阿尔茨海默病患者AD7c-NTP和GRK5与认知障碍的相关性

目的探索阿尔茨海默病(AD)患者尿液阿尔茨海默病相关神经丝蛋白(AD7c-NTP)和外周血淋巴细胞膜相关G蛋白偶联受体激酶5(GRK5)水平与认知障碍的相关性。方法选取2019年1月至2022年1月在大同市第五人民医院门诊及病房AD患者86例作为研究组,研究组内根据临床痴呆评定量表(CDR)评分再分亚组:轻度痴呆组(n=36)、中度痴呆组(n=28)和重度痴呆组(n=22);另选取本院同期健康体检者61例作为对照组。酶联免疫法检测尿液AD7c-NTP、外周血淋巴细胞GRK5水平,采用简易智力状态检查量表(MMSE)评定认知障碍程度,通过Pearson分析AD7c-NTP和GRK5水平与AD患者认知障碍的相关性。结果研究组患者尿液AD7c-NTP明显高于对照组(P<0.05),外周血淋巴细胞GRK5水平明显低于对照组(P<0.05)。尿液AD7c-NTP水平随着临床痴呆程度加重逐渐升高(P<0.05);外周血淋巴细胞GRK5水平随着临床痴呆程度加重逐渐降低(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,尿液AD7c-NTP及外周血淋巴细胞GRK5水平均与认知障碍存在强相关性,尿液AD7c-NTP与MMSE评分呈负相关(r=-0.715,P<0.05),GRK5与MMSE评分呈正相关(r=0.694,P<0.05)。结论AD患者尿液中AD7c-NTP水平与认知障碍的程度呈正相关,外周血淋巴细胞GRK5水平与认知障碍的程度呈负相关。

GRK5功能缺失与阿尔茨海默病的相关性研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的发病机制涉及到很多方面,新近研究表明G蛋白信号转导途径异常在AD的发病中起着重要作用。AD患者脑中信号转导活性明显增强,且信号转导缺陷的位点出现在"受体-G蛋白界面",研究表明G蛋白耦联受体激酶(GRKs)功能缺陷,主要是GRK5,与AD的发生联系密切。

抑制或过表达GRK5基因对星形胶质细胞凋亡及IL-1β和TNF-α表达的影响

目的:探讨抑制或过表达G蛋白偶联受体激酶5(GRK5)基因对星形胶质细胞(AS)凋亡及IL-1β和TNF-α表达的影响。方法:培养原代AS,将干扰GRK5表达的siRNA(GRK5-siRNA)及GRK5的过表达质粒(pc DNA3.1-GRK5)分别转染AS,通过Western blot检测转染24 h后的细胞中GRK5蛋白的表达;缺氧处理AS,细胞分为空白组、缺氧组、缺氧+pc DNA3.1-GRK5组和缺氧+GRK5-siRNA组,缺氧处理24 h后通过流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率及ROS含量;RT-PCR检测IL-1β和TNF-α的mRNA表达;Western blot检测p53、信号转导与转录因子3(STAT3)和p-STAT3蛋白表达。结果:与空白组比较,转染GRK5-siRNA的AS中GRK5的表达显著降低,转染pc DNA3.1-GRK5的细胞GRK5的表达显著升高(P<0.05);与空白组比较,缺氧组细胞凋亡率、ROS水平及IL-1β、TNF-α、p53和p-STAT3的表达均显著升高(P<0.05);与缺氧组比较,缺氧+pc DNA3.1-GRK5组细胞凋亡率、ROS水平及IL-1β、TNF-α、p53和p-STAT3的表达均显著降低,缺氧+GRK5-siRNA组细胞凋亡率、ROS水平及IL-1β、TNF-α、p53和p-STAT3的表达均显著升高(P<0.05)。结论:过表达GRK5可降低AS凋亡和ROS水平,下调IL-1β、TNF-α、p53表达及STAT3信号通路,抑制GRK5表达反之。

