Ghrelin及其受体在大鼠心肌梗死后的动态表达

目的 Ghrelin是近年发现的一种新的生长激素释放肽,具有心血管保护效应。本研究旨在观察心肌梗死(MI)后Ghrelin及其受体GHSR-1a的动态表达及其变化。方法 30只SD雄性大鼠,随机分为四组,分别为假手术组(6只),心肌梗死后3 d组(8只),梗死7 d组(8只),梗死28 d组(8只)。采用冠状动脉结扎法制作心肌梗死模型,假手术组只在冠状动脉下穿线,但不结扎。采用实时定量PCR方法检测梗死边缘心肌Ghrelin及GHSR-1a mRNA表达,免疫印迹法检测梗死边缘心肌Ghrelin及GHSR-1a蛋白表达及分布。结果与假手术组比较,MI后3 d、7 d、28 d梗死周边区域心肌中Ghrelin mRNA表达明显降低(P<0.05),且呈逐渐下降趋势;而GHSR-1a mRNA表达显著增加(P<0.05);梗死3 d组与梗死7 d组差异无统计学意义(P>0.05)。免疫印迹显示假手术组大鼠心肌显示出了较强的Ghrelin阳性表达,而心肌梗死后Ghrelin阳性表达明显降低(P<0.05);与此相反,GHSR-1a蛋白表达在梗死后明显增加(P<0.05)。结论 Ghrelin/GHSR-1a系统在梗死后心脏重构中可能起着重要作用,并可作为防止心脏重构的一个新的干预靶点。

Ghrelin对小鼠不同来源胚胎体外发育的影响及其受体的表达模式

为探明Ghrelin及其受体Ghsr-1a在早期胚胎发育中的作用,以小鼠体内受精、体外受精和孤雌激活胚胎为研究对象,在其体外发育过程中添加不同浓度Ghrelin,观察胚胎发育效率;通过免疫荧光染色和荧光定量PCR,观察不同时期胚胎中Ghsr-1a的变化。结果表明,体内受精胚体外发育中添加0.1 ng/m L Ghrelin显著降低了囊胚率(P<0.05),添加1 ng/m L的Ghrelin显著降低了小鼠体外受精胚的囊胚率(P<0.05)。在体内受精胎中,Ghsr-1a的mRNA表达水平在4细胞显著高于其他时期(P<0.05);体外受精胚中,Ghsr-1a的mRNA水平在8细胞前无明显差异,桑椹胚和囊胚显著下降(P<0.05)。在孤雌激活胚胎中,Ghsr-1a的mRNA表达水平从2细胞到8细胞显著降低,之后到囊胚期开始显著升高,其蛋白表达模式与mRNA表达模式相反。Ghsr-1a在体内受精和体外受精胚胎中的表达相似,囊胚期表达量最低。结果提示,Ghrelin能够抑制体内和体外受精胚的体外发育,不同来源胚胎Ghsr-1a mRNA和蛋白表达模式均不相同。研究结果为进一步探索Ghrelin在胚胎发育中的作用机制提供了试验基础。

生长素对猪孤雌激活胚胎体外发育的影响及其受体基因的表达模式

为探明生长素及其受体GHSR-1a在胚胎早期发育中的作用,以猪孤雌激活胚胎为研究对象,在其体外发育过程中添加不同浓度生长素,观察胚胎发育速度和发育效率,并用荧光定量PCR检测猪孤雌激活胚胎早期发育过程中生长素特异性受体基因GHSR-1a的表达。结果显示,相对于对照组,添加10.0 mg/L生长素可以显著提高4-细胞胚胎、8-细胞胚胎、桑葚胚的发育率(P<0.05),并能加快4-细胞胚胎、8-细胞胚胎、桑葚胚的发育速度(P<0.05)。GHSR-1a mRNA在2-细胞期到桑葚胚期保持较高表达水平,囊胚期后显著下降(P<0.05);免疫荧光染色表明GHSR-1a在猪孤雌激活胚胎各发育时期均有表达,4-细胞期、8-细胞期和桑葚胚期的表达量显著高于囊胚期(P<0.05)。推测生长素通过提高GHSR-1a的表达来提高猪孤雌激活胚胎的发育速度和效率。

香砂六君子汤对脾胃虚弱型功能性消化不良模型大鼠胃窦组织mTOR/ghrelin/GHSR-1a通路的影响

目的探讨香砂六君子汤对脾胃虚弱型功能性消化不良(FD)模型大鼠胃排空的影响及可能作用机制。方法60只SD大鼠的乳鼠随机分为空白组、模型组、莫沙必利组和香砂六君子汤低、中、高剂量组,每组10只。除空白组外,其余各组大鼠采用碘乙酰胺联合蔗糖溶液灌胃+隔日给食+游泳力竭复制脾胃虚弱型FD大鼠模型。造模成功后香砂六君子汤高、中、低剂量组分别给予香砂六君子汤12、6、3 g/(kg·d)灌胃;莫沙必利组给予枸橼酸莫沙必利片1.35 mg/(kg·d)灌胃;空白组和模型组大鼠给予生理盐水10 ml/(kg·d)灌胃。连续干预2周后,测定各组大鼠体质量、胃排空率和肠推进率,HE染色观察各组大鼠胃组织病理学改变,检测大鼠胃窦组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、胃生长激素释放激素(ghrelin)、生长激素促分泌素受体1a(GHSR-1a)、c-kit蛋白表达和血浆酰基化胃生长激素释放激素(Acly-ghrelin)水平。结果与空白组比较,模型组大鼠体质量、胃排空率、肠推进率降低,胃窦组织中ghrelin、GHSR-1a、c-kit蛋白表达和血浆Acly-ghrelin水平均降低,mTOR蛋白表达升高(P<0.05)。与模型组比较,香砂六君子汤中、高剂量组和莫沙必利组大鼠体质量、胃排空率、肠推进率升高,胃窦组织中ghrelin、GHSR-1a、c-kit蛋白表达及血浆Acly-ghrelin水平均升高,mTOR蛋白表达降低(P<0.05)。与莫沙必利组比较,香砂六君子汤高剂量组大鼠胃窦组织中ghrelin蛋白表达升高,mTOR蛋白表达降低(P<0.05)。HE染色结果显示,各组大鼠胃组织病理形态学正常,腺体无萎缩,无炎性细胞浸润。结论香砂六君子汤中、高剂量能够显著促进脾胃虚弱型FD大鼠胃排空,其作用机制可能与香砂六君子汤可正向调控mTOR/ghrelin/GHSR-1a信号通路相关。