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猪血细胞表面多糖抗原α-Gal与人ABO血型抗原的比较 被引量:1
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作者 曾令宇 李幼平 +1 位作者 李胜富 程惊秋 《徐州医学院学报》 CAS 2005年第6期495-498,共4页
目的探讨猪血细胞表面多糖抗原α-Gal与人ABO血型抗原的相似性。方法人全血A、B、O、AB 4种血型的健康人的新鲜血,肝素抗凝,1 800 r/min离心,取白细胞富集层,利用confocal及流式细胞技术(FCM)检测猪及人ABO 4种血型血细胞与BSI-B4-FITC... 目的探讨猪血细胞表面多糖抗原α-Gal与人ABO血型抗原的相似性。方法人全血A、B、O、AB 4种血型的健康人的新鲜血,肝素抗凝,1 800 r/min离心,取白细胞富集层,利用confocal及流式细胞技术(FCM)检测猪及人ABO 4种血型血细胞与BSI-B4-FITC结合的情况。结果以A型血细胞为阴性对照,4种血型血小板、RBC、单个核细胞均为阴性,而粒细胞,B型有14%为(+),AB型约有8%为(+),O型约有2%为(+)。结论4种ABO血型抗原中B抗原与α-Gal的结构最为相似。 展开更多
关键词 Α-gal 多糖抗原 血型抗原
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人血清中非Gal异种抗体检测方法的探讨 被引量:3
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作者 叶学军 卢希彬 +3 位作者 潘登科 蔡志明 牟丽莎 赵成江 《器官移植》 CAS CSCD 2017年第2期132-137,共6页
目的探讨人血清中抗非半乳糖(Gal)异种抗原抗体的最佳检测条件。方法选用α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)五指山小型猪的外周血单核细胞(PBMC)作为靶细胞,与健康人血清混合,在不同血清浓度(4.8%、16.7%、100%)和孵育时间(0.5、1.0... 目的探讨人血清中抗非半乳糖(Gal)异种抗原抗体的最佳检测条件。方法选用α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)五指山小型猪的外周血单核细胞(PBMC)作为靶细胞,与健康人血清混合,在不同血清浓度(4.8%、16.7%、100%)和孵育时间(0.5、1.0、2.0、3.0、6.0 h)条件下,利用流式细胞仪检测GTKO猪的PBMC上结合IgM和IgG的水平。结果在16.7%血清浓度下,孵育时间从0.5 h延长至3.0 h,能显著提高非Gal IgM结合PBMC的水平(P<0.01),而IgG水平的提高则差异无统计学意义(P>0.05)。提高血清浓度也可提高非Gal IgM的结合水平,采用100%的血清浓度孵育3 h,IgM结合PBMC水平最高且有统计学意义(P<0.01)。采用100%的血清孵育6 h,IgG结合水平升高有统计学意义(P<0.05)。延长孵育时间和提高血清浓度不会影响PBMC的活力。结论检测人血清中抗非Gal异种抗原抗体的最佳条件为每1×105个猪PBMC,采用100%人血清浓度孵育3 h检测IgM水平,或加100%人血清浓度孵育6 h检测IgG水平。这一条件的优化有助于筛选非Gal表达抗原低表达的供体猪。 展开更多
关键词 异种移植 外周血单核细胞 gal抗原 流式细胞术 IgM/IgG α-1 3-半乳糖基转移酶 基因敲除 五指山小型猪
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采用Gal抗原缺失鼠评价GGTA1/B4GalNT2/CMAH基因敲除猪软骨组织的免疫原性 被引量:2
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作者 王泽昊 邵安良 +4 位作者 魏利娜 刘舒云 眭翔 徐丽明 郭全义 《解放军医学院学报》 CAS 2019年第6期561-564,共4页
