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低压低氧对肠黏膜屏障及LINE-1核酸内切酶变异体GCRG213表达的影响
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作者 张王静怡 张少杰 +4 位作者 陶虹锦 孟繁森 刘静 朱玲玲 王刚石 《解放军医学院学报》 CAS 2024年第3期296-301,F0003,共7页
背景长散在核元件-1(long interspersed nuclear element-1,LINE-1或L1)是目前基因组中唯一活跃的自主反转录转座元件,低压低氧环境可以改变L1的甲基化程度。目的探究低压低氧环境对肠黏膜中L1核酸内切酶(L1 endonuclease,L1-EN)变异体G... 背景长散在核元件-1(long interspersed nuclear element-1,LINE-1或L1)是目前基因组中唯一活跃的自主反转录转座元件,低压低氧环境可以改变L1的甲基化程度。目的探究低压低氧环境对肠黏膜中L1核酸内切酶(L1 endonuclease,L1-EN)变异体GCRG213表达水平及以闭合蛋白(Occludin)和紧密连接蛋白-1(Claudin-1)表达水平为指标的肠黏膜机械屏障功能的影响。方法利用免疫组织化学染色(immunohistochemical staining,IHC)检测人正常小肠、结肠组织及小鼠正常结肠组织的GCRG213表达,观察GCRG213蛋白在正常肠道中的分布规律。将雄性C57BL/6小鼠随机分为实验组和对照组。实验组模拟海拔6000 m环境,饲养7 d构建低压低氧小鼠模型,对照组常压常氧饲养。将人正常结肠上皮细胞NCM-460随机分为常氧组以及低氧24 h、48 h组,常氧组于常氧环境正常培养,低氧组分别于0.3%O2浓度下培养24 h、48 h构建低氧细胞模型。使用qPCR、Western blot技术检测GCRG213、Occludin和Claudin-1在小鼠结肠组织及人NCM-460细胞中表达水平的变化。结果人正常小肠、结肠及小鼠结肠组织IHC结果一致显示,GCRG213表达于肠黏膜柱状上皮细胞胞质中,而在杯状细胞中未见表达。在动物实验中,与常氧组相比,低压低氧组小鼠结肠组织GCRG213在mRNA水平(P<0.05)和蛋白水平(P<0.01)均表达上调;同时,Occludin在蛋白水平表达下调(P<0.05)。在细胞实验中,低氧暴露后NCM-460细胞中GCRG213在mRNA(P<0.001)和蛋白水平(P<0.01)均表达上调,其中低氧24 h组GCRG213表达水平低于低氧48 h组,Occludin、Claudin-1在mRNA水平(P<0.01;P<0.001)表达下调,其中低氧24 h组表达水平均低于低氧48 h组,Occludin蛋白水平表达在低氧48 h组出现下调(P<0.05)。结论L1-EN变异体GCRG213在人和小鼠正常结肠组织黏膜柱状上皮细胞胞质内存在表达;在体内外模型中,低压低氧暴露下结肠黏膜上皮细胞GCRG213表达升高,同时观察到低压低氧对结肠黏膜紧密连接完整性产生影响,表现为Occludin、Claudin-1蛋白表达水平的降低。 展开更多
关键词 低压低氧 肠黏膜 紧密连接蛋白 gcrg213 LINE-1
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低氧对胃癌细胞增殖及LINE-1核酸内切酶变异体GCRG213表达的影响 被引量:8
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作者 田宇 黄欣 +2 位作者 赵彤 朱玲玲 王刚石 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 2013年第3期225-228,共4页
目的:研究低氧条件下胃癌细胞增殖改变以及对人长散在核元件-1(LINE-1)胃癌相关基因213(GCRG213)表达的影响。方法:将正常胃粘膜细胞(GES-1)与胃癌细胞(BGC-823)分别在20%与3%O2浓度下进行培养,MTT检测细胞存活率的变化,RT-PCR及Western... 目的:研究低氧条件下胃癌细胞增殖改变以及对人长散在核元件-1(LINE-1)胃癌相关基因213(GCRG213)表达的影响。方法:将正常胃粘膜细胞(GES-1)与胃癌细胞(BGC-823)分别在20%与3%O2浓度下进行培养,MTT检测细胞存活率的变化,RT-PCR及Western blot检测细胞的GCRG213基因和蛋白表达变化。利用BLAST进行GCRG213序列同源性分析。结果:与20%O2浓度相比,3%O2浓度下GES-1与BGC-823细胞增殖增高,且两种细胞的GCRG213mRNA及其蛋白的表达均增高。GCRG213序列与LINE-1核酸内切酶序列高度同源。结论:GCRG213是LINE-1核酸内切酶的变异体;低氧环境促进胃癌细胞BGC-823细胞增殖,并导致细胞GCRG213的表达升高。 展开更多
