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羊口疮病毒129蛋白互作宿主蛋白的筛选与C1QBP基因的克隆分析
被引量:
1
1
作者
但一昕
向华
+5 位作者
张焕容
杨璐
任玉鹏
徐颂为
何翃闳
朱江江
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期1-14,共14页
【目的】以羊口疮病毒129(ORFV129)蛋白为研究对象,在构建山羊鼻甲骨原代细胞cDNA文库的基础上,通过酵母双杂交筛选与其相互作用的蛋白。【方法】采用SmartTM技术构建山羊鼻甲骨原代细胞cDNA文库。构建诱饵质粒pGBKT7-129,并将其转化至Y...
【目的】以羊口疮病毒129(ORFV129)蛋白为研究对象,在构建山羊鼻甲骨原代细胞cDNA文库的基础上,通过酵母双杂交筛选与其相互作用的蛋白。【方法】采用SmartTM技术构建山羊鼻甲骨原代细胞cDNA文库。构建诱饵质粒pGBKT7-129,并将其转化至Y2HGold酵母感受态细胞,验证质粒pGBKT7-129是否具有自激活性。对转化了质粒pGBKT7-129的菌液进行生长曲线测定,验证该质粒是否对酵母细胞有毒性作用。以ORFV129为诱饵蛋白,利用酵母双杂交系统筛选出与ORFV129相互作用的宿主胞内蛋白并对阳性菌落进行PCR和测序鉴定。利用DAVID 6.7的GO数据库对胞内宿主蛋白进行功能分类和通路分析,并依据Cytoscape v 3.8.0软件绘制ORFV129与胞内蛋白相互作用的网络图。以山羊脾脏为组织样本,采用RT-PCR技术克隆山羊补体C1q结合蛋白(complement C1q binding protein,C1QBP)基因CDS区序列,并采用在线软件进行生物信息学分析。将C1QBP基因CDS区序列连接至pcDNA3.1(+)构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-C1QBP,并将其转染至山羊鼻甲骨原代细胞进行亚细胞定位分析。【结果】试验成功构建山羊鼻甲骨原代细胞cDNA文库,文库容量约为6.0×106CFU/mL。成功构建诱饵质粒pGBKT7-129,重组质粒pGBKT7-129无自激活能力且对酵母细胞无毒性。利用酵母双杂交筛选出14个与ORFV129进行互作的胞内蛋白并对阳性克隆进行PCR、测序验证。试验成功克隆山羊C1QBP基因CDS区,长度为837 bp,编码279个氨基酸。系统进化树显示,山羊和绵羊亲缘关系最近。C1QBP蛋白为不稳定的亲水性蛋白,无信号肽结构和跨膜结构域,主要包括3种磷酸化位点,分别是18个丝氨酸、4个苏氨酸和3个酪氨酸位点。C1QBP蛋白二级结构由α-螺旋(33.81%)、无规则卷曲(46.40%)、延伸链(16.91%)和β-转角(2.88%)组成,三级结构与二级结构一致。间接免疫荧光试验表明,C1QBP蛋白散在分布于细胞质中。【结论】筛选出了与ORFV129蛋白相互作用且在天然免疫应答中发挥作用的宿主胞内蛋白C1QBP,通过间接免疫荧光试验验证C1QBP定位于细胞质中,推测ORFV129与能C1QBP相互作用诱导炎症,为进一步验证ORFV129蛋白介导ORFV抑制机体免疫应答的过程奠定基础。
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关键词
山羊鼻甲骨原代细胞(
gftc
s)
羊口疮病毒129(ORFV129)
酵母双杂交
互作蛋白
C1QBP
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职称材料
自相似集分离条件和诸条件之间的关系
2
作者
赵国瑞
《湖南农机(学术版)》
2011年第2期42-43,共2页
分形几何中计算自相似集的Hausdorff维数是一个比较重要的基本问题,文章主要将分形几何中和自相似集相关的各类分离条件进行了系统的整理,并对它们之间的关系进行了讨论。
关键词
自相似集
开集条件
有限型
广义有限型
弱分离条件
下载PDF
职称材料
题名
羊口疮病毒129蛋白互作宿主蛋白的筛选与C1QBP基因的克隆分析
被引量:
1
1
作者
但一昕
向华
张焕容
杨璐
任玉鹏
徐颂为
何翃闳
朱江江
机构
西南民族大学畜牧兽医学院
青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期1-14,共14页
基金
西南民族大学优秀学生培养工程(2022NYXXS025)
国家自然科学基金(32072723)
+3 种基金
