miR-499a-3p/GAB1轴在心力衰竭中的作用及机制

目的探究miR-499a-3p在心力衰竭(heart failure,HF)患者血浆中的表达水平及其分子机制。方法收集HF患者和健康对照组的血浆,RT-qPCR检测其miR-499a-3p水平;人心肌细胞系转染miR-499a-3p模拟物,CCK-8检测细胞存活能力,流式细胞术和TUNEL检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹检测细胞凋亡通路相关蛋白的表达水平;建立心衰细胞模型,转染miR-499a-3p抑制物,CCK-8和流式细胞术检测细胞的存活能力和凋亡水平;双荧光素酶报告基因系统分析miR-499a-3p与GAB1的关系;RT-qPCR、蛋白质印迹探究miR-499a-3p对GAB1表达的影响;在人心肌细胞中转染miR-499a-3p模拟物的同时转染GAB1质粒,检测心肌细胞功能变化。结果与对照组血浆中的miR-499a-3p的表达相比,HF患者的表达显著升高(t=77.47,P<0.01);miR-499a-3p模拟物显著降低心肌细胞的存活率,增加凋亡细胞的比例和TUNEL阳性细胞比例(P<0.05);且转染miR-499a-3p模拟物后,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达降低,而凋亡促进蛋白Caspase-3和Bax表达上调;进一步研究发现,miR-499a-3p在心衰细胞中显著高表达,而抑制miR-499a-3p表达后,心衰细胞的存活率显著升高,凋亡比例显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告基因系统结合RT-qPCR及蛋白质印迹结果表明,miR-499a-3p可结合到GAB1的3′-UTR,在mRNA和蛋白水平靶向抑制GAB1的表达;miR-499a-3p模拟物对心肌细胞存活和凋亡的影响可以被GAB1过表达所逆转。结论HF患者中miR-499a-3p表达升高,miR-499a-3p可通过抑制GAB1的表达,影响心肌细胞存活和凋亡,参与HF的发生进展。

Gab1与MMP-9在胆管癌中的表达及意义

目的:探讨胆管癌中Gab1与MMP-9的表达及意义。方法:胆管癌标本70例,胆管癌旁组织30例,正常胆管组织30例,应用免疫组化法检测Gab1和MMP-9蛋白的表达情况。结果:胆管癌组Gab1的平均光密度为0.1689±0.0268,癌旁组为0.1471±0.0185,正常胆管组为0.1023±0.0119,三组结果比较差异有显著性(P<0.05);胆管癌组MMP-9的平均光密度为0.1887±0.0289,癌旁组为0.1345±0.0196,正常胆管组为0.0758±0.0104,三组结果比较差异有显著性(P<0.05)。Gab1和MMP-9在胆管癌中的表达与有无淋巴结转移及肿瘤分期有关(P<0.05),而与肿瘤大小、分化程度无关(P>0.05)。Gab1与MMP-9的表达存在正相关(r=0.362,P<0.05)。结论:Gab1和MMP-9蛋白表达增高与胆管癌的发生、发展及侵袭转移有关;Gab1和MMP-9在胆管癌组织中的表达呈正相关。

Gab1与SOD在胆管癌中的表达及意义

目的通过免疫组织化学方法检测Gab1与SOD在胆管癌组织、癌旁组织和正常胆管组织中的表达,探讨它们对胆管癌发生、发展的影响,揭示胆管癌的发病机制。方法收集中国医科大学附属盛京医院2006年1月~2010年5月胆管癌标本70例,30例癌旁胆管组织,30例正常组织。用免疫组织化学方法检测Gab1与SOD的表达情况,对三组切片染色进行光密度分析。应用SPSS 13.0统计软件进行分析。对两项指标的检测数据分别进行t检验及Spearman等级相关检验。结果胆管癌组Gab1平均光密度为（0.1689±0.0268）;癌旁组为（0.1471±0.0185）;正常组为（0.1023±0.0119）。胆管癌组的SOD的平均光密度为（0.2205±0.0245）;癌旁组为（0.1971±0.039）;正常组为（0.1749±0.0151）。Gab1与SOD蛋白在胆管癌组、癌旁组、正常组表达均呈递减趋势,具有显著性差异（P〈0.05）。胆管癌组织中Gab1与SOD表达呈正相关。r=0.247,P〈0.05。结论 Gab1与SOD蛋白与胆管癌的发生、发展有关。Gab1的含量与SOD的含量呈正相关。