胶质瘤组织中GRK5和Ki-67的表达情况及临床意义

目的:探讨GRK5和Ki-67在胶质瘤组织中的表达情况,与胶质瘤临床病理特征之间的关系及GRK5和Ki-67在胶质瘤中的预后价值。方法:本研究收集2014年1月至2017年1月我院手术切除的104例脑胶质瘤患者的组织标本及同期因颅内损伤行颅内减压术手术切除的正常脑组织20例,采用免疫组化SP法检测胶质瘤组织及其正常脑组织中GRK5和Ki-67的表达水平。相关分析采用Spearman等级相关分析法。采用卡方检验分析GRK5和Ki-67在胶质瘤组织中的表达与临床病理特征的相关性。生存分析采用Kaplan-Meier和Log-rank检验,预后分析采用Cox比例风险模型。结果:通过免疫组化检测结果显示,GRK5在104例胶质瘤组织中阳性表达66例,阳性率为63.5%;在20例正常脑组织中阳性表达2例,阳性率为10.0%。Ki-67在104例胶质瘤组织中阳性表达69例,阳性率为66.3%;在20例正常脑组织中阳性表达率为0.0%。通过Spearman等级相关分析得出,胶质瘤组织中GRK5和Ki-67表达呈正相关(r=0.558,P=0.000)。分析GRK5和Ki-67的表达与胶质瘤患者临床病理特征之间的关系,结果显示GRK5和Ki-67的表达与WHO分级有关(P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤类型无关(P>0.05)。对104例患者进行生存分析,结果显示GRK5阳性表达患者生存率显著低于阴性表达患者(P=0.033);Ki-67阳性表达患者生存率显著低于阴性表达患者(P=0.033)。Cox回归模型分析结果显示,GRK5阳性表达和Ki-67阳性表达均是影响胶质瘤患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:GRK5和Ki-67与胶质瘤的发生发展及细胞增殖有关,GRK5和Ki-67有可能作为胶质瘤患者的预后标志物及临床检测或联合检测的指标,提高临床诊断率。

性别因素对GRK5缺陷小鼠AD样病理改变的影响

目的性别在阿尔茨海默病(AD)的发病中是一不容忽视的危险因素。研究揭示G蛋白偶联受体(GPCRs)激酶5(GRK5)缺陷引起的相关GPCRs脱敏障碍在早期AD病理发生机制中具有重要作用,而且GRK5敲除/缺陷(GRK5KO)小鼠表现出早期AD样病理特征和短时期记忆功能损害。但这种病理变化在不同性别间有无差异,目前不得而知。本研究旨在探讨GRK5KO小鼠出现的AD样病理变化是否存在性别差异。方法用Campbell-Switzer银染来观察老龄GRK5KO小鼠海马内肿胀轴突的病理变化;Western blotting检测海马内突触蛋白水平和数个胆碱能标记物的变化;同时对上述改变在不同性别间进行深入比较。结果雌性GRK5KO小鼠海马内肿胀轴突数目比雄性小鼠高出2.5倍;而且雌性GRK5KO小鼠海马内数个突触蛋白水平比雄性小鼠显著减低。双因素方差分析显示性别和GRK5缺陷双因素之间呈显著协同效应,共同促进了雌性GRK5KO小鼠轴突缺陷和部分突触蛋白水平的降低。另外,胆碱能标记物检测显示,雌性GRK5KO小鼠毒蕈碱受体2、4以及乙酰胆碱酯酶水平较雄性小鼠显著增高。结论在促进早期AD病理发生的过程中,GRK5缺陷和性别双因素表现出协同效应,共同加剧了雌性GRK5KO小鼠脑内的AD样病理改变。

