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PAS-ELISA检测GFLV和GLRaV-3技术的研究 被引量:1
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作者 陈建军 曹香林 +3 位作者 杨清香 李学梅 刘崇怀 古勤生 《河南师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期129-133,共5页
以中国农业科学院郑州果树研究所国家葡萄资源圃的葡萄品种为试材,对葡萄扇叶病毒(GFLV)和葡萄卷叶相关病毒Ⅲ(GLRaV-3)进行了A蛋白酶联免疫吸附测定(PAS-ELISA)的检测技术的研究.从阴、阳性对照及抗血清或抗体浓度的选择,到不同时期、... 以中国农业科学院郑州果树研究所国家葡萄资源圃的葡萄品种为试材,对葡萄扇叶病毒(GFLV)和葡萄卷叶相关病毒Ⅲ(GLRaV-3)进行了A蛋白酶联免疫吸附测定(PAS-ELISA)的检测技术的研究.从阴、阳性对照及抗血清或抗体浓度的选择,到不同时期、检测部位对结果的影响,建立了一套完整的ELISA检测GFLV和GLRaV-3程序;通过实验分析,该方法快速,简便,经济且灵敏度高,不失为葡萄病毒检测的一种新方法.通过检测,还了解到了GFLV的发病高峰在春季,主要发病部位在上部叶片,而GLRaV-3的发病高峰在秋季,重要发病部位在下部叶片.为葡萄病毒的综合防治打下良好的基础. 展开更多
关键词 病毒 检测 灵敏度 GFLV glrav-3
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PAS-ELISA检测GFLV和GLRaV-3技术的研究 被引量:1
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作者 陈建军 曹香林 +2 位作者 李学梅 刘崇怀 古勤生 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第2期50-53,共4页
以中国农业科学院郑州果树研究所国家葡萄资源圃的葡萄品种为试材,对葡萄扇叶病毒(GFLV)和葡萄卷叶病毒Ⅲ(GLRaV-3)进行了A蛋白酶联免疫吸附测定(PAS-ELISA)的检测技术的研究。从阴、阳性对照及抗血清或抗体浓度的选择,到不同时期、检... 以中国农业科学院郑州果树研究所国家葡萄资源圃的葡萄品种为试材,对葡萄扇叶病毒(GFLV)和葡萄卷叶病毒Ⅲ(GLRaV-3)进行了A蛋白酶联免疫吸附测定(PAS-ELISA)的检测技术的研究。从阴、阳性对照及抗血清或抗体浓度的选择,到不同时期、检测部位对结果的影响,建立了一套完整的ELISA检测GFLV和GLRaV-3程序;通过试验分析,该方法快速,简便,经济且灵敏度高,不失为葡萄病毒检测的一种新方法。通过检测,还了解到GFLV的发病高峰在春季,主要发病部位在上部叶片,而GLRaV-3的发病高峰在秋季,重要发病部位在下部叶片。 展开更多
关键词 葡萄 病毒检测 PAS-ELISA 灵敏度 GFLV glrav-3
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红地球葡萄GLRaV-3的茎尖培养脱毒及RT-PCR检测 被引量:8
3
作者 韩艳婷 石雪晖 +4 位作者 杨国顺 王先荣 刘昆玉 徐丰 倪建军 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第4期198-202,共5页
笔者以带GLRaV-3病毒的红地球为试材,研究了6-BA、NAA、IBA、KT不同配组及茎尖大小对茎尖培养的影响,并利用RT-PCR技术对部分红地球组培苗进行了GLRaV-3病毒检测。研究结果表明:红地球葡萄茎尖培养脱毒最佳茎尖初始培养基为:1/2MS+6-BA0... 笔者以带GLRaV-3病毒的红地球为试材,研究了6-BA、NAA、IBA、KT不同配组及茎尖大小对茎尖培养的影响,并利用RT-PCR技术对部分红地球组培苗进行了GLRaV-3病毒检测。研究结果表明:红地球葡萄茎尖培养脱毒最佳茎尖初始培养基为:1/2MS+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+NAA0.2mg/L,最佳茎尖分化培养基为:B5+KT1.0mg/L+NAA0.2mg/L;茎尖大小与成活率成正比,与脱毒率成反比;运用RT-PCR检测技术进行了脱毒后组培苗的检测,得到了GLRaV-3的特异片段为300bp,获得了28株脱毒苗,平均脱毒率为43%。 展开更多
关键词 红地球葡萄 茎尖培养 脱毒 葡萄卷叶病 RT-PCR
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Rt-PCR Analysis and Evolutionary Relationship of Some Hungarian <i>Grapevine leafroll associated virus</i>1 and 3 Isolates
