MYH9与树突状细胞中TRIF-GEFH1-RhoB信号途径的相关性研究

为探讨Rho B(ras homolog family member B)靶蛋白MYH9(nonmuscle myosin heavy chain IIa)与TRIF-GEFH1-Rho B信号途径的关系,通过实时定量PCR技术、si RNA干扰技术、激光共聚焦显微镜、流式细胞术以及基因敲除小鼠等,分析了MYH9与TRIF(TIR domain-containing adapter inducing IFNβ)途径、GEFH1(guanine nucleotide-exchange factors H1)以及MHCII(major histocompatibility complex II)的关系。结果显示,在LPS(lipopolysaccharide)刺激后,MYH9的m RNA表达在野生型小鼠的树突状细胞(dendritic cells,DCs)中增加,在TRIF基因敲除小鼠的DCs中则未被上调。在野生型小鼠中MYH9的m RNA上调可被GEFH1的si RNA明显抑制(P<0.01)。同时,在LPS刺激后,MYH9与MHCII在细胞内共定位。MYH9的si RNA还抑制了DCs中LPS介导的MHCII在细胞表面的表达(P<0.05)。这些结果表明,MYH9与TRIF-GEFH1-Rho B信号途径存在相关性。

GEFH1在LPS诱导树突细胞IL-6和IL-12a表达中的作用

为探讨GEFH1与树突细胞(dendritic cell,DC)TLR4两条下游信号途径的关系,从野生型和TRIF基因、IFNα/β受体基因敲除小鼠中分离和培养DC,LPS或IL-6刺激后收集细胞制备总cDNA,通过实时定量PCR检测GEFH1的mRNA表达。再用GEFH1的siRNA转染DC,LPS刺激后检测IL-6和IL-12a的mRNA表达。结果,在LPS刺激后,GEFH1的mRNA表达在野生型小鼠的DC中显著增加,在TRIF基因、IFN-α/β受体基因敲除小鼠的DC中则未被上调。此外,GEFH1siRNA处理后,IL-6和IL-12a的mRNA表达均上升显著(P>0.05),而在IL-6刺激的野生型小鼠的DC中,GEFH1的mRNA没有明显改变。以上结果提示在转录水平,TRIF-IFNβ信号通路、而非IL-6可诱导GEFH1基因表达。GEFH1可能对MyD88途径中细胞因子IL-6和IL-12a的表达有负调节作用。

Arl8a与树突状细胞TLR4-TRIF信号途径的相关性

目的 探讨ADP-核糖基化因子样8A（ADP-ribosylation factor-like 8A,Arl8a）与树突状细胞（dendritic cell,DC）中TLR4-TRIF-GEFH1-RhoB信号途径的相关性.方法 从野生型和TRIF敲除基因（TRIFKO）小鼠中分离和培养DC,LPS刺激后收集细胞扩增总cDNA,通过实时定量PCR检测Arl8a的mRNA表达.然后用鸟嘌呤核苷酸交换因子H1（GEFH1）的siRNA转染来自野生型小鼠的DC,进行LPS刺激或未刺激处理并检测Arl8a的mRNA表达.再用GEFH1和Arl8a的siRNA转染DC,LPS刺激后检测RhoB的mRNA表达.结果 在LPS刺激后,Arl8a的mRNA表达在野生型小鼠的DC中增加,在TRIFKO小鼠的DC中则未被上调.此外,在野生型小鼠中Arl8a的mRNA上调可被GEFH1的siRNA明显抑制（P＜0.01）.而Arl8a和GEFH1的siRNA均能显著抑制RhoB的mRNA表达（P＜0.01）.结论 Arl8a的表达与DC的TRL4-TRIF途径有关,并且在转录水平与GEFH1和RhoB相关.

Arl8a与树突状细胞TLR4两条下游途径的相关性

为探讨Arl8a(ADP-ribosylation factor-like 8A)与树突状细胞(dendritic cells,DCs)TLR4两条下游信号途径的关系,用Arl8a和GEFH1(guanine nucleotide-exchange factors H1)的siRNA转染来自野生型小鼠的DC,进行LPS刺激或未刺激处理后,检测TLR4-TRIF途径中RhoB靶蛋白MYH9的mRNA表达。然后从野生型和IFNα/β受体基因敲除小鼠中分离和培养DC,LPS刺激后收集细胞扩增总cDNA,通过实时定量PCR检测Arl8a的mRNA表达。再用Arl8a的siRNA转染DC,LPS刺激后检测IL-6和IL-12a的mRNA表达。结果表明,Arl8a和GEFH1的siRNA均能显著抑制LPS介导的MYH9的mRNA表达(P<0.01),而且在LPS刺激后,Arl8a的mRNA表达在野生型小鼠的DC中增加,在IFNα/β受体基因敲除小鼠的DC中则未被上调。此外,Arl8a的siRNA对IL-6和IL-12a的mRNA表达没有显著效应。以上结果提示,在转录水平,Arl8a和GEFH1均对MYH9的表达有影响,并且Arl8a基因的表达与TRIF-IFNβ途径有关,Arl8a可能与MyD88途径中细胞因子IL-6和IL-12a的表达无关。