GPER抑制IGF2R表达介导缺血性脑卒中的抗炎作用

目的:探讨缺血性脑卒中(IS)的潜在治疗靶标及分子机制。方法:识别GSE16561和GSE22255数据中IS和对照之间的差异表达基因中的免疫相关基因,并进行富集分析。利用随机森林算法对基因进行重要性排序,并评价核心基因的诊断能力。鉴定IS中免疫细胞水平并与核心基因进行相关性分析。在IS和对照的外周血样本中验证关键基因和免疫细胞的水平。此外,在建立的大鼠IS模型中评价G蛋白偶联受体家族(GPER)的治疗作用及调控机制。结果:共鉴定了59个免疫相关的差异表达基因,显著参与MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路。选择重要性排序前10的基因作为核心基因,并发现胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)的诊断能力最高。IGF2R与中性粒细胞的相关性最大。分子实验验证了IGF2R和中性粒细胞在IS患者中显著升高。GPER治疗明显改善了大鼠缺血性脑卒中,并降低了模型大鼠中IGF2R的表达。结论:GPER对IS的治疗作用可能与降低IGF2R的表达有关。

雌激素激活GPER-EGFR-ERK通路促进人乳腺癌SKBR-3细胞系增殖

目的探讨G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)介导雌激素对人乳癌细胞系SKBR-3增殖的影响。方法激光共聚焦显微镜扫描检测钙离子探针标记的细胞内钙离子浓度随时间的变化,CCK-8法观测细胞的增殖生长,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测磷酸化细胞外信号调节激酶(phospho-extracellular regu-late kinase,p-ERK)的相对表达量。结果 17-β雌二醇(E2)与GPER激动剂(G1)(E2、G1处理组)刺激SKBR-3细胞后,细胞内钙离子浓度从120 s开始迅速升高,细胞增殖与对照组相比显著增加,CCK-8测定的(E2、G1处理组)相对细胞数分别是对照组的(2.08±0.07)倍和(2.00±0.04)倍;流式细胞术检测E2、G1处理组细胞增殖指数(PI)(E2、G1处理组)为(43.12±0.38)%、(42.43±0.52)%,较对照组(29.19±0.29)%明显增加(P<0.05);Western blot检测结果显示E2处理组p-ERK表达量显著高于对照组(P<0.05)。GPER特异性抑制剂G15、EGFR拮抗剂AG1478、ERK拮抗剂U0126均可抑制E2、G1触发的相应变化,PI3K拮抗剂WM则不能。结论雌激素激活GPER-EGFR-ERK通路促进人乳腺癌SKBR-3细胞系增殖。

新型雌激素受体GPER在乳腺癌MCF-7细胞他莫昔芬耐药中的作用及机制

目的研究乳腺癌他莫昔芬耐药细胞MCF-7R中新型雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)对促凋亡蛋白Bim的影响及其机制。方法倒置显微镜下观察MCF-7和MCF-7R经过浓度为1μmol/L的他莫昔芬(tamoxifen,TAM)处理后细胞形态的变化;qRT-PCR检测人乳腺癌细胞MCF-7及其他莫昔芬耐药株MCF-7R中促凋亡蛋白Bim(Bcl-2L11)的mRNA表达水平,Western blot检测两种细胞株Bim蛋白表达水平和两种细胞中总的GPER和膜上GPER的表达水平;两种细胞中分别以(无水乙醇、TAM、GPER特异性抑制剂G15+TAM、GPER特异性激动剂G1)处理后,检测Bim的蛋白表达水平;MCF-7R细胞中分别抑制PI3K-Akt及MAPK/Erk两条信号通路后,再加入TAM,检测Bim的蛋白水平;流式细胞术检测细胞凋亡。结果倒置显微镜下发现MCF-7细胞经TAM处理后细胞大部分变透亮且悬浮,而MCF-7R无明显变化;MCF-7R细胞中促凋亡蛋白Bim的mRNA水平及蛋白水平较MCF-7都降低(P<0.05);耐药细胞中总GPER的蛋白表达量较MCF-7无明显变化而膜上的表达量升高(P<0.05);MCF-7经TAM处理后,Bim蛋白表达量增加(P<0.05),而MCF-7R中却无明显变化,但在MCF-7R中加入GPER特异性抑制剂G15后再用TAM处理,Bim蛋白水平增加(P<0.05);耐药细胞中PI3K/AKT及MAPK/Erk信号通路处于活化状态,抑制MAPK/Erk信号通路后再加入TAM,耐药细胞中促凋亡蛋白Bim的表达量增加(P<0.05);在MCF-7中加入TAM后细胞凋亡率明显升高(P<0.05),MCF-7R经TAM处理后无明显差异,但抑制GPER或Erk信号通路后,再加入TAM处理,细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。结论乳腺癌TAM耐药细胞MCF-7R中TAM作为GPER的激动剂,活化信号通路MAPK/Erk抑制Bim表达。抑制GPER或MAPK/Erk信号通路,可使耐药细胞对TAM恢复敏感性。

