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GM-CSF/IL-3融合蛋白质量标准的研究和建立 被引量:2
1
作者 袁力勇 饶春明 +4 位作者 李响 韩春梅 郭莹 丁有学 王军志 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1605-1608,共4页
目的:建立重组 GM-CSF/IL-3融合蛋白的质控标准和检测方法,以用于该产品的常规质量控制。方法:用 TF-1/MTT 细胞增殖试验定量测定 GM-CSF/IL-3融合蛋白体外生物学活性;用抗 GM-CSF 和 IL-3的抗体分别进行 WesternBlot 进行鉴别试验;用 C... 目的:建立重组 GM-CSF/IL-3融合蛋白的质控标准和检测方法,以用于该产品的常规质量控制。方法:用 TF-1/MTT 细胞增殖试验定量测定 GM-CSF/IL-3融合蛋白体外生物学活性;用抗 GM-CSF 和 IL-3的抗体分别进行 WesternBlot 进行鉴别试验;用 C_8-HPLC 和 SDS~PAGE 测定蛋白纯度;用胰蛋白酶消化/C_(18)-HPLC 进行肽图分析;用顶空进样气相色谱法检测甲醇残留量;还原型 SDS-PAGE 测定融合蛋白相对分子质量;其他原液和成品检测项目参照2005年版中国药典三部的方法进行。结果:GM-CSF/IL-3融合蛋白的原液及成品与 TF-1细胞的反应呈典型的 S 型曲线,符合四参数方程 y=(A-D)/[1+(x/C)(?)B)]+D,相关系数大于0.99,成品和原液的回收率均大于94%,RSD 均小于20%;与 GM-CSF 和 IL-3抗体进行的 Western Blot 均为阳性;原液纯度大于95.0%;甲醇残留量小于0.005%,其他项目均符合2005年版中国药典三部要求。结论:建立的重组 GM-CSF/IL-3融合蛋白质控标准和检测方法可以有效控制该制品的质量,并确保制品的安全与有效,已用于该制品的常规检定。 展开更多
关键词 gmcsf/il-3 TF-1细胞 WESTERN BLOT 甲醇
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肠道菌群失调对小鼠IL-3、GM-CSF水平的影响 被引量:2
2
作者 张亚超 孙晓利 +3 位作者 刘颖 刘惠敏 王憬 王沛 《临床合理用药杂志》 2009年第17期5-6,共2页
目的观察肠道菌群失调小鼠体内白细胞介素-3(IL-3),粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)水平的变化。方法采用抗生素脱污染造成小鼠肠道菌群失调的动物模型,实验组和对照组各10只;用ELISA方法检测血清IL-3和GM-CSF含量。结果实验组小鼠血清... 目的观察肠道菌群失调小鼠体内白细胞介素-3(IL-3),粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)水平的变化。方法采用抗生素脱污染造成小鼠肠道菌群失调的动物模型,实验组和对照组各10只;用ELISA方法检测血清IL-3和GM-CSF含量。结果实验组小鼠血清中IL-3和GM-CSF的含量明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论肠道菌群失调可减少体内IL-3和GM-CSF含量。 展开更多
关键词 菌群失调 il-3 gm-csf 小鼠
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联用重组的IL-3、GM-CSF对阿糖胞苷诱导的HL-60细胞凋亡的影响 被引量:6
3
作者 陈燕 周剑峰 +1 位作者 李崇渔 王辨明 《同济医科大学学报》 CSCD 1997年第2期92-95,共4页
为研究在阿糖胞苷(Ara-C)的作用下,基因重组的人白细胞介素3(rh-IL-3)、粒单祖细胞集落刺激因子(rh-GM-CSF)对白血病细胞凋亡的影响,选用了HL-60白血病细胞系,采用DNA电泳、流式细胞仪检测、单克隆抗体C-myc、bcl-2抗... 为研究在阿糖胞苷(Ara-C)的作用下,基因重组的人白细胞介素3(rh-IL-3)、粒单祖细胞集落刺激因子(rh-GM-CSF)对白血病细胞凋亡的影响,选用了HL-60白血病细胞系,采用DNA电泳、流式细胞仪检测、单克隆抗体C-myc、bcl-2抗原表达的分析以及白血病细胞集落的培养观察方法,观察了0~36h8个不同时相凋亡率与其他指标的变化,表明Ara-C凋亡的作用随药物孵育时间的延长而逐渐增强,凋亡率从0h的1.5%升至36h后的36.4%,而IL-3和GM-CSF能使这种作用明显提高,使凋亡率从7.6%升至19.6%,并能增强Ara-C对白血病细胞的杀灭,引起HL-60细胞C-myc抗原表达下降,而bcl-2抗原表达变化不大,同时发现这两种细胞因子对正常造血细胞影响较小,这为临床上白血病诱导缓解期联用rh-IL-3、rh-GM-CSF和细胞毒药物,提高缓解率,提供了理论依据。 展开更多
