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GST-TAT-GFP融合蛋白的表达、纯化及鉴定
被引量:
4
1
作者
何火聪
刘树滔
+2 位作者
潘剑茹
陈躬瑞
饶平凡
《福建医科大学学报》
2006年第4期334-337,共4页
目的获得融合TAT短肽的融合蛋白GST-TAT-GFP,以用于阐明TAT短肽的跨膜递送机理。方法以质粒pGEX-GFP为模板,扩增目的基因TAT-GFP,将其克隆至质粒pGEX-2T,用所构建的质粒pGEX-TAT-GFP转化大肠杆菌BL21并诱导表达,利用GS-4B亲和柱进行纯化...
目的获得融合TAT短肽的融合蛋白GST-TAT-GFP,以用于阐明TAT短肽的跨膜递送机理。方法以质粒pGEX-GFP为模板,扩增目的基因TAT-GFP,将其克隆至质粒pGEX-2T,用所构建的质粒pGEX-TAT-GFP转化大肠杆菌BL21并诱导表达,利用GS-4B亲和柱进行纯化,所得产物进行SDS-PAGE、Western blot及细胞跨膜实验鉴定。结果大肠杆菌细胞经诱导高效表达出约54.3 kD的蛋白,其相对分子质量与GST-TAT-GFP融合蛋白相符;Western blot显示该融合蛋白能够被抗GFP的抗体特异性识别;细胞实验表明融合TAT短肽的融合蛋白能跨膜进入细胞L-02、SMMC-7721、Hela和BEL-7402。结论在大肠杆菌表达系统中高效表达了有活性的GST-TAT-GFP融合蛋白。
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关键词
膜融合蛋白
gst-tat-gfp
基因表达
下载PDF
职称材料
TAT-PTD融合蛋白可能存在的跨膜递送作用机制
被引量:
12
2
作者
何火聪
刘树滔
+4 位作者
潘剑茹
傅蓉
陈菁
陈躬瑞
饶平凡
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第9期704-710,共7页
为探讨TATPTD融合蛋白的跨膜递送作用机制,采用DNA重组技术构建pGEXTATGFP表达质粒.在E.coliBL21表达GST-TAT-GFP,并用谷胱甘肽(glutathione)Sepharose4B亲和柱进行纯化.GST-TAT-GFP在不同条件下与细胞的作用结果表明,GST-TAT-GFP能有...
为探讨TATPTD融合蛋白的跨膜递送作用机制,采用DNA重组技术构建pGEXTATGFP表达质粒.在E.coliBL21表达GST-TAT-GFP,并用谷胱甘肽(glutathione)Sepharose4B亲和柱进行纯化.GST-TAT-GFP在不同条件下与细胞的作用结果表明,GST-TAT-GFP能有效进入HeLa、SMMC7721、L02和BEL7402细胞,GST-TAT-GFP在递送时对时间和浓度有依赖关系.同时,温度对GST-TAT-GFP跨膜作用具有明显的影响,GST-TAT-GFP的跨膜作用受代谢抑制剂的影响很小,肝素的存在能明显抑制GST-TAT-GFP跨膜进入细胞的能力,GST-TAT-GFP对细胞活性没有影响.这些结果说明,TATPTD可能是通过与细胞表面的硫酸乙酰肝素等受体相结合介导融合蛋白跨膜递送进入细胞的.
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关键词
TAT-PTD
跨膜递送
gst-tat-gfp
下载PDF
职称材料
带有TAT-PTD跨膜转导域融合基因的原核表达及表达条件优化
3
作者
何火聪
刘树滔
+3 位作者
潘剑茹
傅蓉
陈菁
陈躬瑞
《福州大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期606-610,616,共6页
为构建pGEX-TAT-GFP原核表达质粒并优化GST-TAT-GFP表达条件,将PCR扩增的基因TAT-GFP克隆至质粒pGEX-2T,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并优化表达条件,表达产物进行SDS-PAGE、Western blot及荧光学特性鉴定.结果表明:构建的质粒经PCR...
为构建pGEX-TAT-GFP原核表达质粒并优化GST-TAT-GFP表达条件,将PCR扩增的基因TAT-GFP克隆至质粒pGEX-2T,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并优化表达条件,表达产物进行SDS-PAGE、Western blot及荧光学特性鉴定.结果表明:构建的质粒经PCR、酶切和DNA测序正确,含有重组质粒的宿主菌经过IPTG诱导表达分子量约为54.3 kD的融合蛋白GST-TAT-GFP,并经优化确定最佳的诱导表达条件.
