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茶尺蠖普通气味结合蛋白EoblGOBP2与茶树挥发物的结合功能研究 被引量:10
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作者 赵磊 崔宏春 +3 位作者 张林雅 陈玲 余继忠 李红亮 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期165-171,共7页
茶尺蠖是茶园中一种重要的鳞翅目害虫,主要以幼虫取食危害茶树叶片,给茶叶生产带来了严重威胁。茶尺蠖在寻找配偶、产卵地以及觅食活动中其嗅觉系统发挥了非常重要的作用。本研究以茶尺蠖Ectropis obliqua Prout嗅觉系统中的一个普通气... 茶尺蠖是茶园中一种重要的鳞翅目害虫,主要以幼虫取食危害茶树叶片,给茶叶生产带来了严重威胁。茶尺蠖在寻找配偶、产卵地以及觅食活动中其嗅觉系统发挥了非常重要的作用。本研究以茶尺蠖Ectropis obliqua Prout嗅觉系统中的一个普通气味结合蛋白——EoblGOBP2为研究对象,在克隆得到的EoblGOBP2基因基础上,通过对EoblGOBP2进行原核表达、分离纯化后,利用1-NPN的荧光竞争结合法研究了体外重组EoblGOBP2与茶树挥发物的结合生理功能。Scatchard方程显示EoblGOBP2与1-NPN的解离常数KD为2.310μmol·L-1。在荧光竞争结合实验中,7种待测配基均能使1-NPN的相对荧光强度降低到50%以下,表明与EoblGOBP2均有较强的结合能力,而其中邻苯二甲酸二丁酯结合能力最强,KD值达到4.353μmol·L-1。本研究7种配基均为茶树叶片挥发物,表明EoblGOBP2在茶尺蠖嗅觉系统对茶树挥发物的信息识别结合功能中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 茶尺蠖 普通气味结合蛋白(gobp) 原核表达 纯化 茶树挥发物 结合特性
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家蚕蛹和成虫期GOBP/PBP亚家族基因簇基因定位与表达分析 被引量:8
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作者 张升祥 张瑶 +4 位作者 徐世清 王更先 胡增娟 赵春晓 崔为正 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1069-1076,共8页
昆虫的气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆虫与外界环境化学信息交流过程中起着重要作用,对昆虫觅食、求偶、繁殖具有重要意义。普通气味结合蛋白/性信息素结合蛋白(general odorant binding protein/pheromone binding p... 昆虫的气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆虫与外界环境化学信息交流过程中起着重要作用,对昆虫觅食、求偶、繁殖具有重要意义。普通气味结合蛋白/性信息素结合蛋白(general odorant binding protein/pheromone binding protein,GOBP/PBP)是鳞翅目昆虫OBP家族的一个重要单系群。为进一步明确家蚕Bombyx moriGOBP/PBP基因的结构、表达及功能,本研究利用染色体定位及半定量表达分析方法对其进行了分析。染色体定位分析显示,这些基因以基因簇的形式存在于第19染色体的nscaf3052上,基因结构相似,转录方向一致,表明这些基因可能由同源基因复制产生,并具有类似功能。对家蚕蛹和成虫不同发育阶段的雌、雄虫多种组织中进行表达分析发现,这些基因的表达在不同发育时期和不同组织间差异明显(P<0.05),相对表达量均以触角中为最高,其他非嗅觉组织中也多有表达,性别间差异不大,说明了该基因簇基因除了具有嗅觉相关的功能外,很可能具有其他尚未被发现的功能。 展开更多
关键词 家蚕 气味结合蛋白 PBP1-gobp2亚家族 基因簇 表达分析 染色体定位
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茶尺蠖普通气味结合蛋白(GOBP)的基因克隆与序列分析 被引量:2
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作者 陈华才 刘军 +1 位作者 张晓燕 殷坤山 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期37-44,共8页