关键词 HL-60细胞系 白细胞介素3 gm-csf 细胞凋亡
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利用IL-3/GM-CSF融合蛋白(PIXY-321)扩增脐血造血细胞方法的初步建立
4
作者 徐黎 裴雪涛 +1 位作者 王立生 吴祖泽 《中国应用生理学杂志》 CSCD 1996年第3期233-235,共3页
利用单克隆抗体免疫磁珠吸附方法分离脐血CD34+细胞,并观察了IL3/GMCSF融合蛋白(PIXY321)对脐血CD34+细胞的刺激作用。PIXY321对脐血CD34+细胞扩增作用大于IL3和GMCSF单... 利用单克隆抗体免疫磁珠吸附方法分离脐血CD34+细胞,并观察了IL3/GMCSF融合蛋白(PIXY321)对脐血CD34+细胞的刺激作用。PIXY321对脐血CD34+细胞扩增作用大于IL3和GMCSF单独及联合应用。在液体培养条件下,每毫升20ngPIXY321可有效地扩增脐血造血祖细胞,适宜扩增时间为5-8天,扩增后造血祖细胞的数量可达扩增前的8-10倍,从而初步建立了一种简单可行的脐血造血细胞扩增方法。 展开更多
关键词 脐血 扩增 造血方法 PIXY-321 融合蛋白 制备
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rhGM-CSF/IL-3融合蛋白对人骨髓造血祖细胞体外培养的研究 被引量:2
5
作者 戴盛明 肖桂元 +3 位作者 周少雄 郑兴武 饶颖竹 周甘平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期326-328,共3页
研究了rhGMCSF/IL3融合蛋白对人骨髓造血祖细胞(CFUGM、CFUGEMM、BFUE)集落形成的影响,结果表明rhGMCSF/IL3能显著促进CFUGM、CFUGEMM、BFUE集落的形成... 研究了rhGMCSF/IL3融合蛋白对人骨髓造血祖细胞(CFUGM、CFUGEMM、BFUE)集落形成的影响,结果表明rhGMCSF/IL3能显著促进CFUGM、CFUGEMM、BFUE集落的形成,分别与GMCSF、IL3单独或联合用药比较,差异有显著性(P<0001),CFUGM、CFUGEMM、BFUE集落的形成对融合蛋白均有剂量依赖性,培养体系浓度在5~10ng/ml时,各个集落生长效果最好。提示rhGMCSF/IL3对造血祖细胞的生长发挥着重要作用,可能成为放疗、化疗后继GMCSF及IL3更重要的造血制剂。 展开更多
关键词 RHgm-csf il-3 融合蛋白 骨髓 造血干细胞
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人IL-3、GM-CSF和Hly基因的cDNA克隆及测序
6
作者 孙英民 孙朕 樊宝良 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第4期91-94,共4页
试验利用PCR技术扩增并获得了人IL-3、GM-CSF和人溶菌酶(human lysozyme,Hly)基因组基因编码区序列,人IL-3和GM-CSF基因PCR产物与pMD19-T连接,Hly基因PCR产物同pEASY-Blunt载体连接,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,蓝白斑筛选后经PCR及酶... 试验利用PCR技术扩增并获得了人IL-3、GM-CSF和人溶菌酶(human lysozyme,Hly)基因组基因编码区序列,人IL-3和GM-CSF基因PCR产物与pMD19-T连接,Hly基因PCR产物同pEASY-Blunt载体连接,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,蓝白斑筛选后经PCR及酶切鉴定,选取测序正确的克隆连接到pIRESneo载体中构建相关真核表达载体,分别用这些基因的表达载体转染PK15细胞,48 h后提取转染细胞的总RNA,并采用RT-PCR方法获得了人IL-3、GM-CSF和Hly基因的cDNA,结果发现,所获得的cDNA序列同NCBI登录的序列完全同源。 展开更多