目的比较在Gal抗原缺失小鼠皮下分别植入GGTA1/B4GalNT2/CMAH基因敲除猪软骨组织与野生型猪软骨组织所引起的免疫反应。方法将三基因敲除猪软骨组织(KO组)与野生型猪软骨组织(WT组)分别植入Gal抗原缺失小鼠皮下4周,设立假手术组(con)作... 目的比较在Gal抗原缺失小鼠皮下分别植入GGTA1/B4GalNT2/CMAH基因敲除猪软骨组织与野生型猪软骨组织所引起的免疫反应。方法将三基因敲除猪软骨组织(KO组)与野生型猪软骨组织(WT组)分别植入Gal抗原缺失小鼠皮下4周,设立假手术组(con)作为阴性对照。4周后抽取小鼠血清检测总IgM抗体和抗Gal抗体。结果野生型猪软骨(WT)材料植入组小鼠总IgM含量平均在(0.525±0.224)mg/ml,显著高于阴性对照(Con)组小鼠总IgM平均含量(0.121±0.050)mg/ml(P<0.05),但与三基因敲除猪软骨(KO)组小鼠总IgM平均含量(0.313±0.061)mg/ml无统计学差异。野生型猪软骨组织具有比三基因敲除猪软骨组织组和对照组更高的抗α-Gal IgM水平(P<0.05),而三基因敲除组与对照组相比无统计学差异(P>0.05)。结论上述结果表明GGTA1/B4GalNT2/CMAH基因敲除猪软骨组织在体内几乎没有免疫反应,可作为软骨缺损修复材料。 展开更多
关键词 GGTA1/B4galNT2/CMAH基因敲除猪 gal抗原缺失小鼠 软骨缺损修复 免疫原性
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基于Gal抗原缺失小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞试验敏感性初探 被引量:4
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作者 刘露丝 张乐 +1 位作者 邵安良 徐丽明 《中国药事》 CAS 2021年第3期300-306,共7页
目的:采用腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验考察Gal抗原缺失小鼠评价动物源材料对固有免疫影响的敏感性。方法:Gal抗原缺失小鼠(GGTA1 KO)经兔血预免后,随机分为空白对照组(生理盐水)、地塞米松抑制性阳性对照组、植物血凝素刺激性阳性对... 目的:采用腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验考察Gal抗原缺失小鼠评价动物源材料对固有免疫影响的敏感性。方法:Gal抗原缺失小鼠(GGTA1 KO)经兔血预免后,随机分为空白对照组(生理盐水)、地塞米松抑制性阳性对照组、植物血凝素刺激性阳性对照组、牛跟腱样品植入组。地塞米松阳性对照组与植物血凝素阳性对照组参照YY/T 1465.4-2017进行给药。牛跟腱植入组皮下植入牛跟腱(2.4cm2/只),周期为4周。最后所有实验组小鼠均腹腔注射鸡血红细胞,参照YY/T 1465.4-2017计数巨噬细胞和被吞噬的鸡血红细胞个数,并计算吞噬百分数和吞噬指数。结果:Gal抗原缺失小鼠的植物血凝素阳性对照组的细胞吞噬百分数和吞噬指数为39.05%和2.02,略高于空白对照组的32.15%和1.87,但无统计学差异;牛跟腱植入组的细胞吞噬百分数和吞噬指数分别为55%和2.59,均高于空白对照组,存在显著性差异(P<0.01);地塞米松抑制性阳性对照组吞噬百分数和吞噬指数分别为20.60%和1.43,低于空白对照组(P<0.05,P<0.01);研究结果表明,Gal抗原缺失小鼠对植物血凝素有一定程度的刺激反应,而地塞米松可明显降低吞噬百分数和吞噬指数,说明试验体系基本成立。牛跟腱植入物引起了吞噬细胞吞噬百分数和吞噬指数的显著升高,提示牛跟腱具有免疫原性风险。结论:在腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞试验中,Gal抗原缺失小鼠对地塞米松抑制性阳性对照表现出显著的抑制效应,而牛跟腱植入物的刺激引起了明显的刺激效应,表明Gal抗原缺失小鼠对于评价动物源性生物材料对固有免疫的影响具有一定应用价值。 展开更多
关键词 gal抗原缺失小鼠 巨噬细胞 鸡血红细胞 吞噬作用 免疫原性 固有免疫
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α-半乳糖苷酶清除猪细胞表面的α-Gal抗原 被引量:1
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作者 贠志敏 张雪 +5 位作者 李素波 檀英霞 冷泠 季守平 高红伟 宫锋 《生物技术通讯》 CAS 2014年第6期849-851,共3页
目的:探讨脆弱类杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶清除猪细胞表面α-Gal抗原的作用。方法:用不同浓度的α-半乳糖苷酶酶解猪红细胞、猪胚肾细胞PK15、猪睾丸细胞ST和原代培养的猪成纤维细胞上的α-Gal抗原,酶解温度为26℃,作用时间为2 h... 目的:探讨脆弱类杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶清除猪细胞表面α-Gal抗原的作用。方法:用不同浓度的α-半乳糖苷酶酶解猪红细胞、猪胚肾细胞PK15、猪睾丸细胞ST和原代培养的猪成纤维细胞上的α-Gal抗原,酶解温度为26℃,作用时间为2 h;用25μg/m L的FITC-IB4凝集素标记酶解前后的细胞,采用流式细胞仪检测细胞表面α-Gal抗原的清除率。结果:流式细胞检测结果表明,不同组织来源的猪细胞表面的α-Gal抗原的表达量明显不同,所需酶的剂量也不同,但其表面的α-Gal抗原均能被α-半乳糖苷酶清除。结论:脆弱类杆菌来源的α-半乳糖苷酶可以清除猪细胞表面的α-Gal抗原,提示该酶对降低异种移植引起的超急性排斥反应有重要意义。 展开更多