卵巢上皮性癌组织中Gab1与PD-L1蛋白表达与临床病理特征及预后的相关性

目的探讨卵巢上皮性癌组织中Gab1与程序性死亡配体-1(PD-L1)的表达情况,并分析Gab1、PD-L1蛋白与卵巢上皮性癌患者临床病理特征及预后的相关性。方法选取我院2008年5月~2014年5月收治的86例卵巢上皮性癌患者作为研究对象,采用回顾性分析法分析其临床及随访资料,收集86份癌组织标本(观察组)及86份癌旁正常组织标本(对照组),所有组织标本均行Gab1与PD-L1蛋白检测,并根据其资料及检测结果记录所有患者年龄、体质量指数等一般临床资料及肿瘤情况、Gab1与PD-L1蛋白水平及预后等。结果观察组中Gab1及PD-L1蛋白的表达水平均显著高于对照组(P<0.05);随着卵巢上皮性癌患者临床分期更高、分化程度越低及出现淋巴结转移时其Gab1及PD-L1蛋白的阳性表达率也显著增高(P<0.05);Gab1阴性和阳性患者其3年总生存率分别为72.73%和42.86%,而PD-L1阴性和阳性患者其3年总生存率分别为73.68%和45.83%(P<0.05);经非条件单因素Cox比例风险回归模型显示不同临床分期、分化程度、是否出现淋巴结转移以及Gab1和PD-L1不同表达的卵巢上皮性癌患者间其预后生存时间均存在差异(P<0.05);经多因素Cox比例风险回归模型分析显示临床分期Ⅲ~Ⅳ期、低分化、出现淋巴结转移以及Gab1和PD-L1阳性均为影响卵巢上皮性癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论Gab1和PD-L1蛋白在卵巢上皮性癌组织中均高表达,随着病情加重其阳性表达率更高,且其阳性表达联合临床分期Ⅲ~Ⅳ期、低分化和出现淋巴结转移均为影响卵巢上皮性癌患者预后生存的独立危险因素,故可将其作为临床上评估卵巢上皮性癌患者病情进展和预后的有效指标。

Gab1与PD-L1在胆管癌中的表达及意义

目的:免疫组化检测Gab1和PD-L1在胆管癌、癌旁组织和正常胆管组织中的表达水平,探讨它们在胆管癌中的表达及意义。方法:收集胆管癌组织70例,胆管癌旁组织30例,正常胆管组织30例。用免疫组化的方法检测Gab1与PD-L1的表达情况。结果:胆管癌组Gab1蛋白平均光密度分析值为0.165 7±0.025 1,癌旁组为0.145 3±0.017 7,正常组为0.102 1±0.011 5。胆管癌组PD-L1平均光密度为0.221 1±0.027 9,癌旁组为0.197 1±0.037 2,正常组为0.175 4±0.014 6。Gab1与PD-L1在胆管癌组、癌旁组、正常胆管组中表达均为逐渐减弱的趋势,有显著的组间差异(P<0.05)。胆管癌组织中Gab1与PD-L1表达呈正相关(r=0.301 1,P<0.05)。结论:Gab1在胆管癌组织中的表达随PD-L1的升高而升高,呈正相关关系。Gab1与PD-L1蛋白与胆管癌的发生、发展有关。

胆管癌组织中c-Met、Gab1的表达及意义

目的研究c-Met、Gab1在胆管癌和癌旁组织中的表达,并探讨c-Met、Gab1与胆管癌临床病理特征的关系。方法收集手术切除的胆管癌组织52例和癌旁胆管组织30例,应用免疫组化SP法检测c-Met、Gab1在不同组织中的表达。结果 cMet、Gab1在胆管癌组织中表达阳性率明显高于在癌旁胆管组织(P<0. 05); c-Met表达与胆管癌分期、有无淋巴结转移相关(P <0. 05),Gab1表达与胆管癌分期正相关(P<0. 05),与患者年龄、性别、肿瘤分化程度无相关性(P>0. 05)。Spearman双变量相关分析示胆管癌组织中c-Met与Gab1表达呈正相关(r=0. 327,P<0. 05)。结论 c-Met、Gab1在胆管癌中高表达,在胆管癌的发生、发展过程中具有协同促进作用;可作为胆管癌重要标记,对胆管癌的诊断、鉴别诊断、预后评估具有重要意义,并为胆管癌的分子靶向治疗提供研究方向。

