GIRK4基因在肥胖大鼠肾脏组织的表达

目的研究GIRK4基因在正常与肥胖大鼠肾脏组织表达水平的差异。方法采用饮食诱导的方法构建肥胖大鼠模型,Western blot技术对正常组与肥胖组大鼠肾脏组织GIRK4蛋白表达进行定量分析。结果肥胖组大鼠肾脏组织GIRK4蛋白相对表达量为1.75±0.42,明显低于正常组大鼠的3.37±0.68(P<0.05)。结论肥胖大鼠肾脏组织GIRK4蛋白表达降低。

GIRK4在肥胖大鼠模型心肺组织中的表达研究

目的研究饮食诱导肥胖大鼠G-蛋白偶联(门控)内向整流钾离子通(GIRK4)基因在心肺组织中的表达,探讨GIRK4与肥胖的相关性。方法 30只SD大鼠,雌雄各半,10对照组(n=10),予以普通饲料饲喂作为,实验组(n=20),以高脂肪高热量饮食饲喂8周,建立肥胖大鼠模型,肥胖大鼠体重超过正常饮食饲喂大鼠20%以上为成功模型,处死大鼠,提取两组大鼠的心肺组织,分别提取心肺的总蛋白,应用Western blot检测技术,检测GIRK4蛋白表达,Quantity One软件处理实验结果。结果①15只大鼠进入肥胖组(体重大于正常对照组20%);②肥胖组血清总胆固醇及甘油三酯水平高于对照组(P<0.05),高脂高糖饮饲喂建立大鼠模型,肥胖大鼠心、肺中表达GIRK4蛋白较正常饲喂大鼠低,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论GIRK4在大鼠心、肺均有表达,可能与肥胖时心律失常及肺损伤相关。

蛋白质印迹法检测GIRK4在SD大鼠肾脏组织的表达

目的探讨GIRK4基因在健康SD大鼠肾脏组织的表达水平。方法采用蛋白质印迹法(Western-blot-ting)对健康SD大鼠肾脏组织GIRK4蛋白表达进行定量分析。结果 GIRK4基因蛋白在健康SD大鼠肾脏组织相对表达量为3.37±0.68。结论从蛋白质水平对GIRK4基因在健康SD大鼠肾脏组织表达的定量研究,将为探索GIRK4基因与肾脏生理功能及其相关临床疾病的关系奠定基础。

GIRK4错义突变与新疆和田地区维吾尔族人群代谢综合征相关性研究

目的新疆维吾尔族人群代谢综合征(MetS)罹患率高,本研究在前期基础上探讨G-蛋白偶联内向整流钾通道4(GIRK4)基因低频率错义突变610G>A(Met210Ile)在和田维吾尔族人群的发生率及分布特点,明确该错义突变是否与维吾尔族代谢综合征有关。方法应用Taq Man-PCR技术在新疆和田维吾尔族自然人群中对外显子2区630G>A,Met210Ile错义突变进行基因分型。结果该位点仅有GG和GA两种基因型;最小等位基因频率<0.005(为0.0028);发生突变的7例个体均为腹型肥胖患者。对突变序列保守性分析显示,该位点中度保守。结论 GIRK4基因630G>A(Met210Ile)错义突变可能与新疆维吾尔族人代谢综合征不相关性,但可能与超重与腹型肥胖有关。因其发生频率低,有待于进一步行功能试验验证。

肥胖大鼠模型脑组织中GIRK4的表达研究

目的研究饮食诱导肥胖大鼠G-蛋白偶联(门控)内向整流钾离子通道(GIRK4)基因在脑组织中的表达,探讨GIRK4与肥胖的相关性。方法 30只SD大鼠,雌雄各半,对照组(n=10)予以普通饲料饲喂作为,实验组(n=20)以高脂肪高热量饮食饲喂8周,建立肥胖大鼠模型,肥胖大鼠体重超过正常饮食饲喂大鼠20%以上为成功模型,处死大鼠,提取两组大鼠的脑组织,提取脑组织中的总蛋白,应用Western blot法检测GIRK4蛋白表达,Quantity One软件处理实验结果。结果 (1)15只大鼠进入肥胖组(体重大于正常对照组20%)。(2)肥胖组血清总胆固醇及甘油三酯水平高于对照组(P<0.05),高脂高糖饮饲喂建立大鼠模型,肥胖大鼠脑中表达GIRK4蛋白较正常饲喂大鼠低,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GIRK4在肥胖大鼠脑组织中表达水平降低,且在肥胖大鼠中表达,可能与饮食诱导肥胖的发生相关。

FLAG标记的GIRK4通道的构建、表达及其对GIRK4功能的影响

目的在GIRK4通道蛋白中加入FLAG标记短肽,并检测通道功能是否受到影响。方法运用聚合酶链式反应(PCR)技术合成带有FLAG标记的GIRK4通道片段,并将该片段插入至载体pGEMHE质粒DNA中。使用免疫印迹检测FLAG短肽是否与GIRK4通道蛋白融合,并使用双电极电压钳(two-microelectrodevoltageclamp,TEVC)检测通道的表达情况。结果经测序鉴定,确认成功构建了重组质粒DNA即FLAG-GIRK4-pGEMHE,使用双电极电压钳检测有通道电流。结论通过PCR技术成功构建重组质粒DNA,即FLAG-GIRK4-pGEMHE,且FLAG标记蛋白已稳定表达并且未影响GIRK4通道蛋白的功能,为今后研究GIRK4通道蛋白功能提供了简便途径。