内异康复片调控GPER-Ras-STAT3通路治疗子宫腺肌病的机制

目的探究内异康复片(鳖甲、牡蛎、大黄,等)对子宫腺肌病的治疗作用及其可能作用机制。方法通过异体垂体移植手术建立小鼠子宫腺肌病模型,采用不同剂量的内异康复片、丹莪妇康煎膏(丹参、莪术、赤芍,等)和孕三烯酮分别给药治疗,灌胃治疗3个月后取样,应用Western blot、real-time PCR、免疫组化SP法检测在位和异位内膜上的GPER-Ras-STAT3通路的表达。结果高剂量的内异康复片可以显著下调GPER蛋白(G蛋白偶联雌激素受体蛋白)和基因的表达,下调Ras和STAT3(信号转导和转录激活因子3)的蛋白表达,降低异位病灶严重程度的组织形态学评分,且其疗效优于丹莪妇康煎膏和孕三烯酮。结论内异康复片可能通过抑制GPER-Ras-STAT3通路活性,弱化雌激素的生成,从而控制异位病灶的发展。

双酚A对雄性小鼠生殖和睾丸GPER表达的影响及与肾虚不育的相关性研究

目的：探讨双酚A（Bisphenol-A,BPA）对雄性小鼠生殖和睾丸GPER表达的影响及与肾虚不育的相关性。方法：将6周龄雄性昆明小鼠随机分为正常、阴性对照、BPA、肾阳虚及肾阴虚组。高架十字迷宫和游泳力竭等实验评价小鼠惊恐程度、耐力等行为学改变;全自动精子分析仪检测精液质量,并计算平均育仔数;免疫组织化学和免疫荧光染色检测GPER在睾丸的定位和表达。结果：BPA与肾阳虚组小鼠均出现活动度和耐力下降及惊恐程度增加,精子数量与育仔数亦下降及精子畸形率增加及睾丸GPER的表达增加,且两组间无显著差异（P〉0.05）。结论：BPA致雄性小鼠生精障碍与肾阳虚不育具有相关性。