关键词 异种抗原 α-gal抗原 超急性排斥反应 Α-半乳糖苷酶
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一种新的非Gal异种移植抗原——FAM234A的鉴定
6
作者 谢崇伟 戴文杰 +2 位作者 张军方 蔡志明 牟丽莎 《器官移植》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期354-359,共6页
目的探讨FAM234A是否为一种新的非Gal异种移植抗原。方法用α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)小型猪的原代猪主动脉内皮细胞(PAEC)免疫食蟹猴。将免疫的猴血清与PAEC孵育,其中经免疫产生的猴抗猪细胞抗体能够识别并结合PAEC表面的未... 目的探讨FAM234A是否为一种新的非Gal异种移植抗原。方法用α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)小型猪的原代猪主动脉内皮细胞(PAEC)免疫食蟹猴。将免疫的猴血清与PAEC孵育,其中经免疫产生的猴抗猪细胞抗体能够识别并结合PAEC表面的未知抗原。采用流式细胞术测定PAEC表面结合的猴抗猪细胞抗体的平均荧光强度(MFI),用以表示PAEC表面抗原的含量。利用慢病毒介导的短发夹核糖核酸(shRNA)敲减PAEC中的FAM234A基因,检测该细胞结合的猴抗猪细胞抗体含量是否减少,以确定该基因是否为潜在的移植抗原。结果 PAEC中的非Gal抗原能够在猴体内引发大量的猴抗猪细胞抗体。在GTKO小型猪的PAEC中用shRNA敲减FAM234A基因后,PAEC结合的猴IgG抗体减少。结论 FAM234A是一种新的非Gal异种移植抗原。 展开更多
关键词 异种移植 gal抗原 主动脉内皮细胞(PAEC) FAM234A 食蟹猴 α-1 3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO) 流式细胞术 短发夹核糖核酸(shRNA) 基因敲减 巴马小型猪 五指山小型猪 慢病毒
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Hepatocellular carcinoma-specific immunotherapy with synthesized α1,3-galactosyl epitope-pulsed dendritic cells and cytokine-induced killer cells 被引量:8
7
作者 Ying Qiu Ming-Bao Xu +6 位作者 Mark M Yun Yi-Zhong Wang Rui-Ming Zhang Xing-Kai Meng Xiao-Hui Ou-Yang Sheng Yun 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2011年第48期5260-5266,共7页
AIM: To evaluate the safety and clinical efficacy of a new immunotherapy using both α-Gal epitope-pulsed dendritic cells (DCs) and cytokine-induced killer cells.METHODS: Freshly collected hepatocellular carcinoma(HCC... AIM: To evaluate the safety and clinical efficacy of a new immunotherapy using both α-Gal epitope-pulsed dendritic cells (DCs) and cytokine-induced killer cells.METHODS: Freshly collected hepatocellular carcinoma(HCC) tumor tissues were incubated with a mixture of neuraminidase and recombinant α1,3-galactosyltransferase (α1,3GT) to synthesize α-Gal epitopes on carbohydrate chains of the glycoproteins of tumor membranes. The subsequent incubation of the processed membranes in the presence of human natural anti-Gal IgG resulted in the effective phagocytosis to the tumor membrane by DCs. Eighteen patients aged 38-78 years with stage Ⅲ primary HCC were randomLy chosen for the study; 9 patients served as controls, and 9 patients were enrolled in the study group.RESULTS: The evaluation demonstrated that the procedure was safe; no serious side effects or autoimmune diseases were observed. The therapy significantly prolonged the survival of treated patients as compared with the controls (17.1 ± 2.01 mo vs 10.1 ± 4.5 mo,P = 0.00121). After treatment, all patients in the study group had positive delayed hyper sensitivity and robust systemic cytotoxicity in response to tumor lysate as measured by interferon-γ-expression in peripheral blood mononuclear cells using enzyme-linked immunosorbent spot assay. They also displayed increased numbers of CD8-, CD45RO-and CD56-positive cells in the peripheral blood and decreased α-fetoprotein level in the serum.CONCLUSION: This new tumor-specific immunotherapy is safe, effective and has a great potential for the treatment of tumors. 展开更多
关键词 Hepatocellular carcinoma α-gal epitope Dendritic cell Tumor-associated antigen Dendritic cell-activated cytokine-induced killer cell
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去端肽Ⅰ型胶原蛋白的免疫原性研究 被引量:6
8
作者 张自强 张以河 +3 位作者 安琪 徐荣荣 李欢 王恩博 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第22期3542-3548,共7页
背景:Ⅰ型胶原蛋白的免疫原性主要分布在分子链的端肽区域,可在胶原蛋白提取过程中通过水解或是去除而使其失活,制备去端肽Ⅰ型胶原蛋白,降低其免疫原性。目的:评价去端肽Ⅰ型胶原蛋白的免疫原性。方法:采用酶切、盐析、透析工艺制备去... 背景:Ⅰ型胶原蛋白的免疫原性主要分布在分子链的端肽区域,可在胶原蛋白提取过程中通过水解或是去除而使其失活,制备去端肽Ⅰ型胶原蛋白,降低其免疫原性。目的:评价去端肽Ⅰ型胶原蛋白的免疫原性。方法:采用酶切、盐析、透析工艺制备去端肽Ⅰ型胶原蛋白,通过考马斯亮蓝对牛血清白蛋白染色极限的分析,鉴定去端肽Ⅰ型胶原蛋白的纯度,依据YY/T 0606.25-2014中规定的方法,利用Quant-IT PicoGreendsDNA Reagent and Kits试剂盒测定去端肽Ⅰ型胶原蛋白的DNA残留量,利用ELISA试剂盒分析去端肽Ⅰ型胶原蛋白的端肽去除效果,依据YY/T 1561-2017标准检测去端肽Ⅰ型胶原蛋白的α-Gal抗原含量。结果与结论:去端肽Ⅰ型胶原蛋白的纯度可达99.8%,DNA残留量为4μg/g,C、N末端肽浓度低于试剂盒检测限,α-Gal抗原含量低于检测限。通过酶切、盐析、透析工艺制备的去端肽Ⅰ型胶原蛋白,可显著去除天然胶原蛋白的免疫原性根源,有效控制胶原蛋白临床应用的免疫原性风险。 展开更多
