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新型半胱氨酰白三烯受体GPR17的多克隆抗体制备及其鉴定 被引量:5
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作者 戚玲玲 卢韵碧 +8 位作者 史文珍 赵春贞 张咏梅 陈丽萍 张丽慧 方三华 鲍建芳 沈建根 魏尔清 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期357-361,共5页
目的:制备新型半胱氨酰白三烯受体GPR17的多克隆抗体(pAb),并鉴定其免疫学特性。方法:以KLH偶联的GPR17多肽免疫家兔制备其pAb,用间接ELISA法测定抗体效价,阻断ELISA测定抗体敏感性及特异性,同时以新制备的抗体做Western blot,检测GPR1... 目的:制备新型半胱氨酰白三烯受体GPR17的多克隆抗体(pAb),并鉴定其免疫学特性。方法:以KLH偶联的GPR17多肽免疫家兔制备其pAb,用间接ELISA法测定抗体效价,阻断ELISA测定抗体敏感性及特异性,同时以新制备的抗体做Western blot,检测GPR17的组织表达。结果:通过免疫家兔获得的抗GPR17 pAb,ELISA测定显示其抗体效价最高可达到1/16 364,并对CysLT1受体和CysLT2受体基本无交叉反应,具有较好的特异性。Western blot结果显示,GPR17在大鼠脑和心脏组织中有较高的表达,其分子量在43 kD左右。结论:制备的GPR17 pAb具有较高的效价和较好的特异性,能满足Western blot检测GPR17的要求。 展开更多
关键词 受体 白三烯 半胱氨酸 gpr17 半胱氨酰白三烯受体 多克隆抗体
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GPR17调控脑白质损伤后内在修复潜能的研究进展 被引量:1
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作者 毛凤霞 陈惠金 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期287-290,共4页
脑白质损伤可导致髓鞘损害和神经纤维不能髓鞘化,是脑瘫、智力和视听障碍的主要原因。目前,促进神经再生的内在修复潜能正趋向于成为治疗脑白质损伤的重要策略。近来发现一种新的P2Y受体——GPR17可能调控脑白质损伤后的内在修复潜能。... 脑白质损伤可导致髓鞘损害和神经纤维不能髓鞘化,是脑瘫、智力和视听障碍的主要原因。目前,促进神经再生的内在修复潜能正趋向于成为治疗脑白质损伤的重要策略。近来发现一种新的P2Y受体——GPR17可能调控脑白质损伤后的内在修复潜能。文章将就脑白质的解剖特点、少突胶质细胞的生物学特性及GPR17在脑白质损伤后内在修复中的作用进行综述。 展开更多
关键词 脑白质 少突胶质细胞 gpr17 神经再生
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Cangrelor通过抑制GPR17介导的炎症缓解博来霉素诱导的小鼠肺纤维化 被引量:3
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作者 詹天玮 田雨鑫 +6 位作者 魏韬峰 董灵军 吴紫祥 王琪 张纬萍 卢韵碧 吴明 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期739-739,共1页
目的探讨抗血小板药Cangrelor缓解博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的作用及机制。方法整体动物实验以博来霉素(BLM)3 mg·kg-1诱导C57BL/6J小鼠发生肺纤维化,Cangrelor在给予BLM前2天至给药第14天期间给予,皮下注射,每天1次。BLM给药第1... 目的探讨抗血小板药Cangrelor缓解博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的作用及机制。方法整体动物实验以博来霉素(BLM)3 mg·kg-1诱导C57BL/6J小鼠发生肺纤维化,Cangrelor在给予BLM前2天至给药第14天期间给予,皮下注射,每天1次。BLM给药第14天,取肺固定后石蜡切片做HE染色、Msasson′s染色和GPR17、巨噬细胞特异性免疫组化染色并做纤维化评分,Western蛋白质印迹法检测肺组织GPR17蛋白表达,定量PCR检测胶原蛋白mRNA表达、定量PCR和ELISA检测肺组织炎症因子的合成与释放。细胞实验采用RAW 264.7细胞,以博来霉素,Cangrelor和GPR17siRNA处理12 h;细胞活性以MTT法检测,以定量PCR和ELISA分别检测细胞炎症因子的合成和释放。结果 (1)BLM诱导小鼠发生肺纤维化的同时,肺组织GPR17表达和GPR17阳性巨噬细胞增加,合成和释放TNF-α,IL-6和TGF-β1增高,肺组织合成胶原Ⅰ和Ⅲ增高;Cangrelor 2.5, 5.0和10.0 mg·kg-1不仅剂量依赖性减弱BLM诱导的炎症反应和致纤维化作用,且明显减少GPR17阳性巨噬细胞的数量;(2)BLM(1 mg·L^(-1))诱导RAW 264.7巨噬细胞发生炎症的同时可促进细胞表达GPR17,抑制GPR17表达可减轻细胞炎症,Cangrelor 2.5~10.0μmol·L^(-1)浓度依赖性减轻BLM诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症。结论 Cangrelor通过抑制GPR17介导的炎症而减轻BLM诱导的小鼠肺纤维化。 展开更多
关键词 肺纤维化 巨噬细胞 gpr17 CANGRELOR 炎症因子
