蛇葡萄素对人肺癌GLC-82裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 :为了进一步研究蛇葡萄素体内抗肿瘤作用 ,我们进行了人肺癌GLC 82裸小鼠移植瘤的抑瘤实验研究。方法 :人肺癌GLC 82细胞接种于裸鼠腋窝建立移植模型。荷瘤BALB/C裸鼠随机分成 6组 ,蛇葡萄素以 3个剂量腹腔给药。观察肿瘤体积、相对肿瘤体积、瘤重、相对肿瘤增殖率以及肿瘤生长曲线 ,以此评价蛇葡萄素的抗瘤作用。结果 :2 5 0mg/kg蛇葡萄素对裸鼠移植瘤的抑制率 ,二次实验结果分别为 35 5 % (P <0 0 1)和 37 1% (P<0 0 1) ,相对肿瘤增殖率则分别为 5 5 2 4 % (P <0 0 1)和 5 7 71% (P <0 0 5 )。结论 :蛇葡萄素对人肺癌GLC 82裸鼠移植瘤具有显著的抑制作用。

三氧化二砷(As_2O_3)诱导人肺腺癌GLC-82细胞凋亡及分子机制的研究

目的： 探讨Ａｓ２ Ｏ３ 对人肺腺癌ＧＬＣ８２ 细胞系抑制生长、诱导凋亡的生物学效应及作用机制。方法：通过ＭＴＴ 还原法检测Ａｓ２ Ｏ３ 对该细胞系生长的影响；用光学显微镜、流式细胞仪、ＤＮＡ 凝胶电泳和细胞凋亡原位检测（ＴＵＮＥＬ） 研究Ａｓ２Ｏ３ 诱导细胞凋亡的情况；用ＲＴＰＣＲ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 或Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 分析Ａｓ２ Ｏ３ 对ｃｍｙｃ、ｐ５３、ｐ１６ 和ｂｃｌＸ 等基因表达的影响。结果：Ａｓ２ Ｏ３ 能抑制ＧＬＣ８２ 细胞的生长。Ａｓ２ Ｏ３ 处理ＧＬＣ８２ 细胞后，光学显微镜下可见到明显的凋亡细胞，细胞周期的Ｇ１ 期前有低于２ 倍体的凋亡峰，ＤＮＡ 凝胶电泳显示出典型的凋亡特征：ＤＮＡ 有规律断裂形成的梯状图谱，蛋白水平的检测表明Ａｓ２ Ｏ３ 可使细胞ｃｍｙｃ 基因表达下降，ｐ１６ 和ｐ５３ 表达升高。结论：Ａｓ２ Ｏ３ 能显著抑制ＧＬＣ８２ 细胞生长、诱导细胞凋亡，并主要通过调节ｃｍｙｃ，ｐ１６ 和ｐ５３ 等基因的表达来实现。

当归挥发油对人肺腺癌GLC-82细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨当归挥发油对人肺腺癌GLC-82细胞增殖及凋亡的作用。方法:MTT比色法检测当归挥发油对GLC-82细胞的细胞毒作用;流式细胞术检测GLC-82细胞凋亡;吖啶橙/溴化乙锭(AO/BE)双荧光染色法观察GLC-82细胞凋亡。结果:当归挥发油在浓度6.25~200μg/m L范围内对GLC-82细胞的增殖具有浓度依赖性抑制作用,对GLC-82细胞的IC_(50)为113.03μg/m L。流式细胞术检测结果表明,当归挥发油可诱导GLC-82细胞凋亡、坏死,且细胞凋亡、坏死率随药物浓度增高而升高。AO/BE双荧光染色法结果显示,用药组随着药物浓度的升高,细胞结构固缩加重,凋亡、坏死细胞增多。结论:当归挥发油具有诱导GLC-82细胞凋亡的作用。