关键词 胃肿瘤 gcrg213 低氧 LINE-1
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胃癌相关基因GCRG213真核表达载体的构建及其对胃癌细胞生长特性的影响 被引量:5
3
作者 高利利 吴本俨 +5 位作者 王孟薇 王珊 黄海力 伍银桥 尤纬缔 王卫华 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期881-884,共4页
目的研究胃癌相关基因GCRG213正义、反义转染对胃癌细胞MKN45生长特性的影响。方法将从pGEM-T质粒上扩增出的胃癌相关基因GCRG213的DNA片段,按正向、反向克隆入真核表达载体pcDNA3·1(+)。测序正确的重组子pcDNA3·1-a(含GCRG21... 目的研究胃癌相关基因GCRG213正义、反义转染对胃癌细胞MKN45生长特性的影响。方法将从pGEM-T质粒上扩增出的胃癌相关基因GCRG213的DNA片段,按正向、反向克隆入真核表达载体pcDNA3·1(+)。测序正确的重组子pcDNA3·1-a(含GCRG213正向克隆)、pcDNA3·1-b(含GCRG213反向克隆)和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞,采用半定量RT-PCR及Westernblot方法比较转染不同质粒的MKN45细胞中GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异。选取稳定转染不同质粒的MKN45细胞,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪分析细胞的增殖状态,AnnexinVFITC/PI双标记法检测凋亡细胞。结果经测序证实,GCRG213正向克隆和反向克隆正确插入真核表达载体pcDNA3·1(+)。与对应的空载体比较,转染pcD-NA3·1-a的MKN45细胞中mRNA的表达上调35·4%,蛋白的表达上调49·4%,而转染pcDNA3·1-b的MKN45细胞中mRNA的表达下调32·1%,蛋白的表达下调50·3%。转染了GCRG213正向克隆的MKN45细胞生长增殖速度加快,凋亡率下降,而转染了GCRG213反向克隆的MKN45细胞生长增殖速度减慢,凋亡率增加。结论胃癌相关基因GCRG213可促进肿瘤细胞的生长,抑制肿瘤细胞凋亡,可能是恶性肿瘤癌变的促进因素之一。 展开更多
关键词 胃肿瘤 基因 gcrg213 转染 细胞凋亡
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兔抗胃癌相关蛋白GCRG213抗体的制备及鉴定 被引量:4
4
作者 伍银桥 王孟薇 +3 位作者 吴本俨 王刚石 尤纬缔 王卫华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期174-177,共4页
目的 :制备胃癌相关蛋白GCRG2 13的多克隆抗体。方法 :在大肠杆菌中表达Thioredoxin/GCRG2 13融合蛋白 ,并以所获蛋白免疫新西兰白兔 ,制备兔抗GCRG2 13的抗体。抗体的效价及特异性 ,分别用ELISA、Westernblot法鉴定。结果 :在大肠杆菌... 目的 :制备胃癌相关蛋白GCRG2 13的多克隆抗体。方法 :在大肠杆菌中表达Thioredoxin/GCRG2 13融合蛋白 ,并以所获蛋白免疫新西兰白兔 ,制备兔抗GCRG2 13的抗体。抗体的效价及特异性 ,分别用ELISA、Westernblot法鉴定。结果 :在大肠杆菌中高效表达出相对分子质量 (Mr)约为 2 940 0的Thiore doxin/GCRG2 13融合蛋白 ,经凝胶回收法得到纯度近 10 0 %的蛋白产品。制备了兔抗GCRG2 13的抗体。ELISA法检测抗体的效价达到 1∶2 560 0 0 ,Westernblot证实该抗体可与原核表达的GCRG2 13蛋白特异性结合。结论 :兔抗GCRG2 13抗体的成功制备 ,为进一步深入研究GCRG2 展开更多
关键词 胃肿瘤 gcrg213 多克隆抗体
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胃癌相关基因GCRG213在大肠杆菌中的表达及重组蛋白纯化 被引量:2
5
作者 伍银桥 王刚石 +3 位作者 王孟薇 吴本俨 尤纬缔 王卫华 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期406-408,共3页