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大鼠GPR17基因真核表达载体的构建及其功能鉴定 被引量:1
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作者 林卡娜 方三华 +4 位作者 蔡蓓蕾 王欣欣 卢韵碧 张纬萍 魏尔清 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期584-590,共7页
目的:构建大鼠GPR17(rGPR17)基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并对其功能进行初步研究。方法:从大鼠脑组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增rGPR17 cDNA,与载体pcDNA3.1(+)连接,并转化到大肠杆菌DH5α以获得重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,... 目的:构建大鼠GPR17(rGPR17)基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并对其功能进行初步研究。方法:从大鼠脑组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增rGPR17 cDNA,与载体pcDNA3.1(+)连接,并转化到大肠杆菌DH5α以获得重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,以PCR、双酶切和测序鉴定;将重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17通过脂质体转染方法,转染HEK293细胞,RT-PCR、免疫荧光法检测rGPR17的表达,Fluo-4测定激动剂LTD4处理后细胞内钙变化。结果:RT-PCR、双酶切和测序证明,重组的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17构建成功,并在HEK293细胞获得表达,加入外源性激动剂LTD4可诱导细胞内钙的增加。结论:成功构建了rGPR17的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并在HEK293细胞功能性表达,为GPR17受体及其拮抗剂的研究提供了基础。 展开更多
关键词 半胱氨酸/遗传 受体 白三烯/遗传 遗传载体 gpr17 真核表达载体 HEK293细胞 细胞内钙
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GPR17同源二聚体结构与功能的研究
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作者 杨菊 龚州 +4 位作者 吴明 魏尔清 卢韵碧 唐淳 张纬萍 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期739-739,共1页
目的表征GPR17同源二聚体的结构,揭示GPR17同源二聚体形成对GPR17功能的影响。方法采用结构预测软件I-TASSER预测GPR17单体结构,并在脂膜环境下采用分子动力学模拟进行结构优化,通过荧光寿命成像的荧光共振能量转移(FLIM-FRET)获得细胞... 目的表征GPR17同源二聚体的结构,揭示GPR17同源二聚体形成对GPR17功能的影响。方法采用结构预测软件I-TASSER预测GPR17单体结构,并在脂膜环境下采用分子动力学模拟进行结构优化,通过荧光寿命成像的荧光共振能量转移(FLIM-FRET)获得细胞膜表达GPR17分子间的距离约束,采用Xplor-NIH计算GPR17同源二聚体结构;基于结构模型进行相互作用关键位点的突变,采用免疫共沉淀和FLIM-FRET实验,结合全原子分子动力学模拟,研究关键位点突变对同源二聚体结构稳定性的影响;比较野生型和关键位点突变的GPR17功能变化。结果免疫共沉淀和FLIM-FRET检测发现,GPR17能够形成同源二聚体,二聚体结构显示2个GPR17分子之间的相互作用界面为TM5,而2个TM5的F229和F233之间,能够形成π-π相互作用;将F229和F233进行突变,发现与野生型GPR17相比,GPR17/F229A/F233A之间的二聚体结构变得不稳定;免疫共沉淀和FLIM-FRET显示,GPR17/F229A/F233A不能形成同源二聚体,但仍参与异源寡聚体;在配体UDP-glucose的作用下,GPR17能够偶联Gαi抑制细胞内cAMP水平,能够偶联Gαq,使细胞内钙离子增加、ERK1/2激活及受体发生内化。与野生型相比,GPR17/F229A/F233A突变后,UDP-glucose诱导的细胞内钙离子增加、ERK1/2激活和受体内化显著抑制,而抑制cAMP的作用未受影响。结论GPR17能够通过TM5的2对F229和F233之间的π-π相互作用形成同源二聚体,GPR17的同源二聚体介导配体激活引起的Gαq偶联和受体内化。 展开更多
关键词 gpr17 切割绿色荧光蛋白 GPCR 同源二聚体
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GPR17在少突胶质细胞分化和脱髓鞘疾病中的作用 被引量:1
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作者 蔡其燕 黄镜洁 +1 位作者 李红丽 肖岚 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期371-374,共4页
