糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)对髓性白血病骨髓细胞黏附功能的影响及机制探讨

为了探讨糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPIPLD)对髓性白血病骨髓单个核细胞黏附功能的影响及其机制,利用具有完整糖基化磷脂酰肌醇(GPI)结构的胎盘碱性磷酸酶(PLAP)做底物,通过TX114分相,定量检测骨髓单个核细胞中GPIPLD活性,用1,10二氮杂菲抑制GPIPLD的活性,用MTT方法检测抑制组和非抑制组骨髓细胞对纤连蛋白的黏附率,用免疫组织化学方法检测GPI锚定蛋白CD24的表达。结果显示:1,10二氮杂菲(1mmol/L)作用骨髓单个核细胞5小时可使细胞的GPIPLD的活性由(42.08±7.21)%降为(5.4±2.96)%,GPIPLD活性被抑制后细胞的黏附率增加,由(49.78±26.73)%升为(61.19±29.14)%,与此同时,CD24的表达率上调,由(16.02±9.68)%升为(18.5±11.14)%。结论:降低GPIPLD活性能增加骨髓单个核细胞对纤连蛋白的黏附率,与此同时,骨髓单个核细胞上GPI锚定蛋白CD24的表达增强。

重组人磷脂酶D2在体内能明显抑制慢性哮喘豚鼠血清中GPI-PLD的表达(英文)

通过建立慢性豚鼠哮喘模型,研究重组人磷脂酶D2(rhPLD2)干预慢性哮喘豚鼠血清中糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)含量的变化,探寻可能的机制.以rhPLD2干预慢性哮喘豚鼠,用TX-114分相法检测豚鼠血清中GPI-PLD酶活性.与正常状态豚鼠相比较,慢性哮喘状态豚鼠其血清中GPI-PLD酶活性显著升高.但以rhPLD2及地塞米松干预慢性哮喘豚鼠后,该指标显著下降.rhPLD2可通过抑制其血清中GPI-PLD酶活性表达,来抑制哮喘发生过程中的炎症反应.

影响血清中GPI-PLD活性检测的因素

采用在碱性条件下正丁醇抽提的人胎盘膜上的碱性磷酸酶（ＡＬＰ）作底物， 检测血清中糖基磷脂酰肌醇－ 特异性的磷脂酶Ｄ （ＧＰＩ－ＰＬＤ） 的活性水平． 这种ＡＬＰ 含疏水的ＧＰＩ锚定膜结构（ａｎｃｈｏｒ）， 与血清保温后能被其中的ＧＰＩ－ＰＬＤ降解成亲水的不含ＧＰＩ－锚定的ＡＬＰ． 采用Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１１４ 二相分离法和梯度凝胶电泳法来分离含ＧＰＩ的ＡＬＰ和不含ＧＰＩ的ＡＬＰ， 计算出转化率（％ ）， 用来表示ＧＰＩ－ＰＬＤ酶活性． 对这两种方法进行比较后， 表明在一般实验室条件下， 二相分离法更为简便， 并对其影响因素进行了全面探讨．

GPI-PLD的表达在甲状腺癌诊断中的临床意义

目的：探讨甲状腺癌患者糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D（GPI-PLD）的活性变化,为甲状腺癌患者的诊断提供依据.方法：利用具有糖基化磷脂酰肌醇（GPI） 结构的胎盘碱性磷酸酶（PLAP）做底物,通过TX-114分相,定量检测外周血单个核细胞和血浆中GPI-PLD活性,并采用荧光定量PCR外周血单个核细胞中GPI-PLD mRNA水平,分析其表达量与甲状腺癌之间的关系.结果：甲状腺癌患者外周血单个核细胞和血浆中GPI-PLD酶活性分别为（24.15±2.33）%和（29.71±1.52）%,明显低于正常外周血中GPI-PLD酶活性（P＜0.001）,且甲状腺癌患者单个核细胞GPI-PLD活性仅为其血浆中酶活性水平的81.29%,二者之间有显著性差异（P〈0.05）;甲状腺癌患者外周血单个核细胞中GPI-PLD mRNA表达平均值为（0.46±0.17）×10^3copy/ng total RNA,明显低于正常人外周血单个核细胞中的表达水平（1.35±0.41）×10^3copy/ng total RNA （P＜0.001）.结论：GPI-PLD在甲状腺癌患者中活性及表达明显降低,有可能作为甲状腺癌诊断的指标之一.