关键词 il-3基因 gm-csf基因 Hly基因 CDNA 克隆 测序
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rhGM-CSF/IL-3融合蛋白对Ara-C介导的HL-60细胞凋亡的影响
7
作者 戴盛明 肖桂元 +4 位作者 周少雄 饶颖竹 郑兴武 周甘平 吴茂莲 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1998年第1期36-38,共3页
本研究采用HL-60白血病细胞系探讨了rhGM-CSF/IL-3融合蛋白对Ara-C介导的HL-60细胞凋亡的影响,结果表明,Ara-C与rhGM-CSF/IL-3联合应用处理HL-60比Ara-C单独作用更能显著提高寡核苷体DNA片段、抑制HL-60集落形成;rhGM-CSF/IL-3对Ara-C... 本研究采用HL-60白血病细胞系探讨了rhGM-CSF/IL-3融合蛋白对Ara-C介导的HL-60细胞凋亡的影响,结果表明,Ara-C与rhGM-CSF/IL-3联合应用处理HL-60比Ara-C单独作用更能显著提高寡核苷体DNA片段、抑制HL-60集落形成;rhGM-CSF/IL-3对Ara-C介导的HL-60细胞凋亡率的影响比不加rhGM-CSF/IL-3的对照组有明显提高,且比rhGM-CSF与rhIL-3联用作用更明显,但对正常人外周血白细胞作用较弱,提示可能对于rhGM-CSF/IL-3诱导缓解期白血病具有一定作用. 展开更多
关键词 gm-csf il-3 融合蛋白 HL-60细胞系 白血病
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Effect of Concurrent Use of rh-IL-3 and rh-GM-CSFon Apoptosis of HL-60 Cells Induced by Ara-C
8
作者 陈燕 周剑峰 +2 位作者 李崇渔 王辨明 李慧玉 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 1997年第1期13-17,共5页
The myeloid leukemic cell line HL-60 was studied by using DNA gel electrophoresis, flow cytomery, McAb C-myc, McAb Bc1-2 and CFU-L. From zero to 36 h,the apoptosis rates of 8 different phases and other indexes were ob... The myeloid leukemic cell line HL-60 was studied by using DNA gel electrophoresis, flow cytomery, McAb C-myc, McAb Bc1-2 and CFU-L. From zero to 36 h,the apoptosis rates of 8 different phases and other indexes were observed. The results showed that with the prolonged time of drug incubation,apoptosis of HL-60 cells increased progressively. This effect can be enhanced obviously by rh-IL-3 and rh-GM-CSF. At the same time,the killed rate of leukemic cells by Ara-C induction was increased. C-myc expression was decreased and Bc1-2 expression did not display apparent change. Interestingly, the normal hemopoietic cells were not affected by these two kinds of cytokine. The theoretical basis was provided for concurrent use of rh-IL-3, rh-GM-CSF and cytotoxic drugs whose purpose is to elevate remission rate during the phase of induced remission of leukemia. 展开更多