目的 利用硫氧还蛋白融合表达系统表达胃癌相关基因GCRG2 13,制备高纯度的GCRG2 13蛋白。方法 采用PCR技术从pGEM T质粒上扩增出含完整ORF的GCRG2 13cDNA序列 ,将其克隆至硫氧还蛋白融合表达载体 pET10 2 /D TOPO中 ,转化大肠杆菌BL2... 目的 利用硫氧还蛋白融合表达系统表达胃癌相关基因GCRG2 13,制备高纯度的GCRG2 13蛋白。方法 采用PCR技术从pGEM T质粒上扩增出含完整ORF的GCRG2 13cDNA序列 ,将其克隆至硫氧还蛋白融合表达载体 pET10 2 /D TOPO中 ,转化大肠杆菌BL2 1,经IPTG诱导表达融合蛋白 ,凝胶回收目的蛋白。结果 SDS PAGE证实在大肠杆菌中高效表达出相对分子量约 2 9 4kD的Thioredoxin/GCRG2 13融合蛋白。薄层凝胶扫描显示 ,其表达量占菌体总蛋白的 2 8 7%。经凝胶回收法得到纯度近 10 0 %的蛋白产品。结论 在大肠杆菌中成功表达了Thioredoxin/GCRG2 13融合蛋白 ,并制备出高纯度蛋白产品 。 展开更多
关键词 胃肿瘤 基因 gcrg213 融合蛋白 原核表达 纯化
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抗人GCRG213单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:3
6
作者 伍银桥 吴本俨 +3 位作者 王刚石 尤纬缔 王卫华 王孟薇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期46-48,共3页
目的:制备GCRG213单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法:在大肠杆菌中表达HIS-GCRG213融合蛋白,并以所获蛋白作为免疫原制备鼠mAb。采用ELISA、Westernblot法鉴定抗体的效价及特异性。免疫组化染色观察GCRG213在胃癌和正常组织中的表达... 目的:制备GCRG213单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法:在大肠杆菌中表达HIS-GCRG213融合蛋白,并以所获蛋白作为免疫原制备鼠mAb。采用ELISA、Westernblot法鉴定抗体的效价及特异性。免疫组化染色观察GCRG213在胃癌和正常组织中的表达。结果:HIS-GCRG213融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,经常规的细胞融合和筛选获得2株可稳定分泌抗GCRG213的杂交瘤细胞株。ELISA法检测腹水的效价可达到1∶106,Western blot证实该抗体可与重组HIS-GCRG213蛋白特异性结合。免疫组化染色显示GCRG213在胃癌组织中的表达明显强于正常胃黏膜组织。结论:成功地制备出2株抗GCRG213的mAb,为进一步研究GCRG213的生物学功能提供了有效的工具。 展开更多
关键词 胃肿瘤 gcrg213 单克隆抗体
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胃癌相关基因GCRG213正反义真核表达载体的构建及鉴定 被引量:4
7
作者 高利利 吴本俨 +4 位作者 王孟薇 黄海力 伍银桥 尤纬缔 王卫华 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2006年第15期1453-1457,共5页
目的:构建胃癌相关基因GCRG213正、反义真核表达载体.方法:从pGEM-T质粒上扩增出的胃癌相关基因GCRG213的DNA片段,两端分别引入限制性内切酶KpnI,BamHI和EcoRI, BamHI识别位点.按正向、反向克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+).测序正确... 目的:构建胃癌相关基因GCRG213正、反义真核表达载体.方法:从pGEM-T质粒上扩增出的胃癌相关基因GCRG213的DNA片段,两端分别引入限制性内切酶KpnI,BamHI和EcoRI, BamHI识别位点.按正向、反向克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+).测序正确的重组子pcDNA3.1-a(含GCRG213正向克隆), pcDNA3.1-b(含GCRG213反向克隆)和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞, G418筛选获得稳定转染的细胞株,采用半定量RT-PCR及Wlestern blot比较转染不同质粒的 MKN45细胞中GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异.结果:经测序证实,GCRG213正向克隆和反向克隆正确插入真核表达载体 pcDNA3.1(+),组成重组子pcDNA3.1-a(含正向克隆),pcDNA3.1-b(含反向克隆).