GIRK4基因多态性与新疆南疆地区维吾尔族原发性高血压的关联研究

目的研究GIRK4基因多态性与新疆南疆地区维吾尔族人群原发性高血压的相关性。方法采取病例一对照研究方法，筛选1194名体重指数（body mass index，BMI）〉18．5kg／m。的人群，按高血压诊断标准，将收缩压≥140mmHg和（或）舒张压≥90mmHg作为高血压组（482例），收缩压≤140mmHg和（或）舒张压≤90mmHg作为正常组（712人），其中男性461人，女性733人。提取两组血样的基因组DNA，PCR扩增GIRK4基因并测序。结果通过对GIRK4基因测序，在上述人群中发现171C／T（rs6590357）、5126A／G（rs4937391）、6262A／C（rs2604204）、-20559C／G（rs11221497）等4个多态位点，其基因型分布均符合Hard—Weinberg平衡（P〉0．05）。连锁不平衡分析显示，rs11221497位点与rs4937391、rs2604204、rs6590357位点之间位点存在连锁不平衡（D’〈0．001），后3个位点之间连锁平衡（D’〉0．9）；rs6590357、rs4937391、rs2604204等3个位点的基因型在高血压组和对照组间的频率分布差异无统计学意义（P〉0．05）；rs11221497位点CC基因型平均收缩压[（132．69±26．9）mmHg）]高于CG基因型[（127．4±22．7）mmHg]及GG基因型[（121．1±26．3）mmHg]；CC基因型舒张压[（79．4±15．6）mmHg]也高于CG基因型[（77．1±14．1）mmHg]和GG基因型[（72．9±14．8）mmHg]，其中CC型与GG型间平均收缩压及舒张压差异有统计学意义（P〈0．05）；基因频率分析显性模型显示rs11221497位点CC基因型在高血压组分布频率高于正常组，两组间比较差异有统计学意义[P〈0．05，OR-0．67（0．49～0．93）]；Logistic回归分析显示，在校正吸烟、年龄、BMI后，rs11221497位点与新疆维吾尔族肥胖人群高血压相关。单倍型分析发现,H6单倍型（C—G-C-G）在正常组中分布明显高于高血压组，差异有统计学意义（P〈0．05），是其保护性因子。结论GIRK4基因rs11221497位点可能和新疆维吾尔族肥胖人群高血压相关，等位基因G可能是其保护因素。

GIRK4基因多态性与新疆维吾尔族人胰岛素抵抗的相关性研究

目的探讨G蛋白偶联内向整流钾通道（G-protein-activated inwardly rectifyingK’channel，GIRK4）基因多态性与新疆维吾尔族人胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）的相关性。方法采取横断面流行病学调查为基础的病例一对照研究，随机选取1295位（324例IR患者和971名对照）新疆维吾尔族研究对象，随机抽取其中48例IR患者测序筛查维吾尔族人GIRK4基因功能区的变异位点，然后选取代表性的变异位点，在1295名研究对象中基因分型并进行关联分析研究。结果年龄≤50岁维吾尔族人群中，rs11221497位点变异与IR相关（基因型模型P=0．017，显性模型中P=0．009），Logistic分析校正混杂因素（年龄、性别、吸烟、饮酒）后，显性模型CC基因型携带者患IR的0R值为1．833（95％CI：1．157～2．905）。结论GIRK4基因多态性可能与新疆维吾尔族人IR相关；rs11221497位点CC基因型是IR的危险因素。

GIRK4在肥胖大鼠脂肪组织中的表达

目的研究饮食诱导肥胖大鼠G蛋白耦联（门控）内向整流钾离子通道（GIRK4）基因在脂肪组织中的表达，探讨其与肥胖的相关性。方法30只Sprague—Dawley大鼠随机分为两组：对照组（n=10），予以普通饲料饲喂；肥胖组（n=20），予以高脂肪、高热量饮食饲喂。8周后处死大鼠，提取两组的白色脂肪组织和棕色脂肪组织，应用Western印迹技术检测GIRK4蛋白表达。并测定两组大鼠血糖、甘油三酯、血清总胆固醇水平。结果（1）共15只大鼠人组肥胖组（体重大于对照组大鼠平均体重20％）。（2）肥胖组血清总胆固醇及甘油三酯水平高于对照组（P〈0．05），但血糖在两组问差异没有统计学意义（P〉0．05）。（3）GIRK4在两组大鼠白色脂肪及棕色脂肪组织中均有表达，肥胖组的表达水平低于对照组（P〈0．05）。结论GIRK4可能肥胖的发生、发展中发挥一定作用。

KCNJ5基因多态性与原发性醛固酮增多症的关联性研究

目的 探索KCNJ5基因rs11221497位点多态性与原发性醛固酮增多症之间的相关性。方法 选取原发性醛固酮增多症患者248例,原发性高血压患者816例,采用TaqMan荧光探针法对rs11221497进行基因分型。结果 2组患者基因型均符合Hardy-Weinberg平衡;GG、GC、CC基因型在原发性醛固酮增多症组中分别为208、39、1例,在原发性高血压组分别为631、177、8例,G、C等位基因在原发性醛固酮增多症组分别为455、41,在原发性高血压组分别为1439、193;原发性醛固酮增多症组的GG基因型及G等位基因频率明显高于原发性高血压组（P〈0.05）;Logistic回归显示,矫正了年龄的影响后,GG基因型同原发性醛固酮增多症密切相关。结论 GG基因型及G等位基因可能是原发性醛固酮增多症的易感因素。