全反式维甲酸对白血病HL-60细胞株GPI-PLD基因表达的影响

目的研究用分化诱导剂全反式维甲酸(ATRA)培养HL-60细胞株后GPI-PLD的表达变化,以初步探讨该酶在全反式维甲酸(ATRA)作用下的变化及其与白血病细胞生长增殖的关系。方法用ATRA处理HL-60细胞后,以胎盘碱性磷酸酶为底物,定量检测GPI-PLD活性;RT-PCR法确定GPI-PLD mRNA表达水平;MTT检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期。结果加入全反式维甲酸培养后,HL-60细胞株中GPI-PLD表达量和活性增加。流式细胞仪检测显示细胞阻滞在G2/M期;MTT实验检测显示ATRA处理后HL-60细胞株增殖生长受到抑制。结论加ATRA处理后HL-60细胞株增殖生长受到抑制,可能与GPI-PLD表达量显著增加有关。

GPI-PLD抗实验性大鼠动脉粥样硬化形成的初步研究

目的:探讨糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶(GPI-PLD)对实验性动脉粥样硬化大鼠血脂水平及血管功能、形态的影响。方法:雄性大鼠随机分为三组,静脉输入生理盐水对照组、高表达GPI-PLD(+)细胞组和GPI-PLD(-)细胞组。高脂喂养与维生素D注射(60万IU/kg)建立大鼠动脉粥样硬化模型。实验第6周末,检测血脂水平(总胆固醇,甘油三酯,低密度脂蛋白、高密度脂蛋白)和血清GPI-PLD活性,观察主动脉病理形态学,检测主动脉对乙酰胆碱诱导的内皮依赖性舒张反应。结果:与生理盐水对照组、GPI-PLD(-)细胞组比较,输入高表达GPI-PLD(+)细胞组大鼠的血GPI-PLD活性增加,总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白量减少,而高密度脂蛋白增多(P<0.01);动脉内皮细胞较完整,血管增厚程度明显减轻,泡沫细胞数量明显减少;结论:GPI-PLD可抑制高脂喂养大鼠动脉粥样硬化形成。

糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D对髓系白血病骨髓细胞黏附功能的影响及其机制(英文)

背景:据作者查新检索medline,cnki等数据库,鲜见国内外有关体外研究糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(glycosylphosphatidilinoditol-specific phospholipaseD,GPI-PLD)对白血病细胞黏附功能影响方面的报道。目的:观察GPI-PLD对髓系白血病骨髓单个核细胞黏附功能的影响及其机制。设计、时间及地点:细胞学体外实验,于2004-01/06在湘雅医院血液实验室完成。对象:骨髓标本来自于髓系白血病患者,由湘雅医院血液科提供。方法:利用具有完整糖基化磷脂酰肌醇(GPI)结构的胎盘碱性磷酸酶做底物,通过TX-114分相,定量检测骨髓单个核细胞中GPI-PLD活性,利用1,10-二氮杂菲抑制GPI-PLD的活性,实验分2组:处理组加二氮杂菲,使其终浓度为1mmol/L,对照组加入等量的PBS。用MTT方法检测处理组和对照组骨髓细胞对纤维连接蛋白的黏附率、免疫组织化学方法检测GPI-锚定蛋白CD24的表达。主要观察指标:髓系白血病细胞GPI-PLD活性,细胞黏附率及CD24的表达。结果:1mmol/L1,10-二氮杂菲作用髓系白血病骨髓单个核细胞5h细胞的GPI-PLD活性较对照组降低[(5.40±2.96)%,(42.08±7.21)%,P<0.01];GPI-PLD的活性被抑制后处理组细胞的黏附率较对照组增加[(61.19±29.14)%,(49.78±26.73)%,P<0.01],同时CD24的表达率上调[(18.5±11.14)%,(16.02±9.68),P<0.01]。结论:降低GPI-PLD活性能增加骨髓单个核细胞对纤维连接蛋白的黏附率,同时骨髓单个核细胞上GPI-锚定蛋白CD24表达增强。