重组子 pcDNA3.1-a,pcDNA3.1-b和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株.与对应的空载体比较,RT-PCR结果显示转染pcDNA3.1-a的 MKN45细胞中其mRNA的表达上调35.4%,而转染pcDNA3.1-b的MKN45细胞中其mRNA 的表达下调32.1%;Western blot结果显示转染 pcDNA3.1-a的MKN45细胞中其蛋白的表达上调49.4%,而转染pcDNA3.1-b的MKN45细胞中其蛋白的表达下调50.3%.结论:成功构建胃癌相关基因GCRG213正、反义真核表达载体. 展开更多
关键词 胃癌相关基因gcrg213 真核表达 胃癌细胞 基因转染
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LINE-1核酸内切酶变异体GCRG213在人正常胃黏膜的表达 被引量:3
8
作者 廉宏伟 李杰 +2 位作者 王卫华 段晓剑 王刚石 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期2184-2186,共3页
目的探讨胃癌相关基213(GCRG213)蛋白在人正常胃黏膜的表达特征并分析该蛋白表达是否存在随龄变化。方法收集97例行胃大部切除术患者或经胃镜活检的正常胃黏膜组织,通过免疫组化检测GCRG213蛋白在胃黏膜组织中的表达特征,相应的组织切... 目的探讨胃癌相关基213(GCRG213)蛋白在人正常胃黏膜的表达特征并分析该蛋白表达是否存在随龄变化。方法收集97例行胃大部切除术患者或经胃镜活检的正常胃黏膜组织,通过免疫组化检测GCRG213蛋白在胃黏膜组织中的表达特征,相应的组织切片进行苏木素-伊红(HE)染色,用以对照分析GCRG213蛋白在胃黏膜细胞的分布规律;χ2检验分析患者性别、年龄等临床资料与GCRG213蛋白表达强度的关系。结果正常胃黏膜固有腺体中GCRG213蛋白表达阳性的细胞均为主细胞,表达部位在胞质,而壁细胞、表面黏液细胞和颈黏液细胞无GCRG213蛋白表达。患者的年龄、性别、吸烟史、饮酒史等均与其胃黏膜的GCRG213蛋白表达强度无相关性。结论 GCRG213蛋白在人正常胃黏膜固有腺体的主细胞呈特征性高表达,其表达强度不随年龄的增长而发生改变。 展开更多
关键词 gcrg213蛋白 胃黏膜 主细胞
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胃癌相关基因GCRG213真核表达载体的构建及其对胃癌细胞成瘤性的影响 被引量:1
9
作者 高利利 吴本俨 +5 位作者 王孟薇 战大伟 黄海力 伍银桥 尤纬缔 王卫华 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2007年第2期105-107,共3页
目的:研究胃癌相关基因GCRG213正义、反义转染对胃癌细胞MKN45成瘤性的影响。方法:采用半定量RT-PCR及Western免疫印迹法比较转染不同质粒的MKN45细胞中GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异。选取稳定转染不同质粒的MKN45细胞,绘制... 目的:研究胃癌相关基因GCRG213正义、反义转染对胃癌细胞MKN45成瘤性的影响。方法:采用半定量RT-PCR及Western免疫印迹法比较转染不同质粒的MKN45细胞中GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异。选取稳定转染不同质粒的MKN45细胞,绘制细胞生长曲线,平板克隆形成实验、裸鼠移植瘤实验分析转染细胞成瘤性。结果:平板克隆形成实验显示转染了GCRG213正向克隆的MKN45细胞其细胞克隆形成数量高于转染空载体的细胞,而转染了GCRG213反向克隆的MKN45细胞其细胞克隆形成数量低于转染空载体的细胞。在裸鼠体内进行的转染细胞的成瘤性实验可见,转染了GCRG213正向克隆的MKN45细胞在裸鼠体内成瘤性高于转染空载体的细胞,而转染了GCRG213反向克隆的MKN45细胞在裸鼠体内成瘤性低于转染空载体的细胞。结论:胃癌相关基因GCRG213可促进肿瘤细胞的生长,促进肿瘤细胞的成瘤性,GCRG213反义转染可抑制肿瘤细胞的生长,抑制肿瘤细胞的成瘤性。 展开更多
关键词 胃肿瘤 胃癌相关基因gcrg213 真核表达 基因 转染
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胃癌相关蛋白GCRG213在胃癌细胞中特异性表达 被引量:1
10
作者 王卫华 吴本俨 +1 位作者 伍银桥 尤纬缔 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第1期80-81,共2页
