凝血IX因子复合物的研制

目的 :提高IX因子复合物的活性收率和IX因子复合物的血栓安全性。方法 :采用国产DEAE sepharosefastflow胶离子交换层析及Ca3(PO4 ) 2 吸附法 ,从新鲜冰冻血浆中直接制备凝血Ⅸ因子复合物。结果 :二步的收率分别为 ( 76 42± 4 48) %和 ( 74 31± 3 17) % ,制品的FⅨ :C的比活比传统Ⅸ因子复合物提高了约 2 0倍。结论

表达血小板膜糖蛋白GPIb-Ⅸ复合物的中国仓鼠卵巢细胞株研究模型的建立

本研究旨在建立表达重组野生型和突变型血小板膜糖蛋白GPIb-Ⅸ复合物的中国仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary,CHO)细胞研究模型,为进行GPIb-Ⅸ生理功能的相关研究奠定基础。从表达野生型或缺失突变型GPIbα的大肠杆菌宿主菌中抽提质粒并用EcoRI酶切鉴定,然后将分别表达GPIbα、GPIbβ和GPIX3种基因的质粒共转染到中国仓鼠卵巢细胞中,通过免疫共沉淀、Western blot和流式细胞仪检测其表达效果。结果表明,转染48小时后,CHO细胞裂解物和细胞表面均可检测到GPIb-Ⅸ复合物的表达。结论:成功构建了表达血小板膜糖蛋白GPIb-Ⅸ复合物的CHO细胞研究模型。

基于vWF/GPIb-IX-V信号通路的丹红注射液对急性血瘀大鼠模型活血化瘀作用及机制研究

目的 观察丹红注射液对急性血瘀大鼠模型的影响,探讨丹红注射液调控血瘀证血小板功能的作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、舒血宁注射液(1.8 mL/kg)组和丹红注射液高、中、低剂量(1.4、0.7、0.35 mL/kg)组,尾iv给予药物干预11 d后,采用sc肾上腺素联合冰水浴制备急性血瘀证大鼠模型,再给予药物干预1 d后,检测血流变指标、凝血功能指标,血小板活化黏附、聚集、释放相关指标;观察耳廓微循环、心电图和心尖、腹主动脉组织病理变化;采用qRT-PCR和Western blotting检测心肌组织蛋白激酶B1(protein kinase B1,Akt1)、p38、细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinases1/2,ERK1/2)的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠血液流变学、血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)、纤连蛋白(fibronectin,FN)、血栓素B2(thromboxane B2,TXB2)、β-血栓环蛋白(β-thromboglobulin,β-TG)、血小板第四因子(platelet factor 4,PF4)指标显著升高(P<0.05、0.01),6-酮-前列腺素F1α(6-keto-prostaglandin F1α,6-keto-PGF1α)、耳廓微循环血流量显著降低(P<0.01),心肌组织p-Akt1、p-ERK1/2、p-p38蛋白表达以及Akt1、ERK1/2、p38基因表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,丹红注射液能够不同程度地降低血液流变学指标、vWF、FN、TXB2、β-TG、PF4(P<0.05、0.01),升高6-keto-PGF1α(P<0.05、0.01),显著提高凝血酶时间(thrombin time,TT)值(P<0.05、0.01),保护心脏,增加耳廓微循环血流量(P<0.05)。心尖、腹主动脉组织HE染色结果显示,模型组大鼠心肌、血管内膜出现轻微损伤,弹力纤维破坏,由于斑块脱落导致开始出现空泡;丹红注射液组大鼠心肌、血管内膜和内皮细胞以及弹力纤维显著改善。结论 丹红注射液可以恢复血液流变学、凝血功能,改善血管内皮细胞、心肌细胞功能,通过调控vWF/GPIb-IX-V介导的信号通路及血小板功能,对大鼠急性血瘀有较好的保护和治疗作用。

脑出血患者血小板CD42b,CD62p的表达与脑水肿形成的相关性(英文)