关键词 APOPTOSIS HL-60 cells ARA-C rh-il-3 rh-gm-csf
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人IL-2/GM-CSF融合基因的克隆及序列测定 被引量:4
9
作者 黄树其 林来兴妹 +3 位作者 方向东 高基民 王小宁 刘新垣 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第2期83-85,共3页
通过PCR技术,对人IL2和GMCSF基因分别改构,克隆了通过Pro(CCC)连接臂相连的IL2/GMCSF融合基因。经酶切鉴定和序列测定证实后,将上述融合基因克隆至原核表达载体pLY4,为表达具有IL2,... 通过PCR技术,对人IL2和GMCSF基因分别改构,克隆了通过Pro(CCC)连接臂相连的IL2/GMCSF融合基因。经酶切鉴定和序列测定证实后,将上述融合基因克隆至原核表达载体pLY4,为表达具有IL2,GMCSF双功能活性的新型融合蛋白。 展开更多
关键词 白细胞介素2 gm-csf 融合基因 克隆 序列测定
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huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白的表达及活性测定 被引量:4
10
作者 孙强明 戴长柏 +4 位作者 李洪钊 丁云菲 马雁冰 刘红岩 徐维明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期253-257,共5页
目的 构建及表达具有huIL 6和huGM CSF双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7)融合蛋白分子。方法 应用PCR技术对huIL 6和huGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在二者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成pBV2 2 0... 目的 构建及表达具有huIL 6和huGM CSF双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7)融合蛋白分子。方法 应用PCR技术对huIL 6和huGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在二者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成pBV2 2 0 IL 6 GM CSF(9- 12 7)表达质粒 ,将表达质粒导入E .coliDH5α中 ,诱导表达融合蛋白。通过QSepharoseH .P .离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白。使用MTT法测量其huIL 6和huGM CSF生物学活性。结果 pUC18 IL 6 GM CSF(9- 12 7)的序列与理论设计完全一致 ,表达质粒在E .coliDH5α中得到高效表达 ,表达的融合蛋白占总蛋白含量的 30 %以上 ,表达产物以包涵体的形式存在。通过QSepharoseH .P .离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化及复性后获得目的蛋白 ,其纯度达到 96 %以上。融合蛋白具有huIL 6和huGM CSF的双重生物学活性 ,其促进huIL 6依赖细胞株B9和huGM CSF依赖细胞株TF 1增殖的比活性分别为 2 .86× 10 7U/mg和 3.33× 10 8U/mg。结论 获得了具有较高纯度和双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7) 展开更多
关键词 gm-csf 融合蛋白 基因表达 基因克隆 白细胞介素-6 生物活性蛋白
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急性肾炎患儿治疗前后血清GM-CSF、hs-CRP和IL-8联检的临床意义 被引量:2
11
作者 吕达嵘 鲁科峰 《放射免疫学杂志》 CAS 2009年第3期205-207,共3页