目的:观察来源于胃癌高表达基因GCRG213抗体在两种不同细胞的表达情况,评价GCRG213抗体的肿瘤特异性. 方法:应用免疫印迹方法对GCRG213抗体在胃癌细胞SGC-7901和胃上皮细胞HFE-145的表达进行比较分析. 结果:GCRG213抗体与胃癌SGC-7901... 目的:观察来源于胃癌高表达基因GCRG213抗体在两种不同细胞的表达情况,评价GCRG213抗体的肿瘤特异性. 方法:应用免疫印迹方法对GCRG213抗体在胃癌细胞SGC-7901和胃上皮细胞HFE-145的表达进行比较分析. 结果:GCRG213抗体与胃癌SGC-7901细胞蛋白免疫结合后在相应大小位置有一清晰的特异性条带,而与胃上皮HFE-145细胞蛋白免疫结合后则无特异性条带出现, GCRG213抗体与两种细胞蛋白的结合存在明显差异. 结论:GCRG213抗体具有很强的肿瘤特异性. 展开更多
关键词 抗体 肿瘤 胃癌细胞 特异性表达 相关蛋白 gcrg213 高表达 HFE 基因 免疫印迹
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胃癌相关基因GCRG213的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:1
11
作者 伍银桥 王刚石 +3 位作者 王孟薇 吴本俨 尤纬缔 王卫华 《军医进修学院学报》 CAS 2004年第4期258-260,共3页
目的 :利用硫氧还蛋白融合表达系统表达胃癌相关基因GCRG2 13。方法 :采用PCR技术从pGEM T质粒上扩增出含完整ORF的GCRG2 13cDNA序列 ,将其克隆至硫氧还蛋白融合表达载体 pET10 2 /D TOPO中 ,转化大肠杆菌BL2 1,经IPTG诱导表达重组融合... 目的 :利用硫氧还蛋白融合表达系统表达胃癌相关基因GCRG2 13。方法 :采用PCR技术从pGEM T质粒上扩增出含完整ORF的GCRG2 13cDNA序列 ,将其克隆至硫氧还蛋白融合表达载体 pET10 2 /D TOPO中 ,转化大肠杆菌BL2 1,经IPTG诱导表达重组融合蛋白 ,SDS PAGE分析表达产物。结果 :高效表达出相对分子量约2 9.4ku的重组融合蛋白。薄层凝胶扫描显示 ,其表达量占菌体总蛋白质的 2 8.7%。结论 :在大肠杆菌中成功表达了Thioredoxin GCRG2 13融合蛋白 ,为后续功能研究、蛋白制备及其抗体研制奠定了基础。 展开更多
关键词 胃癌 gcrg213基因 基因克隆 大肠杆菌 基因表达
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胃癌相关基因GCRG213真核表达载体的构建及其对胃癌细胞MKN45的影响
12
作者 高利利 王孟薇 +6 位作者 吴本俨 王珊 杨怡 黄海力 伍银桥 尤纬缔 王卫华 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第41期1-4,共4页
目的研究胃癌相关基因GCRG213正义、反义转染对胃癌细胞MKN45的影响。方法采用分子克隆及基因转染技术将GCRG213基因转入哺乳动物细胞,并结合反义转染技术研究GCRG213基因对胃癌细胞恶性生物学行为的影响。结果GCRG213正向和反向克隆正... 目的研究胃癌相关基因GCRG213正义、反义转染对胃癌细胞MKN45的影响。方法采用分子克隆及基因转染技术将GCRG213基因转入哺乳动物细胞,并结合反义转染技术研究GCRG213基因对胃癌细胞恶性生物学行为的影响。结果GCRG213正向和反向克隆正确插入真核表达载体pcDNA3.1(+);重组子pcDNA3.1-a、pcDNA3.1-b和空载体转染人胃癌细胞系MKN45细胞;正义转染其mRNA的表达上调,而反义转染下调;正义转染加快MKN45细胞生长增殖速度、降低细胞凋亡率,反义转染减慢MKN45细胞生长增殖速度,增加细胞凋亡率。结论胃癌相关基因GCRG213可促进肿瘤细胞生长、分裂和转移,抑制肿瘤细胞的凋亡,可能是一个新发现的恶性肿瘤癌变的促进因素。 展开更多
关键词 胃癌相关基因gcrg213 真核表达 胃癌细胞 基因转染
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表达胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA腺相关病毒载体的构建和高滴度病毒制备
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作者 徐世平 吴本俨 +5 位作者 王孟薇 高利利 伍银桥 蒋立新 王卫华 尤纬缔 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第12期1417-1420,共4页