目的分析比较脑出血患者与健康人血小板CD42b,CD62p的表达差异及急性期脑出血患者血小板CD42b,CD62p的表达量与脑水肿体积的相关性,探讨急性期脑出血患者血小板表面糖蛋白CD42b,CD62p的表达及其与血肿周围脑水肿形成的关系。方法选自2002-01/08华中科技大学同济医学院附属同济医院神经科住院治疗的脑出血患者20例。健康者选自2002-01/08华中科技大学同济医学院附属同济医院神经科住院患者家属,共15例,利用流式细胞术(FCM)测定20例脑出血患者和15例健康人血小板CD42b和CD62p的表达,根据头颅CT测量脑出血患者血肿周围脑水肿带的大小,并对脑出血患者血小板CD42b和CD62p的表达与血肿周围脑水肿带的大小进行相关性分析。结果与健康人犤(9.7±1.1)%,(81.6±3.1)%犦比较,急性期脑出血患者血小板CD42b的表达(74.2±6.4)%减少,CD62p的表达(4.7±4.8)%增加(tCD42b=4.328,P<0.01;tCD62p=4.017,P<0.01);急性期脑出血患者血小板CD42b和CD62p表达量与血肿周围脑水肿带的大小有相关性(rCD42b=-0.489,P<0.05;rCD62p=0.646,P<0.01)。结论脑出血急性期血小板活化,活化的血小板参与了血肿周围脑水肿形成这一病理损伤过程。

CD42b、CD62p、hsCRP和Hcy与AMI患者冠脉病变程度的关系及对预后的预测价值

目的:分析CD42b、CD62p、hsCRP和Hcy与AMI患者冠脉病变程度的关系及对预后的预测价值。方法:根据SYNTAX评分,242例行PCI的AMI患者被分为低分组(65例,≤20分)、中分组(106例,21分~31分)和高分组(71例,≥32分),比较各组血浆CD42b、CD62p、hsCRP和Hcy水平。Pearson相关分析上述指标与SYNTAX评分的相关性;比较各组MACCE发生率;以ROC曲线分析上述指标对MACCE的预测价值。结果:与低分组比较,中分、高分组血浆CD42b水平[(87.71±5.94)比(68.93±3.45)比(55.54±4.31)]显著降低,血浆CD62p[(21.63±3.29)比(27.47±3.01)比(37.81±3.78)]和Hcy[(13.14±1.60)μmol/L比(17.31±1.93)μmol/L比(22.30±2.73)μmol/L]水平显著升高,P均=0.001。Pearson相关分析显示血浆CD42b水平与AMI患者SYNTAX评分显著负相关(r=-0.885,P=0.001),血浆CD62p和Hcy水平与SYNTAX评分显著正相关(r=0.799,0.801,P均=0.001)。与低分、中分组比较,高分组MACCE发生率(9.23%、18.87%比35.21%)显著升高,P=0.001,0.014。ROC曲线显示血浆CD42b、CD62p和Hcy预测AMI患者发生MACCE的最佳截断值分别为69.72、28.33和20.77μmol/L,灵敏度分别为64.7%、73.1%和75.2%,特异度分别为69.3%、80.5%和63.8%。结论:血浆CD42b水平和AMI患者SYNTAX评分显著负相关,CD62p及Hcy水平与SYNTAX评分显著正相关,且对预后MACCE事件有一定的预测价值。

人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅸ效价测定影响因素的探讨

目的 探讨几种因素对人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅸ效价测定的影响。方法 参照《中国药典》2010年版,采用不同厂家乏Ⅸ因子血浆、不同型号仪器、不同肝素中和方式、不同样品前处理方法测定人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅸ效价,分析其对PCC中凝血因子Ⅸ效价测定结果的影响。结果 不同厂家的乏Ⅸ因子血浆对凝血因子效价测定结果有显著性差异（P〈0.05）。不同型号全自动凝血分析仪对凝血因子效价测定结果无显著性差异。当稀释倍数大于60倍时,是否中和肝素对凝血因子Ⅸ效价测定结果影响较小。当稀释倍数小于60倍时,中和肝素的检测结果高于不中和的检测结果,差异有统计学意义（P〈0.05）。样品预温与否及是否复溶15分钟,凝血因子Ⅸ效价测定结果无显著性差异。结论 不同厂家乏Ⅸ因子血浆,不同稀释倍数的肝素中和方式,样品前处理方法均影响PCC制品凝血因子Ⅸ效价的测定,在检测过程中应予以重视。加强对乏因子血浆的质量控制及操作流程的规范化,建立PCC制品凝血因子检测的室间质量评价体系。