GRK5-Moesin通路在胶质母细胞瘤中的分布特点及作用

目的研究GRK5-Moesin通路在胶质瘤中的分布特点及作用。方法采用慢病毒转染法制备GRK5上调/下调的胶质瘤细胞系,Western blot和qRT-PCR鉴定转染效果,Western blot分析GRK5改变对Moesin表达的影响。免疫荧光分析GRK5与Moesin在胶质瘤组织中的亚细胞定位及分布特征。采用CCK-8法、细胞划痕法、Transwell法和流式细胞术分别检测U87细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡情况。结果GRK5、Moesin及CD44共定位于胶质母细胞瘤的细胞膜。GRK5-Moesin-CD44在胶质瘤壁龛结构中富集表达。GRK5-Moesin与胶质瘤血管关系密切,但各血管中的GRK5和Moesin分布位置存在差异。靶向GRK5-Moesin可影响U87胶质瘤细胞生物学活性。结论GRK5-Moesin可促进胶质母细胞瘤的恶性进展,并且与胶质瘤干细胞关系密切。

用酵母双杂交系统筛选与PEN-2蛋白胞内端相互作用的蛋白

γ-分泌酶复合体对β-淀粉蛋白前体蛋白(Beta-amyloid precursor protein,βAPP)的水解是生成β-淀粉蛋白(Aβ)的关键步骤,在阿尔茨海默氏症(Alzhei mer′s disease,AD)的病理发生中起着重要作用.PEN-2蛋白(Presenilin enhancerprotein 2)是γ-分泌酶的一个重要组分,在γ-分泌酶的组装和成熟中扮演重要的角色.此外,PEN-2还具有促进神经细胞存活和防止细胞凋亡的作用.为了进一步研究PEN-2的生理功能,以PEN-2为诱饵蛋白用酵母双杂交系统筛选与之有相互作用的蛋白,发现PCBP4和GRK5肽段可结合PEN-2,并在酵母体系用β-半乳糖苷酶报告基因验证了它们的相互作用.这些结果表明PCBP4和GRK5可能影响PEN-2的正常生理功能,并且有可能在阿尔茨海默氏症的形成中起着一定的作用.

帕金森病α-Synuclein转基因小鼠模型中G蛋白偶联受体激酶5的表达

目的观测G蛋白偶联受体激酶5(G protein-coupled receptor kinase,GRK5)在帕金森病α-synuclein转基因小鼠模型中的表达变化情况,了解GRK5在帕金森病中的可能作用,为发现帕金森病发病机制和探索更好的治疗方法提供新的方向。方法采用Western blotting和实时荧光定量PCR技术对具有不同的人alpha synuclein(hα--syn)表达水平的帕金森病α-synuclein转基因模型小鼠以及3月龄,6月龄以及9月龄A53T突变型帕金森病α-synuclein转基因模型小鼠脑组织进行GRK5的RNA和蛋白水平检测,与同窝阴性对照小鼠进行比较。结果各组帕金森病α-synuclein转基因小鼠与阴性对照小鼠相比,GRK5蛋白表达水平均有不同程度的增加,并且随着转入的hα--syn蛋白表达水平的高低而有所变化。3月龄和6月龄帕金森病转基因模型小鼠与同月龄阴性对照组小鼠相比,GRK5的mRNA和蛋白水平没有变化;而9月龄帕金森病转基因模型小鼠与同月龄阴性对照组小鼠相比,GRK5的mRNA和蛋白水平都有所增加。结论帕金森病α-synuclein转基因模型小鼠具有更高表达水平的GRK5。

G蛋白偶联受体激酶5在稳定表达α-Synuclein的SHSY5Y细胞中的基因表达调控功能

目的观测G蛋白偶联受体激酶5(G protein-coupled receptor kinase,GRK5)在稳定表达hα-synuclein(人突触核蛋白)的SHSY5Y细胞的胞核、胞浆中的表达情况并对其在帕金森病中的可能作用进行研究。方法应用Western blotting、组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)活性检测技术以及shRNA干扰技术等对稳定表达hα-synuclein的SHSY5Y细胞中GRK5的表达及其亚细胞分布、胞核内GRK5蛋白的功能进行研究。结果发现GRK5蛋白在过表达hα-synuclein的细胞核以及细胞浆内均表达增加,胞核中的GRK5蛋白通过影响组蛋白去乙酰化酶的活性对bcl-2基因的转录和表达进行调控。结论帕金森模型中GRK5通过对bcl-2基因的表达进行调控发挥作用。