目的:构建一个表达胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA的重组腺相关病毒载体,制备能靶向性抑制GCRG213表达的重组腺相关病毒.方法:将构建好并经验证的包含胃癌相关基因GCRG213特异性小干扰RNA片段GCRG213-RNAi-2的IMG800-GCRG213i-2质粒用Bam... 目的:构建一个表达胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA的重组腺相关病毒载体,制备能靶向性抑制GCRG213表达的重组腺相关病毒.方法:将构建好并经验证的包含胃癌相关基因GCRG213特异性小干扰RNA片段GCRG213-RNAi-2的IMG800-GCRG213i-2质粒用Bam H I+Bg/Ⅱ双酶切,回收410 bp左右目的片段,将pSNAV2.0质粒用BamH I单酶切后同目的片段连接,经酶切和测序鉴定后,用新建质粒脂质体转染BHK-21细胞,G418筛选后大规模培养,再用辅助病毒HSV1-rc/△UL2感染,获取病毒.结果:成功构建包含U6启动子和胃癌相关基因GCRG213特异性RNA干扰片段的重组腺相关病毒载体,并制备出滴度为5×10^(12)vector genome/L高滴度腺相关病毒.结论:载体的构建为进一步研究GCRG213的体内功能打下了基础,也将为更多的基因干预和基因的功能研究提供有效的工具. 展开更多
关键词 胃癌 gcrg213基因 腺相关病毒 SIRNA 基因转染
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胃癌相关基因GCRG213正反向转染和RNA干扰对裸鼠胃癌种植瘤的影响
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作者 徐世平 吴本俨 +4 位作者 王孟薇 高利利 伍银桥 王卫华 尤纬缔 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第14期1639-1642,共4页
目的:观察胃癌相关基因GCRG213体内正、反向转染和RNA干扰对裸鼠胃癌种植瘤的影响.方法:将对数生长期的胃癌细胞株MKN45接种到裸鼠皮下,成瘤后用制备好的分别含GCRG213正、反义克隆和RNAi片段的腺相关病毒分别在肿瘤局部注射,以空病毒... 目的:观察胃癌相关基因GCRG213体内正、反向转染和RNA干扰对裸鼠胃癌种植瘤的影响.方法:将对数生长期的胃癌细胞株MKN45接种到裸鼠皮下,成瘤后用制备好的分别含GCRG213正、反义克隆和RNAi片段的腺相关病毒分别在肿瘤局部注射,以空病毒和生理盐水对照,继续喂养2 wk后处死,取肿瘤测量重量,并用半定量RT-PCR检测肿瘤组织GCRG213mRNA表达水平.结果:裸鼠接种MKN45细胞3 wk左右皮下形成肿瘤结节.肿瘤组织重量在正向转染组为5.12±1.02g、反向组1.22±0.46g、RNAi组0.81±0.37g、空病毒组3.13±0.69g、生理盐水组3.45±0.87g;各组GCRG213 mRNA表达水平依次分别为0.406±0.01 3,0.211±0.021,0.087±0.015,0.312±0.050,0.283±0.061.结论:三种腺相关病毒分别有效地介导了GCRG213正、反义克隆和RNAi片段的体内表达,提高或降低了GCRG213 mRNA的表达水平,促进或抑制了胃癌种植瘤的生长. 展开更多
关键词 胃癌相关基因gcrg213 腺相关病毒 小干扰RNA 基因转染 胃癌种植瘤
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GCRG213和CDX2蛋白在胃癌组织中表达及临床意义 被引量:1
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作者 刘颖 廖联琼 +1 位作者 胡凌云 吴春磊 《西南国防医药》 CAS 2018年第7期633-636,共4页
目的检测胃癌组织中胃癌相关基因213(GCRG213)和CDX2蛋白表达水平,并分析两者变化的临床意义。方法收集手术切除的100例胃癌标本,采用免疫印迹法和黏蛋白组织化学染色法检测GCRG213和CDX2蛋白在胃癌及其癌前病变组织中的表达水平,同时对... 目的检测胃癌组织中胃癌相关基因213(GCRG213)和CDX2蛋白表达水平,并分析两者变化的临床意义。方法收集手术切除的100例胃癌标本,采用免疫印迹法和黏蛋白组织化学染色法检测GCRG213和CDX2蛋白在胃癌及其癌前病变组织中的表达水平,同时对GCRG213和CDX2蛋白表达水平与胃癌病理特征进行相关性分析。结果 GCRG213蛋白在高度不典型增生伴癌变组织及中低分化腺癌组织中呈现高表达,且在人正常胃黏膜的部分固有腺体存在阳性表达;CDX2蛋白在不完全小肠型肠化生的细胞核及异型增生组织的细胞核呈强阳性表达,但在正常胃黏膜组织中的表达呈阴性。在胃癌组织中,GCRG213和CDX2蛋白阳性表达率与胃癌分化程度、肿瘤分期呈明显的负相关,且CDX2蛋白在肠型胃癌中的阳性表达水平显著高于在弥漫型胃癌中(P<0.05)。结论 GCRG213和CDX2蛋白在胃癌组织中的表达各具特点,联合检测GCRG213与CDX2蛋白表达水平,有助于胃癌分化程度、肿瘤分期的鉴别诊断。 展开更多