以触角总RNA为模板,根据同源性设计简并性引物,采用RT-PCR扩增结合RACE技术克隆获得了茶尺蠖(Ectropis obliqua)普通气味结合蛋白GOBP1和GOBP2基因的cDNA全长序列。分别命名为EoblGOBP1和EoblGOBP2。EoblGOBP1的cDNA全长为1 528 bp,开... 以触角总RNA为模板,根据同源性设计简并性引物,采用RT-PCR扩增结合RACE技术克隆获得了茶尺蠖(Ectropis obliqua)普通气味结合蛋白GOBP1和GOBP2基因的cDNA全长序列。分别命名为EoblGOBP1和EoblGOBP2。EoblGOBP1的cDNA全长为1 528 bp,开放阅读框501 bp,编码166个氨基酸残基,预测分子量Mw=18 835.63 D,等电点pI=5.45,cDNA和氨基酸序列在NCBI/GenBank的登录号分别为FJ156732和ACN29680.1。EoblGOBP2的cDNA全长为1 315 bp,开放阅读框405 bp,编码160个氨基酸残基,预测分子量Mw=18 002.75 D,等电点pI=5.32。cDNA和氨基酸序列在NCBI/GenBank的登录号分别为FJ156733和ACN29681.1。两个气味结合蛋白的氨基酸序列中都含有6个保守的半胱氨酸位点,具有气味结合蛋白的典型特征,与已报道的鳞翅目昆虫气味结合蛋白的同源性为分别62%~82%和76%~88%。 展开更多
关键词 茶尺蠖 普通气味结合蛋白(gobp) 全长序列 基因克隆 序列分析
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斜纹夜蛾普通气味结合蛋白GOBP1基因的表达定位分析 被引量:9
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作者 吴仲南 杜永均 诸葛启钏 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期610-616,共7页
气味调控斜纹夜蛾Spodoptera litura(鳞翅目,夜蛾科)的交配和产卵行为,而嗅觉气味结合蛋白(OBP)是昆虫与外界环境进行化学信息交流中的一种重要蛋白。本研究基于已报道的斜纹夜蛾普通气味结合蛋白GOBP1基因cDNA序列(GenBank登录号为EF15... 气味调控斜纹夜蛾Spodoptera litura(鳞翅目,夜蛾科)的交配和产卵行为,而嗅觉气味结合蛋白(OBP)是昆虫与外界环境进行化学信息交流中的一种重要蛋白。本研究基于已报道的斜纹夜蛾普通气味结合蛋白GOBP1基因cDNA序列(GenBank登录号为EF159978)设计引物,通过RT-PCR法分析了GOBP1 mRNA的组织特异性表达情况,并对GOBP1基因条带进行了克隆、测序和Blast比对。此外,再通过RNA原位杂交的方法进一步分析了GOBP1 mRNA在触角中的表达定位。结果表明:GOBP1只在斜纹夜蛾的触角组织中表达,而且GOBP1转录本较多分布于靠近嗅觉感受器即触角边缘部位。这些结果进一步说明GOBP1是斜纹夜蛾嗅觉过程中的重要蛋白,同时为深入研究GOBP1与其他蛋白的相互空间定位关系、GOBP1的功能等奠定了基础。 展开更多
关键词 斜纹夜蛾 普通气味结合蛋白 基因表达定位 原位杂交
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斜纹夜蛾普通气味结合蛋白基因SlitGOBP2的时空表达分析 被引量:2
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作者 郭晓洁 陈炳翰 +1 位作者 杨云惠 申建梅 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1970-1974,共5页
【目的】分析斜纹夜蛾普通气味结合蛋白(GOBP)基因(SlitGOBP2)的时空表达模式,为深入研究SlitGOBP2蛋白在斜纹夜蛾生长发育过程中的生理功能提供参考。【方法】以斜纹夜蛾为试验材料,分别收集并提取斜纹夜蛾卵、1~6龄幼虫、蛹共8个不... 【目的】分析斜纹夜蛾普通气味结合蛋白(GOBP)基因(SlitGOBP2)的时空表达模式,为深入研究SlitGOBP2蛋白在斜纹夜蛾生长发育过程中的生理功能提供参考。【方法】以斜纹夜蛾为试验材料,分别收集并提取斜纹夜蛾卵、1~6龄幼虫、蛹共8个不同发育时期和雌、雄成虫触角、喙、胸、前足、中足、后足、腹部、翅膀共16个不同组织的RNA;以斜纹夜蛾Actin为内参基因,采用半定量RT-PCR分别对SlitGOBP2基因在雌、雄虫不同组织及不同发育阶段的基因表达模式进行比较分析。【结果】SlitGOBP2基因在斜纹夜蛾雌、雄虫的触角、喙、胸、前足、中足、后足、腹部和翅膀各组织中均有表达,其中在雌、雄虫触角中的表达水平均最高,在雌虫的喙、前足、后足和翅膀次之且明显高于雄虫的相应部位;雌、雄虫胸部和腹部的表达水平基本相同;而雌虫在中足的表达水平略低于雄虫。SlitGOBP2基因在斜纹夜蛾1~4龄幼虫和蛹后期均有表达,且在1龄幼虫和蛹后期中表达量相对较高,而在卵期、5和6龄幼虫中不表达。【结论】SlitGOBP2蛋白除具有取食、寻找寄主和产卵场所等基本功能外,雌虫可能还具有感受其他特殊信息素的功能。 展开更多
关键词 斜纹夜蛾 普通气味结合蛋白(gobp) 表达模式
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Cloning and Sequencing of a Gene Encoding GOBP2 in the Antenna of Spodoptera exigua
6