Polymyxin B Alleviates Angiotensin II-Induced Stress Fiber Formation and Cellular Hypertrophy

Polymyxin B is widely used antibiotic in the clinic for resistant Gram-negative infections. In addition, polymyxin B-immobilized hemoperfusion cartridge has been used for endotoxin removal therapy in patients with septic shock. The aim of this study was to investigate the anti-fibrotic and anti-cellular hypertrophic effects of polymyxin B, and further to explore its possible mechanism. Polymyxin B (3, 10 μM) significantly inhibited stress fiber formation induced by angiotensin II (Ang II) in rat heart-derived H9c2 cells. Furthermore, polymyxin B (1 - 10 μM) showed a potent inhibitory effect on Ang II-induced cellular hypertrophy in H9c2 cells. Under the mechanism study, the inhibitory activities of polymyxin B against kinases involved in cellular hypertrophy such as AKT1, CAMK, GRK5, GSK3β, MLCK, PKC, PKD2, AMPK, ROCK2, p70S6K, SGK1were evaluated. Polymyxin B possesses a potent G protein related kinase 5 (GKR5) inhibitory activity with IC50 value of 1.1 μM, and has an ATP non-competitive inhibitory mode. Taken together, these results indicate that polymyxin B alleviates Ang II-induced stress fiber formation and cellular hypertrophy, and propose that one mechanism underlying these effects involves inhibition of the GRK5 pathway.

骨边刺电针干预对骨癌痛吗啡耐受大鼠蓝斑核的影响

目的:观察骨边刺电针对骨癌痛吗啡耐受大鼠蓝斑核G蛋白耦联受体激酶5(GRK5)、β-抑制蛋白2(β-arrestin2)、蛋白激酶Cα(PKCα)及其磷酸化(p-PKCα)表达的影响,部分揭示骨边刺电针干预骨癌痛吗啡耐受的中枢机制。方法:SD大鼠随机分为假骨癌痛组、骨癌痛组、吗啡耐受组、骨边刺电针组和假电针组,每组8只。采用胫骨骨髓腔内注射3μL MRMT-1大鼠乳腺癌细胞建立骨癌痛模型,在此基础上通过腹腔多次注射盐酸吗啡注射液(10 mg/kg)建立骨癌痛吗啡耐受模型。骨边刺电针组于成功建立骨癌痛吗啡耐受模型后,开始介入骨边刺电针干预,每日1次,持续7 d。动态观察各组大鼠患侧足跖机械痛阈。采用免疫印迹法观察各组大鼠患侧蓝斑核GRK5、β-arrestin2、PKCα、p-PKCα蛋白表达。结果:与假骨癌痛组比较,癌细胞接种后10 d骨癌痛组大鼠患侧足跖机械痛阈显著降低(P<0.01);吗啡注射后,与骨癌痛组比较,吗啡耐受组、骨边刺电针组和假电针组大鼠患侧足跖机械痛阈显著升高(P<0.01),而吗啡注射11 d后,吗啡耐受组机械痛阈显著降低,与骨癌痛组比较差异无统计学意义(P>0.05),出现耐受现象;与吗啡耐受组、假电针组比较,骨边刺电针组干预后机械痛阈明显升高(P<0.01)。与假骨癌痛组比较,吗啡耐受组大鼠蓝斑核GRK5蛋白表达显著降低(P<0.01);与吗啡耐受组和假电针组比较,骨边刺电针组蓝斑核GRK5蛋白表达显著升高(P<0.01)。与假骨癌痛组比较,骨癌痛组大鼠蓝斑核β-arrestin2、p-PKCα蛋白表达显著增多(P<0.01);与吗啡耐受组和假电针组比较,骨边刺电针组蓝斑核β-arrestin2、p-PKCα蛋白表达显著降低(P<0.01)。与吗啡耐受组和假电针组比较,骨边刺电针组蓝斑核PKCα蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:骨边刺电针可有效干预骨癌痛吗啡耐受现象,其机制可能与增加蓝斑核GRK5,抑制β-arrestin2、PKCα及其磷酸化水平有关。