血管性血友病因子和血小板表面受体突变的数据库构建及数据分析

背景:血管性血友病因子和血小板表面受体之间的相互作用在血小板黏附、传播、聚集等血栓形成过程中起到关键作用。目前关于血管性血友病因子突变信息的数据库并不完善且血小板表面受体相关的数据库仍未构建。目的:致力于构建血管性血友病因子及血小板糖蛋白Ibα相关突变的数据库,以利于相关领域的研究人员快速查找到该分子对的重要突变信息。方法:以数据库Uniprot、VWFdb及文献报道的突变信息为数据源,采用MySQL和Apache为后台数据库和服务器,运用PHP语言开发血管性血友病因子及血小板糖蛋白Ibα突变数据库。结果与结论:收集了341条血管性血友病因子,13条血小板糖蛋白Ibα的野生或者突变序列数据,并人工构建A1结构域的虚拟突变3 920条,建立了包括背景介绍、相关病理图册和资料下载等登录页面,初步实现了数据检索、突变位点分析以及虚拟突变位点信息等相关功能。该数据库较全面搜集及分析血管性血友病因子及血小板糖蛋白Ibα的数据信息,有利于研究人员对血管性血友病因子和血小板糖蛋白Ibα相关信息的查询,有助于新型抗血栓药物的研发,进一步提高临床诊断和治疗水平。

平面分层介质结构的空间域格林函数近似解

本文详细描述了用离散复镜像法求解平面分层介质结构的空间域格林函数的过程，指出传统离散复镜像法中存在的不足之处。给出了采用现代谱估计技术中的矩阵束法代替Ｐｒｏｎｙ 法，并通过改变Ｓｏｍ ｍ ｅｒｆｅｌｄ 积分路径，进行多级近似的改进方法。该方法避免了预先研究谱域格林函数的性态和繁琐的提取极点的过程，提高了计算效率和稳定性。

快速构建复杂网络仿真模型的算法研究

针对复杂网络仿真模型的构建问题,本文给出了一种快速构建复杂网络仿真模型的自动连接算法,利用Simulink仿真平台实现规则网络与复杂网络的有向自动连线,并引入加权矩阵控制网络中子系统之间的耦合强度,通过调节加权矩阵实现串联网络、并联网络、星形网络和随机网络4种不同网络拓扑结构。在并联网络构建过程中,需选取其中一个由信号接收机和发射源构成的特殊子系统,而构建随机网络时,仅需要对加权矩阵元素的取值范围进行随机调节即可。此算法通用性较好,提高了具有大量节点的复杂网络模型构建效率,对于利用Simulink仿真平台研究复杂网络具有重要意义。

肝素与抗凝血酶Ⅲ对人凝血因子Ⅸ效价检测的影响

目的了解不同浓度水平的肝素、抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)或肝素/ATⅢ(1∶1混)对人凝血因子Ⅸ(FⅨ)类制品中FⅨ效价检测的影响。方法向FⅨ或人凝血酶原复合物(PCC)样品中加入不同浓度水平的肝素或肝素/ATⅢ来制备每1 IU FⅨ含0、0.1、0.3、0.5、0.8、1、2、4 IU的肝素或肝素/ATⅢ的样品以及向FⅨ或PCC样品中单独加入ATⅢ时制备每1 IU FⅨ中含0、0.1、0.5、1 IU ATⅢ的样品后,采用一期凝固法测定所制备样品中的FⅨ效价;取适量制备的含不同肝素浓度的样品,分别加入相应量的硫酸鱼精蛋白中和样品中的肝素后再次测定FⅨ效价。观察并分析不同浓度水平肝素、ATⅢ或肝素/ATⅢ对FⅨ效价检测的影响。结果当样品中每1 IU FⅨ的肝素或肝素/ATⅢ含量为0、0.1、0.3、0.5 IU时,FⅨ效价检测结果较一致;当肝素或肝素/ATⅢ含量为0.8、1、2、4 IU时,FⅨ效价检测结果均低于不含肝素样品的检测结果;ATⅢ含量为0、0.1、0.5、1 IU时,样品中FⅨ效价检测一致。结论当FⅨ或PCC制品中每1 IU FⅨ含肝素或肝素/ATⅢ的量≤0.5 IU时,对FⅨ效价的检测结果无影响,可省略加入硫酸鱼精蛋白中和肝素的步骤;>0.5 IU时,宜加入硫酸鱼精蛋白中和肝素后再检测FⅨ效价。

