罕见β-珠蛋白基因Codon 24(GGT>GGA)突变导致β-地中海贫血1例及文献分析

目的:分析罕见β-珠蛋白基因突变类型、血液学及临床特征。方法:收集疑为β-地中海贫血的病例120例。对病例进行全血细胞分类及计数、血红蛋白(Hb)电泳分析检测。用跨越断裂点PCR方法、荧光PCR熔解曲线方法、DNA测序等分析α-和β-珠蛋白基因突变类型。结果:120例β-地中海贫血病例中,检出1例为罕见β-珠蛋白基因突变,基因分析为Codon 24(GGT>GGA,HBB:c.75T>A)杂合子。该病例为男性,39岁,血常规检测显示:Hb 127.3 g/L,血红细胞(RBC)5.81×10^(12)/L,红细胞平均体积(MCV)70.29 fL,红细胞平均血红蛋白量(MCH)21.94 pg,红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)312.10 g/L。Hb分析显示Hb A_(2)4.5%,Hb F 0.4%。a-地中海贫血基因分析未发现常见的基因突变类型。结论:首次在国内发现罕见β-珠蛋白基因Codon 24(GGT>GGA,HBB:c.75T>A)突变导致β-地中海贫血。该病例在临床上易漏诊,应引起重视。

GGT异常表达机制及定量HS-GGT诊断肝癌临床价值的研究

目的 : 探讨γ-谷氨酰转移酶 (GGT)在肝癌中的表达机制及其定量分析肝癌特异性 GGT(HS- GGT)的临床价值。方法 :从肝癌组织中纯化总 RNA,以 RT- PCR扩增 GGT基因并分析 M3位点甲基化状态 ,制备酶蛋白观察不同分子形式 GGT的表达与改变 ,并定量检测了不同肝病患者血清 HS- GGT水平。结果 :人肝癌至远癌组织中总 RNA浓度呈明显升高趋势 (P<0 .0 5 ) ,GGT基因检出率分别为 10 0 %、85 %和 75 % ,而 M3位点呈低甲基化状态 ,其频率分别为 75 %、5 5 %和 5 0 % ;癌组织中 GGT过度表达 ,血清 HS- GGT活性在肝癌组明显升高 ,以高于5 .5 U / L为界诊断肝癌的阳性率为 86 % ,而在其他患者中的阳性率低于 3%。结论 :基因甲基化状态降低导致 GGT异常表达 ,定量分析 HS- GGT有助于肝癌的诊断与鉴别。

幽门螺杆菌GGT基因在胃癌上皮细胞中的表达和定位

目的:克隆幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,GGT)基因,实现GGT基因在人胃癌上皮细胞SGC-7901中的表达和定位.方法:本实验从胃癌患者胃黏膜组织中分离培养获得H.pylori,提取其基因组DNA,对GGT基因进行PCR扩增,将利用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)融合GGT基因全长序列和成熟肽序列,克隆进pcDNA3质粒中,观察GGT基因表达后在人胃癌上皮细胞SGC-7901中的定位,观察SGC-7901细胞形态、生长以及运动性的变化.推测其可能诱导细胞凋亡的途径.结果:pcDNA3-GGT-EGFP质粒转染SGC-7901细胞后,在SGC-7901细胞中表达外源基因,在显微镜下可见转染的细胞产生明显的病变,细胞由梭形变成圆形、变大、胞核扩大.转染60 h后,在共聚焦显微镜下观察,发现荧光信号主要集中在细胞质中.结论:成功克隆了GGT基因,经酶切和测序验证正确,成功构建了pcDNA3-GGT-EGFP质粒.

