不同CYP2C9及GGCX基因型在人工瓣膜置换术后的抗凝效果比较

目的了解不同CYP2C9及GGCX基因型对人工瓣膜置换术后抗凝效果的影响。方法选取2013年1月-2016年12月在该院心脏外科接受心脏瓣膜置换术的患者,采集服药后空腹12 h的外周静脉血3 ml进行CYP2C9和GGCX基因型检测,收集患者相关临床资料,采用SPSS 21.0软件进行数据分析。结果选取80例患者,CYP2C9基因型有2种,包括73例CYP2C9*1*1和7例CYP2C9*1*3患者;42例GGCX*A*G型和38例GGCX*G*G型患者。两种基因型患者在性别、年龄、体质指数(BMI)、凝血酶原时间(PT)、国家标准化比值(INR)值及达到稳定抗凝效果后的华法林血药浓度差异无统计学意义(P<0.05),但CYP2C9*1*1型患者INR首次达标时间>CYP2C9*1*3型患者(P=0.013),CYP2C9*1*1型患者华法林日均稳定维持剂量>CYP2C9*1*3型患者(P=0.011),GGCX*A*G型患者华法林日均稳定维持剂量>GGCX*G*G型患者(P=0.000),同时为CYP2C9*1*1型和GGCX*A*G型的患者华法林日均稳定维持剂量>其他3组(P=0.024)。CYP2C9基因型(P=0.001)和GGCX基因型是影响患者术后第6天是否能达到治疗窗的影响因素(P=0.032)。结论根据CYP2C9基因型和GGCX基因型确定个人使用剂量,可提高患者抗凝治疗效果。

新疆地区哈萨克族和汉族人群中GGCX基因多态性分析

目的探讨γ-谷氨酰基羧化酶(Gamma-glutamyl carboxylase,GGCX)基因多态位点在新疆地区哈萨克族、汉族人群中的分布特点及其差异。方法采用标准酚-氯仿法提取新疆地区哈萨克、汉族各305例健康人外周血基因组DNA,应用多聚酶链反应-限制性内切酶长度片段多态性(PCR-RFLP)技术对GGCX的2个单核苷酸位点(rs11676382和rs6751560)进行基因多态性监测,计算其基因型,并比较2个民族人群中基因多态性分布的差异。结果 rs11676382基因型CC、CG和GG在哈萨克族人群中分别有66例(21.64%)、233例(76.39%)和6例(1.97%),C和G等位基因的频率分别为59.84%和83.50%;在汉族人群中分别有209例(68.30%)、93例(30.39%)和4例(1.31%),C和G等位基因的频率分别为40.16%和16.50%。rs6751560基因型AA、AG和GG在哈萨克族人群中分别有2例(0.66%)、11例(3.61%)和292例(95.74%),A和G等位基因的频率分别为2.46%和97.54%;在汉族人群中AA、AG和GG分别有4例(1.31%)、3例(0.98%)和298例(97.70%),A和G等位基因的频率分别为1.80%和98.20%;哈萨克族人群与汉族人群rs11676382位点基因型比较差异有统计学意义(总χ2=134.9,P<0.01),显性模型CC与CG+GG、隐性模型GG与CC+CG、附加模型CG与CC+GG之间比较显示,显性模型和附加模型比较差异有统计学意义(χ2=134.4和129.9,P<0.01),等位基因C与G比较差异有统计学意义(χ2=84.3,P<0.01)。rs11676382位点隐性模型和rs6751560位点基因型及等位基因差异均无统计学意义。结论新疆地区哈萨克族与汉族人群rs11676382位点均以CC和CG基因型比较常见,C等位基因出现的频率比G等位基因出现的频率高;CC基因型是保护因素,而CG基因型是危险因素,GG基因型既不是保护因素,又不是危险因素。2个民族人群中rs6751560位点以GG基因型常见,A和G等位基因出现的频率相等。

转GGCX基因治疗兔骨性关节炎的体外实验研究

目的探索GGCX基因对兔骨性关节炎软骨细胞MMP13的影响及其在兔骨性关节炎软骨退变中的作用。方法取体质量(2.0±0.2)kg日本大耳兔6只,随机分为3组,每组设立一只对照兔,分别在2、4、6周使用膝前交叉韧带切断术构建模型,6周后模型兔构建成功,分离关节软骨,经消化分离后将软骨细胞接种到6孔细胞培养板,将软骨细胞分为空白组、阴性对照组(转染不含GGCX基因慢病毒)、转染组(转染含GGCX基因慢病毒)3组。转染组则均以LipofectamineTM2000为转染媒介。用PCR法及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测GGCX和MMP13的表达。结果转染组GGCX有较高的表达水平;转染组MMP13的表达水平降低,且二者与空白组及阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 GGCX基因过表达可明显降低其软骨细胞MMP13的表达,为将基因治疗运用于体外骨性关节炎提供实验基础。

六种基因多态性对中国汉族人群华法林稳定剂量的影响

目的评价VKORC1、CYP2C9、GGCX、PROC、EPHX1及CYP4F2基因多态性对中国汉族人群华法林稳定剂量的影响。方法随机选取488例服用华法林抗凝且国际标准化比值均稳定达标的中国汉族患者，抗凝指证包括人工瓣膜置换术后、房颤及肺血栓栓塞症，对所有入选患者进行上述6种基因多态性检测，并记录患者平均每日华法林稳定剂量、人口学信息及合并用药情况等；分析VKORC1、CYP2C9、GGCX、PROC、EPHX1及CYP4F2基因多态性、人口学信息及合并用药对华法林稳定剂量的影响。结果VKORC1和CYP2C9基因多态性共解释了50％以上的中国汉族患者华法林稳定剂量的个体差异，其影响程度大于人口学特征、合并用药等因素；CYP4F2基因多态性仅能解释1％中国汉族患者的华法林稳定剂量的个体差异；GGCX、PROC及EPHX1基因多态性不影响中国汉族患者的华法林稳定剂量。结论VKORC1和CYP2C9基因多态性是影响中国汉族人群华法林稳定剂量的主要遗传因素。

先天性维生素K依赖性凝血因子缺乏症1细胞诊断体系的构建

目的:建立可用于确诊先天性维生素K依赖性凝血因子缺乏症1(vitamin K-dependent coagulation factor deficiency 1,VKCFD1)疾病的细胞体系。方法:在稳定表达报告基因FIX-Gla-PC的HEK293细胞中,应用CRISPR/Cas9技术敲除GGCX基因;通过ELISA、DNA测序、Western印迹等方法鉴定GGCX基因敲除的单克隆细胞。用快速点变异的方法构建致病性GGCX变异体质粒;用ELISA方法检测GGCX变异对报告基因的影响。结果:首先用ELISA方法筛选到两株报告基因无活性的单克隆细胞;之后DNA测序结果和Western印迹验证GGCX基因发生了编辑和敲除;最后通过转染野生型GGCX基因,可以恢复报告基因的活性,提示成功筛选到两株GGCX基因敲除的单克隆细胞。在筛选到的细胞株中转染已知可导致VKCFD1的GGCX变异体,发现报告基因活性在致病性变异体中显著降低。结论:成功构建了检测GGCX活性的细胞体系,该体系可以用于诊断GGCX变异导致的VKCFD1。