ERCC1和GST-pi在肺癌中的表达及预后意义

背景与目的切除修复交叉互补基因1(excision repair cross complementing 1,ERCC1)和谷胱甘肽S-转移酶-Pi(glutathione S-transferase Pi,GST-pi)与肿瘤的发生与预后密切相关。本研究探讨ERCC1和GST-pi在肺癌中的表达与临床病理特征和预后的意义。方法选取148例肺癌标本,与7例正常肺组织标本一起制成组织芯片,应用免疫组化S-P法检测ERCC1和GST-pi的表达,并与临床病理特征及预后进行比较分析。结果ERCC1和GST-pi在肺癌标本中的阳性表达率分别为36.2%和73.6%,ERCC1和GST-pi在正常肺组织标本中均无表达,ERCC1阳性表达在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)、分化程度为中高分化和吸烟指数<400的患者中明显升高(P值均<0.05),GST-pi阳性表达在无吸烟者及非小细胞肺癌患者中明显升高(P值均<0.05)。ERCC1和GST-pi的表达呈正相关(r=0.253,P=0.001)。Kaplan-Meier生存分析显示,ERCC1阳性表达者5年总生存率优于阴性表达者,ERCC1的表达与生存显著相关(P=0.037),GST-pi的表达与生存无显著相关(P=0.614)。Cox多因素分析结果显示,NSCLC患者中肿瘤大小(P=0.028,95%CI:1.087-4.378,RR=2.181)和临床分期(P=0.019,95%CI:1.076-2.279,RR=1.566)是影响预后的独立危险因素;ERCC1和GST-pi的表达不是影响预后的独立因素。结论ERCC1和GST-pi在非小细胞肺癌中表达升高并且存在正相关关系,可能在非小细胞肺癌发生发展中起协同作用。ERCC1阳性表达者生存期长,可能在预后判定中有一定作用。

大肠癌细胞GST-Pi免疫细胞化学的超微结构定位

探讨 GST- Pi在大肠癌细胞内亚微结构定位及其与大肠癌发生的关系。应用免疫电镜技术 (免疫胶体金法 )对 6例大肠腺癌及 3例正常大肠粘膜细胞进行 GST- Pi的定位观察。 6例大肠癌细胞内均出现 GST- Pi胶体金阳性颗粒 ,主要分布于胞浆的线粒体、溶酶体、近胞膜部位的胞浆中 ,也分布在核内和核膜上。金颗粒呈团状、点灶状分布 ,图象清晰。 3例正常粘膜细胞内未见 GST- Pi的金颗粒阳性表达。结果表明 ,GST- Pi在癌细胞内的特异性表达可作为大肠癌的诊断指标之一。

TopoⅡ、P170、GST-pi蛋白在胃癌中表达与临床病理及预后的关系

[目的]探讨胃癌中P-糖蛋白(P170)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)和谷胱苷肽-S转移酶(GST-pi)的表达和胃癌的临床病理特征及其预后的关系及意义。[方法]免疫组化检测160例胃癌组织中的P170、TopoⅡ及GST-pi的表达,收集临床病理资料,随访患者的生存时间。分析各因子表达、临床病理资料和预后的关系。[结果]P170和GST-pi的表达呈正相关(P<0.01),P170表达与肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移及TNM分期呈正相关(P<0.05)。GST-pi表达与远处转移及TNM分期呈正相关(P<0.05)。TopoⅡ的表达与侵袭深度、远处转移及TNM分期呈正相关(P<0.05)。单因素分析发现患者年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、病理分级、侵袭深度、淋巴转移、远处转移、TNM分期、TopoⅡ、P170、GST-pi均与预后有关(P<0.05)。Cox风险模型多因素分析发现肿瘤部位、病理分级、侵袭深度、淋巴转移、GST-pi是影响胃癌预后的独立因素(P<0.05)。[结论]TopoⅡ、P170、GST-pi均与胃癌的某些临床病理特征呈一定的相关性,肿瘤部位、病理分级、侵袭深度、淋巴转移、GST-pi是影响胃癌预后的独立因素。