蛇葡萄素钠联合卡铂对人肺腺癌GLC-82细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨蛇葡萄素钠(AMP-Na)单用及其与卡铂(CBP)合用对人肺腺癌GLC-82细胞增殖的抑制作用及可能的机制。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定两药单用及合用对GLC-82细胞的体外杀伤活性;透射电子显微镜(TEM)观察GLC-82细胞超微结构的变化;流式细胞仪(FCM)检测GLC-82细胞凋亡和caspase-3的表达。结果对于GLC-82细胞,AMP-Na与CBP合用,CBP的IC50由(17.10±4.78)mg·L-1降低到<3.12 mg·L-1(P<0.01),表明Amp-Na对卡铂抑制GLC-82细胞增殖的作用具有协同效应(CDI<1)。TEM及FCM检测结果表明,单用AMP-Na及与卡铂合用均可诱导GLC-82细胞凋亡、坏死,两药合用后坏死率由(2.56±0.41)%升高到(71.83±5.43)%(P<0.01)。AMP-Na单用及与卡铂合用作用于GLC-82细胞48 h后,caspase-3的表达均明显增高。结论AMP-Na和CBP具有协同诱导GLC-82细胞凋亡的作用,机制可能与激活细胞内caspase-3介导的信号转导通路相关。

Brefeldin A通过内质网应激途径协同增强顺铂抗肺癌细胞GLC-82作用

已有研究证明,内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)启动的未折叠蛋白质反应(unfolded protein response,UPR)信号途径有助细胞存活;然而,长时间剧烈ERS可诱导细胞凋亡,因此,ERS是肿瘤治疗的新靶点。抗癌药物具有严重的毒副作用,而药物的协同作用是减少抗癌药物使用剂量、减少毒副作用的重要手段之一。本研究证明布雷菲德菌素A(brefeldin A,BFA)与顺铂(cis-dichlorodiamine platinum,CDDP)的协同抗肺癌细胞的作用。MTT试验显示,单独应用BFA和顺铂时,它们抑制肺癌细胞GLC-82生长的半数有效浓度(IC50)分别是100 ng/m L和4μg/m L;而采用半量的BFA和CDDP联合处理GLC-82细胞24 h后,其抑制生长作用进一步加强;等效线图解法及联合作用指数分析进一步证明二者具有协同作用。两药的这种协同作用进一步被形态学检查证明——与单独用药比较,除了细胞皱缩,出现了更多的染色质固缩,细胞质及细胞核裂解碎片,乃至形成凋亡小体,提示细胞凋亡的发生。实时定量PCR及蛋白质印迹证明,与单独用药比较,联合用药导致内质网应激标志分子GRP78、CHOP表达水平明显增加,提示有内质网应激通路激活。上述结果证明,BFA与CDDP联合用药可增强对肺癌细胞GLC-82的生长抑制作用,其协同机制可能与内质网应激通路的激活有关。我们的结果支持"ERS是肿瘤治疗新靶点"学说,对肺癌的新化疗方案有一定的指导意义。

悬浮培养GLC-82肺肿瘤细胞积聚体与蛋白激酶FAK、AKT、ERK和SRC活化的关系

背景与目的:蛋白激酶FAK部分介导肿瘤细胞在悬浮培养下细胞积聚体的形成,从而阻止细胞发生凋亡和促进细胞增殖,但是参与细胞积聚体形成的FAK下游通路尚不清楚。本研究旨在研究蛋白激酶FAK及其可能的下游分子ERK、AKT和SRC活化在悬浮状态肺癌GLC-82细胞积聚中的作用。方法:用polyHEMA悬浮培养观察肺正常细胞HBE和肿瘤细胞GLC-82积聚体形态;细胞凋亡用DNA琼脂糖凝胶电泳检测梯状DNA分析;细胞转化能力用软琼脂糖集落形成实验分析;磷酸化蛋白激酶水平用免疫印迹实验检测;RNA干扰实验降低FAK蛋白水平的表达。结果:GLC-82肺腺癌细胞在polyHEMA悬浮状态下能够存活和形成积聚体,肺正常细胞HBE在polyHEMA悬浮状态下发生凋亡和不形成积聚体。磷酸化FAK、ERK、AKT和SRC的水平和GLC-82积聚体有关。沉默FAK蛋白的表达,能够部分地阻断肿瘤细胞积聚体的形成,降低磷酸化ERK和AKT水平,以及降低软琼脂集落形成能力。FAKRNA干扰前后的GLC-82细胞软琼脂集落形成率分别为(12.2±1.1)%和(3.6±0.7)%(P=0.001)。结论:GLC-82肺癌细胞积聚体的形成部分由FAK信号通路介导,ERK和AKT是FAK的下游通路蛋白。