动物遗传育种四川省重点实验室开放基金
四川省科技计划(2020JDJQ0010)
四川省畜禽育种攻关(2021YFYZ0003)
浙江省科技计划(2022C04017)。
文摘
【目的】以羊口疮病毒129(ORFV129)蛋白为研究对象,在构建山羊鼻甲骨原代细胞cDNA文库的基础上,通过酵母双杂交筛选与其相互作用的蛋白。【方法】采用SmartTM技术构建山羊鼻甲骨原代细胞cDNA文库。构建诱饵质粒pGBKT7-129,并将其转化至Y2HGold酵母感受态细胞,验证质粒pGBKT7-129是否具有自激活性。对转化了质粒pGBKT7-129的菌液进行生长曲线测定,验证该质粒是否对酵母细胞有毒性作用。以ORFV129为诱饵蛋白,利用酵母双杂交系统筛选出与ORFV129相互作用的宿主胞内蛋白并对阳性菌落进行PCR和测序鉴定。利用DAVID 6.7的GO数据库对胞内宿主蛋白进行功能分类和通路分析,并依据Cytoscape v 3.8.0软件绘制ORFV129与胞内蛋白相互作用的网络图。以山羊脾脏为组织样本,采用RT-PCR技术克隆山羊补体C1q结合蛋白(complement C1q binding protein,C1QBP)基因CDS区序列,并采用在线软件进行生物信息学分析。将C1QBP基因CDS区序列连接至pcDNA3.1(+)构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-C1QBP,并将其转染至山羊鼻甲骨原代细胞进行亚细胞定位分析。【结果】试验成功构建山羊鼻甲骨原代细胞cDNA文库,文库容量约为6.0×106CFU/mL。成功构建诱饵质粒pGBKT7-129,重组质粒pGBKT7-129无自激活能力且对酵母细胞无毒性。利用酵母双杂交筛选出14个与ORFV129进行互作的胞内蛋白并对阳性克隆进行PCR、测序验证。试验成功克隆山羊C1QBP基因CDS区,长度为837 bp,编码279个氨基酸。系统进化树显示,山羊和绵羊亲缘关系最近。C1QBP蛋白为不稳定的亲水性蛋白,无信号肽结构和跨膜结构域,主要包括3种磷酸化位点,分别是18个丝氨酸、4个苏氨酸和3个酪氨酸位点。C1QBP蛋白二级结构由α-螺旋(33.81%)、无规则卷曲(46.40%)、延伸链(16.91%)和β-转角(2.88%)组成,三级结构与二级结构一致。间接免疫荧光试验表明,C1QBP蛋白散在分布于细胞质中。【结论】筛选出了与ORFV129蛋白相互作用且在天然免疫应答中发挥作用的宿主胞内蛋白C1QBP,通过间接免疫荧光试验验证C1QBP定位于细胞质中,推测ORFV129与能C1QBP相互作用诱导炎症,为进一步验证ORFV129蛋白介导ORFV抑制机体免疫应答的过程奠定基础。
关键词
山羊鼻甲骨原代细胞(
gftc
s)
羊口疮病毒129(ORFV129)
酵母双杂交
互作蛋白
C1QBP
Keywords
goat fetal turbinate cells(
gftc
s)
Orf virus 129(ORFV129)
yeast two-hybrid
interacting protein
C1QBP
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
自相似集分离条件和诸条件之间的关系
2
作者
赵国瑞
机构
广州城建职业学院基础部
出处
《湖南农机(学术版)》
2011年第2期42-43,共2页
文摘
分形几何中计算自相似集的Hausdorff维数是一个比较重要的基本问题,文章主要将分形几何中和自相似集相关的各类分离条件进行了系统的整理,并对它们之间的关系进行了讨论。
关键词
自相似集
开集条件
有限型
广义有限型
弱分离条件
Keywords
Self-similar set
OSC
FTC
gftc
WSP
分类号
O1 [理学—基础数学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
羊口疮病毒129蛋白互作宿主蛋白的筛选与C1QBP基因的克隆分析
但一昕
向华
张焕容
杨璐
任玉鹏
徐颂为
何翃闳
朱江江
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2023
1
下载PDF
职称材料
2
自相似集分离条件和诸条件之间的关系
赵国瑞
《湖南农机(学术版)》
2011
0
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职称材料
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