目的:探讨了急性肾炎患儿治疗前后血清巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)和IL-8水平的变化及意义。方法:应用放射免疫分析和免疫比浊法对31例急性肾炎患儿进行了血清GM-CSF、hs-CRP和IL-8测定,并与30名正常健康儿... 目的:探讨了急性肾炎患儿治疗前后血清巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)和IL-8水平的变化及意义。方法:应用放射免疫分析和免疫比浊法对31例急性肾炎患儿进行了血清GM-CSF、hs-CRP和IL-8测定,并与30名正常健康儿作比较。结果:急性肾炎患儿在治疗前血清GM-CSF、hs-CRP和IL-8水平均非常显著地高于正常儿组(P<0.01),经治疗6个月后则与正常儿比较无显著性差异(P>0.05)。结论:检测血清GM-CSF、hs-CRP和IL-8水平的变化对观察病情和预后判定均具有重要的临床价值。 展开更多
关键词 小儿急性肾炎 巨噬细胞集落刺激因子 超敏C-反应蛋白 白细胞介素-8
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肺炎支原体肺炎患儿血清hs-CRP、IL-6和GM-CSF检测的临床意义 被引量:8
12
作者 李鹏飞 《放射免疫学杂志》 CAS 2012年第4期396-398,共3页
目的:探讨了肺炎支原体肺炎患儿血清hs-CRP、IL-6和GM-CSF水平的变化及临床意义。方法:应用放免法和免疫比浊法对36例肺炎支原体肺炎患儿进行了肺炎支原体肺炎并发冠脉病变患儿进行了血清hs-CRP、IL-6和GM-CSF检测,并与35名正常健康儿... 目的:探讨了肺炎支原体肺炎患儿血清hs-CRP、IL-6和GM-CSF水平的变化及临床意义。方法:应用放免法和免疫比浊法对36例肺炎支原体肺炎患儿进行了肺炎支原体肺炎并发冠脉病变患儿进行了血清hs-CRP、IL-6和GM-CSF检测,并与35名正常健康儿作比较。结果:肺炎支原体肺炎患儿血清hs-CRP、IL-6和GM-CSF水平均显著高于正常儿组(P<0.01),且血清hs-CRP与IL-6、GM-CSF水平呈正相关(r=0.6012、0.5784,P<0.01)。结论:血清hs-CRP、IL-6和GM-CSF参与了肺炎支原体感染的全过程,监测这些细胞因子的变化有助于诊断、治疗和预后,提供一定的临床价值。 展开更多
关键词 肺炎支原体肺炎 超敏C-反应蛋白 白细胞介素-6 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子
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急性肾炎患儿治疗前后血清hs-CRP、IL-2、IL-6和GM-CSF检测的临床意义 被引量:6
13
作者 霍汝亚寒 《放射免疫学杂志》 CAS 2010年第2期133-134,共2页
目的:探讨了小儿急性肾炎患儿治疗前后血清CRP、IL-2、IL-6和GM-CSF水平的变化及意义。方法:应用放射免疫分析和免疫比浊法对31例急性肾炎患儿进行了治疗前后血清hs-CRP、IL-2、IL-6和GM-CSF测定并与35名正常儿作比较。结果:在治疗前,... 目的:探讨了小儿急性肾炎患儿治疗前后血清CRP、IL-2、IL-6和GM-CSF水平的变化及意义。方法:应用放射免疫分析和免疫比浊法对31例急性肾炎患儿进行了治疗前后血清hs-CRP、IL-2、IL-6和GM-CSF测定并与35名正常儿作比较。结果:在治疗前,急性肾炎患儿血清hs-CRP、IL-6和GM-CSF水平非常显著的高于正常儿组(P<0.01),而IL-2水平又非常显著地低于正常儿组(P<0.01),经治疗1个月后则与正常儿比较无显著性差异(P>0.05),直线相关分析显示,血清IL-2水平、hs-CRP、IL-6和GM-CSF水平呈明显负相关(r=-0.5678、-0.6014、-0.5926,P<0.01)。结论:血清hs-CRP、IL-2、IL-6和GM-CSF在急性肾炎患儿的发生和发展过程中相互作用,观察其病情的变化和探讨其发病机理及指导用药均有重要的临床价值。 展开更多
关键词 小儿急性肾炎 超敏-C反应蛋白 白细胞介素-2 白细胞介素-6 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子
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两种hIL-6/GM-CSF融合蛋白基因的构建、表达及活性比较
14
作者 孙强明 孙茂盛 +4 位作者 易山 曹增 别俊 戴长柏 徐维明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期104-108,共5页
