左归丸对绝经后骨质疏松症大鼠骨组织中GPR48、CREB表达影响的实验研究

目的:通过研究去卵巢骨质疏松症大鼠股骨中GPR48和CREB的蛋白表达,探讨摘除卵巢致肾虚骨质疏松症的病理机制,并研究左归丸的作用机制。方法:摘除雌性大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,采用左归丸对实验大鼠治疗12周,以盖天力片作为阳性对照组,正常组、假手术组作为标准对照组,模型组作为空白对照,用ELISA法检测骨质疏松症大鼠股骨GPR48和CREB的蛋白表达。结果:ELISA方法检测表明:正常大鼠股骨中存在GPR48和CREB的蛋白表达。模型组大鼠股骨中GPR48和CREB的蛋白表达水平有明显的下降。左归丸组、盖天力组用药12周后,与模型组相比较,左归丸组可显著上调股骨中GPR48和CREB的蛋白表达水平。结论:1正常大鼠股骨中存在GPR48和CREB的蛋白表达;2股骨中GPR48和CREB的蛋白表达下降可能是导致骨质疏松症发生的机理之一;3左归丸能够上调GPR48和CREB的蛋白表达,表明左归丸对骨质疏松症有一定的防治作用。

靶向GPR48的shRNA抑制人宫颈癌HeLa细胞的侵袭转移

背景与目的:GPR48受体偶联Gs蛋白介导细胞内信号转导通路,通过调节微管聚合状态和基质金属蛋白酶活性,影响肿瘤细胞的侵袭转移。本研究探讨靶向GPR48的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对人宫颈癌细胞株HeLa体外侵袭能力及在体转移能力的影响。方法:以人GPR48mRNA编码区中两条不同序列作为RNA干扰靶点,构建靶向GPR48的shRNA真核表达质粒,同时构建不针对任何已知mRNA的阴性shRNA真核表达质粒,分别转染至HeLa细胞,新霉素抗性筛选稳定表达siRNA的转化克隆。采用RT-PCR和Western blot检测GPR48的表达变化。通过Boyden小室实验以穿过人工基底膜的细胞数量评估HeLa细胞体外侵袭能力的变化;分别将转染和未转染GPR48shRNA的HeLa细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况及肺部转移情况。结果:RNA干扰使HeLa细胞GPR48表达下调80%;与阴性对照组比较,转染靶向GPR48重组质粒的实验组穿膜细胞数显著减少(28.3±1.5和17.6±1.5vs.94.4±15.7,P<0.01)。裸鼠在体肺转移实验中,与阴性对照组比较,转染靶向GPR48重组质粒的实验组肺转移结节数显著减少(1.3±0.2和1.5±0.4vs.7.8±1.8,P<0.01)。结论:shRNA真核表达载体能明显抑制HeLa细胞的GPR48表达,有效抑制HeLa细胞的体外侵袭和在体转移。

左归丸含药血清对骨髓间充质干细胞GPR48、BSP表达影响的实验研究

目的:通过左归丸含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞GPR48、BSP、BGP的实验研究,探究左归丸对治疗骨质疏松症的疗效机制。从而为"肾藏精"这一理论提供实验依据。方法:将SPF级大鼠分为正常组、左归丸组、诱导液组、阳性药物组骨疏康组、福善美,对大鼠进行灌胃5天。制备含药血清,并观察左归丸含药血清对骨髓间充质干细胞的影响。结果:与正常组和阳性药物组及诱导液组相比,左归丸组的蛋白表达水平明显上升。结论:1G蛋白偶联受体GPR48的变化可能引起骨质疏松症的发生;2左归丸能够有效治疗骨质疏松,这种作用可能通过G蛋白偶联受体GPR48信号通路来实现。

左归丸对骨质疏松症大鼠GPR48、ATF4、BSP表达影响的实验研究

目的:通过研究摘除卵巢致肾虚骨质疏松症大鼠血清中GPR48、ATF4、BSP的蛋白表达,探讨摘除卵巢致肾虚骨质疏松症的病理机制,并研究左归丸防治疗效及其作用机制。方法:摘除雌性大鼠双侧卵巢的方法复制肾虚骨质疏松症模型,采用具有补肾作用的左归丸对实验大鼠治疗12周,以盖天力片作为阳性对照组,正常大鼠、假手术组作为标准对照组,模型大鼠作为空白对照组,用ELISA法检测肾虚骨质疏松症大鼠血清GPR48、ATF4、BSP的蛋白表达。结果:ELISA方法检测表明:正常大鼠血清中存在GPR48、ATF4、BSP的蛋白表达。模空组大鼠血清中GPR48、ATF4、BSP的蛋白表达水平有明显的下降。左归丸组、盖天力组用药12周后,与模空组相比较,左归丸组可显著上调血清中GPR48、ATF4、BSP的蛋白表达水平。结论:1正常大鼠血清中存在GPR48、ATF4、BSP的蛋白表达;2血清中GPR48、ATF4、BSP的蛋白表达异常变化可能是导致骨质疏松症发生的机理之一;3左归丸能够调控GPR48、ATF4、BSP的蛋白表达,表明左归丸对骨质疏松症有一定的防治作用。