小檗碱对人肺癌GLC-82细胞凋亡的影响

目的探讨生物碱类中药成分小檗碱(berber-ine)诱导人肺癌GLC-82细胞的凋亡作用。方法采用细胞培养技术,用不同浓度的小檗碱处理GLC-82细胞48h,用Hoechst33258染细胞核,在荧光显微镜下观察凋亡细胞核的形态变化,用QWin图象分析软件测量细胞核面积,计算凋亡率。采用MTT法测定细胞的增殖能力。小檗碱作用GLC-82细胞36h后,采用荧光免疫细胞化学SABC-Cy3法测定Caspase-3和PARP蛋白表达,在荧光显微镜下拍照,用QWin图象分析软件测定Caspase-3和PARP荧光强度值。结果小檗碱剂量依赖性的抑制GLC-82细胞增殖,半数生长抑制剂量IC50为19.9mg·L-1,上调凋亡促进因子Caspase-3,PARP蛋白表达增加,使GLC-82细胞呈现典型的凋亡形态学特征,胞核缩小,核质浓集,呈斑块状,有凋亡小体。结论小檗碱通过上调Caspase-3诱导人肺癌GLC-82细胞凋亡。

抑癌基因p53与癌基因mdm2在肺腺癌细胞系GLC-82中的相互作用

目的：探讨抑癌基因ｐ５３和癌基因ｍｄｍ２在肺腺癌细胞系ＧＬＣ８２中的相互关系和作用．方法：采用脂质体Ｌｉｐｏｆｅｔｉｎ介导的ＤＮＡ转染法，用含有野生型ｐ５３基因和ｍｄｍ２基因的ＰＤＯＲｎｅｏ逆转录病毒载体分别或共转染ＧＬＣ－８２细胞．结果：转染野生型ｐ５３基因可阻止ＧＬＣ８２细胞生长；抑制ＧＬＣ８２细胞ＤＮＡ合成；软琼脂培养集落形成率减少及裸小鼠成瘤性减慢，而ｍｄｍ２基因的转染可拮抗野生型ｐ５３的功能．结论：将ｍｄｍ２表达载体转染含有野生型ｐ５３基因的ＧＬＣ８２细胞后，ｍｄｍ２可部分地解除野生型ｐ５３对ＧＬＣ８２细胞生长的抑制作用．

高能电磁脉冲诱导肺癌细胞株GLC-82凋亡的研究

背景与目的:电磁脉冲(electromagneticpulse,EMP)辐射已用于饮食行业的灭菌,且较2450MHz连续微波辐射消毒更加有效。本研究探讨高能电磁脉冲对肺癌细胞GLC-82凋亡的影响,以发现治疗肿瘤的新手段。方法:以场强为6×104V/m的EMP2min内辐照5次,然后采用细胞计数、MTT、流式细胞术及SP免疫组化法检测bcl-2和p53蛋白的表达,并对表达强度用CMIAS-Ⅱ图像分析仪在放大400倍条件下进行分析,通过上述方法观察EMP对肺癌细胞GLC-82的损伤作用,所有数据经SPSS8.0软件进行分析。结果:EMP可明显抑制肺癌细胞GLC-82的增殖与活力。照射后细胞的MTT光吸收值(A570)与对照组相比,在辐照后0h,1h和6h明显降低。流式细胞术证明,GLC-82细胞在辐照后6h发生明显的凋亡,凋亡率达13.38%。免疫组化的图像分析表明,照射后GLC-82细胞有不同程度的bcl-2蛋白表达的下调及p53蛋白表达的上调。结论:EMP可诱导肺癌细胞GLC-82的凋亡。bcl-2及p53蛋白参与了GLC-82细胞的凋亡过程。