目的 :构建及表达具有hIL 6和hGM CSF双重生物学活性的hIL 6 /GM CSF融合蛋白分子。方法 :应用PCR技术对hIL 6和hGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在两者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成克隆有两种融合蛋白基因... 目的 :构建及表达具有hIL 6和hGM CSF双重生物学活性的hIL 6 /GM CSF融合蛋白分子。方法 :应用PCR技术对hIL 6和hGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在两者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成克隆有两种融合蛋白基因的pBV2 2 0表达质粒 ,两种融合蛋白分别是 :IL 6 (1~ 184 ) GM CSF(9~ 12 7) (简称IG1)和IL 6 (2 4~ 184 ) GM CSF(9~ 12 7) (简称IG2 )。将表达质粒分别导入E .coliBL 2 1中诱导表达。通过QSepharoseHP离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化目的蛋白。使用hIL 6依赖细胞株B9和hGM CSF依赖细胞株TF1,通过MTT比色法测定融合蛋白的生物学活性。结果 :对两种融合蛋白基因的测序结果表明 ,其序列与理论设计完全一致。表达质粒在E .coliBL 2 1中均得到高效表达 ,表达的融合蛋白均占总蛋白含量的 2 5 %以上 ,表达产物以包涵体的形式存在 ,通过QSepharoseHP离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化及复性后 ,获得两种目的蛋白 ,其纯度均达到 95 %以上。活性测定结果表明 ,两种融合蛋白均具有较高的hIL 6和hGM CSF的双重生物学活性。结论 :获得了具有较高纯度和双重生物学活性的hIL 6 /GM 展开更多
关键词 白细胞介素-6 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 融合蛋白 克隆 基因表达
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rhIL-2/GM-CSF融合蛋白抗体制备、鉴定及其生物学活性研究
15
作者 林来兴妹 周明乾 +2 位作者 陈泽洪 张亚莉 王小宁 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1103-1105,共3页
目的 :制备 rh IL - 2 / GM- CSF融合蛋白的抗体 ,并观察该抗体的特异性及对融合蛋白生物学活性的影响。方法 :用纯化的融合蛋白 (rh IL - 2 / GM- CSF)作为抗原 ,免疫新西兰兔后制备抗血清 ,用 EL ISA和 Dot- EL ISA检测抗体滴度和特... 目的 :制备 rh IL - 2 / GM- CSF融合蛋白的抗体 ,并观察该抗体的特异性及对融合蛋白生物学活性的影响。方法 :用纯化的融合蛋白 (rh IL - 2 / GM- CSF)作为抗原 ,免疫新西兰兔后制备抗血清 ,用 EL ISA和 Dot- EL ISA检测抗体滴度和特异性。用依赖株细胞增殖实验检测抗体对 rh IL - 2 / GM- CSF生物学活性的影响。 结果 :此抗体效价高 ,特异性好 ,不仅与融合蛋白(rh IL - 2 / GM- CSF)、IL - 2以及 GM- CSF发生反应 ,而且能够竞争抑制 rh IL - 2 / GM- CSF的生物学活性。 结论 :此抗体可用于融合蛋白 (rh IL - 2 / GM- CSF) 展开更多
关键词 RHil-2 gm-csf 融合蛋白 抗体 制备 鉴定 生物学活性 白细胞介素-2 粒-巨噬细胞集落刺激因子
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两种rHuIL-6/GM-CSF融合蛋白对化疗药物所致小鼠白细胞减少的恢复作用
16
作者 孙强明 孙茂盛 +4 位作者 谢天宏 张光明 孙雯佳 戴长柏 徐维明 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期225-228,共4页