雌激素活化GPER介导的IL-6/STAT3通路促进乳腺癌细胞SKBR-3增殖作用

目的探讨雌激素活化膜性雌激素受体(G-protein coupled estrogen receptor,GPER)所介导的IL-6/STAT3炎症信号通路对乳腺癌SKBR-3细胞增殖能力的影响。方法用17-β雌二醇(E2)、GPER特异性激动剂(G1)、GPER特异性拮抗剂(G15)、IL-6中和抗体(Anti-IL-6)及STAT3特异性抑制剂JSI-124(cucurbitacin I)药物处理SKBR-3细胞后,分别得到对照组、E2处理组、G1处理组、E2+G15处理组、G1+G15处理组、E2+Anti-IL-6处理组、G1+Anti-IL-6处理组、E2+JSI-124处理组与G1+JSI-124处理组,用ELISA检测细胞培养液上清中IL-6的分泌量,CCK-8法检测细胞增殖能力的变化,Western blot检测细胞中p-STAT3与STAT3的蛋白表达水平。结果 E2和G1显著促进SKBR-3细胞上清中IL-6的分泌量,G15可显著阻断其分泌(P<0.05)。E2及G1药物处理细胞后增殖能力较对照组显著增强,相对细胞数分别为对照组的(1.68±0.13)倍与(1.74±0.21)倍,其促增殖作用被G15及IL-6中和抗体(Anti-IL-6)显著抑制(P<0.05)。E2及G1在不同时间点(1、3、6、12 h)均可显著促进细胞中p-STAT3的蛋白表达量,分别于12 h和3 h达到表达峰值,其蛋白相对表达量分别为对照组的(2.54±0.23)倍和(3.12±0.24)倍。G15、Anti-IL-6及JSI-124显著阻断以上变化(P<0.05)。JSI-124亦可明显抑制E2及G1所引起的促增殖效应(P<0.05)。结论雌激素活化膜性雌激素受体GPER促进乳腺癌SKBR-3细胞自分泌IL-6从而激活细胞中下游STAT3炎症信号通路,同时,GPER/IL-6/STAT3信号通路也介导了雌激素对细胞的增殖作用。

新型雌激素受体GPER在乳腺癌组织中的表达及与预后的相关性

目的探讨新型雌激素受体GPER在乳腺癌中的表达及与患者预后的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测241例乳腺癌患者手术标本中GPER蛋白的表达,利用χ2检验和t检验分析其与临床病理变量的关系,结合随访资料利用生存函数分析其与患者预后的关系。结果乳腺癌组织中GPER阳性表达率为64.7%,其表达与ER、PR的表达显著相关(P<0.05),与HER-2及其他临床病理指标(年龄、月经情况、肿瘤大小、TNM分期、组织学分级、病理类型)无相关性(P>0.05)。中位随访时间44.6月,GPER阳性肿瘤患者无进展生存时间和总生存时间较阴性患者长,但差异无统计学意义(P>0.05)。GPER的表达与乳腺癌患者内分泌治疗耐药也无相关性(P>0.05)。结论 GPER在大部分乳腺癌中阳性表达,但对患者预后无显著影响,可能不是乳腺癌的独立预后因子。

GPER在子宫内膜样腺癌中的表达及其与ER的相关性

目的:研究GPER(G protein-coupled estrogen receptor)在子宫内膜样腺癌(EEC)组织中的表达情况,探讨GPER对EEC临床病理因素、预后的意义及其与雌激素受体(ER)之间的相关性。方法:采用实时定量PCR技术检测EEC组织中的GPER mRNA含量,免疫组化法检测GPER蛋白含量,分析GPER表达对EEC的临床意义。结果:GPER高表达于FIGO晚期、低分化、子宫肌层深浸润及淋巴转移的EEC组织中。单因素分析结果显示,GPER mRNA高表达的患者预后较差(OS,P=0.001;DSS,P=0.001;PFS,P<0.001),GPER蛋白阳性的患者预后亦较差(OS,P=0.009;DSS,P=0.009;PFS,P<0.001)。多因素分析发现,GPER不是影响EEC患者预后的独立因子。GPER与ER无统计学相关性。结论:GPER不是EEC预后的独立因子,但在其临床生物学行为中扮演重要的角色。

雌激素受体GPER在乳腺癌中的研究现状

G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER,也称GPR30)在多种类型细胞中均可介导雌激素信号,其在乳腺癌、子宫内膜癌等激素敏感性肿瘤细胞中的作用尤为明显。雌激素及抗雌激素药物通过激活GPER促进下游信号通路的活化及靶基因的表达进而参与乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭及他莫昔芬耐药等恶性生物学行为。目前发现表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的转活是GPER引发下游生物学效应的关键靶点。此外,GPER还被认为是预测三阴乳腺癌患者预后的潜在生物学标志物之一,对GPER的深入研究可能为乳腺癌患者的综合性评估和临床治疗打开更广阔的前景。

