重组表达糖蛋白GPIIIa片段偶联荧光微球分析人血小板抗原-1系统同种抗体

目的:应用偶联血小板GPIIIa重组表达片段的Luminex xMAP荧光微球,检测血小板抗HPA-1a和-1b抗体。方法:以倍比稀释成12个浓度(原液~1/2048)的抗HPA-1a WHO国际标准品,比较MAIPA和Luminex xMAP技术检测抗HPA-1a的灵敏度。以8份抗HPA-1a/b阴、阳性对照,36份WHO血小板抗体质控盲样,评估流式荧光微球技术检测抗HPA-1a和-1b的特异性。结果:MAIPA检测抗HPA-1a的灵敏度为滴度1/64(抗体浓度1.56 IU/ml),流式荧光微球检测的灵敏度远高于滴度1/2048(抗体浓度0.049 IU/ml)。微球分析法能特异性鉴别抗HPA-1a和-1b阴、阳性对照。36份盲样中,有1份样本,在高浓度对偶抗体的影响下,产生抗HPA-1b假阳性结果。其余样本的微球分析结果与预期结果相符,能准确检出抗HPA-1a和-1b抗体,而且与HLA和ABO抗体以及其它的血小板抗体(包括抗HPA-3b、-5b、-15b、-GPIb/IX和非HPA-1特异性的抗-GPIIb/IIIa)未发生交叉反应。结论:基于重组偶联血小板GPIIIa的流式荧光微球技术可灵敏、特异性检测血小板HPA-1系统抗体,适合于临床免疫性血小板减少症患者的抗体特异性鉴定。

阿司匹林抵抗患者的基因多态性研究

目的探究阿司匹林抵抗患者COX-1、P2Y1、GPIa及GPIIIa基因多态性。方法收集动脉粥样硬化阿司匹林抵抗患者35例,患者予以阿司匹林肠溶片口服治疗,14天后测定每位患者COX-1、P2Y1、GPIa及GPIIIa基因多态性进行对比分析。结果COX1(A-842G)位点基因型为AA及COX1(C50T)位点基因型为CC检测比例较高,与其他基因比较差异具有统计学意义(P<0.05);P2Y1(A1622G)位点基因型为AG;P2Y1(C893T)位点基因型为CC检测比例较高,与其他基因比较差异具有统计学意义(P<0.05);GPIa(C807T)位点基因型为CT;GPIa(G873A)位点基因型为GA检测比例较高,与其他基因比较差异具有统计学意义(P<0.05);GPⅢa(T1565C)位点基因型为TT比例较高,与其他基因比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 P2Y1(C893T)、GPIa(C807T)等位基因与阿司匹林抵抗具有相关性,与COX-1(A-842G、C50T)、GPIa(G873A)、GPⅢa(T1565C)、P2Y1(A1622G)等位基因相比更易诱导阿司匹林抵抗的发生。

抗血小板GP Ⅲa单克隆抗体SZ-21单链抗体片断的表达和特性

将能与血小板膜糖蛋白IIIa特异结合的单克隆抗体SZ 2 1构建成单链抗体。应用RT PCR技术 ,从分泌SZ 2 1单克隆抗体的杂交瘤细胞中克隆出VH 和VL 可变区基因 ,并构建成SZ 2 1单链抗体 (SZ 2 1ScFv)。将该单链抗体基因亚克隆到高效表达质粒pET2 0b ,得到pET2 0b 2 1ScFv。通过IPTG诱导在大肠杆菌EcoliBL2 1(DE3)PlysS中表达了功能分子。表达产物主要以包涵体形式存在 ,表达量占菌体蛋白的 2 1%。经过包涵体的溶解、Ni NTA树脂亲和吸附纯化和蛋白质的体外重折叠等一系列的变性和复性过程 ,获得具有生物活性的高纯度单链抗体片段。ELISA和Westernblot证实该融合蛋白保留了与亲本抗体同样的血小板结合特性。SZ 2 1单链抗体体外能够抑制ADP诱导的血小板聚集 ,其抑制能力呈剂量依赖性 ,在浓度为 2 0mg/L时达到最大抑制率。流式细胞仪检测证实该单链抗体能与内皮细胞反应。该单链抗体有望用于血栓性疾病的治疗。

CYP2C19*2及GPⅢa基因多态性对广州地区汉族冠心病人群氯吡格雷药效反应性的影响

目的探讨CYP2C19＊2（G681A）及GPⅢa（T1565C）基因多态性在广州地区汉族冠心病人群中的分布情况及对氯吡格雷药效反应性的影响。方法共纳入对象146例,均经冠脉造影证实为冠心病患者并连续服用75 mg/d氯吡格雷5 d以上。根据最大血小板聚集率（MPA）结果判断氯吡格雷药效反应性,≥50%为氯吡格雷治疗后血小板高反应性（HTPR,HTPR组）,〈50%为正常（正常组）。采用聚合酶链反应和基因测序的方法检测患者上述两个位点的基因型,对两组相关的临床指标、基因型、等位基因及不良心血管事件发生率进行分析。结果 CYP2C19＊2基因G681A多态位点3种基因型在两组间的分布差异有统计学意义（P〈0.05）。A等位基因频率在HTPR组高于正常组（P〈0.05）,A等位基因携带者HTPR的发生风险显著增加（OR=1.91,95%CI 1.091～3.344,P〈0.05）。经Binary logistic回归分析校正了相关的临床指标后,CYP2C19＊2基因G681A多态性仍与HTPR的发生有关（OR=2.837,95%CI 1.246～6.458,P〈0.05）。GPⅢa基因T1565C位点的多态基因型和等位基因的频率在两组中的分布差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 CYP2C19＊2基因G681A多态性与HTPR的发生密切相关,其可能影响广州地区汉族冠心病人群氯吡格雷药效反应性。