RAB5A基因表达改变对人肺腺癌细胞系GLC-82和SPC-a1的分化和侵袭特性影响

为探讨RAB5A基因对两种人肺腺癌细胞系GLC 82和SPC al分化及侵袭特性的影响 ,利用细胞转染技术将构建的RAB5A反义RNA重组质粒 (pcDNA3 AntiRAB5A)和RAB5A正义真核表达载体分别转染入低分化人肺腺癌细胞系GLC 82和低转移人肺腺癌细胞系SPC al中 ,在稳定筛选后 ,通过裸鼠体内实验和体外人工基底膜侵袭和细胞趋化运动实验 ,观察转染后细胞分化和转移特性的改变。观察转染前后细胞 ,发现转染后GLC 82细胞体外侵袭重组基底膜能力及趋化运动能力降低 (t检验P <0 .0 2 ) ;裸鼠体内成瘤实验 ,瘤块切片病理观察转染后GLC 82细胞出现腺腔样及基底模样结构 ,分化程度增高。转染后SPC al细胞体外趋化运动能力、侵袭重组基底膜能力均增强 (t检验P <0 .0 2 )。RAB5A基因通过影响细胞的体外趋化运动能力、侵袭重组基底膜能力等对GLC 82和SPC al细胞的侵袭转移表型形成及GLC 82细胞的分化性发挥重要作用。

非聚焦超声对溶液中GLC-82肺腺癌细胞损伤的实验研究

目的:探讨不同功率及不同作用时间的非聚焦超声(none focused ultrasound,NFU)对溶液中肺癌细胞的作用,为杀灭弥漫在胸水及腹水中或浸润在组织中的癌细胞提供实验依据。方法:台盼蓝拒染法测NFU辐照GLC-82肺腺癌细胞后细胞的即刻存活率,MTT法检测其作用后24 h细胞的增殖率,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果:(1)GLC-82细胞的即刻存活率随着辐照功率和作用时间的不断增加明显下降;(2)超声辐照24 h后,随着超声辐照时间和剂量的不断增加,细胞的增殖率明显下降,时间-效应各组之间、剂量-效应各组之间细胞的增殖率差异均有显著性(P<0.05);(3)超声辐照细胞的凋亡率均高于阴性对照,但其周期即刻未发生明显变化。结论:NFU能杀伤溶液中GLC-82肺癌细胞并抑制其增殖,较低功率的超声可能以诱导细胞凋亡为主,较高功率时则可能以杀伤细胞为主。超声对细胞周期的影响为迟发性效应。

氧代克斑宁对人肿瘤细胞GLC-82、HL60增殖的影响

目的:探讨氧代克斑宁抗肿瘤作用。方法:以MTT法观察氧代克斑宁在不同浓度下对人肿瘤GLC-82、HL60细胞增殖的影响。结果:氧代克斑宁在100μM浓度时对肺腺癌GLC-82细胞株具有明显抑制作用,而对人白血病HL60细胞株在1μM浓度时即显示极强的抑制作用。氧代克斑宁对GLC-82,HL60的IC50分别为109.17、86.61μM。结论:氧代克斑宁可抑制人肿瘤细胞株GLC-82、HL60增殖。

烟酰胺对GLC-82人肺腺癌细胞的体外作用

目的研究不同浓度的烟酰胺对体外培养的GLC-82肺腺癌细胞的作用。方法荧光显微镜观察细胞形态的变化;MTT法检测不同浓度烟酰胺培养细胞后细胞的存活率;划痕试验检测不同浓度的烟酰胺对细胞愈合力的影响;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果烟酰胺诱导细胞凋亡程度与用药剂量呈正相关,较高剂量的药物能引起GLC-82肺腺癌细胞呈现边界不清,体积缩小,核固缩,染色质凝集、边缘化,甚至细胞发生破碎,凋亡小体形成;随着烟酰胺浓度的增高GLC-82细胞向划痕区的愈合速度不断减慢;烟酰胺的浓度大于等于3mg/ml时,细胞周期主要表现为G1期比例的上升伴随S期比例的下降。结论高剂量烟酰胺能够诱导GLC-82细胞凋亡及周期的改变,为临床上用药剂量提供一定的依据。