人肝癌组织特异性GGTmRNA亚型表达的研究

目的 探讨γ-谷氨酰转移酶 ( GGT) m RNA亚型转化与肝癌发生的关系。方法 采用 RT-PCR方法检测正常肝组织、良性肝病肝组织、肝癌组织、癌旁组织、远癌组织及肝转移癌癌周组织中三种 GGTm RNA亚型 ( F、H、P亚型 )的表达情况。结果 正常肝组织主要的 GGTm RNA类型为 F亚型 ,良性肝病及肝转移癌癌周组织亦以 F亚型为主 ;肝癌组织、癌旁组织及远癌组织 H亚型的阳性率显著高于正常肝脏及良性肝病肝组织 ( P<0 .0 5) ;肝癌组织 F亚型阳性率明显低于正常及良性肝病肝组织 ( P<0 .0 5)。结论 GGTm RNA亚型转化与肝癌发生有密切关系 ;

检测γ-谷氨酰转移酶mRNA亚型在肝癌早期诊断中的临床价值

背景及目的:与正常肝脏相比,肝癌细胞表达的γ-谷氨酰转移酶(GGT)有一独特的碳水化合物结构,这种GGT可作为肝癌诊断的重要指标,但是,在癌变过程中GGT基因的改变机制尚不清楚,本研究探讨GGTmRNA亚型的转化与原发性肝癌(HCC)发生的关系,寻找肝癌早期诊断的新方法。方法:以RT-PCR方法检测正常对照组、非癌肝病组、肝癌组及肝转移癌肝组织及外周血的三种GGTmRNA亚型(F、H、P亚型)。结果:正常肝组织、非癌肝病肝组织及肝转移癌癌周组织主要的GGTmRNA类型为F亚型,肝癌组织、癌旁组织、及远癌组织GGTmRNA-H亚型的阳性率显著高于正常肝脏及非癌肝病肝组织(P<0.05),肝癌组织GGTmRNA-F亚型阳性率明显低于正常对照及非癌肝病组(P<0.05)。在26例HCC中有12例外周血中检出GGTmRNA-H亚型,AFP阴性的10例HCC中有5例检出GGTmRNA-H亚型。结论:GGTmRNA亚型转化与肝癌发生有密切关系,分析GGT基因可望成为监测肝细胞癌变的灵敏方法。

肝癌细胞中γ-谷氨酰转肽酶基因甲基化研究

目的:研究肝癌细胞中γ-谷氨酰转肽酶(GGT)甲基化的改变。方法:纯化人肝癌及癌旁组织中总GGT及RNA,观察总GGT、膜结合和可溶性GGT的表达,并以逆转录巢式PCR扩增GGT非编码区基因片段,分析M_3位点的甲基化状态。结果:肝癌、癌旁和远癌组总RNA浓度呈明显的梯度升而趋势(P<0.05);癌组织总GGT、膜结合和可溶性GGT均高于癌周又远癌组织(P<0.05);在癌、癌旁及远癌组织中,特定基因片段的扩增检出率分别为100％、85％、75％,M_3位点低甲基化频率分别为75％、55％、50％。结论:肝癌组织中GGT呈异常表达与基因低甲基化状态有关。

应用半乳糖表型差异高效筛选α-1,3半乳糖苷转移酶基因缺失的猪成纤维细胞

【目的】筛选α-1,3半乳糖苷转移酶(α1,3galactosyl transferase,GGTA1)基因缺失的猪成纤维细胞。【方法】用同源重组载体pBS-GGTA1-SKO和pBS-GGTA1-DKO电转染GGTA1单等位基因敲除(GGTA1+/-)的五指山小型猪胎儿成纤维细胞,利用磁激活细胞分选(MACS)、MACS联合流式细胞术(FACS)、TcdA联合FACS等3种方法进行细胞筛选;对MACS筛选获得的单细胞克隆进行PCR和FACS鉴定,对MACS联合FACS、TcdA联合FACS获得的细胞集落进行PCR鉴定。【结果】经MACS筛选获得了11个细胞克隆,经鉴定2个是GGTA1-/-细胞克隆,阳性率为18.2%;MACS联合FACS筛选获得了3个细胞克隆,经鉴定无GGTA1-/-细胞克隆,阳性率为0;TcdA联合FACS筛选获得了3个细胞克隆,经鉴定均为GGTA1-/-细胞克隆,阳性率为100%。【结论】MACS法筛选和TcdA联合FACS法筛选这2种方法均可以高效筛选出GGTA1双等位基因缺失的猪成纤维细胞,可用于进一步制备供异种器官移植的基因修饰小型猪。

