绵羊GSTA2基因克隆、生物信息学分析及真核表达载体构建

为阐明绵羊谷胱甘肽S转移酶α2(Glutathione S-transferase alpha 2,GSTA2)基因功能,利用牛GSTA2基因序列设计引物,提取绵羊皮肤组织总RNA,应用RT-PCR、基因克隆、生物信息学对GSTA2基因进行研究,构建真核表达载体,转染绵羊皮肤成纤维细胞,应用qPCR技术检测GSTA2基因的表达。结果表明,克隆到绵羊GSTA2基因672 bp编码区序列(GenBank登录号:OR440604.1),编码223个氨基酸,分子量为25.39 ku。氨基酸比对和系统进化树分析表明,绵羊与牛的GSTA2相似度最高,达87.39%。GSTA2的二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。构建的真核表达载体pcDNA3.1-GSTA2转染绵羊皮肤成纤维细胞后,GSTA2基因表达量极显著上调(P <0.001)。说明成功克隆了绵羊新基因GSTA2的CDS序列,并成功构建了其真核表达载体。

GSTA1作为CCl_4致小鼠急性肝损伤早期诊断指标的研究

通过时间-效应和剂量-效应关系研究急性肝损伤时血清中谷胱甘肽硫转移酶A1(GSTA1)与丙氨酸氨基转移酶(ALT)的变化。用0.35%的CCl_4给小鼠灌胃,分别于染毒后1、2、4、6、12、16、24、28、48 h检测小鼠血清中GSTA1的含量和ALT活性。2 h时GSTA1开始升高,与对照组相比差异显著(P<0.05),而ALT在6 h才开始升高,与对照组相比差异显著(P<0.05)。在6 h时GSZA1的增加量与ALT相比较差异已相当显著,与对照组相比差异极显著(P<0.01)。在染毒后24 h,GSTA1和ALT都达到最大值。分别以0.125%、0.25%、0.3%、0.35%、0.4%、0.5%、0.7%的CClJ_4给小鼠灌胃,染毒24 h后检测ALT活性和GSTA1含量。当CCl_4浓度为0.125%时,与对照组相比,GSTA1含量增加差异极显著(P<0.01),而ALT与对照组相比无明显变化;当CCl_4浓度为0.35%时,ALT活性显著增加,与对照组相比差异极显著(P<0.01)。结果表明,在CCl_4、小鼠急性肝损伤中GSTA1比血清转氨酶检测出的时间更早,并且更加敏感,因此,GSTA1可作为急性肝损伤的标记物。

急性酒精性肝损伤小鼠模型及早期诊断指标GSTA1的研究

为研究谷胱甘肽S转移酶A1(GSTA1)在肝损伤早期诊断中的价值,本试验通过检测血清谷丙转氨酶(GPT)及肝组织指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)变化,成功复制急性酒精性肝损伤小鼠模型;通过时间-效应和剂量-效应关系研究血清中GSTA1和ALT变化。结果显示,给予小鼠灌服乙醇溶液后,2 h血清中GSTA1含量变化与对照组相比差异极显著(P<0.01),而ALT活性变化在6 h才显示出一定的差异性(P<0.05);当乙醇剂量为10 m L/kg体重时,血清中GSTA1含量变化与对照组相比差异极显著(P<0.01),而当乙醇剂量达到14 m L/kg体重时,ALT活性变化与对照组相比差异极显著(P<0.01)。表明在急性酒精性肝损伤模型中,GSTA1的含量变化在肝损伤早期就可检测出来,作为肝损伤标记物,GSTA1比ALT更敏感。