关键词 去端肽胶原蛋白 Ⅰ型胶原蛋白 免疫原性 DNA残留量 端肽 α-gal抗原 胶原纯度
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中国内江猪胰腺组织异种抗原的研究 被引量:1
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作者 步宏 陈蕴颖 +2 位作者 李幼平 程惊秋 李涛 《华西医科大学学报》 CSCD 2000年第1期14-17,共4页
为获取临床猪→人异种胰腺移植的基础资料 ,分别采用植物凝集素 BSIB4、健康人血清、人类血型抗原 A、B、H物质单克隆抗体免疫组化法检测 1 0头内江猪胰腺组织中异种移植抗原的表达。结果显示 :内江猪胰腺组织中血管内皮、导管上皮细胞... 为获取临床猪→人异种胰腺移植的基础资料 ,分别采用植物凝集素 BSIB4、健康人血清、人类血型抗原 A、B、H物质单克隆抗体免疫组化法检测 1 0头内江猪胰腺组织中异种移植抗原的表达。结果显示 :内江猪胰腺组织中血管内皮、导管上皮细胞表达α- Gal;部分胰岛细胞、胰腺外分泌细胞和所有导管上皮细胞均表达人类血型 A抗原。结论 :人体内存在抗内江猪胰腺组织部分细胞的天然抗体 ; 展开更多
关键词 胰腺组织 异种移植抗原 α-gal抗原
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血清癌胚抗原、甲状腺球蛋白及半乳凝集素-3水平在甲状腺癌鉴别诊断中的价值 被引量:22
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作者 温琥玲 谢建平 +1 位作者 林师宇 文丹 《分子诊断与治疗杂志》 2019年第1期58-62,共5页
目的探讨血清中癌胚抗原(CEA)、甲状腺球蛋白(Tg)及半乳凝集素-3(gal-3)在甲状腺癌鉴别诊断中的价值。方法选取我院经病理学明确诊断的甲状腺癌患者127例(甲状腺癌组)、甲状腺良性结节患者(良性组)60例,收治时间2015年1月至2017年9月,... 目的探讨血清中癌胚抗原(CEA)、甲状腺球蛋白(Tg)及半乳凝集素-3(gal-3)在甲状腺癌鉴别诊断中的价值。方法选取我院经病理学明确诊断的甲状腺癌患者127例(甲状腺癌组)、甲状腺良性结节患者(良性组)60例,收治时间2015年1月至2017年9月,检测并对比2组患者的血清CEA、Tg及gal-3水平,以病理学结果作为诊断金标准,计算诊断学指标。结果甲状腺癌患者的血清CEA、Tg及gal-3水平均显著高于良性组,差异具有统计学意义(P<0.05);当血清CEA为5.00 ng/mL时,CEA诊断甲状腺癌的灵敏度为26.98%,特异度为87.40%,ROC曲线下面积AUC值为0.608;当血清Tg为65.40 ng/mL时,Tg诊断甲状腺癌的灵敏度为30.17%,特异度为89.21%,ROC曲线下面积AUC值为0.629;当血清gal-3为19.67 ng/mL时,gal-3诊断甲状腺癌的灵敏度为72.85%,特异度为85.64%、ROC曲线下面积AUC值为0.761;血清CEA、Tg及gal-3诊断甲状腺癌的灵敏度为87.92%,特异度为94.18%,ROC曲线下面积AUC值为0.916。结论血清CEA、Tg及gal-3联合诊断甲状腺癌较3项指标单独应用具有更高的临床价值。 展开更多
关键词 癌胚抗原 甲状腺球蛋白 半乳凝集素-3 甲状腺癌
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α-半乳糖基抗原缺失模型兔的研制与评价 被引量:1
11
作者 穆钰峰 魏利娜 +4 位作者 吴勇 邵安良 陈亮 屈树新 徐丽明 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2021年第2期281-285,共5页
背景:有研究表明一种称为α-Gal的糖抗原是动物源性生物材料或异种器官移植引起超急性免疫排斥反应的主要靶抗原。目的:研制Gal抗原缺失兔模型,预期用于评价植入性医疗器械,其局部植入后对宿主的局部免疫反应及非特异性炎症反应风险。方... 背景:有研究表明一种称为α-Gal的糖抗原是动物源性生物材料或异种器官移植引起超急性免疫排斥反应的主要靶抗原。目的:研制Gal抗原缺失兔模型,预期用于评价植入性医疗器械,其局部植入后对宿主的局部免疫反应及非特异性炎症反应风险。方法:选用SPF级6-8月龄新西兰大白兔作为模式动物蓝本,制备Gal抗原缺失兔模型。采用CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术,针对调控兔子Gal抗原表达的GGTA1基因第8外显子设计构建2条相辅的sgRNA。