人凝血因子Ⅸ效价测定影响因素的探讨

目的:探讨人凝血酶原复合物中人凝血因Ⅸ因子效价测定的影响因素。方法:考察3种不同的APTT试剂,2种不同的稀释液对人凝血因Ⅸ因子效价测定的影响,以及标准和样品复溶后置-20℃以下冻存的稳定性。结果:3种APTT试剂测定样品结果无显著性差异,但APTT-LS试剂较APTT-XL、Synth Asil-液体APTT试剂的实验精密度高,实验重复性好;咪唑缓冲液与咪唑缓冲液中加入枸橼酸钠、白蛋白,两者测定结果、精密度无显著性差异;标准与样品复溶后置-20℃以下冻存,35天内使用有效。

Concurrency Control Mechanism of Complex Objects

A complex object is an abstraction and description of a complex entity of the real world. Many applications in such domains as CIMS, CAD and OA define and manipulate a complex object as a single unit. In this paper, a definition of the model of complex objects is given, and the concurrency control mechanism of complex objects in WHYMX object-oriented database system is described.

抗血小板膜糖蛋白Ibα胞内段多肽多克隆抗体的制备及初步应用

目的制备兔抗人血小板膜糖蛋白（GP）IbαC端557～561氨基酸序列多肽的多克隆抗体，并初步用于人血小板GPIbαC端559位丝氨酸磷酸化状态的检测。方法应用化学方法合成C—R—G-S—L-P（559位丝氨酸非磷酸化，Ser559）和C—R—G—S（P）-L-P（559位丝氨酸磷酸化，pSer559）多肽。将2种多肽分别与钥孔蜮血蓝蛋白交联后，以皮下注射法分别免疫新西兰大白兔，分离获得2种抗血清（抗Ser559多抗和抗pSer559多抗）。应用斑点印迹和酶联免疫吸附试验（ELISA）方法对抗血清进行鉴定并检测效价。从人血小板裂解液中分离纯化血小板GPIbα，利用抗Ser559多抗和抗pSer559多抗、采用ELISA方法检测人血小板GPIbαC端559位丝氨酸磷酸化状况。结果所制备的2种多抗分别特异性识别各自抗原，效价分别为1：32000和1：64000。2种多抗均可与纯化的人血小板GPIbα特异结合，表明人血小板GPIbα559位点丝氨酸存在磷酸化与非磷酸化两种状态。结论应用人工合成多肽成功制备出2种可特异性识别丝氨酸磷酸化状态的兔抗人血小板GPIbα胞内段多肽多抗，并证明人血小板GPIbcαC端559位丝氨酸存在磷酸化状态。

两种材料修复楔状缺损临床疗效评估

目的比较Dyract AP复合体和GC Fuji IX GP两种材料修复牙体楔状缺损的临床效果。方法选择2007年9月至2009年10月,在四川省德阳市口腔医院口腔内科就诊的患者181例,共567颗中等以上深度楔状缺损牙,随机分为A、B两组,A组采用Dyract AP复合体充填修复,B组采用GC Fuji IX GP充填修复,随访1年,评定成功率。结果 A组回访256颗患牙,成功225颗,成功率87.89%;B组回访248颗患牙,成功196颗,成功率79.03%。两组成功率差异有统计学意义(P<0.01)。结论 Dyract AP复合体修复楔状缺损优于GC Fuji IX GP。