GPR30/GPER介导雌激素快速效应的研究进展

雌激素不仅在生殖系统,而且还在机体其他多个系统中发挥重要的生理作用。雌激素对靶细胞的作用除了传统的基因组效应外还具有快速非基因组效应。近年来的研究发现,一种膜结合的雌激素受体:G蛋白耦联受体30(GPR30)又称G蛋白耦联雌激素受体(GPER),与雌激素结合后可通过调节激酶活性、影响第二信使分子、调节基因转录,从而介导雌激素对靶细胞的快速效应。GPR30介导的快速效应在生殖、心血管、神经和免疫系统的生理功能中都发挥重要的作用,并与肿瘤密切相关。对GPR30介导的雌激素快速效应的特异生物学功能和作用机制的研究,将为研制新一代用于治疗雌激素相关疾病的药物提供新的思路。

GPER抑制剂PTX对雌激素作用下子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨G蛋白偶联雌激素受体(GPER)抑制剂百日咳毒素(PTX)对17β-雌二醇(E2)作用下子宫内膜癌系ER阳性的Ishikawa及ER低表达的HEC-1A的细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,初步探讨阻断GPER介导的信号传导通路治疗子宫内膜癌的可行性。方法:选取对数生长的细胞随机分为空白对照组(不加任何试剂)、阴性对照组(加10-6mol/L E2)和实验组(10-6mol/L E2+PTX)。应用四甲基亚唑蓝(MTT)法、流式细胞术观察PTX对E2作用下的子宫内膜癌的细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果:(1)随着E2浓度的增加和作用时间的延长,子宫内膜癌Ishikawa细胞在490nm处光密度值增大。E2对Ishikawa细胞具有促增殖作用,且呈时间和浓度依赖性(P均<0.001),而对HEC-1A的细胞增殖作用不显著(P=0.393),各浓度之间差异均无统计学意义(P=0.137)。不同浓度E2作用48h后,Ishikawa细胞G0～G1期比例减少(P=0.001),S期比例增多(P=0.002),HEC-1A变化不显著。(2)随着PTX浓度增加及时间延长,两种细胞增殖能力逐渐下降并呈时间和浓度依赖性(P均<0.001);不同浓度PTX作用48h后,两种细胞的凋亡率、G0～G1比例均升高(P<0.001,P<0.05),S期比例在Ishikawa细胞无显著变化,在HEC-1A细胞降低,G2～M期比例在Ishikawa细胞降低,在HEC-1A细胞无显著变化。结论:PTX可以抑制E2对子宫内膜癌细胞的促增殖作用,促使其发生凋亡,抑制细胞周期进展。GPER介导的信号传导通路可能成为治疗子宫内膜癌的新靶点。

镉通过GPER1-ERK/AKT通路促进甲状腺癌WRO细胞系增殖

目的检测镉对甲状腺癌WRO细胞系的增殖作用,及G蛋白偶联雌激素受体1(GPER1、GPR30)在该过程中的作用。方法 Western blot检测MCF-7、MDA-MB-231及WRO 3种细胞系GPER1的表达;将3种细胞分别分为7组进行处理:空白对照组、镉(Cd)(250、500、750及1 000 nmol/L)处理组、17β-雌二醇(E2)(10 nmol/L)处理组和GPER1特异性激动剂(G1)(10 nmol/L)处理组,MTT法检测细胞增殖;将WRO细胞分组并进行处理:1)空白对照组、Cd(5、10、15及30 min)处理组、E2(15 min)处理组和G1(15 min)处理组;2)空白对照组、GPER1特异性拮抗剂(G15)处理组、Cd+G15处理组、E2处理组和E2+G15处理组;3)空白对照组、Cd处理组、Cd+scramble siRNA处理组和Cd+GPER1 siRNA处理组;Western blot检测上述3种情况中各组磷酸化ERK和AKT及总的ERK和AKT蛋白表达水平;将WRO细胞分为6组进行处理:空白对照组、Cd处理组、Cd+G15处理组、Cd+ERK抑制剂(PD98095)处理组、Cd+AKT抑制剂(LY294002)处理组和Cd+GPER1 siRNA处理组,MTT法检测细胞增殖。结果 WRO为GPER1阳性;低浓度Cd促进细胞增殖(P<0.05),500 nmol/L Cd效果最明显;随Cd处理时间延长,ERK和AKT蛋白磷酸化水平升高(P<0.05),15 min时最高;G15或GPER1 siRNA抑制Cd或E2诱导的ERK和AKT蛋白磷酸化水平上升(P<0.05);G15、LY294002、PD98059及GPER1 siRNA减弱Cd诱导的细胞增殖。(P<0.05)。结论镉通过GPER1激活GPER1-ERK/AKT信号通路促进甲状腺癌WRO细胞增殖。