人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的基因结构初探

探讨人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D (GPI PLD)的cDNA及其基因组基因的结构。从人骨髓基质细胞克隆出的GPI PLDcDNA中发现 ,它能编码信号肽 ,其编码的酶蛋白成熟肽为 817个氨基酸残基。该GPI PLDcDNA与从人肝组织和胰腺组织克隆到的GPI PLDcDNA的碱基序列的同源性分别为 95 %和 99%。人GPI PLD基因组基因定位于 6p2 2 .1～ 2 2 .3区域 ,包含 2 5个外显子 ,其上游调控区具有启动子 (TATA盒与CAAT盒 )、增强子核心序列 (TGGAAG)及同源转换盒Pit 1/GHF 1结合序列 (TATGCATAA)等顺式作用元件。

急性髓系白血病骨髓单个核细胞糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D mRNA的表达与意义

本研究探讨糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(glycosylphosphatidilinoditol-specific phospholipase D,GPI-PLD)在急性髓系白血病病人骨髓单个核细胞中的表达及其意义。采用半定量RT-PCR和酶转化底物的百分率的方法检测急性髓系白血病初发组、难治复发组、缓解组与正常对照组骨髓单个核细胞GPI-PLD酶活性和mRNA表达,并比较它们之间的差异。结果显示:急性髓系白血病初治组骨髓单个核细胞GPI-PLD mRNA表达和GPI-PLD活性分别为1.86±0.32、(46.96±7.15)%;缓解组分别为1.26±0.29和(33.36±5.13)%;难治复发组分别为1.79±0.19和(44.31±7.22)%;而正常对照组分别为1.27±0.23和(35.38±5.15)%。初治组和难治复发组的GPI-PLD活性与mRNA表达均明显高于正常对照组,差异具有统计学意义(p<0.01);而缓解组与正常对照组之间比较,差异无统计学意义(p>0.05)。结论:GPI-PLD活性和mRNA表达水平变化一致;初治组和难治复发组急性髓系白血病病人骨髓单个核细胞GPI-PLD活性与mRNA表达水平明显高于正常组。GPI-PLD是否在白血病的发生、发展过程中发挥一定作用,有待进一步研究。

糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的表达与白血病细胞黏附和侵袭性的关系

目的比较髓性白血病细胞K562、HL-60和THP-1黏附、迁移能力以及糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)的表达,探讨GPI-PLD表达与不同白血病细胞黏附性、迁移性的关系。方法采用黏附实验和体外穿膜实验比较3种不同白血病细胞的黏附性和侵袭性;半定量RT-PCR检测这些白血病细胞GPI-PLD和uPAR mRNA的表达水平;免疫印迹法检测细胞GPI-PLD的表达;流式细胞术检测细胞膜uPAR的表达。结果 THP-1细胞中GPI-PLD和uPAR的mRNA及蛋白质表达水平均明显高于K562和HL-60细胞。THP-1细胞对Fn的黏附率显著高于K562、HL-60细胞;THP-1与HL-60细胞体外穿膜侵袭能力显著高于K562细胞。结论 THP-1细胞较K562和HL-60细胞具有较高的黏附和侵袭能力,与其GPI-PLD和锚定蛋白uPAR表达有关。

竞争性RT-PCR法定量检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D基因的表达

目的 :建立一种定量检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)基因表达水平的竞争性RT PCR方法 ,以研究GPI PLD与白血病等疾病的关系。方法 :首先用PCR定点诱变法构建GPI PLD的竞争性cDNA模板 ,该模板与靶cDNA具有相同的引物结合区 ,但在长度上要比靶cDNA少 2 0个碱基。把该竞争性cD NA模板在体外转录出的竞争性RNA作为RT PCR的内标准 ,与白血病细胞株K5 6 2细胞的总RNA在同一体系内进行逆转录和PCR扩增 ,二者的PCR产物因长度不同可经电泳区分开 ,然后对电泳图像进行光密度扫描 ,根据已知的竞争性RNA模板的量计算出GPI PLDmRNA的量 ,从而得到GPI PLD基因的绝对表达量。结果 :构建和制备了长度为 198bp的GPI PLD竞争性RNA模板 ,该模板与靶模板呈明显的竞争性RT PCR反应 ;测得K5 6 2细胞GPI PLD基因的表达水平为每纳克 (44 0± 2 0 )拷贝。结论 :成功地建立了一种定量检测GPI PLD基因表达水平的竞争性RT PCR方法 ,该方法具有灵敏、准确等优点。