了解少突胶质细胞分化的调控机制对促进中枢神经系统脱髓鞘疾病髓鞘再生有重要意义。近年来研究发现,G蛋白偶联受体GPR17在调控少突胶质细胞分化和髓鞘再生中发挥了重要作用。本文主要就GPR17的特点及其在少突胶质细胞分化和脱髓鞘疾病... 了解少突胶质细胞分化的调控机制对促进中枢神经系统脱髓鞘疾病髓鞘再生有重要意义。近年来研究发现,G蛋白偶联受体GPR17在调控少突胶质细胞分化和髓鞘再生中发挥了重要作用。本文主要就GPR17的特点及其在少突胶质细胞分化和脱髓鞘疾病中的作用作一简要综述,从而为中枢神经系统脱髓鞘疾病的治疗及药物研发提供新的理论依据。 展开更多
关键词 gpr17 少突胶质细胞 分化 脱髓鞘
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Quetiapine promotes oligodendroglial process outgrowth and membrane expansion by orchestrating the effect of GPR17
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作者 Wang Yuxin Wang Xiaorui +3 位作者 Tang Ziqin Yu Guangdan Xiao Lan Niu Jianqin 《解剖学杂志》 CAS 2021年第S01期120-121,共2页
Oligodendroglial lineage cells go through a series of morphological changes prior to myelination.Sufficient cell process outgrowth and mem brane expansion are required to meet the needs of axon-wrapping and myelin seg... Oligodendroglial lineage cells go through a series of morphological changes prior to myelination.Sufficient cell process outgrowth and mem brane expansion are required to meet the needs of axon-wrapping and myelin segment formation,but which are hard to achieve maldevelopment and remyelination.Quetiapine,an atypical antipsychotic drug,has been proved to promote oligodendrocyte(OL)differentiation and(re)myelination,pending detailed effects and regulatory mechanism.In present study,we showed that quetiapine promoted OL differentiation and myelin segment formation in a short period of treatment,enhanced OL processes outgrowth and membrane expansion,and provided detail evidence that quetiapine relocated nuclear transcription factor Olig1 to cytosol,in which highly correlating with OL morphological transformation.To uncover the underlying mechanism,informatics analyses,including docking and MD studies,were executed.GPR17 was one of the most likely candidates.GPR17 is restricted to oligodendroglial lineage cells in an up-and-down expression pattern and acts as a developmental control timer. 展开更多
关键词 gpr17 EXPANSION PROCESS
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半胱氨酰白三烯及其受体的信号转导通路研究进展 被引量:3
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作者 吕喆 王炜 蔡怜民 《微生物学免疫学进展》 2008年第2期45-50,共6页
半胱氨酰白三烯(Cysteinyl-leukotrienes,CysLTs)能够产生广泛的促炎作用,例如促进气道和血管平滑肌收缩,通透性增加导致的原生质渗出及水肿,粘液分泌增多等。CysLTs在哮喘、过敏性鼻炎、心血管等疾病中是一类很重要的生物活性介质。白... 半胱氨酰白三烯(Cysteinyl-leukotrienes,CysLTs)能够产生广泛的促炎作用,例如促进气道和血管平滑肌收缩,通透性增加导致的原生质渗出及水肿,粘液分泌增多等。CysLTs在哮喘、过敏性鼻炎、心血管等疾病中是一类很重要的生物活性介质。白三烯受体(Cysteinyl-LT receptors,CysLTRs)的亚型分类是基于使用天然激动剂和各种拮抗剂而获得的亲和力和功能方面的数据进行划分的。通过不同的信号转导通路CysLTs及其受体在不同组织器官产生了不同的生物学作用,本文介绍了CysLTs及其受体的下游信号转导通路研究的最新进展。 展开更多
关键词 CyaLTIR CysLT2R gpr17 信号转导通路
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