凋亡抑制基因Survivin和GW112在Barrett食管与食管腺癌中的表达及其意义

目的探讨凋亡抑制基因Survivin和GW112在反流性食管炎、Barrett食管及食管腺癌中的表达及其意义。方法采用SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法检测反流性食管炎、Barrett食管、食管腺癌黏膜组织中SurvivinmRNA和GW112 mRNA的表达。结果 GW112在对照组和反流性食管炎阴性组中呈低水平表达,明显低于反流性食管炎阳性组、Barrett食管组及食管腺癌组的表达(P<0.05),反流性食管炎阳性组、Barrett食管组及食管腺癌组GW112表达水平无明显差异(P>0.05)。Survivin表达水平依正常对照、反流性食管炎阴性、反流性食管炎阳性、Barrett食管、食管腺癌的次序渐进增强,其中反流性食管炎阳性组、Barrett食管与食管腺癌组患者Survivin表达水平明显高于对照组和反流性食管炎阴性组(P<0.05,P<0.01),且3组间亦存在显著性差异(P<0.05,P<0.01)。结论 Survivin和GW112基因的过度表达引起的细胞凋亡抑制在Barrett食管及其腺癌发生、发展过程中起着重要的作用,尤其是Survivin在Barrett食管与食管腺癌的发生、发展最早步骤中可能扮演着更主要的角色。

GW112基因siRNA对人胃癌SGC-7901细胞体外增殖的影响

目的构建靶向GW112siRNA逆转录病毒载体并筛选特异高效的RNAi靶点,研究GW112基因沉默后对胃癌SGC-7901细胞体外增殖的影响。方法应用逆转录病毒载体psilencer5.1-H1Retro构建针对GW112基因3个不同靶点的RNAi干扰载体-pSiRNA-GW112(pSi405-GW112,pSi1066-GW112,pSi1480-GW112),将脂质体法转染PT67细胞包装的病毒感染SGC-7901细胞,嘌呤霉素筛选稳定克隆,RT-PCR鉴定病毒整合,Real-timePCR筛选高效抑制靶点,CCK-8法检测对细胞体外增殖的影响。Westernblot检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果测序结果证实各干扰靶点的重组逆转录病毒载体pSiRNA-GW112构建正确。RT-PCR结果显示除亲本细胞外,经各靶点病毒上清感染的细胞均能扩增出510bp的Puro抗性基因片段。Real-TimePCR分析表明与SGC-7901亲本细胞组相比,7901-Si405,7901-Si1066及7901-Si1480组GW112的转录水平分别只有SGC-7901组的(15.50±0.01)%,(32.40±0.01)%与(57.00±0.02)%。而7901-Sc组GW112表达基本无变化。Si405,Si1066与Si1480靶点的抑制率分别为84.5%,67.6%及43.0%。沉默GW112后导致SGC-7901细胞体外增殖能力显著抑制(P<0.05),并伴随PCNA蛋白表达下调。结论构建的重组逆转录病毒载体pSiRNA-GW112能显著抑制SGC-7901细胞的体外增殖能力,且这种增殖抑制与下调的PCNA表达有关。

GW112 mRNA 3’端非翻译区特异性结合蛋白研究

目的:通过体外实验筛选出与GW112 mRNA 3’非翻译区临床特异性结合蛋白,并研究蛋白性质。方法:以稳定表达GW112基因的胃癌细胞SGC-7901为实验对象,体外转录法获得GW112 mRNA 3’非翻译区片段并用生物素标记,结合亲和素磁珠特异性吸附原理,从细胞总蛋白中纯化出与GW112 mRNA 3’非翻译区特异性结合蛋白。经过质谱鉴定得到蛋白信息,并用Western blot验证结果。结果:用磁珠纯化的蛋白样品经SDS-PAGE电泳后,取目的条带进行质谱分析发现存在核仁素蛋白,以核仁素单克隆抗体进行Western blot验证后发现与质谱结果一致。结论:核仁素是GW112 mRNA 3’非翻译区特异性结合蛋白的一种,并很可能对GW112 mRNA稳定性有直接影响,这为进一步揭示GW112在胃癌细胞抗凋亡机制中的作用奠定基础。

抗凋亡基因GW112在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:观察抗凋亡基因GW112(Olfactomedin 4)在胃癌组织的表达水平及临床意义。方法:采用SYBR Green I实时定量RT-PCR检测25例胃癌组织及胃癌外周正常胃组织中GW112的表达,并分析其表达情况与临床病理资料的相关性。结果:GW112基因在胃癌组织的表达水平(M=0.12)显著高于正常胃组织(M=0.02,P<0.05),在有淋巴结转移的胃癌组织中的表达(M=0.23)显著高于无淋巴结转移的胃癌组织(M=0.04,P<0.05),在肿瘤TNM分期Ⅲ/Ⅳ期的胃癌组织(M=0.23)的表达显著高于Ⅰ/Ⅱ期(M=0.04,P<0.05);在年龄高(>60岁)患者的胃癌组织中的表达(M=0.25)高于年龄低(≤60岁)的患者(M=0.06,P<0.05)。在性别和分化程度上差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:GW112基因在胃癌组织中高表达,与胃癌的侵袭和转移相关,可作为胃癌侵袭、转移的标志物。