以BALB/c系小鼠作为实验动物 ,探讨两种rHuIL 6 /GM CSF融合蛋白 [包括IL 6 (1 184 )GM CSF (9 12 7) (简称IG1) ,IL 6 (2 4 184 ) GM CSF (9 12 7) (简称IG2 ) ]在小鼠体内的生物学活性 ,观察它们对环磷酰胺所致BALB/c系小鼠白细胞... 以BALB/c系小鼠作为实验动物 ,探讨两种rHuIL 6 /GM CSF融合蛋白 [包括IL 6 (1 184 )GM CSF (9 12 7) (简称IG1) ,IL 6 (2 4 184 ) GM CSF (9 12 7) (简称IG2 ) ]在小鼠体内的生物学活性 ,观察它们对环磷酰胺所致BALB/c系小鼠白细胞减少及造血功能的影响。注射环磷酰胺建立化疗模型 ,分别同时注射融合蛋白 7d ,于 13d摘除眼球采血 ,并进行外周血白细胞记数 ,骨髓有核细胞 ,单个核细胞记数及CFU GM的测定。实验结果表明两种rHuIL 6 /GM CSF融合蛋白对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少及造血功能的损伤具有不同程度的修复作用。 展开更多
关键词 il-6 gm-csf 融合蛋白 白细胞 造血系统
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基于IL-3及G-CSF的玉屏风散调控变应性鼻炎肥大细胞活性的实验研究
17
作者 张仲林 钟玲 +1 位作者 凌保东 袁明勇 《成都医学院学报》 CAS 2014年第4期392-396,共5页
目的探讨并阐释中医经方玉屏风散调控变应性鼻炎肥大细胞活性的作用机制。方法选用健康SD大鼠,采用卵蛋白联合Al(OH)3复制变应性鼻炎动物模型,用玉屏风散治疗。实验结束后,收集大鼠鼻腔灌洗液,采用ELSIA法检测IL-3及G-CSF含量;处死动物... 目的探讨并阐释中医经方玉屏风散调控变应性鼻炎肥大细胞活性的作用机制。方法选用健康SD大鼠,采用卵蛋白联合Al(OH)3复制变应性鼻炎动物模型,用玉屏风散治疗。实验结束后,收集大鼠鼻腔灌洗液,采用ELSIA法检测IL-3及G-CSF含量;处死动物,剖取鼻黏膜,匀浆,取上清液,采用Western blot法检测IL-3及G-CSF的表达;另取鼻黏膜行吉姆萨染色,进行病理检测。结果模型组动物出现明显过敏症状,玉屏风散治疗后症状明显改善,过敏症状计分差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);模型组动物鼻腔灌洗液中IL-3及G-SCF含量最低,玉屏风散治疗后明显升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);模型组动物鼻黏膜组织匀浆中IL-3及G-SCF低表达,玉屏风散治疗后表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);模型组动物鼻黏膜中吉姆萨染色显示肥大细胞数量明显增多,玉屏风散治疗后数量明显减少。结论玉屏风散是通过激活肥大细胞生长因子IL-3、抑制肥大细胞的增值因子G-SCF,通过对肥大细胞进行双向调节而有效地治疗变应性鼻炎。 展开更多
关键词 变应性鼻炎 il-3 gm-csf 肥大细胞 双向调节
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分泌型rhGM-CSF/IL-2融合蛋白表达载体的构建 被引量:1
18
作者 刘冬梅 张卓远 +1 位作者 王妍 孟洪琪 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期197-200,共4页
目的 将GM-CSF基因与IL-2基因通过一中间接头G-G-G-S-G-G-S-G连接到一起,并在E.coli中分泌表达具有更高GM-CSF和IL-2生物活性的融合蛋白分子。方法 在引物设计中,通过选择密码子,在Linker的中前部设计了一个BamHI酶切位点,GM-CSF的下游... 目的 将GM-CSF基因与IL-2基因通过一中间接头G-G-G-S-G-G-S-G连接到一起,并在E.coli中分泌表达具有更高GM-CSF和IL-2生物活性的融合蛋白分子。方法 在引物设计中,通过选择密码子,在Linker的中前部设计了一个BamHI酶切位点,GM-CSF的下游引物和IL-2的上游引物均起始于该位点。然后通过PCR、酶切、连接等一系列分子克隆的方法,构建融合蛋白的克隆及表达载体。结果 经EcoRI/SaII双酶切鉴定,克隆载体pUC19GM-CSF/L/IL-2及表达载体pBVGMCSF/L/IL-2中均插入了正确的外源片段。结论 克隆及表达载体的成功构建,为进一步表达融合蛋白及活性研究打下了基础。 展开更多