siRNA干扰Gab1表达对胆管癌细胞株HUCCA-1功能的影响及其与PI3K/Akt信号通路的关系

目的：检测下调Gab1表达后人胆管癌细胞株HUCCA-1细胞功能、PI3KCA及Akt1的蛋白及mRNA表达水平改变，探讨Gab1、PI3KCA及Akt1表达在胆管癌恶性行为中的作用机制。方法 Gab1siRNA转染HUCCA-1细胞，采用qRT-PCR法及Western blot法检测转染效率及PI3KCA、Akt1表达水平，MTT检测转染后细胞增殖变化，流式细胞术检测转染后细胞凋亡变化，Transwell检测细胞迁移及侵袭能力。结果 Gab1siRNA在HUCCA-1细胞中的转染效率约为65%～70%，转染效率佳；Gab1siRNA转染HUCCA-1细胞后，PI3KCA、Akt1的蛋白及mRNA表达量下调；Gab1siRNA组HUCCA-1细胞增殖能力在48 h、72 h及96 h均低于siRNA control组和Mock组（P〈0.05）；Gab1siRNA组的HUCCA-1细胞凋亡率高于Mock及siRNA control组（P〈0.05）；Gab1siRNA组HUCCA-1细胞迁移减少百分比及侵袭能力低于siRNA control组及Mock组（P＜0.05）。结论 Gab1可能通过激活PI3K/Akt信号通路表达促进肿瘤细胞恶性行为，Gab1可作为胆管癌治疗新的靶向标志物及候选基因。

Gab1在胆管癌中的表达以及作用机制研究

目的探讨Gab1在胆管癌细胞中的表达以及其作用机制。方法正常胆管上皮细胞系HIBEC以及人胆管癌细胞系QBC939以及RBE作为研究对象,Western blot检测胆管癌细胞中Gab1的表达水平,Transwell和CCK8法检测Gab1对胆管癌细胞增殖和迁移的影响;并且用抑制剂PF2341066处理胆管癌细胞后,观察其对裸鼠移植瘤的影响。结果 Gab1在胆管癌细胞中发生明显的磷酸化;Gab1表达被干扰后,胆管癌细胞的增殖以及迁移能力受到明显的抑制;应用小分子抑制剂PF2341066对Gab1以及其下游信号磷酸化具有抑制作用;PF2341066明显抑制了胆管癌细胞的增殖以及迁移能力,并且PF2341066对胆管癌细胞增殖的抑制作用呈时间以及浓度依赖;应用抑制剂PF2341066后,裸鼠的肿瘤体积增长缓慢,肿瘤组织中Gab1的磷酸化水平明显降低,并且肿瘤组织中增殖标志物Ki67的阳性率明显下降。结论 Gab1在胆管癌细胞中明显活化,并且能够促进癌细胞的增殖和迁移,PF2341066可以有效的抑制Gab1的活化水平,缩小肿瘤体积。

接头蛋白Gab1结构、功能及与肿瘤的关系

肿瘤的发生、侵袭、转移是一个涉及多种基因及其产物的复杂过程,异常的酪氨酸磷酸化在其中发挥了重要作用,研究表明接头蛋白Gab（Grb2-associated binder,Grb2相关结合蛋白）家族正是通过参与异常的酪氨酸磷酸化参与肿瘤过程。

Gab1在肝外胆管癌中的表达及意义

目的:探讨肝外胆管癌中Gabl的表达及意义。方法:肝外胆管癌标本70例,胆管癌旁组织30例,正常胆管组织30例,应用免疫组化法检测Gabl蛋白的表达情况。结果:胆管癌组的Gab1平均光密度为0.1689±0.0268,癌旁组为0.1471±0.0185,正常胆管组为0.1023±0.0119,三组结果比较差异有显著性(P<0.05);Gab1在肝外胆管癌中的表达与肿瘤分期及有无淋巴结转移有关(P<0.05),与肿瘤大小、分化程度无关(P>0.05)。结论:Gab1表达增高与肝外胆管癌的发生、发展及侵袭转移有关。