GSA、GPER软件在粒度沉积环境识别中的应用

介绍河南油田引进的粒度数据处理及沉积环境识别系统 (GSA、GPER)原理并进行测试。粒度分布是一个混合正态粒度 (Φ )分布 ;沉积环境决定了子正态分布组合形式 ,即子正态分布组合与沉积环境有一定的对应关系。利用数学方法求解各个子正态分布参数 ,这些数据将具有最全面、最简洁的指相意义。系统采用BP神经网络完成子正态分布参数组合到沉积环境的复杂对应关系 。

G蛋白耦联雌激素受体（GPER）作为三阴性乳腺癌治疗靶标的研究

目的三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）指的是雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人表皮生长因子受体2（HER2）均为阴性的一类乳腺癌亚型.其靶向治疗已成为当前乳腺癌领域亟待解决的关键问题.本研究在于探讨G蛋白耦联雌激素受体（G protein coupled estrogen receptor,GPER）作为TNBC潜在治疗靶标的可行性.利用Real-Time、Westernbot检测GPER在TNBC细胞中的表达,并利用流式细胞仪观察GPER活化后周期及凋亡发生情况,并结合划痕试验、Confocal、免疫荧光等手段探讨GPER活化后调控TNBC细胞侵袭转移的相关机制.结果表明GPER在TNBC细胞株中高表达.其特异性激动剂G-1可明显抑制MDA-MB-231和SkBr3细胞增殖,并造成细胞G2/M期阻滞,剂量依赖性下调cyclinB的表达.GPER活化后可上调p53的mRNA及蛋白表达,并促进其入核,降低其泛素化水平并增强其Ser15的磷酸化,从而抑制细胞增殖.进一步研究表明,G-1可持续性活化ERK1/2,并通过GPER/EGFR/ERK1/2下调cy-clinB的表达.且G-1可通过GPER/EGFR/ERK1/2上调p21并磷酸化p53,从而抑制细胞增殖.裸鼠移植瘤实验发现G-1可明显抑制肿瘤生长并提高其生存率,同时瘤内的cyclinB、Bcl-2表达明显下调.从而表明GPER活化可抑制TNBC的体内外生长.进一步研究表明,GPER的活化可以抑制TNBC细胞株MDA-MB-231及BT-549等体外侵袭转移,并阻止其发生上皮间质化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）,机制研究发现GPER活化后可诱导PKA、PI3K/Akt、及PKC的活化,并通过磷酸化GSK-3β从而抑制NF-κB的磷酸化、核转位、及转录活性,从而下调纤连蛋白FN（Fibronectin）的表达.以上研究结果表明GPER活化可抑制TNBC细胞的体内外增殖及侵袭转移,从而提示其是TNBC潜在的重要治疗靶点.

新型雌激素受体GPR30/GPER1及其在乳腺癌中的作用

G蛋白偶联受体30(G protein-coupled receptor 30,GPR30)作为一种新型雌激素受体被发现,它与经典雌激素受体没有同源性,作用机制和效应也均有不同,主要通过表皮生长因子受体转活后的蛋白激酶途径和第二信使cAMP、Ca2+介导快速非基因效应,继而调节转录因子的转录活性。在ER(-)乳癌细胞中,它促使肝素结合表皮生长因子前体pro-HB-EGF转变为HB-EGF并释放,反式激活表皮生长因子受体。它不但构建了慢速基因效应和快速非基因效应的交互通话,还沟通了雌激素和表皮生长因子,使雌激素具有表皮生长因子类似的功能,它介导了雌激素靶器官癌症细胞的发生发展,是新型的肿瘤标志物,同时促使乳癌细胞产生耐药性。本文就GPR30/GPER1的研究进展进行综述并论述它在乳腺癌中的作用,对其在乳腺癌研究和治疗中的前景进行展望。