重组鸡GSTA3蛋白对福美双诱导的TD肉鸡血清中Bax含量的影响

为研究谷胱甘肽硫转移酶A3(GSTA3)对胫骨软骨发育不良(TD)肉鸡血清中凋亡因子Bax的影响,试验将90羽1日龄AA肉仔鸡预饲7 d后,随机分为6组(A,B,C,D,E和F组),分别在8,9日龄对D,E,F组饲喂添加100 mg/kg福美双的日粮,将饲喂基础日粮组(A,B,C组)和添加福美双日粮组(D,E,F组)的肉鸡各分对照组(A,D组)、重组GSTA3蛋白低剂量(20μg/kg)注射组(B,E组)和高剂量(50μg/kg)注射组(C,F组),在试验第8,10,12天腿部肌肉注射重组GSTA3蛋白,对照组注射稀释用PBS。在饲喂福美双后第1,2,4天分别采集各组肉鸡血液、分离血清,利用ELISA方法测定肉鸡血清中Bax的含量。结果显示,低剂量的重组GSTA3蛋白显著降低第2天基础日粮(B)组肉鸡血清中Bax的浓度,同时显著降低第4天福美双处理(E)组肉鸡血清中Bax的浓度;高剂量的重组GSTA3蛋白显著降低第4天基础日粮(C)组和福美双处理(F)组肉鸡血清中Bax的浓度。低剂量的重组鸡GSTA3蛋白对降低TD肉鸡血清中Bax含量的效果较好,这一研究将为肉鸡TD的防治提供新的方向和研究基础。

LASP1、GSTA3在鼻咽癌组织中的表达及与复发、转移的关系

目的探究LIM和SH3蛋白1(LASP1)、谷胱甘肽硫转移酶A3(GSTA3)在鼻咽癌组织中的表达及与复发、转移的关系.方法选取本院2012年9月至2016年5月收治的鼻咽癌患者117例作为研究对象,检测对比鼻咽癌患者癌组织、癌旁组织中LASP1、GSTA3 mRNA,比较不同临床特征患者癌组织中LASP1、GSTA3 mRNA,采用Logistic多元回归方程分析LASP1、GSTA3 mRNA与鼻咽癌复发、转移的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线分析LASP1、GSTA3 mRNA高危者、低危者生存曲线,采用Pearson分析LASP1、GSTA3 mRNA与无进展生存期(PFS)相关性.结果癌组织中LASP1 mRNA高于癌旁组织,GSTA3 mRNA低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);复发、转移、低分化、Ⅳ期鼻咽癌患者LASP1 mRNA高于未复发、转移、中高分化、Ⅲ期患者,GSTA3 mRNA低于未复发、转移、中高分化、Ⅲ期患者,差异有统计学意义(P<0.05);复发、转移鼻咽癌患者LASP1 mRNA高于未复发、未转移患者,GSTA3 mRNA低于未复发、未转移患者,差异有统计学意义(P<0.05);LASP1、GSTA3 mRNA与鼻咽癌复发、转移显著相关(P<0.05);复发鼻咽癌患者PFS为31.17个月,转移鼻咽癌患者PFS为8.72个月;复发与转移鼻咽癌患者LASP1 mRNA高表达者PFS短于低表达者,GSTA3 mRNA高表达者PFS长于低表达者,差异有统计学意义(P<0.05);LASP1 mRNA与PFS呈负相关,GSTA3 mRNA与PFS呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05).结论在鼻咽癌组织中,LASP1表达升高,GSTA3表达降低,对肿瘤复发、转移分别起到正负调节作用,并与PFS有关.