Gab1蛋白在肝细胞癌组织中的表达及与临床预后的关系

目的探讨生长因子受体相关结合蛋白1(growth factor receptor binding protein-associated binder1,Gab1)蛋白在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及对患者临床预后的影响.方法收集2005年1月至2014年2月邯郸市中心医院存档的70例行根治性手术的HCC患者资料,所有患者均未进行过相关放射治疗或化学治疗.同时选取不典型增生和正常肝组织各30例为研究对象.采用免疫组织化学(EnVisionTM)法检测Gab1蛋白在上述3种组织中的表达,并分析其与HCC临床病理因素及HCC患者4年生存率的关系.结果 Gab1蛋白在正常肝组织、不典型增生及HCC组织中阳性表达率分别为0.00%(0/30)、33.33%(10/30)和58.57%(41/70),差异有统计学意义(χ^2=30.78,P<0.001).Gab1蛋白的阳性表达率与患者年龄、性别、组织分型及病灶形式无关(P>0.05),但与肿瘤直径、淋巴结转移、MCM7蛋白表达及临床TNM分期有关(P<0.05).Gab1阳性表达的HCC患者4年生存率为5.26%,阴性表达者为25.00%,差异有统计学意义(χ^2=3.96,P=0.04).结论 Gab1蛋白的过表达参与了HCC的发生发展,其表达水平可作为预测HCC患者4年生存预后的参考指标.

Gab1和Sfmbt2基因在成年普通牛8种不同组织中的印记状态分析

旨在揭示Gab1(Grb2-associated binding protein 1)和Sfmbt2(Scm-like with four mbt domains 2)基因在牛不同组织以及胎盘中的印记状态,本研究应用基于单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms,SNP)的RT-PCR(Reverse transcription-PCR)产物直接测序方法对Gab1和Sfmbt2基因在牛7个组织(心、肝、脾、肺、肾、肌肉和脂肪)以及胎盘中的印记状态进行分析。结果显示,在被分析的7个组织和胎盘中均检测到Gab1和Sfmbt2基因的表达。通过比较杂合子牛基因组PCR扩增产物与RT-PCR扩增产物在SNP位点的测序峰图,发现Gab1和Sfmbt2在被检测的7个组织和胎盘中均为双等位基因表达,说明Gab1和Sfmbt2在牛的组织和胎盘中是非印记的。

接头蛋白Gab1的结构及功能研究进展

Gab1蛋白属于接头蛋白Gab家族,该家族蛋白因能与生长因子受体结合蛋白2(Grb2)相结合而得名。作为接头蛋白,Gab1蛋白能被多种受体酪氨酸激酶或非受体酪氨酸激酶激活,接受胞外多种生长因子、细胞因子和一些T/B细胞抗原受体的刺激,介导PI3K/Akt和Ras/MAPK等多条信号转导途径,具有促进细胞生长、迁移、调节免疫等多种生物学功能,与糖尿病、肿瘤、心血管疾病等的发生发展密切相关。

GAB1在ER阳性乳腺癌组织中的表达及其对MCF-7细胞转移能力的影响

目的探讨GAB1在ER阳性乳腺癌组织中的表达,并分析其对ER阳性乳腺癌细胞MCF-7转移能力的影响。方法免疫组织化学方法检测GAB1在ER阳性乳腺癌组织中的表达,并分析GAB1表达与患者临床参数及预后的关系。Transwell实验检测干扰GAB1对MCF-7细胞的迁移和侵袭能力的影响。Western blotting检测干扰GAB1对EMT相关指标的影响。结果免疫组化染色结果显示,GAB1表达与淋巴结转移(P=0.014)、分期(P=0.011)呈相关性。Transwell实验发现,干扰GAB1明显抑制了MCF-7细胞的迁移和侵袭能力。Western blotting结果显示,干扰GAB1后E-cadherin表达明显增高,而Vimentin的表达明显降低。Kaplan-Meier生存分析显示,GAB1高表达组患者的无复发生存率明显短于GAB1低表达组(P<0.001)。多因素COX比例风险模型分析显示,分期和GAB1表达是影响患者无复发生存的独立预后因素。结论GAB1在ER阳性乳腺癌组织中高表达,干扰GAB1表达可抑制ER阳性乳腺癌细胞的迁移、侵袭及EMT过程,并可作为评价ER阳性乳腺癌患者预后的有效指标之一。