4
作者 Eszter Cseh András Péter Takács +2 位作者 Richard Gáborjányi László Palkovics László Kocsis 《American Journal of Plant Sciences》 2013年第10期2006-2010,共5页
Hungarian isolates of Grapevine leafroll associated virus 1 and 3 (GLRaV-1, GLRaV-3) were tested using serological (DAS-ELISA) and molecular (RT-PCR) methods. Five hundred bp long PCR products of the part of HSP70 gen... Hungarian isolates of Grapevine leafroll associated virus 1 and 3 (GLRaV-1, GLRaV-3) were tested using serological (DAS-ELISA) and molecular (RT-PCR) methods. Five hundred bp long PCR products of the part of HSP70 gene of one serologically positive GLRaV-1 and four GLRaV-3 isolates were sequenced. These sequences were applied for phylogenetic analysis and compared to foreign virus isolates of NCBI GenBank. Phylogenetic analysis of GLRaV-1 HSP70 gene supported the earlier results that it could be divided into two clusters: E and A. The Hungarian isolate 6.4.1 belonged to the group E. This isolate showed the highest homology with the AY754914 isolate from the Czech Republic. GLRaV-3 sequence data could cluster five groups. Hungarian 2.2;3.5 and 4.2 isolates were estimated belonging to the group II. The 1.4 isolate from the same vineyard as 2.2 varied in sequence data so it belonged to the other, IV. variant group with two South African, two Austrian and a Syrah isolate. According to the phylogenetic analysis, two variant groups occurred in Hungary. These isolates related with each other, but showed higher similarity of foreign counties. In some cases, they were similar to isolates of the neighbour countries such as Slovakia and Austria. It could be supposed that mainly the exchange of virus infected propagation materials caused the dissemination of GLRaV isolates. 展开更多
关键词 GRAPEVINE VIRUS glrav-1 glrav-3 HSP70 RT-PCR Hungary
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长线形病毒科成员编码蛋白的功能 被引量:11
5
作者 洪雪玉 陈剑平 《浙江农业学报》 CSCD 2004年第1期47-52,共6页
长线形病毒科病毒危害甜菜、柑桔、番茄、马铃薯、樱桃、莴苣等重要的经济作物,是正链RNA病毒中基因组最大,且最复杂的植物病毒科。目前包括长线形病毒属,Ampelo病毒属和毛形病毒属,其代表种分别为甜菜黄化病毒(BYV),葡萄卷叶伴随病毒3(... 长线形病毒科病毒危害甜菜、柑桔、番茄、马铃薯、樱桃、莴苣等重要的经济作物,是正链RNA病毒中基因组最大,且最复杂的植物病毒科。目前包括长线形病毒属,Ampelo病毒属和毛形病毒属,其代表种分别为甜菜黄化病毒(BYV),葡萄卷叶伴随病毒3(GLRaV 3)和莴苣传染性黄化病毒(LIYV)。最近随着研究的拓展和深入,有关该科病毒的新种类不断增加,部分种类的基因组全序列已被测定。病毒基因编码的重要蛋白如热激蛋白70,外壳蛋白和重复的外壳蛋白,病毒复制所需的蛋白以及疏水性蛋白的功能也得到深入研究。本文就这些蛋白的功能作一个简要的综述。 展开更多