重组GSTA3蛋白对福美双诱导的肉鸡TD中抗凋亡基因BAG-3表达的影响

【目的】肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)是肉鸡常见的一种骨骼性疾病,研究重组GSTA3蛋白对福美双诱导的TD肉鸡软骨细胞中抗凋亡基因BAG-3表达的影响,为治疗TD提供新的思路和方法。【方法】将120羽1周龄肉雏鸡随机分为6组(编号为A、B、C、D、E、F组)。A、B、C组为基础日粮对照组,D、E、F组为添加福美双日粮诱导TD组。试验饲喂福美双2 d诱发TD,在添加福美双第1、3、5、7天,腿部肌肉注射重组鸡GSTA3蛋白和磷酸盐缓冲液,A组与D组注射(100μg·kg^-1)磷酸盐缓冲液;B组与E组注射低剂量(100μg·kg^-1)GSTA3;C组与F组注射高剂量(200μg·kg^-1)GSTA3。试验历时23 d。添加福美双后1、2、4、6、10和15 d采集胫骨生长板。通过Real-time qPCR检测BAG-3基因的mRNA水平,利用免疫组化来检测BAG-3蛋白表达水平。【结果】Real-time qPCR结果显示,TD损伤修复期内,相比较于基础日粮对照组,福美双对照组肉鸡胫骨生长板中BAG-3 mRNA的表达水平基本都显著上调(P<0.05);相比较于福美双对照组,E和F组在第2、4、10、15天都有显著差异,且在第10和15天显著低于福美双对照组(P<0.05),表明与D组相比恢复较快。免疫组化结果表明BAG-3蛋白在肉鸡胫骨软骨细胞的增殖区和前肥大区无表达,只在肥大区细胞质中表达;福美双组与空白对照组相比,BAG-3蛋白表达增加;福美双高低剂量组与未注射蛋白的福美双组相比,重组GSTA3增加了肥大区的蛋白表达水平(第10和15天)。【结论】在福美双诱导肉鸡发生TD的过程中,GSTA3重组蛋白能够通过调控BAG-3表达参与凋亡途径,抑制细胞凋亡。在TD损伤修复期,注射GSTA3后使抗凋亡基因BAG-3蛋白表达增强,从而可参与细胞凋亡来缓解TD损伤,使得肉鸡TD生长板功能较快地恢复正常。

重组GSTA3蛋白对福美双诱导的TD肉鸡生长性能的影响

胫骨软骨发育不良(TD)是在快速生长的肉鸡中常发的一种骨骼性疾病,给禽类养殖带来了严重的经济损失。试验在基础日粮中添加福美双,诱导产生TD肉鸡,然后分4次注射谷胱甘肽硫转移酶A3蛋白(GSTA3),探究谷胱甘肽硫转移酶A3蛋白(GSTA3)对于TD肉鸡生长性能的影响。结果表明,注射了GSTA3蛋白的TD肉鸡精神恢复快,增质量恢复快。试验结果证明重组外源GSTA3蛋白对TD肉鸡有促生长作用,可为TD肉鸡生长性能的恢复奠定理论基础。

鸡GSTA2基因5′UTR区域变异及其与重要经济性状关联性

试验旨在分析GSTA2基因的SNPs和杏花鸡与隐性白洛克鸡F2群体的肉质、生长和屠体性状的相关性。试验采用Sanger测序从359个杏花鸡与隐性白洛克鸡F2群体的基因组序列中筛选到4个GSTA2基因的SNPs,均位于5′UTR区域。利用SPSS 22.0软件对4个SNPs与杏花鸡和隐性白洛克鸡F2群体的经济性状进行了关联分析。结果显示:4个SNPs与杏花鸡和隐性白洛克鸡F2群体的体重、胫长、肤色等性状显著相关。对4个SNPs进行单倍型分析发现SNP1、SNP3、SNP4组成的单倍型AGAGTT与鸡的翅重有显著相关性,SNP2、SNP4组成的单倍型GGTT与鸡的胫长有显著相关性。结果表明GSTA2基因的SNPs显著影响鸡的经济性状,可以作为鸡经济性状选育的候选分子标记。

HepG2细胞中TNFα通过NF-κB信号通路下调GSTA1/GSTA4表达（英文）

谷胱甘肽巯基转移酶α1/α4(GSTA1/A4)是体内重要的解毒酶,可降低多种内、外源性毒性化合物的毒性.然而,胆汁淤积病人肝细胞内G STA1/A4的表达是下调的,下调机制尚不清楚.本研究通过肿瘤坏死因子α(TNFα)处理人肝癌细胞Hep G2细胞,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测GSTA1/A4、核因子κB(NF-κB)和核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达.发现TNFα在m RNA水平和蛋白质水平均抑制GSTA1/A4表达,且呈剂量与时间依赖关系.干扰NF-κB信号通路,可减弱T NFα对G STA1/A4表达的抑制作用.以上结果表明,在Hep G2细胞中,TNFα可通过激活N F-κB信号通路抑制G STA1/A4表达.