miR-106a-5p靶向GAB1影响人心肌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的探究心力衰竭患者血浆中miR-106a-5p的表达水平及其影响人心肌细胞增殖和凋亡的潜在机制.方法利用RT-qPCR检测45例心力衰竭患者和健康志愿者血浆中miR-106a-5p的表达水平;利用Lipofectamine 2000转染miR-106a-5p模拟物及模拟物对照至人心肌细胞系,RT-qPCR验证转染效率后,分别使用CCK-8和流式细胞术检测各组转染细胞的增殖和凋亡水平;生物信息学结合双荧光素酶报告基因实验验证miR-106a-5p与接头蛋白GAB1的靶向关系;RT-qPCR和Western印迹检测转染miR-106a-5p对GAB1 mRNA和蛋白表达水平的影响;最后,将miR-106a-5p模拟物和GAB1的质粒共转染至人心肌细胞中,利用CCK-8和流式细胞术验证GAB1对miR-106a-5p诱导的心肌细胞增殖、凋亡的回复作用.结果心力衰竭患者血浆中的miR-106a-5p表达水平显著高于健康志愿者(t=48.54,P<0.001);CCK-8结果显示转染miR-106a-5p模拟物组人心肌细胞的A450值显著低于模拟物对照组和空白对照组(P<0.05);流式细胞仪结果显示过表达miR-106a-5p的人心肌细胞的凋亡率显著高于模拟物对照组和空白对照组(P<0.05);生物信息学分析结合双荧光素酶报告基因实验证实miR-106a-5p可结合到GAB1的3′-非翻译区(3′-UTR);RT-qPCR和Western印迹检测发现,过表达miR-106a-5p可显著抑制GAB1 mRNA和蛋白的表达水平;回复实验结果表明,过表达GAB1可逆转miR-106a-5p所致的心肌细胞增殖和凋亡能力改变.结论miR-106a-5p在心力衰竭患者中显著上调,其可通过靶向调控GAB1蛋白的表达抑制人心肌细胞增殖和诱导人心肌细胞凋亡,从而参与心力衰竭的病理过程.

胆管腺癌组织中Gab1、PI3KCA的表达变化及意义

目的观察胆管腺癌组织中生长因子受体结合蛋白2相关的接头蛋白(Gab1)、磷脂酰肌醇3激酶α亚单位(PI3KCA)的表达变化,并探讨其意义。方法 76例胆管腺癌患者,手术留取癌组织76例份(腺癌组)、癌旁正常组织45例份(癌旁组),采用免疫组化法、Western blotting法、qRT-PCR法检测各组Gab1及PI3KCA,并分析两指标间及其与胆管腺癌临床病理参数的相关性。结果三种检测方法显示,腺癌组Gab1、PI3KCA表达均高于癌旁组(P均<0.05)。Gab1、PI3KCA表达均与胆管腺癌肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05)。Spearmanrank相关分析显示,胆管腺癌组织中Gab1与PI3KCA表达呈正相关(r=0.214,P<0.05)。结论胆管腺癌组织在细胞、蛋白、mRNA水平上均升高,Gab1及PI3KCA对胆管腺癌的发展及浸润转移恶性行为可能有促进作用,两者可作为胆管腺癌恶性行为及预后的预测因素及未来治疗的靶向基因。

接头蛋白Gab1和酪氨酸磷酸酶SHP2在50例甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义分析

[目的]探讨接头蛋白Gab1和酪氨酸磷酸酶SHP2在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义。[方法]收集2020年4月至2021年3月青岛大学附属医院收治的50例甲状腺乳头状癌患者的癌组织和癌旁组织。统计所有患者的年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移情况、肿瘤分期(TNM分期)等临床资料。应用RT-qPCR、Western blot检测20例患者的新鲜组织标本,采用免疫组化方法检测50例患者的组织石蜡切片,探讨Gab1和SHP2的表达情况和临床意义。[结果](1)RT-qPCR和Western blot显示,Gab1和SHP2在甲状腺乳头状癌组织中的表达高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)免疫组化结果显示,Gab1和SHP2在癌组织中的表达(68.0%、64.0%)高于癌旁组织(36.0%、40.0%),差异有统计学意义(P<0.05)。(3)甲状腺乳头状癌组织中Gab1和SHP2的表达与肿瘤分期、淋巴结转移和肿瘤大小有关(P<0.05),在有淋巴结转移、较晚的分期和较大的肿瘤直径组中表达较高。(4)Gab1和SHP2高表达与患者年龄、性别无关。(5)Spearman相关性分析显示,Gab1和SHP2在甲状腺乳头状癌中的表达呈显著正相关(r=0.468,P=0.001)。[结论]Gab1和SHP2在甲状腺乳头状癌的发生中起着促癌基因的作用,与甲状腺乳头状癌的发展、转移及恶性程度有关。Gab1和SHP2在甲状腺乳头状癌发生、发展中存在协同作用的关系。