GW112基因逆转录病毒载体的构建及在胃癌SGC-7901细胞的表达研究

目的构建人GW112基因的逆转录病毒载体,并通过病毒介导其在人胃癌SGC-7901细胞的稳定表达。方法采用DNA重组技术构建并鉴定重组逆转录病毒载体pLEGFP-N1-GW112;以脂质体PT67细胞包装病毒,经病毒感染的SGC-7901细胞通过G418筛选及荧光定量PCR鉴定,建立GW112稳定过表达SGC-7901细胞株。结果成功构建了pLEGFP-N1-GW112逆转录病毒表达载体,经病毒包装的重组转录病毒成功感染SGC-7901细胞,Real-Time PCR结果显示实验组中GW112基因是对照组细胞中的4.2倍。结论逆转录病毒介导的GW112基因在胃癌SGC-7901细胞获得了稳定过表达,为进一步研究GW112在胃癌中的功能奠定了良好基础。

CD133和GW112在胃癌中的表达及其与预后的关系

目的 研究胃癌组织CD133 mRNA和GW112 mRNA的表达水平及其与患者临床病理参数、无瘤生存率和生存率的关系.方法 采用实时定量PCR技术检测25例手术切除的胃癌及相应癌外正常胃黏膜组织中CD133mRNA和GW112mRNA的表达,随访患者进行生存分析.结果 （1）胃癌组织CD133 mRNA和GW112 mRNA表达量[0.07（0.01～0.13）,0.12（0.04～0.36）]均显著高于正常胃黏膜组织[0.01（0.00～0.07）,0.02（0.01～0.05）]（P＜0.05）.（2）GW112 mRNA表达量随患者年龄增高（＞60岁）,合并淋巴结转移,TNM分期Ⅲ期或Ⅳ期而升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）.CD133 mRNA则和临床病理参数无显著关系.（3）随访所有病例,5年生存率为（28.0＋9.0）%,无瘤生存率为（24.6±9.5）%.分别按照癌组织CD133和GW112表达水平分为高、低表达组.CD133高、低表达组5年生存率（7.7%比50.0%）和无瘤生存率（0%比50.5%）差异均有统计学意义（P＜0.05）;GW112高、低表达组5年生存率（11.1%比71.4%）和无瘤生存率（20%比29%）差异也均有统计学意义（P＜0.05）.Cox多因素分析表明癌组织CD133和GW112的表达水平是患者无瘤生存期的独立影响因子（相对危险度分别为3.792和5.155）;GW112同时也是患者生存期的独立影响因子（RR=4.978）.（4）ROC曲线分析发现,联合检测CD133和CEA对患者预后有一定的预测价值.结论 胃癌组织CD133 mRNA和GW112 mRNA 表达水平与胃癌恶性潜能有关,可预测胃癌患者的预后.

细胞凋亡调节基因GW112及GRIM-19的研究进展

OLFM4GW112/hGC-1（olfactomedin 4,又名GW112,hGC-1）和GRIM-19（Genes assoeiated with retin-oid-IFN-induced mortality-19）是近年来发现的基因,它们通过多种机制来参与细胞凋亡。GW112是抗凋亡基因,促进肿瘤的生长,其在很多人类肿瘤中,特别是消化系统肿瘤中高表达。同时GW112与GRIM-19相互关联,而GRIM-19的正常表达可以维持细胞正常的生活周期,使细胞从衰老进入凋亡。近年来,GW112与GRIM-19受到人们的广泛关注,本文主要综述了二者与细胞凋亡的关系。

肿瘤标志物GW112在胃癌及结直肠癌等消化道肿瘤中的研究进展

GW112是近年来发现的嗅觉介导素相关蛋白家族的新成员,在神经发育、细胞间黏附、细胞周期调控及肿瘤发生等多种细胞功能中起重要作用。GW112调节肿瘤细胞增殖、凋亡、黏附,并对关键信号转导通路起调控作用。GW112在消化道肿瘤中异常表达,且在早期胃癌及结直肠癌中呈高度特异性表达,提示其可能成为新的早期诊断胃癌及结直肠癌的靶点基因。

GW112蛋白在乳腺癌组织中表达及意义

目的探讨GW112蛋白在乳腺癌组织中的表达情况及其与临床病理因素间的相关性。方法应用Western blot和免疫组织化学法检测乳腺增生、不典型增生、乳腺癌组织和相应癌旁组织中GW112蛋白表达水平。结果乳腺癌组织中GW112蛋白表达量(1.09±0.14)及阳性表达率(61.7%)明显高于癌旁组织(0.41±0.19,0)(P<0.05);GW112蛋白表达水平从乳腺增生、不典型增生到乳腺癌组织依次增强,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);乳腺癌组织中GW112蛋白阳性表达与肿瘤直径、是否发生腋窝淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论 GW112蛋白在乳腺癌发生、发展和淋巴结转移中起重要作用,可能成为乳腺癌临床治疗的新靶点。