LRP、TOPO-Ⅱ和GST-Pi在NSCLC中表达及临床研究

目的 检测肺癌耐药蛋白 (Lungresistanceprotein ,LRP)、DNA拓扑异构酶Ⅱ (Topoisomerase ,TOPO Ⅱ )和酸性谷胱甘肽 -S -转移酶 (Glutathion S transferase ,GST Pi)在非小细胞肺癌 (Non smallcelllungcancer ,NSCLC)中的表达。探讨其在NSCLC中的表达水平及其临床相关性。 方法 用SP免疫组化方法分别检测 95例术前未进行化疗的NSCLC组织中LRP、TOPO Ⅱ和GST Pi的表达情况。 结果 在NSCLC中LRP、TOPO Ⅱ和GST Pi的阳性率分别为 64 2 1%( 61 95 ) ;60 % ( 5 7 95 ) ;73 69% ( 70 95 )。TOPO Ⅱ与组织类型相关 ,GST Pi表达与组织类型、细胞分化有关。TOPO Ⅱ与GST Pi之间呈负相关 (P <0 0 5 ) ;LRP、TOPO Ⅱ和GST Pi的阳性表达均与生存率相关 ,且三者协同表达与生存率之间差异有显著性 (P <0 0 1)。 结论 LRP、TOPO Ⅱ和GST Pi在不同类型的NSCLC中均可表达 ,但水平不同。它们与NSCLC的耐药明显相关 ,且有一组有效判断预后的综合指标 ;它们的联合检测 ,将为优化治疗方案 ,提高非小细胞肺癌化疗效果提供科学的依据。

子宫内膜癌组织中的rasp21及GST-pi表达的对比

目的探讨ｒａｓｐ２１与ＧＳＴｐｉ在子宫内膜癌发生、发展过程中的表达状态及意义。方法用免疫组化ＬＳＡＢ法对３２例子宫内膜腺癌和１２例子宫内膜增生过长组织进行检测，观察ｒａｓｐ２１和ＧＳＴｐｉ在病变组织中的分布。结果３２例子宫内膜癌中ｒａｓｐ２１、ＧＳＴｐｉ阳性率分别为６５．６％（２１／３２）和７１．９％（２３／３２）；１２例子宫内膜增生过长组织中的ｒａｓｐ２１，ＧＳＴｐｉ阳性率分别为１６．７％（２／１２）和３３．３％（４／１２）。ｒａｓｐ２１，ＧＳＴｐｉ在癌组织中的表达均高于子宫内膜增生过长（Ｐ＜０．０１；Ｐ＜０．０５）。结论ｒａｓｐ２１和ＧＳＴｐｉ均与子宫内膜癌的发生发展有关，两种标记物在子宫内膜高、中分化癌及癌前病变中的表达有协同作用。

电镜免疫金标记在大肠癌细胞GST-Pi定位中的应用

目的 探讨免疫电镜胶体金技术在大肠癌细胞GST -Pi定位中的应用及某些关键技术环节的处理。方法 应用免疫电镜胶体金技术对 6例大肠癌及 3例正常大肠粘膜细胞进行GST -Pi的定位观察。结果 大肠粘膜细胞结构清晰 ,金颗粒呈团状、点灶状分布 ,特异性强 ,无非特异性散在金颗粒。结论 免疫电镜金标记技术是大肠癌细胞GST -Pi超微结构定位的有效方法。对某些关键性技术环节的处理是获得理想免疫金染色切片的保证。

不同食管上皮组织中GST-Pi的表达及意义

目的探讨食管不同上皮组织中GST-Pi表达以了解其在癌发生发展过程中的作用。方法应用免疫组化SP法观察40例“正常”食管鳞状上皮、10例轻度不典型增生、20例重度不典型增生和40例食管鳞状上皮癌组织中GST-Pi蛋白阳性表达率。结果由正常”食管鳞状上皮-轻度不典型增生-重度不典型增生-食管癌组织中GST-Pi的表达呈逐渐降低的趋势看出,癌组织的表达明显低于正常上皮和轻度增生组,差异均有显著意义(P<0.01)。结论GST-Pi可能与食管癌的发生、发展密切相关。

乳癌组织中GST-Pi,ToPoII和PgP耐药基因的表达

目的 探讨乳癌组织中GST Pi ,ToPoII和PgP耐药基因的表达及其生物学意义。 方法 采用即用型免疫组化微波加热法 ,检测 5 2例乳癌GST Pi ,ToPoII和PgP耐药基因。结果 (1) 5 2例乳癌中的GST Pi ,ToPoII和PgP的阳性表达率分别为 5 0 .0 % (2 6/ 5 2 ) ,17.3 % (9/ 5 2 )和 11.5 % (6/ 5 2 ) ;(2 )浸润性导管癌对三种耐药基因均呈不同程度的阳性表达 ,较其它组织学类型的乳癌的耐药基因更为广泛。 (3 )乳癌中的GST Pi ,ToPoII和PgP阳性表达大多与年龄无明显关系 ,但 40～ 49岁和 60～ 69岁年龄组的三种耐药基因阳性表达较其他年龄组为高。结论 (1)部分乳癌患者的体内存在多向耐药基因 ,或癌细胞内 (原发 )存在GST Pi ,ToPoII和PgP ,对抗癌药物已产生耐药性。 (2 )对乳癌患者在化疗前进行耐药基因检测 ,有助于联合用药的合理选择、提高疗效及延长患者生存期。