Gab1在恶性肿瘤中的研究进展

Gab蛋白是一类重要的接头蛋白,该家族能与生长因子受体结合蛋白2(growth factor receptor binding protein 2,Grb2)相结合。Gab1是哺乳动物中含量最多、分布最广的Gab蛋白,可通过与各类生长因子、细胞活素类等相互作用来放大和整合信号转导,主要通过RAS-ERK和PI3K-AKT这两条经典途径实现促进细胞生长和分化、控制凋亡、调节免疫等多种生物学功能。研究表明Gab1蛋白与肿瘤的发生、发展以及预后密切相关。全文就Gab1蛋白的结构功能、参与信号转导的作用机制以及在肿瘤中的研究进展进行综述。

清开灵对快速老化痴呆小鼠学习记忆能力的影响及作用机制研究

目的探讨清开灵对快速老化痴呆小鼠(senescence accelerated mouse-prone/8,SAMP8)学习记忆能力、全脑神经递质及磷脂酰肌醇3激酶激活的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B磷酸化(phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)信号通路的影响。方法将SAMP8老化鼠随机分为模型组、清开灵组[1.3mL/(kg·d)]及安理申组[0.58 mg/(kg·d)],治疗90天;抗快速老化亚系小鼠(senescence acceleratedmouse-resistance/1,SAMR1)作为对照组。采用水迷宫方法检测小鼠学习记忆能力,以高效液相电化学法检测小鼠全脑乙酰胆碱(ACh)及单胺类神经递质含量,蛋白质印迹法(Western-blot)测定脑Gab1(Grb2-associatedbinder-1)、AKT、473位点丝氨酸磷酸化蛋白激酶B(phospho-serine/threonine protein kinase B,pAKT473)的蛋白表达。结果与对照组SAMR1鼠比较,模型组SAMP8小鼠在隐平台试验和反向试验第3天潜伏期显著升高(P<0.05,P<0.01),ACh、5-羟色胺(5-HT)水平显著降低(P<0.01,P<0.05),Gab1蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。给药后,清开灵组小鼠在第2～5天隐平台试验和反向试验中潜伏期较模型组显著降低(P<0.05),ACh、5-HT含量明显升高(P<0.05),Gab1蛋白表达水平显著增加(P<0.01),AKT蛋白磷酸化水平显著增加(P<0.05)。结论清开灵能改善AD模型小鼠的学习记忆能力,这一作用可能与其提高脑内ACh、5-HT的水平,激活PI3K/AKT通路有关。

微小RNA-30a诱导人心肌细胞凋亡及其机制研究

目的探讨心力衰竭患者循环中微小RNA(miR)-30a的表达水平及诱导人心肌细胞凋亡的可能分子机制。方法采集心力衰竭患者和健康志愿者的血清用于检测miRNAs的表达水平。体外实验,将人心肌细胞分为3组:空白对照组(MOCK组)、空质粒组(NC组)和转染miR-30a模拟物组(miR-30a组)。用脂质体2000(Lipofectamine2000,Li2)转染miR-30a模拟物(终浓度为100 nmol/L)。采用实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组的miR-30a的表达水平。用细胞计数-8试剂盒(CCK-8)检测各组细胞增殖。用流式细胞仪和Tunel法检测各组心肌细胞的凋亡并检测各组细胞的Caspase-3活性。用荧光素酶报告基因检测法检测miR-30a和接头蛋白Gab1(Gab1)的相互作用。用蛋白免疫印记法(WB)检测各组增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki67和核转录因子Kappa B(NF-κB)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、以及Gab1、β-肌动蛋白(β-actin)的表达水平。结果心力衰竭患者血清中的miRNA-30a表达水平显著高于健康志愿者(P<0.05)。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)结果显示miR-30a组的人心肌细胞miR-30a的表达显著增高相对于NC组(P<0.05)。CCK-8结果显示miR-30a组OD值低于MOCK组和NC组(P<0.05)。流式细胞仪和Tunel结果显示miR-30a过度表达的人心肌细胞凋亡高于MOCK组和NC组(P<0.05)。Caspase-3活性检测显示miR-30组Caspase-3活性显著高于MOCK组和NC组(P<0.05)。荧光素酶报告基因检测法报告miR-30a与Gab1有互补配对序列。WB结果显示miR-30a组PCNA、ki67、Bcl-2、Gab1表达下降,NF-κB、Bax表达上升(P<0.05)。结论 miR-30a通过下调Gab1抑制人心肌细胞增殖和诱导人心肌细胞凋亡。