关键词 长线形病毒科 长线形病毒属 毛形病毒属 Ampelo病毒属 BYV glrav-3 LIYV 蛋白质
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微量植物组织直接RT-PCR反应检测4种植物病毒的方法建立与优化 被引量:2
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作者 李姣 任秋蓉 +2 位作者 古蕾 朱晓换 王亚男 《四川师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2021年第1期111-117,共7页
建立并优化微量植物组织直接RT-PCR反应检测病毒的方法:在立体显微镜下,用26 G无菌注射器针头刺入植物茎、叶柄或根中,将沾有组织液的针头直接浸入RT反应液中,通过PCR反应产生病毒特异性DNA条带.该方法在葡萄、苹果、马铃薯和百合中有... 建立并优化微量植物组织直接RT-PCR反应检测病毒的方法:在立体显微镜下,用26 G无菌注射器针头刺入植物茎、叶柄或根中,将沾有组织液的针头直接浸入RT反应液中,通过PCR反应产生病毒特异性DNA条带.该方法在葡萄、苹果、马铃薯和百合中有效检测了葡萄卷叶相关病毒3(GLRav-3)、苹果茎沟病毒(ASGV)、马铃薯卷叶病毒(PLRV)和黄瓜花叶病毒(CMV);消除了传统RT-PCR制备RNA模板复杂耗时的缺点. 展开更多
关键词 微量植物组织直接RT-PCR反应 葡萄卷叶相关病毒3(glrav-3) 苹果茎沟病毒(AS-GV) 马铃薯卷叶病毒(PLRV) 黄瓜花叶病毒(CMV)
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葡萄卷叶病毒外壳蛋白基因的克隆、序列分析及其在大肠杆菌中的表达 被引量:6
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作者 张玉满 李云 +2 位作者 田砚亭 腊平 蔡文启 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期232-236,共5页
从我国感染 GL Ra V的葡萄韧皮部组织中提取到约 18kb的 GL Ra V- ds RNA。以此为模板 ,采用 RT- PCR方法 ,扩增到约 1.0 kb的 GL Ra V CP基因 c DNA片段 ,并将其克隆到p Bluescript IISK载体。序列分析表明 ,GL Ra V(中国分离物 ) CP... 从我国感染 GL Ra V的葡萄韧皮部组织中提取到约 18kb的 GL Ra V- ds RNA。以此为模板 ,采用 RT- PCR方法 ,扩增到约 1.0 kb的 GL Ra V CP基因 c DNA片段 ,并将其克隆到p Bluescript IISK载体。序列分析表明 ,GL Ra V(中国分离物 ) CP基因与美国 GL Ra V- 3CP基因核苷酸序列同源性达 99.15% ,推导的氨基酸序列同源性为 98.0 9%。通过大肠杆菌表达载体p BV2 2 1构建了 GLRa V- CP基因的大肠杆菌蛋白表达克隆 ,SDS- PAGE电泳分析及 Western-Blot结果表明 ,有一条约 35k Da的特异表达蛋白带 ,与 GL Ra V- 展开更多
关键词 葡萄卷叶病毒 外壳蛋白基因 克隆 序列分析 表达
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IC-RT-PCR检测葡萄卷叶病毒Ⅲ的研究 被引量:3
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作者 陈建军 曹香林 +2 位作者 古勤生 张亚冰 刘崇怀 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2006年第8期109-112,共4页
结合ELISA和反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的特点,引入了另外一种方法,即免疫捕捉反转录聚合酶链式反应(IC-RT-PCR)对葡萄卷叶病毒Ⅲ(GLRaV-3)进行了检测。从免疫捕捉病毒、释放RNA到反转录成cDNA,最后扩增出了约300bp的预期目的片段。... 结合ELISA和反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的特点,引入了另外一种方法,即免疫捕捉反转录聚合酶链式反应(IC-RT-PCR)对葡萄卷叶病毒Ⅲ(GLRaV-3)进行了检测。从免疫捕捉病毒、释放RNA到反转录成cDNA,最后扩增出了约300bp的预期目的片段。为了进一步明确PCR扩增的特异性,将PCR产物连接到pGEM-T载体上,转化大肠杆菌E.coliJM109菌株,通过蓝白斑筛选,获得重组质粒,提取质粒DNA,经酶切对重组质粒进行鉴定,结果得到了含有目的片段的重组质粒。由此证明,IC-RT-PCR检测GLRaV-3结果准确可靠。最重要的是它弥补了ELISA易出现假阴性、假阳性以及RT-PCR提取RNA难等的缺点,不失为病毒检测的新型方法。 展开更多