ABCB11基因突变导致的进行性家族性肝内胆汁淤积症的临床病理观察

目的探讨ABCB11基因突变导致的进行性家族性肝内胆汁淤积症(progressive familial intrahepatic cholestasis,PFIC)的临床特点、组织学形态、免疫表型及其鉴别诊断。方法分析8例ABCB11基因突变导致PFIC的临床资料、基因检测、病理学形态和免疫表型,并复习相关文献。结果基因检测显示8例均有ABCB11基因突变,1岁内起病,以持续性黄疸为主要表现,不伴肝外异常症状,血清GGT水平均较低或正常。7例肝活检组织HE染色镜下均可见弥漫的肝细胞气球样变及多核巨肝细胞形成,同时伴明显的肝细胞内胆汁淤积及较轻的肝小叶内炎症,汇管区纤维化及炎症程度不等。1例巨肝细胞病变程度轻且无明显的炎症,所有病例均未发现真性胆小管增生。7例肝活检组织中BSEP蛋白表达缺失或减少,1例表达无明显减少。结论肝组织的病理特征及BSEP蛋白的免疫组化检测是明确诊断ABCB11基因突变导致PFIC的重要手段,结合临床表现可对该病进行早期筛查,提高基因检测及临床诊疗的针对性。

γ-谷氨酰转移酶mRNA亚型对肝细胞癌变的监测

目的 探讨γ 谷氨酰转移酶 (GGT)mRNA亚型的转化与原发性肝癌 (HCC)发生的关系 ,寻找肝癌早期诊断的新方法。方法 以逆转录聚合酶链反应方法检测正常对照组、非癌肝病组、肝癌组及肝转移癌肝组织及外周血的 3种GGTmRNA亚型 (A、B、C亚型 )。结果 正常肝组织、非癌肝病的肝组织及肝转移癌癌周组织主要的GGTmRNA类型为A亚型 ,肝癌组织、癌旁组织及远癌组织GGTmRNA B亚型的阳性率显著高于正常肝脏及非癌肝病的肝组织 (P <0 .0 5 ) ,肝癌组织GGTmRNA A亚型阳性率明显低于正常对照及非癌肝病组 (P <0 .0 5 )。在 2 6例HCC中有 12例外周血中检出GGTmRNA B亚型 ,甲胎蛋白阴性的 10例HCC中有 5例检出GGTmRNA B亚型。结论 GGTmRNA亚型转化与肝癌发生有密切关系 ,分析GGT基因可望成为监测肝细胞癌变的灵敏方法。

外周血谷氨酰转肽酶mRNA-H亚型与AFP检测对评估原发性肝细胞肝癌病人术后预后价值的比较

目的深入探讨原发性肝细胞肝癌(HCC)病人外周血谷氨酰转肽酶(GGT)mRNA-H亚型表达与肝癌术后预后指标的关系,并与AFP比较,寻找评估肝癌预后更可靠的新指标。方法对78例HCC病人外周血应用逆转录聚合酶链反应方法检测GGTmRNA-H亚型;并运用放射免疫测定法检测AFP水平。对49例无门脉和(或)肝外转移的HCC病人进行随访研究。结果有肝内转移、门静脉癌栓及远处转移组其外周血GGTmRNA-H亚型阳性率显著高于对照组(P<0·05);在随访期内外周血GGTmRNA-H阳性组门脉及肝外转移的发生率比例明显高于阴性组(P<0·05),而AFP阳性及阴性组的转移发生率相似。结论HCC病人外周血细胞GGTmRNA-H亚型表达阳性者,术后出现转移的可能性高、预后差;GGTmRNA-H亚型与AFP相比,有望成为评估肝癌预后更可靠的新指标。