效成分进行质量评价。方法:采用CO_(2)超临界萃取法提取肉豆蔻挥发油,建立GC-MS/MS法分析肉豆蔻中6个成分的检测方法,进行方法学考察并对16批次挥发油样品中6个成分进行含量测定。气相色谱条件:J&W DB-17ms气相色谱柱(30 m×0.25 mm,0.25μm);升温程序:50℃,保持1 min,以10℃·min^(-1)的速率升高到150℃,保持3 min;再以20℃·min^(-1)的速率升高到250℃,保持3 min。进样口温度280℃;载气为氮气,流速为1 mL·min^(-1),分流比为10∶1,进样量为1μL;建立16批次挥发油处理脂多糖(LPS)诱导的Raw264.7巨噬细胞炎症模型,并进行药效分析;对挥发油中6个成分进行主成分分析(PCA-X)、Pearson相关性分析及药效分析,并将变量重要性投影(VIP)值>1及Pearson系数为正的化合物作为贡献性成分。结果:4-萜烯醇、α-蒎烯、甲基丁香酚、榄香素、黄樟素、肉豆蔻醚在相应的浓度范围内呈现良好的线性关系;6个成分精密度试验的RSD在0.18%~0.90%,重复性试验的RSD在1.53%~2.90%,稳定性试验的RSD在2.11%~2.94%;平均加样回收率(n=9)分别为98.32%、99.41%、94.79%、98.82%、96.14%、97.81%,RSD分别为1.51%、1.62%、1.87%、0.71%、1.82%、1.31%。16批次挥发油样品中4-萜烯醇、α-蒎烯、甲基丁香酚、榄香素、黄樟素、肉豆蔻醚的含量范围分别为4.674~12.432、2.316~11.121、0.201~4.653、1.047~10.488、201.776~402.163、7.888~39.570 mg·g-1。量效关系分析显示,抗炎活性与6个成分含量具有一定的相关性,甲基丁香酚、榄香素、肉豆蔻醚对抗炎活性有贡献,其中榄香素贡献最大。结论:建立了肉豆蔻16批次挥发油中6个成分的抗炎活性量效关系分析方法,本法简便快速,为肉豆蔻的质量控制及安全、有效的应用提供依据。

气相色谱-质谱法测定食用植物油中多种植物甾醇含量

[目的]建立气相色谱-质谱法(GC-MS)同时测定食用油中β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、菜籽甾醇含量的方法。[方法]样品选用氢氧化钾-乙醇皂化、正己烷萃取、浓缩、衍生化后以正己烷定容,采用GC-MS选择离子扫描模式(SIM),外标法定量。[结果]β-谷甾醇、豆甾醇、菜籽甾醇的线性范围为5~500μg/mL,菜油甾醇的线性范围为2.5~250.0μg/mL,线性相关系数(R^(2))均大于0.999,检出限为0.05~0.10 mg/kg,定量限为0.1~0.3 mg/kg,加标回收率为80.5%~107.8%,相对标准偏差(RSD)为2.3%~9.8%。[结论]该方法操作简单、高效、灵敏度高、重复性好,适用于食用植物油样品中β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、菜籽甾醇含量的测定。

气相色谱法测定对乙酰氨基酚片中的残留溶剂乙醇的含量

建立气相色谱法检测对乙酰氨基酚片中残留溶剂乙醇的含量。采用5%苯基甲基聚硅氧烷(DB-5)色谱柱,氢火焰离子化(FID)检测器,程序升温。方法的线性范围为0.0008~1.0020 mg/mL(R^(2)=0.9999);回收率为92.55%~102.01%,RSD为2.93%;精密度RSD为3.87%;检测限为0.2386μg;定量限为0.7952μg。该方法简单快速、专属性好,结果准确可靠、重现性好、灵敏度高,可用于对乙酰氨基酚片中残留溶剂乙醇的含量测定。

陆地棉叶绿体基因组密码子使用偏性的分析

【目的】通过分析陆地棉叶绿体基因组密码子使用偏性,探讨影响密码子偏性形成的主要因素。【方法】以陆地棉叶绿体基因组为研究对象,利用Mobyle及其它软件,分析叶绿体50个基因密码子的使用模式。【结果】陆地棉叶绿体基因组密码子GC1与GC2之间的相关系数达到极显著水平,GC3含量最低,与GC12的相关系数为0.14,双尾检验未达到显著水平;单个基因ENC比值多分布在-0.05—0.05;对应性分析,第一轴上显示了10.27%的差异,与GC3、ENC的相关系数分别为0.223和-0.147,均未达到显著水平。【结论】陆地棉叶绿体密码子第三位偏好使用嘧啶,而最优密码子多以A或T结尾;密码子使用模式可能是由选择和突变及其它因素共同作用形成的。

百草油中薄荷脑、肉桂醛、丁香酚的含量测定

目的：建立百草油中薄荷脑、肉桂醛、丁香酚等挥发性成分的含量测定方法。方法：采用毛细管气相色谱法分离薄荷脑、肉桂醛、丁香酚，并用外标法定量。结果：薄荷脑、肉桂醛、丁香酚3种成分均达到良好分离，在测定范围内线性良好，回收率均在98％～102％之间。结论：所建立的方法快速、稳定、可靠，可为该产品建立质量控制方法提供参考。