作者 WANG Gui-rong, GUO Yu-yuan, XU Guang and WU Kong-ming( The Institute of Plant Protection , Chinese Academy of Agricultural Sciences , Beijing 100094 ) 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2002年第2期200-206,共7页
A pair of degenerate primers was designed, based on the comparison of five insects' GOBP2 gene sequences reported previously. A specific band (about 400bp in length) was amplified from cDNA of Spodoptera exigua an... A pair of degenerate primers was designed, based on the comparison of five insects' GOBP2 gene sequences reported previously. A specific band (about 400bp in length) was amplified from cDNA of Spodoptera exigua antenna and another specific band (about 2kb in length) was amplified from genomic DNA. The two segments were cloned into T-easy vector, respectively. Results of sequencing and structural analysis showed that the full-length of GOBP2Sexi ORF is 426bp, 141 amino acid residues were encoded. The predicted MW and pI are 16.07ku and 5.09 .respectively. There are six conservative Cys locus in the sequence, which is the typical characteristic of OBPs. GOBP2Sexi gene was inserted by two introns between amino acid residue 22 and 23 and between 82 and 83. The length of two introns is 160bp and 1403bp. Results of Northern blot showed that GOBP2 gene expressed specifically in the antenna of Spodoptera exigua, and the expression level is nearly equal in the antenna of male and female moths. The sequence was deposited in GenBank/EMBL and the accession number is AJ294809. 展开更多
关键词 Spodoptera exigua ANTENNA gobp2 Gene cloning
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昆虫气味结合蛋白基因家族序列多样性分析
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作者 余海忠 祝增荣 +3 位作者 杨璞 刘慧宏 杨霄 肖作安 《信阳师范学院学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2008年第1期64-69,共6页
运用PCR技术,获得了全长为416 bp的二化螟(Chilo suppressalis)触角普通气味结合蛋白(General Odorant Binding Proteins2,GOBPs2)保守区片段(GenBank:DQ447635),它编码的138个氨基酸残基中含有6个保守的半胱氨酸位点,具有气味结合蛋白... 运用PCR技术,获得了全长为416 bp的二化螟(Chilo suppressalis)触角普通气味结合蛋白(General Odorant Binding Proteins2,GOBPs2)保守区片段(GenBank:DQ447635),它编码的138个氨基酸残基中含有6个保守的半胱氨酸位点,具有气味结合蛋白的典型特征.凝胶电泳检测PCR产物表明GOBPs2基因在二化螟成虫触角中特异性表达且雌雄虫表达水平相当,但在除触角外的组织中不表达.统计了GenBank中已登录的54种昆虫130余条OBPs序列的分布类型,分别运用Clustal W、MEGA软件比对分析了GOBPs的相似性和同源性以及重新构建了OBPs、PBPs、GOBPs序列的系统发生树. 展开更多
关键词 昆虫 OBPs gobps PBPs 同源性 系统树
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小菜蛾普通气味结合蛋白2基因的原核表达与多克隆抗体制备 被引量:2