子宫内膜癌患者BRCA1和GPER的表达及其与预后的关系

目的探讨子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)组织中乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)及G蛋白偶联受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)表达水平及其与病理特征的相关性,并分析其与患者预后的关系。方法采用免疫组织化学染色法检测EC标本中BRCA1、GPER蛋白的表达。χ^(2)检验分析BRCA1及GPER的表达与患者临床病理参数的相关性。BRCA1、GPER与不同病理种类子宫内膜癌的相关性使用多元Logistic回归分析。COX回归方法分析EC预后的独立风险因子。结果BRCA1的表达与EC患者病理类型、组织分化、肌层浸润相关(P<0.05)。GPER的表达与EC患者临床分期、预后相关(P<0.05)。GPER与BRCA1在EC中表达呈负相关性(P<0.05)。国际妇产科联盟分期、年龄、GPER表达情况是EC预后独立危险因素。结论EC组织中BRCA1、GPER的表达与EC部分临床病理特征相关,二者表达呈负相关性,GPER表达水平与EC患者总体预后有关,二者联合检测有望成为EC诊断和治疗的靶点。

沉默GPER1表达逆转乳腺癌细胞三苯氧胺耐药的实验研究

目的探讨沉默G蛋白偶联雌激素受体1(GPER1)对乳腺癌MCF-7细胞三苯氧胺(TAM)的逆转作用及可能的作用机制。方法体外培养乳腺癌TAM耐药细胞株MCF-7 TAMR及其亲本非耐药细胞株MCF-7,采用MTT法检测MCF-7 TAMR细胞对TAM的耐药性。shCtrl、shGPER1-1、shGPER1-2和shGPER1-3分别转染MCF-7 TAMR细胞为shCtrl组、shGPER1-1组、shGPER1-2组和shGPER1-3组,另设空白对照组(CTL组),实时荧光定量PCR(QPCR)鉴定转染效果。采用MTT法和Ca 2+荧光检测法检测shGPER1-1组细胞增殖活性和Ca 2+变化。Western blotting检测各组自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ)和Beclin 1表达;采用免疫荧光技术观察细胞自噬泡的形成情况。结果MCF-7和MCF-7 TAMR对TAM的半数抑制浓度(IC 50)分别为1.15 nmol/L和19.47 nmol/L。MCF-7 TAMR的耐药指数(RI)为16.93。MCF-7细胞和MCF-7 TAMR细胞中GPER1的表达水平分别为1.00±0.08和1.27±0.12,差异有统计学意义(P<0.05)。shGPER1-1、shGPER1-2、shGPER1-3组中GPER1的表达水平分别为0.45±0.09、0.66±0.08、0.91±0.07,均较CTL组和shCtrl组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。shGPER1-1组经TAM作用1~2 min内细胞内Ca 2+浓度迅速升高,而CTL组和shCtrl组变化不明显。0.01、0.1、1、10、100 nmol/L TAM对shGPER1-1组细胞的增殖抑制率分别为(5.44±1.79)%、(17.64±2.34)%、(40.56±3.79)%、(69.51±3.70)%、(76.62±4.15)%,高于CTL组和shCtrl组细胞(P<0.05)。IC 50为2.41 nmol/L。shGPER1-1组对TAM的敏感性较CTL组增加7.08倍。shGPER1-1组Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白表达量分别为0.45±0.10、0.33±0.07,低于CTL组和shCtrl组(P<0.05);shGPER1组LC3-Ⅱ荧光斑点的数量明显少于CTL组和shCtrl组。结论沉默GPER1表达可逆转MCF-7 TAMR细胞对TAM的耐药性,其可能的作用机制可能与抑制细胞保护性自噬有关。