GSTA1基因多态性与白消安为基础预处理方案致急性肝损伤的相关性研究

目的探讨GSTA1基因多态性与以白消安为基础预处理的造血干细胞移植人群发生急性肝损伤的相关性。方法收集以白消安为基础的预处理的HSCT患者115例,PCR-RFLP法测定样本GSTA1 C-69T基因多态性,MALDI-TOF-MS法验证,经χ^(2)检验分析基因型与急性肝损伤相关性。结果GSTA1*A/*A(野生型)、*A/*B(杂合型)、*B/*B(纯突变表型)基因型频率分别为80.9%、19.1%、0%,该分布符合Hardy-Weinberg平衡;该基因型与急性肝损伤的发生存在相关性(χ^(2)=5.222,P=0.022,RR=2.416,95%CI:1.160-5.032)。结论携带GSTA1*A/*B(杂合型)的患者急性肝损伤的发生率显著高于携带GSTA1*A/*A(野生型)的患者,有必要对Bu实行个体化给药并对携带GSTA1*B等位基因的患者加强监测和保护。

GSTA1基因C-69T多态性与糖尿病视网膜病变的相关性研究

糖尿病视网膜病变是糖尿病最常见的微血管病变之一,是工作年龄成人致盲的主要原因。氧化应激是活性氧生成和清除不平衡的结果,在糖尿病视网膜病变的发生中起重要作用。GSTA1是重要的氧化应激相关的谷胱甘肽硫转移酶之一,目前暂没有其多态性与糖尿病视网膜病变发病之间的研究。本实验以546例2型糖尿病样本为研究对象,根据直接眼底镜的结果把病人分成糖尿病视网膜病变组和有糖尿病但没有视网膜病变组。采用构象差异凝胶电泳方法检测GSTA1基因C-69T多态性。GSTA1基因C-69T多态性的CC、CT和TT种基因型在DR组的频率分别为79.8%、17.7%和2.5%,在NDR组的频率分别为77.8%、20.6%和1.6%,两组比较差异无统计学意义(x^2=1.254,p=0.561)。本实验结果表明,GSTA1基因C-69T多态性与中国江西汉族糖尿病视网膜病变的发病没有关联。

海南岛博鳌港沉积物的沿岸输送

分析了博鳌港沿岸沉积物粒度参数的沿岸变化 ,并应用沉积物粒径趋势分析模型 (GSTA模型 )对沉积物运动趋势进行了分析。 GSTA模型结果表明 ,博鳌港沿岸的泥沙在横向上表现为 :万泉河口以北岸段为由海向岸运动 ,近期处于淤积状态 ;万泉河口以南岸段即玉带滩大致以 NNE走向到 NE走向的转折点为界 ,北部主要是由岸向海运动 ,是侵蚀岸段 ,而南部则主要为由海向岸运动 ,有少量的淤积。博鳌港沿岸泥沙输送在纵向上表现为 :万泉河口以北由南向北运动 ,万泉河口以南 ,北部是由北向南运动 ,南部是由南向北运动。其次还运用了经验公式对GSTA结果进行了验证 ,得到了通过万泉河口南部 (玉带滩 ) 3个断面的沿岸漂沙量 ,其沿岸漂沙方向主要为南北向。以上两种分析方法得出的结果和当地的许多地貌证据基本符合 ,而 GSTA模型在玉带滩北部泥沙纵向输运方向与经验公式计算结果所表现出的一些差异 。

伶仃洋表层沉积物特征及其泥沙运移趋势

根据伶仃洋表层沉积物的粒度分析资料,探讨表层沉积物的特征,并在此基础上应用Gao-Collins粒径趋势分析方法(GSTA模型)分析了伶仃洋表层沉积物的泥沙净输运趋势。结果表明,伶仃洋表层沉积物共有6种类型,其中以黏土质粉砂分布最广泛。受径流、潮流、波浪和陆架水入侵等多种动力作用,伶仃洋表层沉积物颗粒在北面最粗,南面次之,中间最细,东面略粗,西面略细;分选由中部向东、西两岸逐渐变好,但总体分选差;不同级配的泥沙分布和沉积特征存在差异。伶仃洋泥沙运移规律较复杂,泥沙呈现出向西南输运的总趋势;内伶仃洋四周泥沙受各种力作用,呈现出顺时针方向的环流运移,中心区域为最大浑浊带,泥沙以垂直落淤为主。淇澳岛以南至澳门半岛以东海域受粉砂和黏土向西扩散影响,泥沙向西运移。大屿海峡及外伶仃岛附近海域为高盐水入侵通道,泥沙向西北运移。

