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生长激素释放相关肽GHRL-12在免疫检查点抑制剂相关心肌炎小鼠中的作用与机制研究 被引量:1
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作者 汪雪君 沈毅辉 +4 位作者 张卉 陈怡帆 许宇辰 张健 程蕾蕾 《中国心血管杂志》 北大核心 2024年第2期112-121,共10页
目的探讨生长激素释放相关肽GHRL-12在免疫检查点抑制剂相关心肌炎中的作用与机制,为其临床应用提供理论依据。方法6~8周龄BALB/c小鼠,采用随机数生成器,随机分为对照组、心肌炎组、GHRL-12组和GHRL-12+心肌炎组。GHRL-12组和GHRL-12+... 目的探讨生长激素释放相关肽GHRL-12在免疫检查点抑制剂相关心肌炎中的作用与机制,为其临床应用提供理论依据。方法6~8周龄BALB/c小鼠,采用随机数生成器,随机分为对照组、心肌炎组、GHRL-12组和GHRL-12+心肌炎组。GHRL-12组和GHRL-12+心肌炎组小鼠尾静脉注射10 mg/kg GHRL-12连续1周,同时对照组和心肌炎组小鼠尾静脉注射同等体积的无功能scramble肽。在第7天和第14天分别给予心肌炎组和GHRL-12+心肌炎组小鼠250μg心肌肌钙蛋白I(cTnI),从第14天开始,每间隔1天给予小鼠腹腔注射5 mg/kg anti-PD-1,共5次。每7天称量小鼠体重,测量小鼠心体比和心胫比。超声心动图检测心功能指标。HE染色检测心肌组织炎症细胞浸润程度,Masson染色检测心肌组织纤维化程度,并用ImageJ对炎症细胞浸润和纤维化程度进行量化。取小鼠眼球血,检测血清中肌酸激酶(CK)、CK同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶1(LDH-1)变化。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中炎症因子cTnI、cTnT、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)释放情况。蛋白质印迹技术测定小鼠心肌组织中自噬相关蛋白高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、酵母Atg6同源物(Beclin-1)、自噬基因-相关蛋白5(ATG5)和微管相关蛋白轻链3B(LC3B)的表达,同时测定小鼠心肌组织中凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的表达。对心肌细胞核用DAPI染成蓝色,凋亡细胞被TUNEL染成绿色,检测小鼠心肌组织发生凋亡的情况。结果(1)与对照组相比,GHRL-12组小鼠体重无显著差异,心肌炎组小鼠体重增长不明显;与心肌炎组比较,给药第19天起GHRL-12+心肌炎组小鼠体重增长较为明显。与对照组和GHRL-12组相比,心肌炎组小鼠心体比、心胫比显著增加,而与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组小鼠心体比、心胫比下降。(2)超声心动图显示,单纯给予GHRL-12干预对小鼠心功能无显著影响,与对照组相比,心肌炎组小鼠左心室射血分数(LVEF)、缩短分数(FS)显著下降,左心室收缩末期内径(LVEDs)、左心室舒张末期内径(LVEDd)显著增加;而与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组小鼠LVEF、FS升高,LVEDs、LVEDd减少。(3)HE染色结果显示,与对照组小鼠相比,心肌炎组小鼠炎症细胞浸润显著增加,而与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组小鼠炎症细胞浸润减少。(4)Masson染色结果表明,与对照组小鼠相比,心肌炎组小鼠心肌组织纤维化程度增加,而与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组小鼠心肌组织纤维化程度降低。(5)与对照组小鼠相比,心肌炎组小鼠血清中CK、CK-MB、LDH-1、cTnI和cTnT均显著上升,而与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组均显著下降。(6)蛋白质印迹结果显示,与对照组小鼠相比,心肌炎组小鼠心肌组织HMGB1、Beclin-1、ATG5和LC3B蛋白表达均显著增加,而与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组均显著下降;同时,心肌炎组Caspase-3和PARP蛋白表达均显著增加,GHRL-12+心肌炎组均显著减少。(7)TUNEL结果显示,与对照组小鼠相比,心肌炎组小鼠心肌组织凋亡显著增加,与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组小鼠心肌组织凋亡显著下降。结论多肽GHRL-12能够改善免疫检查点抑制剂诱导的心功能损伤,减少心肌组织中炎症细胞浸润和纤维化,抑制心肌组织凋亡和自噬,为未来免疫检查点抑制剂相关心肌炎的治疗提供潜在可能。 展开更多
关键词 免疫检查点抑制剂 心肌炎 ghrl-12 细胞凋亡 自噬