8
作者 徐红星 陈东旭 +1 位作者 张雅林 王敦 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2010年第2期194-198,共5页
本实验提取羽化3d的小菜蛾Plutella xylostella成虫触角总RNA,反转录合成cDNA,以此为模板PCR扩增出小菜蛾普通气味结合蛋白2基因,大小为492bp,Blast结果显示与多种昆虫的GOBP2具有较高的同源性。将该基因克隆到表达载体pMAL-c4E中,转化... 本实验提取羽化3d的小菜蛾Plutella xylostella成虫触角总RNA,反转录合成cDNA,以此为模板PCR扩增出小菜蛾普通气味结合蛋白2基因,大小为492bp,Blast结果显示与多种昆虫的GOBP2具有较高的同源性。将该基因克隆到表达载体pMAL-c4E中,转化宿主菌TB1(DE3),获得单克隆重组质粒pMAL-c4E-GOBP2。IPTG成功诱导pMAL-c4E-GOBP2表达出约60kDa的融合蛋白。优化诱导条件为3mmol/L终浓度IPTG、6h,可获得大量可溶性蛋白。表达的融合蛋白通过亲和色谱法纯化、免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。ELISA分析表明制备的抗体效价达1:1.28×105。 展开更多
关键词 小菜蛾 gobp2 原核表达 多克隆抗体
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烟青虫气味结合蛋白基因的克隆与序列分析 被引量:16
9
作者 吴少英 王桂荣 +3 位作者 吴孔明 郭予元 原国辉 郭线茹 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1817-1824,共8页
根据已经报道的棉铃虫普通气味结合蛋白I(GOBP1)和性信息素结合蛋白(PBP)基因的cDNA序列,设计了2对引物,以烟青虫Helicoverpaassulta触角cDNA为模板,分别进行PCR扩增,获得2条特异性条带,约400bp。将以上两条片段分别连接到T-easy载体上... 根据已经报道的棉铃虫普通气味结合蛋白I(GOBP1)和性信息素结合蛋白(PBP)基因的cDNA序列,设计了2对引物,以烟青虫Helicoverpaassulta触角cDNA为模板,分别进行PCR扩增,获得2条特异性条带,约400bp。将以上两条片段分别连接到T-easy载体上,获得重组子T-GOBP1-Hass和T-PBP-Hass。序列测定和结构分析表明,Hass-GOBP1开放阅读框全长441bp,编码147个氨基酸残基,预测分子量和等电点分别为17.2kD和4.71。Hass-PBP开放阅读框全长405bp,编码135个氨基酸残基,预测分子量和等电点分别为15.1kD和5.2。Hass-GOBP1和Hass-PBP具有昆虫气味结合蛋白的典型特征,即氨基酸序列中具有6个保守的半胱氨酸残基,呈酸性。这2个基因已在GenBank中登记,序列号分别是AY864774和AY864775。 展开更多
关键词 烟青虫 普通气味结合蛋白 性信息素结合蛋白 基因克隆 序列分析 气味结合蛋白 蛋白基因 烟青虫 序列分析 CDNA序列 氨基酸残基 GENBANK 开放阅读框 克隆
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淫羊藿多糖对寒凝血瘀大鼠肝脏基因表达的影响 被引量:2
10
作者 赵金椽 王宇 刘树民 《药物评价研究》 CAS 2021年第9期1862-1868,共7页
目的归纳大鼠寒凝血瘀模型在基因表达层面的肝脏功能变化和潜在的分子标记,并探讨淫羊藿多糖(EFPS)对基因表达的影响。方法雄性SD大鼠随机分为3组:对照组、模型组和EFPS(38.7 mg/kg)组,将模型组和EFPS组大鼠连续15 d每天14∶00时置于冰... 目的归纳大鼠寒凝血瘀模型在基因表达层面的肝脏功能变化和潜在的分子标记,并探讨淫羊藿多糖(EFPS)对基因表达的影响。方法雄性SD大鼠随机分为3组:对照组、模型组和EFPS(38.7 mg/kg)组,将模型组和EFPS组大鼠连续15 d每天14∶00时置于冰水浴1 h,造模的同时每天给药1次。取3组大鼠肝脏进行转录组测序,通过构建差异表达基因(DEGs)的基因本体(GO)中生物过程(BP)与京都基因和基因组百科全书(KEGG)网络,同时结合基因富集分析(GSEA),分别分析并比对各组大鼠的肝脏功能变化。结果与对照组比较,模型组大鼠肝脏基因表达变化表现为脂质代谢下调、细胞生长受负向调控、产生免疫反应以及对于温度的自稳态调节;与模型组比较,EFPS组大鼠肝脏基因表达变化表现出免疫回调、激素调控和基因表达调控发生改变。通过二者DEGs的等量共表达模式初步确立EFPS干预寒凝血瘀模型的分子标记为Ccl5、Cxcl13、Jund。结论长期冰冷导致的体寒通过大鼠肝脏表现出脂质代谢下调、细胞生长减缓、促进炎症反应,EFPS发挥免疫和激素调节作用。 展开更多
关键词 寒凝血瘀 淫羊藿多糖 差异表达基因 gobp 共表达 脂质代谢 细胞生长 免疫 激素
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