转导GST-pi基因表达抑制甲基丙烯酸环氧丙酯的致癌作用

环境中的化学致癌物是引发癌症的主要原因 .谷胱甘肽S 转移酶 (GST)pi在防止各种内、外源毒物对细胞的损害方面起关键性作用 .GST pi基因与反转录病毒载体 (pXT1)重组后转染 3T3细胞 ,使该基因在 3T3细胞中整合和表达 .研究发现 :GST pi的表达可以防止化学致癌物甲基丙烯酸环氧丙酯 (GMA)诱导的细胞恶性转化 .此结果为进一步探讨GST

Prevention of chemical carcinogenesis using glutathine S-transferase-pi (GST-pi)

In order to explore whether the protective function of GST-pi can prevent transformation in vitro, NIH3T3 cells and carcinogen glycidyl methacrylate (GMA) have been used in cell transformation study. NIH3T3 cells have been transfected with GST-pi cDNA inserted retrovirus vector, pXT1, and then G418 resistant clones have been analyzed by Southern and Northern analyses. NIH3T3/pXGST clones that stably express GST-pi and control cells,

基于PI3K/Akt信号通路探讨抗纤抑癌方干预肝癌前病变的作用机制

目的:研究抗纤抑癌方对肝癌前病变大鼠PI3K/Akt信号通路的影响。方法:雄性Wistar大鼠85只,随机分为正常组、模型组、抗纤抑癌低、中、高剂量组及鳖甲软肝组。采用二乙基亚硝胺腹腔注射制备肝癌前病变模型,抗纤抑癌方进行干预,复方鳖甲软肝片作为对照;采用免疫组化法检测GST-Pi的表达,实时荧光定量PCR及Western blot法检测PI3K、Akt mRNA及蛋白的表达。结果:与模型组相比,抗纤抑癌高剂量组GST-Pi阳性表达面积明显减少,染色减轻,MOD值显著降低(P<0.05);与模型组相比,抗纤抑癌低、中、高剂量组及鳖甲软肝组PI3K、Akt mRNA的表达均显著降低(P<0.01),抗纤抑癌低、中、高剂量组PI3K、p-PI3K蛋白表达显著降低(P<0.01或P<0.05),抗纤抑癌中、高剂量组p-Akt蛋白表达显著降低(P<0.01);与鳖甲软肝组相比,抗纤抑癌高剂量组PI3K mRNA及p-PI3K蛋白的表达显著降低(P<0.05)。结论:抗纤抑癌方可通过调控PI3K/Akt信号抑制肝癌前病变。

细胞周期因子CyclinDs的表达水平与口腔鳞癌对顺铂敏感性的关系

目的:寻找口腔鳞癌对顺铂耐药的相关基因,以预测临床化疗效果并指导临床化疗。方法:收集口腔鳞癌标本,根据其体外药敏测试(改良MTT法)进行分组,同时用免疫组化法检测这些标本中CyclinDs(CCND1、CCND3)、P鄄gp和GST鄄Pi的表达情况。结果:根据药敏测试结果,最后收集到顺铂耐药标本23例,顺铂敏感标本20例。对免疫组化结果采用SAS5.0统计软件分析,发现只有CCND1和CCND3的表达水平与标本顺铂敏感性有关,CCND1阳性率高往往提示肿瘤细胞对顺铂不敏感。结论:细胞周期因子CyclinDs的表达异常与口腔鳞癌顺铂耐药性相关,可被纳入口腔鳞癌顺铂耐药相关基因表达谱。

人肺腺癌顺铂耐药细胞A549/CDDP对铂类化疗药的敏感性及耐药基因表达改变的研究

目的:探讨人肺腺癌细胞系A549/CDDP对铂类化疗药耐药的机制。方法:应用MTT法检测人肺腺癌细胞A549及其顺铂耐药细胞A549/CDDP对铂类化疗药(CDDP、CBD及L-OHP)的敏感性,应用RT-PCR法比较两细胞系多药耐药基因(包括MDR1,ABCG2,MRP1,LRP),DNA-polβ和GST-pi等在mRNA水平的表达差异,筛选出差异基因,用Western blotting法验证该基因在蛋白水平的表达差异。结果:MTT实验发现,与人肺腺癌细胞系A549相比,顺铂耐药细胞A549/CDDP对CDDP的耐药系数(RI)为7.877,而A549/CDDP细胞也对CBD及LOHP交叉耐药(RI分别为4.486及2.352);RT-PCR发现两细胞系的MDR1,ABCG2,MRP1,LRP及GST-pi等耐药基因在mRNA水平无明显差异,但A549/CDDP细胞中DNA-polβ在mRNA及蛋白表达水平均较A549细胞明显升高。结论:A549/CDDP细胞内DNA-polβ表达升高可能与铂类耐药有关。