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关键词
GST—TAT—GFP
大肠杆菌
融合基因
原核表达
优化
原文传递
题名
GST-TAT-GFP融合蛋白的表达、纯化及鉴定
被引量:
4
1
作者
何火聪
刘树滔
潘剑茹
陈躬瑞
饶平凡
机构
福建省肿瘤医院放射生物学研究室
福州大学生物工程研究所
出处
《福建医科大学学报》
2006年第4期334-337,共4页
基金
福建省自然科学基金重大科技项目(2001F009)
福州大学发展基金资助项目[2002-XY-11XJY-0241XKJ(QD)-0132]
文摘
目的获得融合TAT短肽的融合蛋白GST-TAT-GFP,以用于阐明TAT短肽的跨膜递送机理。方法以质粒pGEX-GFP为模板,扩增目的基因TAT-GFP,将其克隆至质粒pGEX-2T,用所构建的质粒pGEX-TAT-GFP转化大肠杆菌BL21并诱导表达,利用GS-4B亲和柱进行纯化,所得产物进行SDS-PAGE、Western blot及细胞跨膜实验鉴定。结果大肠杆菌细胞经诱导高效表达出约54.3 kD的蛋白,其相对分子质量与GST-TAT-GFP融合蛋白相符;Western blot显示该融合蛋白能够被抗GFP的抗体特异性识别;细胞实验表明融合TAT短肽的融合蛋白能跨膜进入细胞L-02、SMMC-7721、Hela和BEL-7402。结论在大肠杆菌表达系统中高效表达了有活性的GST-TAT-GFP融合蛋白。
关键词
膜融合蛋白
gst-tat-gfp
基因表达
Keywords
membrane fusion protein
gst-tat-gfp
gene expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
TAT-PTD融合蛋白可能存在的跨膜递送作用机制
被引量:
12
2
作者
何火聪
刘树滔
潘剑茹
傅蓉
陈菁
陈躬瑞
饶平凡
机构
福州大学生物工程研究所
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第9期704-710,共7页
基金
福建省自然科学基金重大科技项目(No.2001F009)
南昌大学食品科学教育部重点实验室开放基金(No.NCU200403)资助~~
文摘
为探讨TATPTD融合蛋白的跨膜递送作用机制,采用DNA重组技术构建pGEXTATGFP表达质粒.在E.coliBL21表达GST-TAT-GFP,并用谷胱甘肽(glutathione)Sepharose4B亲和柱进行纯化.GST-TAT-GFP在不同条件下与细胞的作用结果表明,GST-TAT-GFP能有效进入HeLa、SMMC7721、L02和BEL7402细胞,GST-TAT-GFP在递送时对时间和浓度有依赖关系.同时,温度对GST-TAT-GFP跨膜作用具有明显的影响,GST-TAT-GFP的跨膜作用受代谢抑制剂的影响很小,肝素的存在能明显抑制GST-TAT-GFP跨膜进入细胞的能力,GST-TAT-GFP对细胞活性没有影响.这些结果说明,TATPTD可能是通过与细胞表面的硫酸乙酰肝素等受体相结合介导融合蛋白跨膜递送进入细胞的.
关键词
TAT-PTD
跨膜递送
gst-tat-gfp
Keywords
TAT-PTD
transmembrane
gst-tat-gfp
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
Q26 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
带有TAT-PTD跨膜转导域融合基因的原核表达及表达条件优化
3
作者
何火聪
刘树滔
潘剑茹
傅蓉
陈菁
陈躬瑞
机构
福建省肿瘤医院放射生物研究室
福州大学生物工程研究所
出处
《福州大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期606-610,616,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(30800285/C100804)
福建省卫生教育联合攻关项目(WKJ2008-2-47-1)
福建省卫生厅青年科研资助项目(2007-1-20)
文摘
为构建pGEX-TAT-GFP原核表达质粒并优化GST-TAT-GFP表达条件,将PCR扩增的基因TAT-GFP克隆至质粒pGEX-2T,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并优化表达条件,表达产物进行SDS-PAGE、Western blot及荧光学特性鉴定.结果表明:构建的质粒经PCR、酶切和DNA测序正确,含有重组质粒的宿主菌经过IPTG诱导表达分子量约为54.3 kD的融合蛋白GST-TAT-GFP,并经优化确定最佳的诱导表达条件.
关键词
GST—TAT—GFP
大肠杆菌
融合基因
原核表达
优化
Keywords
GST - TAT - GFP
E coli
fusion gene
prokaryotic expression
optimization
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
GST-TAT-GFP融合蛋白的表达、纯化及鉴定
何火聪
刘树滔
潘剑茹
陈躬瑞
饶平凡
《福建医科大学学报》
2006
4
下载PDF
职称材料
2
TAT-PTD融合蛋白可能存在的跨膜递送作用机制
何火聪
刘树滔
潘剑茹
傅蓉
陈菁
陈躬瑞
饶平凡
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
12
下载PDF
职称材料
3
带有TAT-PTD跨膜转导域融合基因的原核表达及表达条件优化
何火聪
刘树滔
潘剑茹
傅蓉
陈菁
陈躬瑞
《福州大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010
0
原文传递
已选择
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