GPR48单克隆抗体的制备、鉴定及应用

目的:制备GPR48的单克隆抗体,并且初步评估其在体外对子宫颈癌细胞侵袭转移的抑制作用。方法:纯化的GPR48特异性片段作为抗原,细胞融合法制备GPR48单克隆抗体,蛋白免疫印迹法检测单克隆抗体的特异性,用体外侵袭性实验检测该单抗抑制子宫颈癌细胞Hela侵袭转移的作用。结果:制备了效价高、特异性好的GPR48单克隆抗体。当加入10 nmol/L浓度的单克隆抗体时,对照组和实验组的穿膜细胞数分别为280±18、73±11;而当加入单抗浓度为50 nmol/L时,对照组和实验组的穿膜细胞数分别为267±30、14±3。结论:GPR48单克隆抗体在体外能够显著抑制子宫颈癌细胞的侵袭转移。

桃红四物汤对大鼠创伤性股骨头缺血性坏死进程中GPR48表达的影响

目的:观察桃红四物汤对大鼠创伤性股骨头缺血性坏死进程中GPR48表达的影响,探讨桃红四物汤改善坏死股骨头血运及坏死骨新生的作用效果。方法:大鼠造模成功后随机分为桃红四物汤低、中、高剂量组、模型组。桃红四物汤组采用低、中、高剂量灌胃,正常对照组、模型组采用等量的生理盐水灌胃,灌胃8周后收集样本,观察样本大体外观、组织形态学、空骨陷窝率;RT-PCR检测大鼠股骨头坏死过程中GPR48的表达情况。结果:(1)大体样本观察:模型组大鼠股骨头呈暗红色,粗糙,有不同程度的关节软骨面塌陷。桃红四物汤组与模型组基本一致,但塌陷程度较轻。(2)X线结果:模型组、桃红四物汤组出现密度减低区,骨小梁排列紊乱,有不同程度的关节软骨面塌陷。(3)HE染色:模型组、桃红四物汤组股骨头髓腔空虚,造血组织、骨小梁骨细胞大量减少,空骨陷窝大量形成。(4)RT-PCR分析结果:正常对照组、桃红四物汤组、模型组的GPR48表达量逐渐减少,但桃红四物汤组不同剂量之间,随着剂量增高GPR48表达量逐渐升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:桃红四物汤可促进大鼠创伤性股骨头缺血性坏死进程中GPR48的表达。

GPR48单克隆抗体的制备及其在甲状腺癌中的表达

目的制作G蛋白偶联受体48(GPR48)的单克隆抗体并研究其在甲状腺癌中的表达。方法利用细胞融合法制作单克隆抗体,蛋白免疫电泳法检测单克隆抗体。免疫组化法研究GPR48蛋白在90例甲状腺癌及35例良性甲状腺组织中的表达情况。结果成功制备了GPR48的特异性单克隆抗体。良性甲状腺疾病组织和癌对侧的甲状腺组织中几乎没有GPR48的表达。甲状腺癌组织中GPR48表达阳性率为61.1%(55/90)。未分化型甲状腺癌和分化型甲状腺癌中GPR48的表达阳性率分别为80.0%和55.7%(P=0.09),伴有淋巴结转移和不伴有转移的分化型甲状腺癌中GPR48的表达阳性率分别为77.3%和45.8%(P=0.03)。结论GPR48抗体可用于相应蛋白的特异性检测,GPR48可作为提示肿瘤分化和淋巴结转移的新标记物。

左归丸含药血清对骨髓间充质干细胞GPR48、BMP6、ATF4表达影响的实验研究

目的：通过观察左归丸含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞GPR48、BMP6、ATF4的表达影响,研究左归丸治疗骨质疏松症的疗效机制,从而证明中医＂肾藏精＂理论的科学性。方法：将40只SPF级雌性大鼠按照正常组、左归丸组、诱导液组、阳性药物组骨疏康组、福善美组进行随机分组,并灌胃5 d,5 d后制备含药血清。运用现代医学实验技术观察左归丸含药血清对骨髓间充质干细胞的影响。结果：通过将左归丸组与正常组和阳性药物组及诱导液组的对比,可以看到该组的蛋白表达水平明显上升。结论：（1）骨质疏松症的发生与G蛋白偶联受体GPR48密切相关;（2）中药左归丸极有可能通过G蛋白偶联受体GPR48信号通路,来促使骨髓间充质干细胞向骨细胞分化。

右归丸含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞中GPR48、ATF4、BSP表达影响实验研究