鼻咽癌患者糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D活性及其表达水平的初步研究

目的①通过研究正常人和鼻咽癌患者的糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)的酶活性和酶促反应的3-D图,探索鼻咽癌患者该酶活性的变化情况及该酶促反应的可能机制。②通过研究正常人和鼻咽癌患者GPI-PLD mRNA的表达水平,探寻鼻咽癌患者该酶活性变化的可能机制,为鼻咽癌的诊断、预后估计提供有效指标。方法①采用我室自制的具完整GPI结构的胎盘型碱性磷酸酶(PLAP)作底物进行酶促反应,测定正常人和鼻咽癌患者GPI-PLD的酶活性并应用韩国新科有限公司生产的Photodiode Array Uv-Vis Spectrophotometer仪器研究了该酶的催化机理,并且利用该机所带软件作出3-D图。②采用逆转录PCR(RT-PCR)检测正常人和鼻咽癌患者的GPI-PLD mRNA的表达水平,以RT-PCR结果的琼脂糖电泳照片的积分光密度值(IA)比值代表GPI-PLD mRNA的表达水平。结果①正常人和鼻咽癌患者血清GPI-PLD的活性水平(均以转化底物百分比表示)分别为17.6%±2.7%和20.6%±2.4%,鼻咽癌患者的血清GPI-PLD活性比正常人血清GPI-PLD活性显著增高(P<0.05)。并且其酶促反应的3-D图显示有直观差异。2.RT-PCR检测GPI-PLD mRNA的表达,结果表明正常人鼻咽上皮细胞中GPI-PLD mRNA琼脂糖电泳照片的平均积分光密度比值(IA比值)是2.6131±0.7653,鼻咽癌患者鼻咽上皮细胞中GPI-PLD mRNA琼脂糖电泳照片的平均积分光密度比值(IA比值)是9.3522±5.2879,鼻咽癌患者的GPI-PLD mRNA的表达水平比正常人鼻咽上皮细胞中GPI-PLD mRNA的表达水平显著性增高(P<0.05)。结论①鼻咽癌患者的血清GPI-PLD活性比正常人显著增高,其酶促反应的3-D图也与正常人有明显差异,提示测定GPI-PLD活性可作为临床诊断鼻咽癌的生化指标。②鼻咽癌患者GPI-PLD mRNA的表达水平高于正常人。GPI-PLD mRNA表达增强是导致鼻咽癌患者GPI-PLD酶活性增高的主要机制。

维甲酸对肝癌细胞HepG2糖基化磷脂酰肌醇特异性磷酯酶D表达及细胞生物学特性的影响

应用MTT、流式细胞仪、免疫印迹法检测全反式维甲酸(ATRA)单独或联合糖基化磷脂酰肌醇特异性磷酯酶D(GPI-PLD)特异性抑制剂1,10-二氮杂菲对肝癌细胞HepG2生物学特性的改变.ATRA使肝癌细胞HepG2 GPI-PLD基因表达及酶活性上调,并呈现剂量和时间依赖性.ATRA可抑制肝癌细胞HepG2增殖,使肝癌细胞Caspase-3表达水平显著增加,Bcl-2表达水平下调,促进肝癌细胞凋亡(P<0.05).ATRA联合1,10-二氮杂菲诱导组细胞,Bcl-2、细胞增殖活性较ATRA单独诱导组显著增强,Caspase-3、凋亡率显著下降.维甲酸可促进肝癌细胞HepG2 GPI-PLD基因表达上调,高活性的GPI-PLD有助于维甲酸抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡.