关键词 分泌型rhgm-csf/il-2融合蛋白 表达载体 构建 分泌表达
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猪瘟病毒E2-GM-CSF融合蛋白在HEK293T细胞中的表达和免疫原性分析 被引量:2
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作者 张艳敏 周亚南 +4 位作者 曹磊 田园 刘旭平 谭文松 赵亮 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第2期669-676,共8页
【目的】设计构建分泌表达E2-GM-CSF融合蛋白的HEK293T重组细胞,并评估表达的E2-GM-CSF融合蛋白的免疫原性,为猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)的防控提供新的候选亚单位疫苗。【方法】利用PCR方法扩增E2-GM-CSF基因并克隆... 【目的】设计构建分泌表达E2-GM-CSF融合蛋白的HEK293T重组细胞,并评估表达的E2-GM-CSF融合蛋白的免疫原性,为猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)的防控提供新的候选亚单位疫苗。【方法】利用PCR方法扩增E2-GM-CSF基因并克隆入慢病毒表达载体pCDH,将得到的重组慢病毒质粒pCDH-E2-GM-CSF包装成E2-GM-CSF慢病毒颗粒,转导HEK293T细胞,经嘌呤霉素加压筛选获得分泌表达E2-GM-CSF融合蛋白的HEK293T重组细胞,纯化表达的E2-GM-CSF融合蛋白经小鼠免疫试验验证其免疫原性。【结果】pCDH-E2-GM-CSF质粒经酶切鉴定,得到大小分别为8172 bp的载体片段和1521 bp的E2-GM-CSF基因片段,表明E2-GM-CSF基因成功克隆入pCDH载体;细胞基因组DNA PCR扩增结果为一条大小为1686 bp的条带,表明E2-GM-CSF基因成功整合至HEK293T细胞基因组;Western blotting分析获得约70 ku的条带,证明E2-GM-CSF融合蛋白在HEK293T细胞中成功分泌表达;SDS-PAGE验证显示,纯化后的E2-GM-CSF融合蛋白为单一条带,纯度较高,大小约70 ku;小鼠免疫血清ELISA检测结果表明,表达的E2-GM-CSF融合蛋白具有良好的免疫原性,免疫后第14天在小鼠血清中检测到效价为1∶300的E2特异性抗体,免疫后第21天E2特异性抗体效价达1∶900,免疫后第28天小鼠血清中的E2特异性抗体效价最高达到1∶8100,远高于E2蛋白的1∶1800。【结论】利用慢病毒载体构建的表达E2-GM-CSF融合蛋白的HEK293T重组细胞可正确分泌表达具有免疫原性的E2-GM-CSF融合蛋白,为CSFV的防控提供了新的候选亚单位疫苗,同时其构建、开发与评估过程也可为其他亚单位疫苗在哺乳动物细胞中的快速表达提供借鉴。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(csfV) E2-gm-csf融合蛋白 慢病毒载体表达系统 HEK293T细胞 免疫原性
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测定重组人白细胞介素—3(IL—3)等六种基因工程产品 被引量:3
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作者 蔡耘 杨松成 +1 位作者 王勇波 董方霆 《质谱学报》 EI CAS CSCD 1997年第2期22-26,共5页
本文应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI/TOF-MS)测定了重组人白细胞介素-3(IL-3)、人表皮生长因子(hEGF)等六种基因工程产品,建立了一种对基因工程产品进行质量控制的新方法,此方法稳定、快速、灵敏,准确度达0... 本文应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI/TOF-MS)测定了重组人白细胞介素-3(IL-3)、人表皮生长因子(hEGF)等六种基因工程产品,建立了一种对基因工程产品进行质量控制的新方法,此方法稳定、快速、灵敏,准确度达0.3%,仅需fmol样品即可测定。 展开更多
关键词 重组 质谱 il-3 HEGF TNF gm-csf G-CF bFGF
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