基于GPER/PI3K/AKT通路探究四物汤对成骨细胞的雌激素样效应及其分子机制

目的:利用SD大鼠颅骨原代培养成骨细胞研究四物汤的雌激素样效应及其分子机理。方法:40只未性成熟SD大鼠,体重50 g,按照随机分组原则分为5组:正常对照组、雌激素组和四物汤高、中、低剂量组。四物汤灌胃给药,持续4天后腹主动脉取血,制备含药血清。利用出生72 h内的乳鼠提取并培养原代成骨细胞(rats osteoblast,ROBs),并选取第2或3代的细胞进行实验研究。用四物汤含药血清作用ROBs细胞,并分别加入G蛋白偶联雌激素受体(GPER)的特异性激动剂G1和特异性拮抗剂G15作为工具药,通过MTT法检测各组含药血清对ROBs细胞增殖的影响;通过细胞免疫荧光法检测含药血清对ROBs PI3K、AKT、p-Akt表达的影响。结果:显微镜下形态学观察和ALP结果表明,原代ROBs提取和培养成功;四物汤含药血清可促进ROBs增殖(P<0.05或P<0.01),该促增殖作用在加入拮抗剂G15后明显减弱(P<0.01),加入激动剂G1后明显增强(P<0.05或P<0.01);利用细胞免疫荧光技术检测发现四物汤含药血清可提高PI3K、p-Akt在ROBs细胞的荧光表达强度,且该效应在加入G1后增强(P<0.05或P<0.01),加入G15后减弱(P<0.05)。结论:四物汤可通过GPER通路发挥雌激素样效应,促进成骨细胞增殖,提高GPER介导下游信号分子PI3K、p-Akt的表达水平。

雌激素膜性受体GPR30/GPER的研究现状

雌激素对女性生理变化或病理改变都起到重大的作用。传统理论认为,雌激素通过经典受体ERα/β调控转录反应或介导细胞信号转导。G蛋白耦联受体30(GPR30),又称G蛋白耦联雌激素受体(GPER),是一种新型的雌激素受体,能与雌激素或其衍生物、拮抗剂特异性结合并发挥生物学效应。近期发现在恶性肿瘤,如乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌中有GPR30过表达。研究GPR30与恶性肿瘤发生发展的关系,以期在雌激素相关疾病尤其是肿瘤中寻找新的治疗靶点。

GPER特异性拮抗剂G15对子宫内膜癌侵袭、迁移的影响及作用机制

目的探讨G蛋白偶联雌激素受体GPER特异性拮抗剂G15对子宫内膜癌细胞Ishikawa、HEC-1A、KLE侵袭、迁移的影响及相关作用机制。方法应用划痕愈合及Transwell迁移、侵袭实验检测不同浓度G15作用不同时间对子宫内膜癌细胞Ishikawa、HEC-1A、KLE迁移能力的影响。应用Western blotting检测Ishikawa、HEC-1A、KLE细胞中GPER、MMP9及ERK蛋白表达水平的变化。结果划痕愈合实验及Transwell小室实验显示,随着G15浓度的增加和作用时间的延长,经E2处理的HEC-1A、KLE细胞迁移能力逐渐增强,而G15对经E2处理的Ishikawa细胞迁移能力的抑制作用较弱。Western blotting结果显示,G15可显著抑制E2诱导的HEC-1A、KLE细胞GPER、ERK、MMP9蛋白表达上调。而在Ishikawa细胞中,G15仅能抑制GPER的表达,对ERK、MMP9蛋白的表达无显著影响。结论G15可抑制经E2处理的子宫内膜癌细胞Ishikawa、HEC-1A、KLE的迁移能力,且对ER低表达HEC-1A细胞和ER阴性KLE细胞迁移能力的抑制作用更为显著,而GPER/ERK/MMP9信号通路在这一过程中发挥重要作用。因此,GPER特异性拮抗剂G15有望成为子宫内膜癌新型靶向治疗药物。