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两个贵州山羊品种GHSR和GHRL基因遗传变异及其与生长性状的关联性 被引量:15
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作者 宋桃伟 蔡惠芬 +4 位作者 罗卫星 刘若余 张依裕 孙岩岩 刘彬 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期140-153,共14页
【目的】探讨GHSR和GHRL基因作为山羊体重体尺性状候选基因的可能性,寻找与山羊生长性状相关的分子遗传标记。【方法】以贵州白山羊和贵州黑山羊为研究素材,采用DNA混合池结合PCR产物直接测序及PCR-SSCP技术检测GHSR和GHRL基因的单核苷... 【目的】探讨GHSR和GHRL基因作为山羊体重体尺性状候选基因的可能性,寻找与山羊生长性状相关的分子遗传标记。【方法】以贵州白山羊和贵州黑山羊为研究素材,采用DNA混合池结合PCR产物直接测序及PCR-SSCP技术检测GHSR和GHRL基因的单核苷酸多态性,利用SPSS(18.0)软件GLM统计模型分析基因SNPs不同基因型及合并基因型与贵州山羊生长性状的关联性,同时采用在线软件对GHSR基因进行生物信息学分析。【结果】在GHSR基因外显子2和3′UTR分别检测到G200A同义突变和T628C位点,而在5′UTR区和外显子1则未发现多态性。设计一对特异性引物对G200A位点进行PCR-SSCP分析,表现为3种基因型,依次命名为GG、GA和AA。GG基因型为优势基因型,在贵州白山羊和贵州黑山羊母羊群体中等位基因G为优势等位基因,其等位基因频率分别为0.6731和0.5243。而在贵州黑山羊公羊群体中A则为优势等位基因,其频率为0.5122。多态信息含量均表现为中度多态(0.25<PIC<0.50)。在GHRL基因内含子2处发现1个G141A突变,外显子2和外显子4处分别检测到2个同义突变(T78C和C14T),设计一对特异性引物对C14T位点进行SSCP分析,显示为2种基因型CT和CC。在所有试验群体中,CC基因型为优势基因型,其频率分别为0.7692、0.9417和0.9390,等位基因C为优势等位基因,其频率依次为0.8846、0.9709和0.9695,多态信息含量均显示为低度多态(PIC<0.25)。χ2检验显示所有试验群体G200A和C14T位点基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。关联分析表明,GHSR基因G200A位点与山羊体重、体高、体斜长和管围显著相关(P<0.05),纯合子GG基因型优势较为明显,贵州白山羊GG基因型个体的体高显著高于GA基因型个体和管围显著高于AA基因型个体(P<0.05)。C14T位点贵州黑山羊(公羊)CC基因型个体的体重、体高和胸围显著高于CT基因型(P<0.05)。组合基因型对体高和胸围指标的影响显著(P<0.05),表现为CCGG合并基因型个体的体高显著高于CCAA合并基因型个体(P<0.05)。生物信息学分析揭露,GHSR基因5’UTR处未检测到核心启动子区和Cp G岛,仅发现1个CAAT-box和部分潜在的转录因子结合位点,G200A导致m RNA二级结构发生明显变化。GHSR蛋白二级结构以α-螺旋为主(48.90%),三级结构及跨膜螺旋结构预测表明该蛋白是膜蛋白。【结论】研究初步推测GHSR基因和GHRL基因多态性及合并基因型对山羊生长性状具有较显著的影响,G200A和C14T位点可作为山羊生长性状的有效遗传标记用于指导山羊的分子育种。 展开更多
关键词 GHSR基因 ghrl基因 遗传变异 生长性状 关联分析
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鸟枪法筛选枯草芽孢杆菌基因强启动子及对黄牛GHRL基因的表达 被引量:4
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作者 张爱玲 张丽 +2 位作者 杨明明 张良志 陈宏 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期92-96,共5页
利用鸟枪法通过大肠埃希菌-枯草芽孢杆菌启动子探针载体分离到枯草芽孢杆菌168菌株的103个基因启动子片段,发现1个672 bp的启动子片段P3.4.23,能够在大肠埃希菌和枯草芽孢杆菌高效启动报告基因β-半乳糖苷酶的表达,其酶活性分别达到3 41... 利用鸟枪法通过大肠埃希菌-枯草芽孢杆菌启动子探针载体分离到枯草芽孢杆菌168菌株的103个基因启动子片段,发现1个672 bp的启动子片段P3.4.23,能够在大肠埃希菌和枯草芽孢杆菌高效启动报告基因β-半乳糖苷酶的表达,其酶活性分别达到3 418、2 877 U/mL.相似性分析表明P3.4.23启动子片段具有枯草芽孢杆菌基因启动子的保守序列,并确定其转录活性区域位于5~333 bp,为yxiE基因的调控序列.将黄牛GHRL基因导入到启动子亚克隆序列下游,使该基因在枯草芽孢杆菌中得到了表达. 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 大肠埃希菌 启动子探针载体 ghrl基因 鸟枪法
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惠阳胡须鸡IGF-Ⅰ和GHRL基因多态性研究 被引量:4