槲皮素诱导人肺癌GLC-82细胞凋亡及机制

目的:探讨黄酮类中药成分槲皮素(Quercetin)对人肺癌GLC-82细胞生长抑制和凋亡的影响。方法:采用细胞培养技术,用不同浓度的槲皮素作用GLC-82细胞48 h,用Hoechst33258染细胞核,在荧光显微镜下观察凋亡细胞核形态变化,用Qwin图像分析软件测量细胞核面积和凋亡率。采用MTT法测定细胞的生长能力。采用荧光免疫细胞化学SABC-Cy3法检测Mdm2、p53、Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白表达,用QWin图象分析软件测定Mdm2、p53、Bax、Bcl-2和caspase-3荧光强度值。结果:槲皮素剂量依赖性的抑制GLC-82细胞生长,呈现典型的凋亡形态学特征,胞核缩小,核质浓集,呈斑块状,有凋亡小体。上调凋亡抑制因子Mdm2和Bcl-2 蛋白表达,下调凋亡促进因子Bax和Caspase-3的蛋白表达,对p53蛋白表达量没有明显影响。增加Mdm2、p53、 Bax、Bcl-2的阳性表达率,降低caspase-3阳性表达率。结论:槲皮素能够抑制肺癌GLC-82细胞生长并诱导细胞凋亡,而Mdm2的蛋白表达增加,可能抑制了p53发挥促凋亡作用,使部分GLC-82肺癌细胞逃避死亡。

当归挥发油对人肺腺癌GLC-82细胞增殖及细胞周期的影响

目的:探讨当归挥发油对人肺腺癌GLC-82细胞增殖及细胞周期的作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测当归挥发油对GLC-82细胞存活率的影响;倒置显微镜下观察细胞生长形态;流式细胞仪检测当归挥发油对GLC-82细胞周期的影响。结果:在6. 25～200μg/m L浓度范围内当归挥发油对GLC-82细胞增殖具有浓度依赖性抑制作用,当归挥发油对GLC-82细胞的I C50为113. 03μg/mL;倒置显微镜下观察发现阴性组细胞具有GLC-82细胞典型的形态特征,多边形,成片生长,随着当归挥发油浓度的升高,细胞数量减少,散在生长,形态发生变化,逐渐皱缩;经当归挥发油处理后GLC-82细胞表现出明显的G2期周期阻滞。结论:当归挥发油可抑制GLC-82细胞生长,引起细胞周期G2期的阻滞。

二氧化硒对GLC-82肺癌细胞株C-FOS蛋白表达的影响

目的:本研究通过观察不同浓度的二氧化硒(SeO2)对GLC-82肺癌细胞株C-FOS蛋白表达的影响,初步探讨SeO2致肺癌细胞损伤的机制。方法:把GLC-82细胞分别接种于3个6孔板中,同时在每个孔中放置4片盖玻片后;于37℃、5% C02下培养爬片24h,分别加SeO2,使每个板5个孔SeO2的浓度分别为3,10,30礛,而每板保留1个孔作为空白对照。分别在1h、6h、12h和24h捞片。100%丙酮固定后,进行SP法的C-FOS蛋白免疫组化染色。在光镜10×40倍视野下,应用CMIAS-H图像分析仪对阳性细胞的图像学参数进行分析,最后结果经Spss8.0统计软件统计分析。 结果:Se02在早期(1h)即可引起 C-FOS蛋白表达增强,随后逐渐增强,在6～12h时GLC-82细胞C-FOS均呈明显的高表达(P<0.05和P<O.01),随后降低,其表达时相、强度与SeO2剂量有关。结论:SeO2可引起GLC-82细胞C-FOS蛋白的高表达,提示C-FOS可能参与Se02致肺癌细胞损伤过程,且具有一定的时相、剂量效应关系。