关键词 胃癌 分化程度 肿瘤分期 gcrg213 CDX2 诊断
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胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA表达载体的构建及其对胃癌细胞的影响 被引量:3
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作者 高利利 吴本俨 +4 位作者 王孟薇 战大伟 张林 尤纬缔 王卫华 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期84-88,共5页
目的探讨胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA(siRNA)转染对胃癌细胞MKN45的影响。方法设计两对针对GCRG213可转录为siRNA的DNA片段,退火后插入siRNA表达载体IMG-800。测序正确的重组子IMG-800-1(含干扰片段1)、IMG-800-2(含干扰片段2... 目的探讨胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA(siRNA)转染对胃癌细胞MKN45的影响。方法设计两对针对GCRG213可转录为siRNA的DNA片段,退火后插入siRNA表达载体IMG-800。测序正确的重组子IMG-800-1(含干扰片段1)、IMG-800-2(含干扰片段2)和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株。采用半定量RT-PCR及Western免疫印迹法,比较转染不同质粒的MKN45细胞中GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异。选取稳定转染不同质粒的MKN45细胞,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪分析细胞的增殖状态,AnnexinV FTTC/PI双标记法检测凋亡细胞,平板克隆形成实验、裸鼠移植瘤实验分析转染细胞成瘤性。结果经测序证实,干扰片段退火后正确插入小干扰RNA表达载体IMG-800,组成重组子IMG-800-1和IMG-800-2。重组子IMG-800-1、IMG-800-2和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株。与对应的空载体比较,RT-PCR结果显示,转染siRNA的MKN45细胞中,mRNA的表达分别下调44.9%和49.5%;Western印迹法结果显示,转染siRNA的MKN45细胞中,蛋白的表达分别下调55.3%和64.2%。与转染空载体的细胞相比,转染siRNA的MKN45细胞生长增殖速度明显减慢,细胞周期表现为处于G0—G1期的细胞有所增加,G2/M期和(或)S期的细胞比例减少,细胞凋亡率增加,细胞克隆形成数量减少,裸鼠体内成瘤性降低。结论胃癌相关基因GCRG213 siRNA转染,可抑制肿瘤细胞的生长和增殖,促进肿瘤细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞的成瘤性。 展开更多
关键词 胃肿瘤 gcrg213 SIRNA转染 MKN45
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A gene encoding an apurinic/apyrimidinic endonuclease-like protein is up-regulated in human gastric cancer 被引量:19
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作者 Gang-ShiWang Meng-WeiWang +3 位作者 Ben-YanWu Xiao-BingLiu Wei-You Xin-YanYang 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2003年第6期1196-1201,共6页