基于呼叫状态的IMS业务触发算法

在IMS会话和业务控制过程中,随着业务量的增长,S-CSCF面临的负载急剧增加,3GPP原有IMS业务的集中控制方式极易形成性能"瓶颈",从而影响系统服务质量。为降低会话时延,提高系统性能,在研究基于分组的业务触发算法和基于呼叫状态的业务触发算法基础上,提出了一种基于呼叫状态的分组业务触发算法(C-GSTA),并对其进行性能建模和理论分析。仿真结果表明,在业务种类和业务量增加的情况下,C-GSTA算法能够有效降低S-CSCF与服务器之间的信令流量,提高IMS系统吞吐量,缩短S-CSCF处理时延,改善业务触发性能和网络服务质量。

丁香叶黄酮对小鼠药物性肝损伤的保护作用研究

为确定丁香叶黄酮的保肝作用,将小鼠随机分为5组,即对照组、模型组、丁香叶黄酮高剂量组(40 mg/kg体重)、中剂量组(35 mg/kg体重)、低剂量组(30 mg/kg体重),以血清转氨酶(ALT、AST)、肝组织指标(MDA、NO、SOD、GSH、GSH-Px)及II相药物代谢酶GSTA1为检测对象,结合小鼠肝脏病理变化综合分析。结果显示,丁香叶黄酮高剂量组血清转氨酶和肝组织中MDA、NO均极显著降低(P<0.01),SOD、GSH、GSH-Px均极显著升高(P<0.01),GSTA1的含量也极显著升高(P<0.01);肝脏组织病理学显示脂肪变性、坏死及炎性细胞浸润减轻;而中、低剂量组的各指标和组织学变化均不如高剂量组明显。研究表明,丁香叶黄酮以40 mg/kg体重剂量对小鼠药物性肝损伤有较好的保护作用。

小鼠急性肝损伤中谷胱甘肽S转移酶A1的表达分析

为研究谷胱甘肽S转移酶A1(GSTA1)在3种急性肝损伤动物模型中的表达情况,选用雄性昆明系小鼠32只,随机分为4组,包括CCl_4组、APAP组、酒精组和对照组,按本课题组前期建立的方法复制三种急性肝损伤模型。采集血清检测转氨酶(ALT、AST),肝脏检测肝组织指标(SOD、MDA、GSH、GSH-Px),应用RT-PCR方法测定肝组织中GSTA1 mRNA表达量。结果显示,3种模型组中血清转氨酶及肝组织指标与对照组相比差异极显著(P<0.01);3种模型组中GSTA1 mRNA的表达量与对照组相比极显著降低(P<0.01),其中CCl_4组降低了4.9倍、APAP组降低了2.1倍、酒精组降低了3.7倍。研究表明,在急性肝损伤中,GSTA1 mRNA的表达水平与肝损伤的程度呈负相关。

