人参总皂甙对人GM-CSF和GM-CSFR表达的调控

为探讨人参调控粒细胞发生的生物学机制,采用造血祖细胞和骨髓基质细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学、核酸分子原位杂交、免疫沉淀和蛋白印迹等现代生物学技术,研究人参总皂甙(totalsaponins of Panax ginseng ,TSPG)对人粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)和粒-巨噬细胞集落刺激因子受体α(GM-CSFRα)表达的影响。结果:(1)经TSPG(50μg/ml)诱导制备的骨髓基质细胞、胸腺细胞、脾细胞、血管内皮细胞和单核细胞条件培养液可显著提高粒单系造血祖细胞(CFU-GM)的集落产率;(2)经TSPG(50μg/ml)诱导后,上述细胞的GM-CSF蛋白(诱导24 h)和mRNA(诱导12 h)表达显著提高;(3)经TSPG(50μg/ml)诱导24 h骨髓造血细胞的GM-CSFRα蛋白表达增强;(4)经TSPG(50μg/ml)刺激后2min,GM-CSFRα和Shc发生酪氨酸磷酸化,5 min时达高峰,随后去磷酸化。上述结果表明,TSPG可能通过直接和/或间接途径促进淋巴细胞与骨髓基质细胞合成与分泌GM-CSF,诱导骨髓造血细胞表达GM-CSFRα,并刺激GM-CSFRα和Shc的酪氨酸可逆磷酸化,从而通过调控GM-CSF的信号转导过程,促进CFU-GM的增殖。

雷公藤甲素对体外不同密度嗜酸细胞凋亡及GM-CSF受体αmRNA表达的影响

目的观察雷公藤甲素(Triptolide,TP)对哮喘豚鼠体外不同密度嗜酸细胞(Eos)凋亡及粒细胞-巨噬细胞克隆剌激因子受体α(GM-CSFRα)mRNA表达的影响,探讨TP促Eos凋亡的机制。方法卵蛋白激发哮喘豚鼠48h后,行支气管肺泡灌洗,分离低密度Eos(HEos)及正常密度Eos(NEos)。HEos及NEos分别与TP(10-7～10-4mol/L)共培养24h,以原位杂交检测Eos表达GM-CSFRαmRNA,3′末端脱氧核苷转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷(d-UTP)缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡。结果哮喘豚鼠不同密度Eos经TP干预24h后,细胞凋亡增加,与对照相比HEos在10-7mol/L时出现差异(P<0.05),NEos在10-6mol/L时出现差异(P<0.05),同时不同密度EosGM-CSFRαmRNA表达增加,与对照相比均在10-5mol/L时出现差异(P<0.05)。Eos凋亡与TP浓度呈剂量依赖性。HEos与NEos表达GM-CSFRα无差异(P>0.05)。不同密度Eos表达GM-CSFRα与Eos凋亡呈正相关(P<0.05)。结论TP可促进哮喘豚鼠不同密度Eos凋亡,提高GM-CSFRα mRNA表达,TP可通过提高Eos表达可溶型GM-CSFRα,抑制GM-CSF细胞因子活动,促进Eos凋亡。

地塞米松对不同密度嗜酸细胞凋亡及GM-CSF受体αmRNA表达的影响

目的:观察地塞米松(DM)对哮喘豚鼠体外不同密度嗜酸细胞(Eos)凋亡及粒细胞巨噬细胞克隆刺激因子受体α(GMCSFRα)mRNA表达的影响,探讨DM促进哮喘Eos凋亡的机制。方法:卵蛋白激发哮喘豚鼠动物模型,48h后行支气管肺泡灌洗,分离低密度及正常密度Eos(HEos,NEos)。HEos及NEos分别与DM(10-10～10-5)mol/L共培养24h,以原位杂交方法检测不同Eos的GMCSFRαmRNA表达,3′末端脱氧核苷转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷(dUTP)缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡。结果:DM干预24h后,在Eos凋亡增加的同时,不同密度EosGMCSFRαmRNA表达也增加,并与DM浓度呈剂量依赖性。GMCSFRα表达与Eos凋亡呈正相关(P<0.05)。结论:DM可促进不同密度Eos表达GMCSFRα,抑制其细胞因子活动,促进Eos凋亡。

氨茶碱对不同密度嗜酸细胞凋亡及其GM-CSF受体αmRNA表达的影响

目的观察氨茶碱(AM)对哮喘豚鼠体外不同密度嗜酸细胞(Eos)凋亡及粒细胞-巨噬细胞克隆剌激因子受体α(GM-CSFRα)mRNA表达的影响, 探讨AM促进哮喘Eos凋亡的机制.方法卵蛋白激发哮喘豚鼠动物模型48h后行支气管肺泡灌洗, 分离低密度及正常密度Eos(HEos,NEos).HEos及NEos分别与AM(10-6～10-3mol/L)共培养24h,以原位杂交方法检测不同Eos的GM-CSFRα mRNA表达, TUNEL法检测细胞凋亡.结果 AM干预体外不同密度Eos24h后,可见Eos细胞凋亡随AM浓度增加而增加,不同密度Eos GM-CSFRα mRNA表达也增加,并与AM浓度呈剂量依赖性.与NEos相比,HEos表达GM-CSFRα mRNA增加明显.HEos表达GM-CSFRα在10-4mol/L 时出现显著差异(P<0.05),而NEos在AM达到最高浓度10-3mol/L 时仍未出现显著差异(P>0.05).GM-CSFRα表达与Eos凋亡呈正相关(P<0.05).结论 AM可促进不同密度Eos表达GM-CSFRα,抑制其细胞因子活动,促进Eos凋亡.AM可通过增加嗜酸细胞GM-CSFRα表达调节Eos凋亡.

CD44抗体HI44a对急性髓系白血病细胞株HL-60细胞体外增殖、分化作用的研究

目的探讨CD44抗体HI44a对急性髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖、分化的作用机制。方法以急性髓系白血病细胞株HL-60为研究对象,以ATRA为阳性对照,以同型抗体IgG2a为阴性对照,以HI44a作为实验组,应用台盼蓝拒染法检测HI44a对HL-60细胞增殖的影响,瑞氏染色法及流式细胞学检测HI44a对HL-60细胞分化的影响,RT-PCR方法检测HI44a处理HL-60细胞前后TGFβ1和TGFβR1基因表达变化,应用荧光定量RT-PCR法检测HI44a处理HL-60细胞前后髓系分化相关的细胞因子及受体信号通路(GM-CSFRα、OPN)基因表达变化,以及DNA序列分析法检测HI44a处理HL-60细胞前后OPN异构体表达改变。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测实验组与对照组培养上清液的OPN水平。结果经HI44a作用后,HL-60细胞增殖受抑;细胞形态变化表现为体积变大,核固缩,核浆比例降低,核仁减少,出现核分叶等特征;细胞表面分化抗原CD15表达上调;HL-60细胞的GM-CSFRα及TGFβ1 mRNA表达水平增高,而OPN mRNA表达水平降低,TGFβR1 mR-NA表达水平无变化;OPN序列分析结果表明HI44a作用后OPN的3种异构体的组成发生改变,HI44a处理后的OPN水平明显下降。结论 CD44抗体HI44a通过上调GM-CSFRα、TGFβ1及下调OPN mRNA表达水平,减少OPN的分泌,抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞分化。