关键词 葡萄 卷叶病毒Ⅲ 检测 IC-RT-PCR
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山东省葡萄几种主要病毒病调查及检测研究 被引量:4
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作者 王升吉 赵玖华 +4 位作者 尚佑芬 吕志华 张加魁 赵亚 戴争 《北方园艺》 CAS 北大核心 2011年第7期20-23,共4页
对采自山东省不同葡萄园类别的葡萄样品,采用PTA-ELISA法和Dot-ELISA法对葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)进行了检测,采用DAS-ELISA法对葡萄卷叶病的3个毒原(GL-RaV-1-、2-、3)进行了检测。GRSPaV检测结果表明:检测的61个品种518个样品,阳性... 对采自山东省不同葡萄园类别的葡萄样品,采用PTA-ELISA法和Dot-ELISA法对葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)进行了检测,采用DAS-ELISA法对葡萄卷叶病的3个毒原(GL-RaV-1-、2-、3)进行了检测。GRSPaV检测结果表明:检测的61个品种518个样品,阳性样品率33.6%,阳性品种率73.8%,其中资源圃样品阳性率32.7%,生产园样品阳性率34.0%。对检测到阳性样品辅以RT-PCR法验证,2对引物均扩增出了预期片段,分别为解旋酶基因340 bp片段、CP基因842 bp片段。GLRaV-1-、2-、3的检测结果表明:鲜食品种3种病原的阳性样品率分别为33.7%、7.1%、62.2%,酿酒品种阳性样品率分别为35.1%、16.2%、54.1%,综合3种病毒的阳性样品率为76.3%,品种感染率87.7%。通过该类研究对推动国内葡萄无毒化生产有重要意义。 展开更多
关键词 葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV) 葡萄卷叶病毒-1■2■3(glrav-1■2■3) 检测 山东
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葡萄卷叶伴随病毒基因的克隆及序列分析 被引量:5
10
作者 张满良 朱水芳 赵冬兰 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 2000年第5期70-75,共6页
根据葡萄卷叶伴随病毒 美国分离物的 GLRa V- 3CP基因序列 ,设计并合成了 1对该病毒的 PCR引物 ,利用 IC- RT- PCR成功地检查到合适大小的 PCR产物 ;同时将PCR产物克隆到中间载体 PGEM- 3Zf上 ,转化大肠杆菌 DH5α菌株 ,筛选阳性克隆... 根据葡萄卷叶伴随病毒 美国分离物的 GLRa V- 3CP基因序列 ,设计并合成了 1对该病毒的 PCR引物 ,利用 IC- RT- PCR成功地检查到合适大小的 PCR产物 ;同时将PCR产物克隆到中间载体 PGEM- 3Zf上 ,转化大肠杆菌 DH5α菌株 ,筛选阳性克隆。通过双酶切以及序列分析表明 ,扩增样品与美国分离物的同源性为 94.1 %。 展开更多
关键词 CP基因 克隆 序列分析 葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ 葡萄卷叶病
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葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ外壳蛋白基因的克隆
11
作者 赵冬兰 朱水芳 +1 位作者 黄文胜 张满良 《中国病毒学》 CSCD 2000年第4期357-360,共4页
根据美国报道的葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ (GLRaV 3)CP基因序列 ,设计并合成一对引物 ,用IC RT PCR对GLRaV 3进行检测 ,琼脂糖凝胶电泳表明其大小与预计相符。将其CP基因克隆到pGEM 3zf( +)中 ,经双酶切和序列分析表明所克隆的是GLRaV 3CP基... 根据美国报道的葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ (GLRaV 3)CP基因序列 ,设计并合成一对引物 ,用IC RT PCR对GLRaV 3进行检测 ,琼脂糖凝胶电泳表明其大小与预计相符。将其CP基因克隆到pGEM 3zf( +)中 ,经双酶切和序列分析表明所克隆的是GLRaV 3CP基因 ,它与美国分离物相应序列同源性为 94 .1%。 展开更多