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作者 李红伟 钟淡龙 +2 位作者 陈圆 吴晓燕 邹志冠 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第9期152-155,共4页
以IGF-Ⅰ和GHRL基因为惠阳胡须鸡生长性状的候选基因,通过测序、酶切等方法对93日龄惠阳胡须鸡IGF-Ⅰ和GHRL基因多态性进行分析,并用GLM模型分析基因型与体质量的关联性。结果表明:IGF-Ⅰ基因在第181位发生碱基突变,A突变为G,属于同义突... 以IGF-Ⅰ和GHRL基因为惠阳胡须鸡生长性状的候选基因,通过测序、酶切等方法对93日龄惠阳胡须鸡IGF-Ⅰ和GHRL基因多态性进行分析,并用GLM模型分析基因型与体质量的关联性。结果表明:IGF-Ⅰ基因在第181位发生碱基突变,A突变为G,属于同义突变,BsmⅠ酶切分析发现,IGF-Ⅰ基因只有1种基因型,表明该位点在胡须鸡保种群中已经纯合;GHRL基因在第124位发生碱基突变,T突变为G,改变了酶切位点,通过pfl MⅠ酶切分析发现,GHRL基因有3种基因型,即AA型、AB型和BB型。统计结果表明,93日龄惠阳胡须鸡3种基因型个体间体质量无显著差异。 展开更多
关键词 惠阳胡须鸡 IGF-Ⅰ基因 ghrl基因 基因多态性
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山羊GHRL基因多态性及其与体重、体尺性状的关系研究 被引量:7
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作者 罗开鹏 宋桃伟 +4 位作者 孙岩岩 刘彬 罗卫星 黄安志 张许 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期162-165,共4页
采用PCR-SSCP技术对贵州黑山羊和贵州白山羊GHRL基因进行单核苷酸多态性检测,并分析其多态与体重、体尺性状间的关联性。结果发现,在GHRL基因外显子4处存在1个同义突变位点(C345T),表现为2种基因型,分别命名为CC和CT。基因型与体重、体... 采用PCR-SSCP技术对贵州黑山羊和贵州白山羊GHRL基因进行单核苷酸多态性检测,并分析其多态与体重、体尺性状间的关联性。结果发现,在GHRL基因外显子4处存在1个同义突变位点(C345T),表现为2种基因型,分别命名为CC和CT。基因型与体重、体尺性状关联分析结果显示,在贵州黑山羊(麦坪)群体中,CT基因型个体的体重、体高和胸围均显著高于CC基因型个体,而在贵州黑山羊(纳雍)和贵州白山羊群体中差异不显著。研究结果揭示,GHRL基因突变位点(C345T)影响贵州黑山羊生长性状可能性较大,该位点有望作为山羊生长性状的一个标记辅助选择位点。 展开更多
关键词 贵州黑山羊 贵州白山羊 ghrl基因 体重、体尺性状
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中华鳖GHRL基因SNPs的筛选及生长性状的关联分析 被引量:4
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作者 李纯 陈辰 +3 位作者 赵建 洪孝友 李伟 朱新平 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期307-312,共6页
为探究GHRL基因多态性对中华鳖(Pelodiscus sinensis)生长性状的影响,采用直接测序法在GHRL基因上检测到14个单核苷酸多态性位点C289T、G501T、T738C、G776T、A841G、T885C、T2960C、A2987T、G3390A、A3857C、G4718A、T4820C、A4850C、T... 为探究GHRL基因多态性对中华鳖(Pelodiscus sinensis)生长性状的影响,采用直接测序法在GHRL基因上检测到14个单核苷酸多态性位点C289T、G501T、T738C、G776T、A841G、T885C、T2960C、A2987T、G3390A、A3857C、G4718A、T4820C、A4850C、T4979C。随机选取同批繁殖的120只中华鳖用飞行时间质谱法进行SNPs位点的分型,并分析与生长性状的相关性。检测结果显示,所有SNP位点均符合HardyWeinberg平衡状态(P>0.05)。方差分析结果显示,C289T位点CT、CC基因型的5项生长数据均显著高于TT基因型(P<0.05)。S2位点AB基因型的体重、背甲长、背甲宽和裙边宽4项数据均显著高于AA基因型(P<0.05)。G3390A位点AG基因型的背甲长、背甲宽2项数据显著高于AA基因型(P<0.05)。G4718A位点AG基因型的背甲长、背甲宽、裙边宽3项数据显著高于AA基因型(P<0.05)。在GHRL基因上获得的SNP位点可能影响着中华鳖的生长性状或与之紧密连锁,可为中华鳖分子辅助育种提供助力与参考。 展开更多
关键词 中华鳖 ghrl SNP 生长相关
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进展期年轻胃癌患者新的预后标志物和免疫治疗的潜在靶点:GHRL和OLFM4
