海藻糖氧钒对小鼠胃肠道的氧化损伤以及Vc和GSH的抗氧化保护作用

目的探讨海藻糖氧钒(VT)对小鼠胃肠道的氧化应激损伤、GSH/GSTs通路基因表达的影响以及维生素C(Vc)和还原型谷胱甘肽(GSH)的保护作用。方法 30只雄性昆明小鼠随机分组:VT组(B组)、Vc+VT组(C组)、GSH+VT组(D组)、Vc+GSH+VT组(E组),每天灌服VT(125mg/kg),而正常对照组(A组)灌服等量生理盐水,Vc和GSH在VT给药前1h灌服,连续15d。取各组小鼠胃和十二指肠,DTNB法测定GSH含量,谷胱甘肽氧化法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,实时荧光定量PCR法检测GSH/GSTs通路相关基因GCLC、GSS、GSR和GSTpi的表达。结果 VT组胃、十二指肠的GSH含量、GSH-Px活性及GCLC、GSS、GSR和GSTpi的表达均低于A组(P<0.05)。C、D、E组各指标显著提高,但仅E组小鼠胃组织的指标恢复到正常对照组水平。C组和D组除十二指肠中GSR表达显著差异外,其余指标差异均无统计学意义。结论灌服VT对小鼠胃肠道产生一定的氧化应激损伤,并可影响GSH含量和GSH-Px活性以及GSH/GSTs通路相关基因的正常表达。外源补充Vc、GSH及两者联用有一定的抗氧化保护作用,降低了VT的毒性,且两者联用的效果更优,使胃中的相关指标达到正常水平。

氧化鱼油对草鱼肠道黏膜抗氧化应激通路基因表达水平的影响

为了探讨氧化鱼油对草鱼肠道黏膜损伤后,参与抗氧化应激的基因通路及其通路基因表达活性的变化,以草鱼为试验对象,灌喂氧化鱼油7d后,采集肠道黏膜组织并提取总RNA,采用RNA-seq方法,进行了氧化鱼油组和正常鱼油组草鱼肠道黏膜基因注释、IPA基因通路分析和基因表达活性差异分析。结果显示,组织切片观察发现氧化鱼油导致草鱼肠道黏膜出现严重的损伤;肠道黏膜中具有较为完整的"Keap1-Nrf2-ARE"基因调控通路。肠道黏膜在受到氧化鱼油的氧化损伤作用后,激活了细胞的抗氧化损伤保护机制,使NRF2介导的氧化应激反应通路基因差异表达显著性地上调,并导致了下游的GSH/GSTs通路基因差异表达显著性上调,促进了GSH的生物合成和GSTs的抗氧化作用;导致"Keap1-Nrf2-ARE"信号通路下游的热休克蛋白和泛素-蛋白酶体通路基因差异表达显著性上调,清除受损伤蛋白质,保护细胞结构完整性。研究表明,上述三类抗氧化应激通路构成了对肠道黏膜损伤细胞、损伤蛋白质的降解系统和清除系统,显示其对肠道黏膜组织和黏膜细胞的保护、修复发挥了重要的作用。

饲料氧化鱼油对草鱼谷胱甘肽/谷胱甘肽转移酶基因通路组织表达差异的影响

为了探讨草鱼不同器官组织应对饲料途径氧化鱼油应激的差异性,以豆油、氧化鱼油为饲料脂肪源分别设计豆油组和氧化鱼油2组等氮、等能半纯化饲料,在池塘网箱养殖草鱼(平均体重(65.5±1.5)g)7 d后,采集草鱼肾脏、心脏、大脑、脾脏、鳃、肠道、皮肤、肝胰脏、肌肉共9个器官组织。采用荧光定量PCR(RT-QPCR)的方法,测定了GSH合成代谢相关酶GCLC、GSS、GSR基因表达活性,以及三个谷胱甘肽转移酶GSTω1、GSTpi、MGSt1基因的表达活性。并测定了草鱼总谷胱甘肽T-GSH在以上九种组织中的含量。结果显示,(1)经氧化鱼油刺激后,肾脏和鳃组织中T-GSH显著上升(p<0.05);(2)经氧化鱼油刺激后,GCLC在肾脏、鳃中表达量显著上调(p<0.05),GSS在肠中显著上调(p<0.05),肝胰脏显著下调(p<0.05),GSR在鳃、肠道、肝胰脏中显著上调(p<0.05),肌肉中显著下调(p<0.05);(3)经氧化鱼油刺激后,GSTω1在肠道中显著上调(p<0.05),肌肉中显著下调(p<0.05),GSTpi在肾脏中显著上调(p<0.05),心脏、肌肉中显著下调(p<0.05),MGST1在肾脏、肠道显著上调(p<0.05),脾脏显著下调(p<0.05)。结果表明,肾脏、心脏、大脑、脾脏、鳃、肠道、肝胰脏、肌肉组织都均有完整的GSH/GSTs通路。短期氧化鱼油刺激后,各个组织中GSH/GSTs通路都受到一定的影响,其中肾脏、肠道、肝胰脏、鳃的GSH/GSTs通路相对其它组织受到影响更大。