血清糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的检测

利用自制的、具完整糖基化磷脂酰肌醇（ＧＰＩ）结构的胎盘型碱性磷酸酶（ＰＬＡＰ）做底物，通过聚乙二醇／葡聚糖分相系统定性，ＴＸ１１４分相定量，初步建立了检测人血清中ＧＰＩ特异性磷脂酶Ｄ（ＧＰＩＰＬＤ）的方法，并对酶促反应的某些动力学性质进行了探讨。该方法重现性好（ＣＶ＝３．６％），灵敏度高（血清用量２μｌ即可），且经济、实用，有一定的推广价值。用该方法检测１００名正常人血清，表明其ＧＰＩＰＬＤ的活性范围为３０％～５０％（用转化底物的百分率表示）。

糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D对白血病细胞黏附和侵袭功能的影响

目的:探讨糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)对髓性白血病细胞黏附和侵袭功能及GPI锚定蛋白uPAR表达的影响。方法:二氮杂菲下调细胞的GPI-PLD酶活性;黏附和体外穿膜实验检测细胞的黏附、侵袭性;流式细胞术检测细胞膜uPAR表达;RT-PCR和Westernblot法检测THP-1细胞中GPI-PLD的表达水平。结果:二氮杂菲处理4h后,THP-1细胞的黏附率和膜uPAR的表达明显上调,差异有显著性;而细胞GPI-PLD的表达并无明显改变。结论:GPI-PLD可能参与THP-1细胞的黏附和侵袭,其机制可能与对uPAR表达的调节有关。

糖基化磷脂酰肌醇-特异性磷脂酶D与白血病类型、CD24表达及细胞黏附功能的关系

糖基化磷脂酰肌醇-特异性磷脂酶D（GPI-PLD）在特定的情况下能通过特异性水解糖基化磷脂酰肌醇（GPI）锚定蛋白中的肌醇磷酸酯键来调节细胞膜上的锚定蛋白表达。在人的造血细胞上有一些GPI锚定蛋白（如CD24、CD87等）属于黏附分子，在肿瘤细胞的转移中发挥重要作用。我们检测了急性白血病患者骨髓细胞GPI-PLD基因表达水平及其活性，探讨其与白血病类型，肝、脾、淋巴结肿大，CD24表达及白血病细胞对纤维连接蛋白（Fn）黏附率的关系。

几种肝脏疾病血清中糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的活性改变

目的 观测几种肝脏疾病患者血清中糖基化磷脂酸肌醇特异性磷脂酶D(GPI -PLD)的活性改变。方法 利用自制的具完整糖基化磷脂酰肌醇 (GPI)结构的胎盘型碱性磷酸酶 (PLAP)做底物 ,通过TX - 114分相 ,定量测定血清GPI-PLD的活性 ,用SPSS 10 0统计软件分析资料。结果 检测 172例肝脏疾病患者 (包括A组 :2 6例急性重症病毒性肝炎 ;B组 :2 9例肝硬化 ;C组 :32例慢性病毒性肝炎 ;D组 :55例急性非重症病毒性肝炎 ;E组 :30例原发性肝癌 )血清中GPI -PLD的活性 (转化底物的百分率 ) ,发现A、B两组患者的该酶活性较正常人 (182名 )显著性降低 ,而D、E两组则较正常人显著性增高 ,C组患者的酶活性与正常人无显著性差异 ,但A、B、C、D、E两组之间的酶活性水平改变却均有显著性。结论 检测患者血清GPI -PLD活性水平 ,既可作为临床诊断急性病毒性肝炎、肝硬化、原发性肝癌等肝脏疾病的一项生化指标 ,也可作为这些疾病临床疗效和预后的一项判断指标。

GPI锚定蛋白与白血病

羧基末端结合有糖基化磷脂酰肌醇(GPI)结构的膜蛋白,称为GPI锚定蛋白(glycosylphosphatidy-linositol-anchored protein);它们功能广泛,涉及细胞识别、生长、分化和程序性死亡等重要生命过程,与许多疾病有着一定的联系。人体内水解GPI锚定蛋白中的肌醇磷酸酯键的只有糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(glycosylphosphatidy-linositol spe-cific phospholipaseD GPI-PLD)。本文概述了近年来有关GPI锚定蛋白的研究状况,包括它的结构、组成、功能和水解酶GPI-PLD,GPI锚定蛋白与白血病的发生、发展及治疗等的相关性研究。