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作者 程银祥 陆浩东 +1 位作者 唐雨辰 张子祥 《中国科技期刊数据库 医药》 2022年第11期45-55,共11页
背景 胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,预后不良,在年轻人中的发病率呈逐年上升趋势。目前,由于年轻IV期胃癌患者预后较差以及免疫治疗的局限性,迫切需要确定新的预后标志物和免疫治疗靶点。通过干预肿瘤微环境中免疫抑制剂的表达来... 背景 胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,预后不良,在年轻人中的发病率呈逐年上升趋势。目前,由于年轻IV期胃癌患者预后较差以及免疫治疗的局限性,迫切需要确定新的预后标志物和免疫治疗靶点。通过干预肿瘤微环境中免疫抑制剂的表达来影响年轻胃癌患者的预后。方法 从SEER数据库下载胃癌临床资料,用X-Tile软件计算。将患者分为两组:青年组和老年组。分析其预后及临床病理特征。用GEO数据库分析基因差异的预后,并进行GO、KEGG和GSEA的富集分析。通过人类蛋白质图谱,观察GHRL和OLFM4蛋白在胃癌和正常胃组织中的表达水平。用TIMER2.0和TISIDB检测GHRL和OLFM4对肿瘤浸润性免疫细胞的影响。结果 青年胃癌IV期患者OLFM4低表达,GHRL高表达,预后不良。GHRL与免疫检查点、肿瘤浸润性免疫细胞呈正相关,而OLFM4与免疫检查点、肿瘤浸润性免疫细胞呈负相关。结论 GHRL和OLFM4可能是判断胃癌诊断和预后的重要指标,并可能通过干预肿瘤微环境中免疫抑制剂的表达而影响年轻胃癌患者的预后。 展开更多
关键词 IV期年轻胃癌 预后 ghrl OLFM4 肿瘤微环境 免疫抑制剂
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GHRL基因多态性与黔东南小香鸡生长性状的关联性分析
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作者 周迪 赵忠海 +6 位作者 李建伟 李俊 杨蓉 陈昌雪 袁勇 严兴烨 林习 《贵州畜牧兽医》 2022年第4期18-22,共5页
为探究GHRL基因多态性对鸡生长性状的影响,寻找有利的遗传标记位点,试验以黔东南小香鸡为研究对象,采用GHRL基因外显子PCR扩增方法筛选单核苷酸突变位点,并分析其与生长性状的关联性。结果:在黔东南小香鸡GHRL基因第2外显子发现1个g.319... 为探究GHRL基因多态性对鸡生长性状的影响,寻找有利的遗传标记位点,试验以黔东南小香鸡为研究对象,采用GHRL基因外显子PCR扩增方法筛选单核苷酸突变位点,并分析其与生长性状的关联性。结果:在黔东南小香鸡GHRL基因第2外显子发现1个g.319A>C突变位点,处于启动子区5’调控端,卡方适合性检验表明该位点满足Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。将g.319A>C所对应的不同基因型分别定义为AA、AC、CC型;与生长性状的关联性分析显示,CC基因型个体的胫围、龙骨长均显著高于AC基因型个体(P<0.05),与AA型(野生型)个体差异不显著(P>0.05),但其均值高于AA基因型个体。结论:GHRL基因g.319A>C位点突变的CC基因型属于有利突变,可以作为黔东南小香鸡分子辅助选育的参考标记位点。 展开更多
关键词 黔东南小香鸡 ghrl基因 多态性 生长性状 关联性
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中国汉族人群Ghrelin基因单核苷酸多态性与精神分裂症关联研究 被引量:5
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作者 杨勇锋 李文强 +7 位作者 岳伟华 张红星 宋学勤 于洪岩 张岱 杨鸽 赵晶媛 吕路线 《中华行为医学与脑科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期589-591,共3页
目的探讨Ghrelin(GHRL)基因单核甘酸多态性与精神分裂症的关联。方法纳入634例精神分裂症患者和606例健康对照,采用限制性片段长度多态性和聚合酶链反应技术检测GHRL基因4个SNP位点rs696217、rs26802、rs27647和rs26311基因型。结果G... 目的探讨Ghrelin(GHRL)基因单核甘酸多态性与精神分裂症的关联。方法纳入634例精神分裂症患者和606例健康对照,采用限制性片段长度多态性和聚合酶链反应技术检测GHRL基因4个SNP位点rs696217、rs26802、rs27647和rs26311基因型。结果GHRL基因4个单核甘酸多态位点基因型和等位基因频率在病例组和对照组中的分布差异均无显著性(基因型频率P值分别为0.649,0.944,0.410,0.826;等位基因频率P值分别为0.773,0.992,0.301,0.723)。而病例组与对照组的单体型(rs696217.rs26802-rs27647-rs26311))分析:GAAG、GAGC、GAGG、GCGC、GCGG、TAGC、TAGG单体型频率的差异均存在显著性(P值分别为0.011,0.001,1.76×10^-6,9.84×10^-10,1.38×10^-9,2.12×10^-5,2.57×10^-6)。结论GHRL基因可能不是精神分裂症的易感基因,但GA单体型可能是精神分裂症的易感因素。 展开更多