几种植物waxy基因的密码子用法特性分析

密码子简并性特征造成了不同物种或同一物种的不同基因在密码子使用上存在不同的偏爱性。本研究运用CodonW软件对水稻、玉米、高粱、小麦、大麦、拟南芥、豌豆的waxy基因的密码子用法进行了分析。结果表明:单子叶植物与双子叶植物waxy基因的密码子用法差异较大,前者偏向于使用以G或C碱基结尾的密码子,后者则偏向于使用以A或T碱基结尾的密码子。不同物种的waxy基因在密码子用法差异上表现为,进化上亲缘关系越近的物种其基因密码子用法越相似。因此,基于基因密码子用法的研究,可作为目前各种系统发育分析方法的重要补充,用于物种进化关系和分子进化机制研究。

坛紫菜(Porphyra haitanensis)丝状孢子体EST的获取及其生物信息学分析

采用改进的一步法提取坛紫菜丝状孢子体的总RNA,构建了坛紫菜丝状孢子体的cDNA文库,对测序得到的EST进行分析并与条斑紫菜的EST相比较。结果表明,cDNA文库共包含2.5×105个克隆,测序得到490个EST,其中275个与已知功能基因同源,占56.1%,260个EST与已知的条斑紫菜EST同源,占53.0%。使用GO(Gene Ontology)分类方法对275个EST进行分类,其中226个可归属于细胞组分(Cellular component)、分子功能(Molecular function)和生物学过程(Biological process)三个大类,而其余49个则为未知功能的EST。挑选出与条斑紫菜同源性高的28个EST,这些EST所包括的密码子数为3221个,发现密码子第三位的平均GC含量远高于第一位的平均GC含量和第二位的平均GC含量。统计坛紫菜丝状孢子体3221个密码子的使用频率,发现同义密码子第三位碱基偏好使用G或C。

GC法同时测定芫花中棕榈酸与亚油酸的含量

目的建立同时测定芫花药材中棕榈酸和亚油酸含量的气相色谱分析方法。方法采用毛细管气相色谱法,甲酯化后测定芫花中棕榈酸与亚油酸的含量。采用DB-17石英毛细管柱（30 m×0.25 mm,0.25μm）;氢火焰离子化检测器（FID）;程序升温：起始温度180℃,以5℃.min-1升至230℃;进样口温度：250℃;检测器温度：270℃;载气为氮气,流速：1.2 mL·min^-1;分流比为20∶1。结果棕榈酸甲酯和亚油酸甲酯的质量浓度分别在0.079-1.578 g.L-1（r=0.999 6）和0.029~0.590 g.L-1（r=0.999 7）内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率（n=9）分别为98.1%（RSD=2.7%）和99.7%（RSD=2.8%）。结论本方法简便、快速、准确,为芫花的质量控制方法提供依据。

高GC含量的鳜鱼rRNA基因家族的克隆

动物rRNA基因是一种GC含量较高、结构复杂的重复序列。该研究结合亲缘生物法生物信息学技术,经反复摸索后选用LA PCR法即LA PCR Taq酶结合GC缓冲液来扩增鳜鱼复杂的rRNA基因重复序列,经测序鉴定最终克隆了鳜鱼的3个rRNA基因及其2个间隔序列。分析了鳜鱼与相关动物的rRNA基因序列的同源性和进化关系。探索了克隆复杂DNA序列时引物设计的特别规则、反应体系的改进、DNA聚合酶的选用、循环参数的调整等措施。

74种鸟类线粒体基因组碱基组成及特征分析

在鸟类线粒体基因组中，不同物种的线粒体碱基组成和特性存在明显的差异。截至2008年5月，Gen-Bank细胞器基因组资源数据库共公布了74种鸟类线粒体全基因组数据。本研究利用已公布的鸟类线粒体基因组全序列分析其碱基组成特征。结果表明：（1）鸟类线粒体基因组密码子第2位的GC含量值波动范围十分狭窄，而密码子第3位的GC含量值波动范围很大。（2）密码子第3位碱基中C的含量波动范围较大，为32．60％～50．70％。（3）线粒体基因组GC含量主要由密码子第3位的碱基C和T的变化引起。（4）密码子第3位碱基的GC含量与线粒体基因组的GC含量的变化存在相关性。本次结果为今后深入研究鸟类线粒体基因组提供了一定的借鉴和参考资料。

竹类植物与水稻等其它禾本科作物的系统进化关系及基因序列组成的比较

利用8个全长mRNA基因序列比较了竹类植物和水稻等禾本科作物的系统进化和序列组成等。结果表明,在与水稻、玉米和麦类作物的比较中,竹类植物与水稻有着最近的亲缘关系和更相似的基因序列特征(GC含量分布和密码子使用频率),它们甚至比水稻与玉米或水稻与麦类之间的亲缘关系更近。这一结果提示,水稻作为禾本科植物的模式物种,应与竹类植物存在良好的基因组共线性关系,水稻基因组序列信息对竹类植物基因组研究与分析具有重要参考价值。

补骨脂中补骨脂酚的含量测定

建立了补骨脂酚气相色谱定量方法。３％ＳＥ＿（３０）填充柱，气化和柱温分别为２５０℃和２２０℃，氢火焰离子检测器。经测定其线性范围０．２４～２．４μｇ，平均回收率９８．８２％，ＲＳＤ１．５８％。对１１个地区所售补骨脂进行测定，含量为１％～７％。