AIM: To identify the gene that may predispose to human gastric cancer and to analyze its expression in gastric cancer and non-tumorous gastric mucosa.METHODS: Cancer, para-tumor, and non-tumor gastric tissues were stu... AIM: To identify the gene that may predispose to human gastric cancer and to analyze its expression in gastric cancer and non-tumorous gastric mucosa.METHODS: Cancer, para-tumor, and non-tumor gastric tissues were studied for gene expression profile using fluorescent differential display reverse transcription polymerase chain reaction (DDRT-PCR). The differentially expressed bands of interest were analyzed by cloning,Northern blotting, and sequencing. The sequencing results were compared with the GenBank database for homologyand conserved domain analysis. In situ hybridization with DIG-labeled cRNA probes was used to detect the expression of gene in paraffin embedded gastric adenocarcinoma and non-cancerous tissues.RESULTS: A gene expressed higher in tumor and para-tumor tissues than in their non-tumor counterparts of all 7 tested gastric adenocarcinoma patients was identified by means of DDRT-PCR analysis, it was named GCRG213(gastric cancer related gene 213). Northern blot confirmed the differential expression. GCRG213(GenBank No. AY053451) consisted of 1094 base pairs with an open reading frame (ORF) which encoded 142 amino acids. The deduced amino acid sequence contained a putative conserved domain, apurinic/apyrimidinic endonuclease (APE). In situ hybridization analysis showed that C-CRG213was expressed higher in gastric cancer tissues than in their corresponding non-tumor ones. Precancerous leisions of gastric adenocarcinoma showed a high GCRG213 expression, too. No difference of the expression pattems was found between the early and advanced gastric cancer.CONCLUSION: A gene named GCRG213 was identified in human gastric adenocarcinoma. It encoded an APE-like protein which was probably a new member of the APE family.GCRG213 was over-expressed not only in gastric cancer,but also in its precancerous leisions. The role of GCRG213 expression in carcinogenesis needs further study. 展开更多
关键词 胃癌 gcrg213基因 基因表达 磷酸内切酶 肿瘤发生学
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