关键词 精神分裂症 GHRELIN ghrl 单核苷酸多态性
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Identification,expression analysis,and functional characterization of ghrelin and its receptors in spotted sea bass(Lateolabrax maculatus) 被引量:1
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作者 Peng Yu Yangyang Zhou +5 位作者 Xin Qi Hongying Fan Kaiqiang Zhang Xiaoyan Zhang Yun Li Haishen Wen 《Marine Life Science & Technology》 2020年第4期349-359,共11页
Ghrelin(Ghrl),an appetite-inducing peptide hormone secreted by the stomach,is the endogenous ligand for the growth hormone secretagogue receptor(Ghs-r).In this study,we identified the preproghrelin gene and its recept... Ghrelin(Ghrl),an appetite-inducing peptide hormone secreted by the stomach,is the endogenous ligand for the growth hormone secretagogue receptor(Ghs-r).In this study,we identified the preproghrelin gene and its receptors in spotted sea bass(Lateolabrax maculatus).The ghrl gene consisted of an open reading frame(ORF)of 324 nucleotides encoding 107 amino acids,and the premature protein contained a 20-amino-acid mature peptide.Through a syntenic analysis,we also validated the annotation of growth hormone secretagogue receptor la(ghs-rla)and growth hormone secretagogue receptor la-1ike(ghs-rla-like),which contained seven-transmembrane structures,in spotted sea bass.The ORF of ghs-rla consisted of 1152 bp that encoded a 383-amino-acid protein,and(ghs-rla-like) contained an ORF of 2631 bp and produced a protein with 876 amino acids.A phylogenetic analysis showed that spotted sea bass ghrl and its receptors clustered with those of other fishes and were more distantly related to those of other vertebrates.In situ hybridization revealed that ghrl was highly expressed in the stomach and localized in the mucosa and submucosa.The expression of these genes varied during short-term starvation in a time-dependent manner.In vitro studies showed that after incubation with Ghrl for 3 h enhanced the expression of motilin(mln),gastrin(gas)and cholecystokinin(cck)、but this effect vanished after 6 h of incubation.In summary,Ghrl and its receptors might play important roles in the regulation of food intake in spotted sea bass. 展开更多
关键词 ghrl Ghs-r-In vitro experiment Localization Spotted sea bass Short-term starvation
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