蛇葡萄素与苯并芘合用对大鼠肝组织内CYP和GST基因表达的影响

目的：观察蛇葡萄素与苯并芘合用对大鼠肿组织内CYP和GST基因表达的影响。方法：蛇葡萄素（二氢杨梅素）250mg／kg、500mg／kg，溶于蒸馏水，空白组和模型组给等体积的蒸馏水，雄性SD大鼠，灌胃给药15口，第15目模型组和两个给药组分别腹腔注射（ip）苯并芘100mg／kg（溶于玉米油），空白对照组ip等容积玉米油，禁食不禁水，24小时后断头取出肝组织，用逆转录．实时荧光定量PCR法检测肝组织内的的细胞色素P450基因CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1和谷胱甘肽．S转移酶基因GST-ml、GST-pi的表达情况。结果：苯并芘组（模型组）可明显诱导肝组织内的CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1基因表达（p〈0．0001），分别是空白对照组的121倍、11倍、684倍，但不影响谷胱甘肽-S转移酶基因GST-ml和GST-pi的表达，反而有抑制趋势，分别是空白对照组的0．79倍和0．82倍；蛇葡萄素（二氢杨梅素）组＋苯并芘组可明显诱导肝组织内的CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1基因表达（p〈0．0001），蛇葡萄素250mg／kg＋苯并芘组和蛇葡萄素500mg／kg＋苯并芘组分别是空白对照组的189和289倍（有剂量效应关系）、16．9和44．5倍（有剂量效应关系）、914和804倍（无明显的剂量效应关系），与苯并芘组（模型组）相比，蛇葡萄素250mg／kg＋苯并芘组和蛇葡萄素500mg／kg＋苯并芘组不影响CYP1B1的基因表达，但明显诱导CYP1A1的基因表达，分别是苯并芘组（模型组）的1．56倍（p〉0．05）和2．39倍（p〈0．05），呈明显的剂量效应关系：明显诱导CYP1A2的基因表达，分别是苯并芘组（模型组）的1．53倍（p〈0．05）和4．04倍（p〈0．05），呈明显的剂量效应关系。

谷胱甘肽巯基转移酶pi参与肿瘤细胞耐药性的产生

目的建立携带大鼠谷胱甘肽巯基转移酶ｐｉ（ＧＳＴ－ｐｉ）ＣＤＮＡ的细胞表达体系。方法用磷酸钙沉淀法将重组质粒ｐＳＶ－ＧＴ和载体质粒ｐＳＶ－ｎｅｏ分别转染ＨｅＬａ细胞，Ｇ４１８筛选得两株转染阳性细胞ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ和ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ｎｅｏ；采用细胞原位杂交法，以地高辛标记的ＧＳＴ－ｐｉ ｃＤＮＡ为探针，检测两细胞株ＧＳＴ－ｐｉｍＲＮＡ的表达水平；用ＭＴＴ法检测不同抗癌药物对细胞株的毒性作用。结果ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ的ＧＳＴ－ｐｉｍＲＮＡ表达明显升高，而ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ｎｅｏ和ＨｅＬａ细胞的表达水平很低。阿霉素、丝裂霉素Ｃ和顺铂对ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ的ＩＣ５０分别为７０．１３、１０．９５和１６．５２ｕｇ／ｍｌ，对ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ｎｅｏ的ＩＣ５０分别为１０．３４、７．４８和１３．７０ｕｇ／ｍｌ，长春新碱对两细胞株的毒性无明显差别。结论ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ细胞具有较高的耐药性。ＧＳＴ－ｐｉｍＲＮＡ的大量表达可能是产生多药耐药的原因，此细胞株可作为一个稳定的遗传学系统在ＧＳＴ－ｐｉ与肿瘤细胞耐药的研究中广泛应用。