经转录后将GGTA1 sgRNA mRNAs与Cas9 mRNA共显微注射到体外培养的兔子受精卵中,继续短暂体外培养后植入代孕母兔体内,经自然妊娠获得仔兔。基因编辑成功与否通过凝胶电泳和基因测序进行验证。Gal抗原的表达参照行业标准给出的方法(YY/T 1561-2017)进行检测。研究经中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所动物伦理委员会批准[批准号:中检动(福)第2017(B)007号]。结果与结论:①基因编辑后的胚胎被转移至4只代孕兔体内,自然妊娠后获得15只基因编辑仔兔,仔兔的外观发育及进食行为等未见异常;②凝胶电泳及基因测序结果显示15只仔兔中有14只的靶向基因被成功编辑,但编辑的碱基并不相同;随机检测其主要脏器Gal抗原,表达均降低了99.96%以上;③结果表明,Gal抗原缺失兔子有望用于动物源性医疗器械的免疫原性风险评价和异种骨、角膜等原位植入实验,以便能够更客观科学地评价动物源性医疗器械的安全性和有效性。 展开更多
关键词 gal抗原 GGTA1基因 CRISPR/Cas9 基因编辑 免疫原性 模式动物 原位植入 gal抗原缺失兔子
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Gal抗原缺失小鼠的应用示范:动物源性硬脑膜补片的免疫原性反应评价 被引量:9
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作者 邵安良 魏利娜 +2 位作者 范昌发 陈亮 徐丽明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1296-1303,共8页
目的:采用Gal抗原缺失模式小鼠评价动物源性硬脑膜补片残余免疫原风险,考察Gal抗原缺失模式小鼠的应用价值。方法:在经外源性Gal抗原(兔血红细胞)预免的Gal抗原缺失小鼠皮下分别植入硬脑膜补片(产品)与牛心包(原材料)4周,分析小鼠血清... 目的:采用Gal抗原缺失模式小鼠评价动物源性硬脑膜补片残余免疫原风险,考察Gal抗原缺失模式小鼠的应用价值。方法:在经外源性Gal抗原(兔血红细胞)预免的Gal抗原缺失小鼠皮下分别植入硬脑膜补片(产品)与牛心包(原材料)4周,分析小鼠血清总抗体,特异性抗-Gal抗体,与免疫排斥反应及炎症反应相关的细胞因子表达水平,脾脏淋巴细胞亚型及胸腺、局部病理,综合考察各实验组的差异。结果:牛心包植入组与对照组相比,小鼠血清抗-Gal IgG和抗-Gal IgM水平显著升高(分别为约4倍和约1.7倍);而硬脑膜补片植入组小鼠血清抗-Gal IgG、抗-GalIgM水平与对照组相比均无明显差异。除硬脑膜补片植入组小鼠血清IL-4含量下降之外,其余细胞因子包括IL-1β、IL-10、IL-2、IL-6、IL-12P70与IFN-γ含量,血清总IgG、IgM水平在各组间均无显著差异。脾脏淋巴细胞亚型分析显示,硬脑膜补片植入组和心包植入组与对照组相比均无显著性变化。胸腺病理未见异常;局部病理显示硬脑膜补片植入组炎症:Ⅰ-Ⅱ级,纤维化:Ⅰ-Ⅱ级,较心包植入组(炎症:Ⅱ-Ⅲ级,纤维化:Ⅱ-Ⅲ级)反应减轻。研究结果表明动物源性硬脑膜补片产品的Gal抗原介导的免疫原性反应与原材料相比显著降低。然而,硬脑膜补片植入组的植入物局部仍存在一定程度的炎症反应和纤维化现象。结论:硬脑膜补片残余免疫原风险与原材料相比显著降低,与对照组无显著性差异;Gal抗原缺失模式小鼠血清抗-Gal IgG、抗-Gal IgM能够科学地评价动物源性生物材料Gal抗原相关的免疫原性,可以作为动物源性生物材料脱抗原处理工艺有效性的特异性指标之一;提示Gal抗原缺失模式小鼠对动源性生物材料的异种免疫原性风险评价具有极高的应用价值。 展开更多
关键词 gal抗原缺失小鼠 动物源性硬脑膜补片 牛心包 原材料 抗-gal抗体 免疫原性
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应用Gal抗原缺失小鼠评价可降解异种脱细胞真皮基质的免疫原性 被引量:7
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作者 陈亮 邵安良 +3 位作者 魏利娜 刘启省 张东刚 徐丽明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1370-1378,共9页