关键词 葡萄卷叶病毒 glrav-3 IC-RT-PCR CP 克隆
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葡萄卷叶伴随病毒-3外壳蛋白的原核表达及其特异性抗血清的制备 被引量:8
12
作者 徐章逸 王国平 +2 位作者 刘亚萍 王彩霞 洪霓 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期129-134,共6页
利用RT-PCR技术扩增得到了葡萄卷叶伴随病毒-3(Grapevine leafroll associated virus-3,GLRaV-3)中国分离物的外壳蛋白(coat protein,cp)基因。序列分析结果表明,cp基因的长度为942bp,与已报道的其它GLRaV-3分离物的cp核苷酸相似性为91%... 利用RT-PCR技术扩增得到了葡萄卷叶伴随病毒-3(Grapevine leafroll associated virus-3,GLRaV-3)中国分离物的外壳蛋白(coat protein,cp)基因。序列分析结果表明,cp基因的长度为942bp,与已报道的其它GLRaV-3分离物的cp核苷酸相似性为91%~99%,编码的氨基酸相似性为95%~100%。将此基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS后用终浓度为1mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE及Western blotting分析表明,cp在大肠杆菌中可表达出分子量约为35kDa的蛋白。纯化表达产物后免疫家兔制备抗血清。A蛋白酶联免疫吸附测定(PAS-ELISA)及斑点免疫结合测定(DBIA)结果显示,制备的特异抗血清可用于检测田间感病葡萄样品中的GLRaV-3。 展开更多
关键词 glrav-3 CP 基因克隆 原核表达 PAS—ELISA DBIA
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基于DPO引物的SYBR Green Ⅰ实时荧光RT-PCR检测葡萄卷叶伴随病毒3号 被引量:4
13
作者 乾义柯 张娜 +2 位作者 魏霜 陆平 张祥林 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期343-344,共2页
葡萄卷叶病是葡萄上一种重要的病毒病,在国内分布较为普遍,引起该病的葡萄卷叶伴随病毒(Grapevine leafroll-associated virus,GLRaV)是由多种病毒单独或复合侵染造成。已报道的GLRaVs至少有5种,其中GLRaV-3是葡萄卷叶病毒属Ampleovi... 葡萄卷叶病是葡萄上一种重要的病毒病,在国内分布较为普遍,引起该病的葡萄卷叶伴随病毒(Grapevine leafroll-associated virus,GLRaV)是由多种病毒单独或复合侵染造成。已报道的GLRaVs至少有5种,其中GLRaV-3是葡萄卷叶病毒属Ampleovirus典型成员(Ling et al.,2004)。 展开更多
关键词 葡萄卷叶病毒 荧光RT-PCR检测 病毒病 Green SYBR 伴随 DPO glrav-3
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双引物一条探针的实时荧光RT-PCR检测葡萄卷叶病毒3 被引量:1
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作者 李金庆 阮国栋 +5 位作者 孙铭璐 徐娟 王克霞 曲直 邹强 段效辉 《中国口岸科学技术》 2022年第12期52-57,共6页
葡萄卷叶病毒3(GLRaV-3)被认为是葡萄卷叶病最重要的致病因子。本研究根据NCBI核酸数据库中葡萄卷叶病毒3复制酶基因序列保守区,设计合成2对上下游引物和1条Taq Man探针,组成2套反应组合。以病毒RNA反转录合成的c DNA为模板,依据2组引... 葡萄卷叶病毒3(GLRaV-3)被认为是葡萄卷叶病最重要的致病因子。本研究根据NCBI核酸数据库中葡萄卷叶病毒3复制酶基因序列保守区,设计合成2对上下游引物和1条Taq Man探针,组成2套反应组合。以病毒RNA反转录合成的c DNA为模板,依据2组引物序列和相同的Taq Man探针序列,在荧光PCR特异性、灵敏度、扩增效率对比试验的基础上,建立了双引物一条探针的实时荧光RT-PCR检测GLRaV-3的新方法,病毒RNA检测下限可达4.5 fg/μL。两套组合相互验证,减少非特异性扩增,进一步提高了方法的特异性。 展开更多
关键词 双引物一条探针实时荧光RT-PCR 葡萄卷叶病毒3 检测
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