番茄GGPS2基因的克隆与表达载体的构建

=牛儿基=牛儿焦磷酸合成酶(geranylgeranyl pyrophosphate synthase,GGPS)在=牛儿基=牛儿焦磷酸合成、植物代谢和生长发育中具有重要作用.采用RT-PCR的方法,从番茄品种Solanum lycopersiconL.cv.AilsaCraig成熟果实中扩增出GGPS2基因,分别构成了该基因的原核与植物表达载体.

甜樱桃AsA合成基因GGP的克隆及在果实发育过程的表达

GGP(GDP-L-galactose phosphorylase)参与植物AsA合成过程。本研究以甜樱桃‘佐藤锦’(Satonishiki)为材料,采用PCR法,首次在甜樱桃上克隆了AsA合成相关基因PacGGP1和PacGGP2,基因片段长度分别为1 297 bp和1 765 bp,分别包含1 107 bp和1 341 bp,并分别编码368和446个氨基酸。通过氨基酸序列比对结果发现,与甜樱桃PacGGP1同源性较高的是枣GGP1,相似度100%,与甜樱桃PacGGP2同源性较高的是碧桃GGP2,相似度在98%左右。采用RT-PCR方法分析了PacGGP1和PacGGP2的表达模式。研究表明PacGGP2基因在‘佐藤锦’甜樱桃品种中的表达变化模式与T-AsA的含量变化趋势表现出明显的相似性,推测它可能是AsA L-半乳糖合成途径中的关键基因,可为甜樱桃分子育种奠定重要基础。

转番茄GGPS2基因烟草的构建及弱光耐受性分析

为探讨弱光处理对转番茄Solanum lycopersicon L.GGPS2基因烟草的类胡萝卜素、叶绿素合成及耐弱光性的影响,将Sla GGPS2基因和绿色荧光蛋白报告基因(GFP)经农杆菌介导转入烟草Nicotiana tabacum L.cv.Wisconsin 38。PCR检测证明抗卡那霉素烟草含有npt II、Sla GGPS2基因,且无农杆菌污染;荧光检测发现,抗卡那霉素烟草的根尖呈现特有的荧光,由此说明获得了整合Sla GGPS2和GFP等外源基因的转基因烟草。弱光处理后,发现转Sla GGPS2基因烟草的类胡萝卜素含量、叶绿素总量、光合速率、单位叶面积重、总干重、根冠干重比均比野生烟草高,达到了差异显著水平。证实Sla GGPS2基因增加了弱光下烟草的类胡萝卜素含量、叶绿素总量,增强了光合速率,促进了生物量积累及其向根部的分配,提高了烟草弱光下的耐受性,推测可用于其他作物的耐弱光性改良。