外源性野生型p53基因对人肺腺癌细胞系GLC-82的生物学效应

目的：研究外源性野生型ｐ５３基因对人肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２的生物学作用。方法：将含有野生型ｐ５３基因的ｐＤＯＲ－ｎｅｏ逆转录病毒载体，通过ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染ＧＬＣ－８２细胞，用流式细胞仪、电镜及３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，观察野生型ｐ５３基因对ＧＬＣ－８２细胞的生物学效应。结果：电镜观察可见，转染野生型ｐ５３基因，可使ＧＬＣ－８２细胞出现一些病理现象，如胞浆中有明显的空泡及线粒体肿胀；流式细胞仪分析显示，野生型ｐ５３基因可阻止ＧＬＣ－８２细胞周期停止于Ｇ１～Ｓ区；３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验提示，野生型ｐ５３基因能够抑制ＧＬＣ－８２细胞ＤＮＡ的合成。结论：这些结果阐明了野生型ｐ５３基因是抑制ＧＬＣ－８２细胞生长的部分机理。

O-甲基芒籽碱对人肿瘤GLC-82、HL60细胞抑制的影响

目的观察O-甲基芒籽碱抗肿瘤的效果。方法以MTT法观察不同浓度O-甲基芒籽碱对人肿瘤GLC-82、HL60细胞抑制的影响。结果10、100和1 000μmol/L O-甲基芒籽碱能抑制GLC-82细胞的增殖,其D值与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);0.1、1、10、100和1 000μmol/L O-甲基芒籽碱能抑制HL60细胞的增殖,其D值与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或0.01)。O-甲基芒籽碱对GLC-82,HL60的半数抑制浓度分别为83.31、65.59μmol/L。结论O-甲基芒籽碱可抑制人肿瘤GLC-82、HL60细胞的增殖,具有一定的抑瘤作用。

琼玉膏加强顺氨氯铂对肺腺癌细胞株GLC-82的体外抑制作用

目的:观察琼玉膏对顺氨氯铂抑制肺腺癌细胞株GLC-82增殖的影响。方法:使用血清药理学分别观察空白对照组(生理盐水)、化疗组(顺氨氯铂)及联合组(顺氨氯铂加琼玉膏)细胞形态学的变化;使用活细胞计数方法记录各组癌细胞6日的生长情况并绘制其生长曲线;使用流式细胞等方法分析各组癌细胞株GLC-82的凋亡情况。结果:对照组癌细胞生长良好,化疗组癌细胞数基本不增长,联合组活癌细胞数则下降。流式细胞仪的分析结果表明,琼玉膏可明显加强化疗药物顺氨氯铂(DDP)诱发癌细胞的凋亡。结论:琼玉膏有加强化疗抑制癌细胞分裂及诱发癌细胞凋亡的作用。

ndr2基因在肺腺癌细胞GLC-82中的诱导表达

目的 构建蜕皮素诱导的抑癌基因 ndr2哺乳动物真核表达载体 (p IND- ndr2 ) ,转染肺腺癌细胞 GL C- 82 ,观察ndr2基因表达 ,为进一步研究 ndr2的生物学功能打下基础 .方法 以 RT- PCR方法确定正常人肺组织和肺腺癌 GL C- 82细胞 ndr2的表达高低 . PCR方法扩增 ndr2 ,以 Bam HI+Eco RI双酶切连接入 p U C19载体中 ,测序正确后 ,插入到蜕皮素诱导的真核表达载体 p IND中 .连有 ndr2基因的载体(p IND- ndr2 )用脂质体方法转染到培养的肺腺癌细胞 GL C-82中 .经 G4 18和 zeocin双抗生素筛选后 ,挑取单克隆进行培养 ,用蜕皮素诱导 ndr2表达 ,用 RT- PCR,western印迹和免疫组织化学方法验证获得表达的细胞株 .结果 PCR的方法扩增获得大小约 12 0 0 bp的片段 ,连接入预先插入 HA- tag的 p UC19载体的 ndr2基因经 H ind +Eco RI酶切后 ,构建到真核表达载体 p IND中 ,酶切鉴定后证明连接片段正确 .通过双载体转染和双抗生素筛选后 ,培养的细胞经诱导后检测到实验组 ndr2的高表达 ,而对照组和未诱导的实验组 ndr2表达均较低 .结论 ndr2基因成功转染培养的肺腺癌 GL C-82细胞 ,建立了