珠江河口及邻近海域表层沉积物特征及其泥沙运移趋势

根据现场采集的1 309个表层沉积物样品,分析了珠江河口及邻近海域的表层沉积物特征。在此基础上,应用Gao-Collins的粒径趋势分析模型(GSTA模型),计算了珠江河口及邻近海域表层沉积物的净输运趋势,并结合有关动力沉积背景讨论了其实际意义。结果表明:珠江口及邻近海域表层沉积物类型共有8种,其中以粘土质粉砂和粉砂分布最广泛。受径流、潮流、沿岸流、波浪和陆架环流等动力作用,表层沉积物颗粒呈现出研究区西南部及北部口门附近的泥沙较粗,中部和东部的泥沙较细。东部(即大鹏湾及大亚湾以南的陆架区域)和西南部的分选略好于珠江河口及近岸10 m以浅区域,珠江河口及近岸10 m以浅区域的分选又略好于研究区的中南部区域(万山群岛的东南面及担秆列岛以南的区域),但泥沙总体分选差。不同级配的泥沙分布和沉积特征不一致。珠江河口及邻近海域泥沙运移规律较复杂,珠江河口及近岸区域(10 m以浅)泥沙主要向南和西南运移;外海陆架区泥沙主要向东运移;大亚湾和红海湾以南至60 m以浅区域的泥沙呈现向南运移的趋势。黄茅海北面的泥沙向西南运移;大襟岛和荷包岛以南及两岛之间是高盐陆架水入侵通道,泥沙整体向北运移;黄茅海中部泥沙以垂直落淤为主,水平运移趋势不显著,只略微向西输运,故黄茅海河口湾中西部床面有淤浅的趋势。在(113.52E,21.76N)点附近存在一个巨大的泥沙辐聚中心,其东北、西北和南面泥沙均向该点运移辐聚;在万山岛至桂山岛周边区域泥沙呈现出逆时针方向的环流运移。

人谷胱甘肽硫转移酶A1原核表达系统的构建及高效表达

目的 对人谷胱甘肽硫转移酶A1(GSTA1)原核表达系统的构建及高效表达。方法 采用RT -PCR方法将肝组织中提取总RNA扩增人GSTA1基因的cDNA序列 ,将其插入到原核表达载体pET30a多克隆位点中 ,构建重组表达质粒 ,并用PCR扩增、酶切分析及序列测定等方法对重组质粒进行鉴定 ,并进行了高效表达。结果 人GSTA1克隆到原核表达载体pET30a多克隆位点中 ,测序结果同GenbankGSTA1(GI:2 2 0 914 5 3)cDNA序列相比较 ,在 5 12位点T→C ,氨基酸由Met→Thr,同源性为 99% ,基因登陆号为AY5 32 92 8。通过IPTG诱导表达 ,在 34.4KDa处 1、2、3、4小时的表达量分别为 4 1.8%、6 8%、6 8.3%、83%。结论 经Westernblot分析 。

共轭亚油酸和α-亚麻酸对HepG2细胞核转录因子NF-E2相关因子及谷胱甘肽硫转移酶A1表达的影响

本试验旨在研究共轭亚油酸(CLA)和α-亚麻酸(ALA)对于HepG2细胞核转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)及其调控的谷胱甘肽硫转移酶A1(GSTA1)mRNA和蛋白质表达的影响。试验组采用浓度为0.2、0.5和1.0mmol/L的CLA和ALA作用HepG2细胞24h,采用荧光定量PCR法测定mRNA的表达量,蛋白质印迹法测定蛋白质的表达量。结果表明,CLA浓度分别为0.2和0.5mmol/L时,Nrf2和GSTA1mRNA和蛋白质表达量与对照组相比极显著增加(P<0.01),并随CLA浓度增加呈下降趋势;采用ALA作用的细胞,Nrf2和GSTA1mRNA和蛋白质表达量与对照组相比,随ALA浓度的增加呈现极显著上升(P<0.01)。由此可见,CLA在较低浓度时,诱导Nrf2和GSTA1mRNA和蛋白质表达量作用较强,而随ALA浓度增加Nrf2和GSTA1mRNA和蛋白质的表达量逐渐增多。

某核电厂附近岸滩演化过程及沉积物运移趋势的探讨

基于典型潮滩剖面高程重复测量及沉积物取样数据,分析了某丁字湾沿岸潮滩短期演化特征和沉积物运移趋势。结果表明,在1个月的时间内,该区潮滩整体处于稳定状态,局部略有弱冲淤现象。GSTA模型分析结果表明,该区潮滩沉积物以缓慢向海搬运为主,局部泥砂有往复运动和淤积现象,长期潮滩表现为弱侵蚀状态。