氧化应激致慢性水砷暴露小鼠肝损伤作用

目的比较不同价态的砷对小鼠脐组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶(GST-Pi)表达的影响,探讨氧化应激在慢性砷暴露致肝损伤中的作用。方法60只雄性昆明种小鼠,体重(20±2)g,随机分为对照组、亚砷酸钠组和砷酸钠组。染毒10个月后处死小鼠,检测血清肝功能;测定肝组织总砷含量;做病理检查;Trizol-酚-氯仿一步法提取小鼠肝组织总RNA,紫外分光光度法测定总RNA浓度及纯度。逆转录PCR(RT-PCR)技术测定小鼠肝组织中GSH-Px和GST-Pi mRNA的表达,以18S基因作为质控。结果亚砷酸钠组在肝组织中的砷蓄积量〔(3992±250)ng/g组织〕高于砷酸钠组〔(2603±357)ng/g组织〕(P<0.05);砷暴露组的肝组织病理检查显示有明显组织损伤;与对照组比较,亚砷酸钠组的血清丙氨酸转氨酶(ALT)〔(61.46±13.85)U/L〕、天冬氨酸转氨酶(AST)〔(510.86±59.01)U/L〕、球蛋白(Glb)〔(26.94±3.73)g/C)〕L值均显著升高,肝组织中GST-Pi mRNA的表达(163.3±11.6)降低,P<0.05。结论砷致小鼠肝损伤与砷在肝组织中的蓄积有关。氧化应激可能是慢性饮水砷中毒致小鼠肝损伤的机制之一。

难治性癫痫患者外周血中生物学标记物的表达

目的通过对难治性癫痫(intractable epilepsy,IE)患者外周血中多耐药基因(multidrug resistance 1,MDR1)、P糖蛋白(p glycoprotein,P-gp)及谷胱甘肽转移酶(glutathione transferaseπ,GST-Pi)的检测来探讨IE的发病机制;探讨这3项指标作为患者外周血标志物对临床治疗的指导意义。方法本研究分为3组,IE患者31例,抗癫痫药物(antiepileptic drugs,AEDs)控制良好者33例,健康者37例。采用荧光定量聚合酶链反应技术检测患者外周血中MDR1及GST-Pi的m RNA、流式细胞术检测患者外周血中MDR1的表达产物P-gp的表达。结果在MDR1基因与GST-Pi基因相对表达量方面,IE组(1.36±0.14,0.585±0.257)显著高于AEDs治疗有效组(0.82±0.15,0.309±0.217),(P<0.05);而AEDs治疗有效组又显著高于正常组(0.27±0.07,0.134±0.223),(P<0.05)。在白细胞P-gp方面,IE组(0.104±0.084)显著高于AEDs治疗有效组(0.063±0.030),(P<0.05)。在用药方式上,GST-Pi基因相对表达量方面,给予3种(0.535±0.256)及2种(0.425±0.254)AEDs联合治疗均显著高于给单药(0.267±0.265)治疗,(P<0.05);在白细胞P-gp方面,3种(0.141±0.096)AEDs联合治疗显著高于2种(0.071±0.020)AEDs联合治疗与单药(0.050±0.020)治疗,(P<0.05)。结论癫痫患者外周血中的MDR1、P-gp及GST-Pi基因相对表达量或可作为IE的综合参考指标以及IE联合用药的耐药指标之一。

糖痹康对糖尿病大鼠坐骨神经Ⅱ相代谢酶GCLc和GST pi蛋白与mRNA的影响

目的观察糖痹康对糖尿病大鼠坐骨神经II相代谢酶谷氨酸半胱氨酸连接酶亚基(glutamate-cysteine ligase catalytic subunit,GCLc)和谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione s-transferase,GST)pi蛋白与mRNA的影响,探讨糖痹康对糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经保护作用机制。方法雄性SD大鼠,高脂饲料与小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)联合诱发糖尿病大鼠模型,模型成功后将糖尿病大鼠随机分为5组:模型组、α-硫辛酸(alpha lipoic acid,ALA)组(0.0268g/(kg·d),糖痹康高(2.5g/kg)、中(1.25g/kg)、低(0.625g/kg)剂量组,每组10只,另将雄性SD大鼠10只设为正常组。治疗12周后测大鼠右侧坐骨神经传导速度;Western blot检测大鼠坐骨神经中GCLc和GST pi蛋白的表达;实时荧光定量PCR检测大鼠坐骨神经中GCLc和GST pi mRNA的表达。结果与模型组相比,12周后ALA组、糖痹康高、中剂量组大鼠坐骨神经传导速度明显升高(P<0.05);ALA组、糖痹康高、中剂量组GCLc和GST pi蛋白及mRNA表达均明显高于模型组(P<0.05)。结论糖痹康可通过诱导Ⅱ相代谢酶GCLc和GST pi改善糖尿病大鼠坐骨神经损伤。