目的:通过右归丸含药血清对大鼠成骨细胞GPR48、ATF4、BSP的实验研究,探究右归丸对治疗骨质疏松症的疗效机制。从而为"肾藏精"这一理论提供实验依据。方法:将SPF级大鼠随机分为正常组、右归丸组、诱导液组、骨疏康组、福善美组,对大鼠进行灌胃5 d。制备含药血清,并观察右归丸含药血清对成骨细胞的影响。结果:与正常组和阳性药物组及诱导液组相比,右归丸组的蛋白表达水平明显上升。结论:(1)正常大鼠骨组织中存在GPR48、ATF4、BSP蛋白表达;(2)右归丸组中的GPR48、ATF4、BSP与正常组相比含量均大幅提升,说明右归丸含药血清能够调控GPR48、ATF4、BSP的蛋白浓度,并可促进骨髓间充质干细胞向骨细胞分化,从而对骨质疏松症起到防治作用。

大鼠创伤性股骨头坏死进程中GPR48的表达研究

目的探讨大鼠创伤性股骨头坏死进程中骨软骨G蛋白偶联受体-48(g protein coupledreceptor,GPR48)的表达变化,为进一步理解创伤性股骨头坏死的分子机制提供新线索。方法 6个月龄SD大鼠33只,随机分实验组(24只)和对照组(9只)。实验组采用圆韧带离断结合骨膜剥离切除术,对照组采用假手术作为对照。术后1、2和4周时收集股骨头,通过大体、组织学及Masson染色,观察股骨头坏死进程;用免疫组织化学、RT-PCR、图像分析等方法检测股骨头坏死过程中GPR48表达变化。结果 (1)大体标本观察发现,与对照组相比,实验组1、2周股骨头关节软骨表面略显粗糙,4周时关节软骨出现不同程度的虫蚀样破损。X线片结果显示,实验组1、2周大鼠股骨头改变较轻微,4周时出现密度减低区,骨小梁排列紊乱。HE染色结果显示,实验组1、2周部分关节标本软骨表面出现破裂、剥脱;4周时坏死集中在软骨下骨和骺软骨区,但同时可见坏死小梁周围局部成骨细胞活跃迹象,并有少量新生骨形成;3个时间点实验组骨小梁内空骨陷窝率均高于假手术组,并随时间延长呈逐渐升高的趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。Masson染色结果显示实验组1、2周时胶原含量下降,骨小梁欠规则;4周骨小梁稀疏、断裂,胶原含量明显减少。(2)免疫组化结果显示,实验组3个时间点GPR48表达量(IOD值)逐渐增加,但均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)RT-PCR分析结果显示,实验组3个时间点GPR48 mRNA表达量逐渐增加,但均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论创伤性股骨头坏死发展进程中,GPR48表达下降,但随坏死进程而逐渐增加,可能与骨坏死后的局部修复有关。

G蛋白偶联受体48基因参与人卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的机制研究

目的探讨G蛋白偶联受体48(GPR48)基因通过β-catenin信号通路参与调控颗粒细胞增殖与凋亡的作用机制。方法应用RNA干扰(RNAi)技术建立GPR48基因低表达人卵巢颗粒细胞(KGN)细胞模型,作为GPR48降表达组,取处于增殖期的KGN细胞作为对照组。MTT法检测干扰GPR48表达对KGN细胞增殖的影响。采用流式细胞仪测定干扰GPR48表达对KGN细胞凋亡的影响。采用蛋白质印迹法检测KGN细胞中GPR48蛋白和β-catenin蛋白含量。结果MTT结果显示,GPR48降表达后,KGN细胞增殖活性显著被抑制,GPR48降表达组相对细胞活性为0.41±0.02,显著低于对照组(1.00±0.03),GPR48降表达组细胞凋亡百分比为(13.63±2.57)%,显著高于对照组[(0.23±0.04)%],差异有统计学意义(P<0.05)。GPR48降表达组的β-catenin和GPR48蛋白的表达为2.32±0.57、2.16±0.38、2.58±0.53,均显著低于对照组(0.68±0.17、1.06±0.21、2.51±0.26),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论GPR48基因可能通过调控β-catenin信号通路抑制KGN细胞增殖,促进其凋亡。

G蛋白偶联受体48在前列腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨G蛋白偶联受体48(GPR48)在前列腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 选取2012年1月至2017年3月本院收治的42例前列腺癌患者手术切除的癌组织标本和癌旁正常组织标本(均经病理检查证实),采用时荧光定量PCR法检测GPR48 mRNA相对表达量,采用免疫组化法检测GPR48蛋白相对表达水平,分析GPR48表达与患者临床病理参数的关系.结果 在前列腺癌组织及癌旁正常组织中,GPR48 mRNA相对表达量分别为0.534±0.032、0.212±0.023(P<0.01),GPR48蛋白相对表达量分别为0.327±0.031、0.097±0.020(P<0.01).相关性分析结果发现GPR48的表达与患者年龄无明显相关性(P>0.05),与患者术前血清总PSA值、TNM分期、Gleason评分正相关(P<0.05).结论 GPR48表达与前列腺癌的恶性程度密切相关,有望成为一种潜在的前列腺癌生物标志物.