目的:采用Gal抗原缺失小鼠评价脱细胞真皮基质及其降解过程中的残余免疫风险。方法:Gal抗原缺失小鼠经兔血预免后,随机分为对照组、T1组、T2组。T1组腿部肌肉间植入牛真皮基质(原材料),T2组肌肉间植入脱细胞真皮基质,对照组进行"... 目的:采用Gal抗原缺失小鼠评价脱细胞真皮基质及其降解过程中的残余免疫风险。方法:Gal抗原缺失小鼠经兔血预免后,随机分为对照组、T1组、T2组。T1组腿部肌肉间植入牛真皮基质(原材料),T2组肌肉间植入脱细胞真皮基质,对照组进行"假手术"操作。在植入后的4、12、52周分别取材,用ELISA方法检测小鼠血清总IgG、IgM含量和血清抗-Gal IgG、IgM水平;用流式细胞仪检测血清IL-4、IL-10、IL-12p40、IFN-γ等细胞因子含量,以及脾淋巴细胞亚型百分比等;进行脾体外淋巴细胞增殖试验,采用CCK-8试剂检测淋巴细胞增殖率;取胸腺、脾脏以及包裹植入物的局部肌肉样本,HE染色后进行组织病理学评价。通过与对照组的比较,进行牛真皮基质原材料和脱细胞真皮基质的免疫毒理学风险评价。结果:与对照组相比,小鼠植入牛真皮基质原材料的T1组小鼠血清抗-Gal IgG含量和体外脾脏淋巴细胞增殖率有统计学显著性差异。T1组小鼠在4周时,血清抗-Gal IgG平均含量是对照组的2倍;植入12周时,血清抗-Gal IgG平均含量继续升高,达到对照组的近7倍,统计学分析均有显著性差异,表明由降解引起的Gal抗原持续暴露或暴露增加,致使小鼠血清抗-Gal IgG含量升高;在植入52周时,血清抗-Gal IgG平均含量回复到对照组水平。植入12周时,T1组小鼠的脾淋巴细胞体外培养3、7d时,淋巴细胞增殖率分别是对照组的211%和243%。组织病理学分析显示T1组牛真皮基质植入后4周时局部反应为重度刺激,12周时为中度刺激,52周时为轻微刺激。植入脱细胞真皮基质的T2组在4、12、52周的不同时点,小鼠血清总IgG、IgM含量,抗-Gal IgG和IgM含量,血清细胞因子,脾淋巴细胞分型和淋巴细胞体外增殖等不同指标的检测结果与对照组相比均无统计学差异;组织病理学分析显示T2组脱细胞真皮基质植入后4周时局部反应为中度刺激,12周时为轻微刺激,52周时为无刺激。而且,脱细胞真皮基质在4、12、52周时的植入局部反应明显低于真皮基质原材料。结论:牛真皮基质(原材料)及其降解产物具有引起Gal抗原缺失小鼠血清抗-Gal IgG含量升高和脾脏淋巴细胞增殖的免疫原性;而脱细胞真皮基质在植入后降解过程中的免疫反应与对照组相比均无显著性差异。这些结果表明脱细胞处理工艺降低了脱细胞真皮基质的特异性免疫反应。 展开更多
关键词 gal抗原缺失小鼠 真皮基质 原材料 脱细胞 降解 抗-gal抗体 免疫原性
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ELISA抑制法检测动物组织中α1,3-Gal抗原 被引量:4
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作者 陆艳 单永强 +2 位作者 邵安良 曾碧新 徐丽明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1729-1735,共7页
目的:用人工合成的Gal/BSA抗原对骨髓瘤细胞的Gal抗原表位数进行赋值;再用骨髓瘤细胞作为参照品,建立并优化单克隆特异性抗体M86检测动物组织中α1,3-Gal(Gal)抗原的ELISA抑制法。应用优化后的方法,检测猪和小鼠组织Gal抗原表位数。方法... 目的:用人工合成的Gal/BSA抗原对骨髓瘤细胞的Gal抗原表位数进行赋值;再用骨髓瘤细胞作为参照品,建立并优化单克隆特异性抗体M86检测动物组织中α1,3-Gal(Gal)抗原的ELISA抑制法。应用优化后的方法,检测猪和小鼠组织Gal抗原表位数。方法:将待测物抗原(Gal-BSA系列稀释液、SP2/0细胞及待检组织样品)与M86特异性抗体反应后离心,取含有M86剩余抗体的上清液;再与Gal-BSA包被的固相抗原反应,计算出待测样品和标准曲线样品的M86结合抑制率;之后绘制相应的质量浓度-结合抑制率曲线,再根据曲线拟合公式计算其50%结合抑制时的质量浓度;进而计算Gal抗原表位数。结果:各结合抑制曲线相关性较好,R2>0.95。SP2/0骨髓瘤细胞Gal抗原数为每个细胞6.19×108个;利用优化了的方法检测猪的冻干组织抗原含量趋势为:肺>肾>脾>心>腹膜>心包膜>肝组织>皮肤;小鼠的新鲜湿组织抗原含量趋势为:心>肺>脾>肾>肝。结论:应用骨髓瘤细胞作为参照品,所建立的M86抗体ELISA抑制法检测动物组织的Gal抗原含量具有较好的敏感性和特异性,为进一步建立该方法规范性的行业标准奠定了基础。 展开更多
关键词 动物源性生物材料 免疫排斥反应靶抗原检测 gal抗原 M86特异性抗体 ELISA抑制法
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三个品种猪α-Gal抗原表位的免疫组化分析 被引量:3
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作者 范晶 吴丹 +5 位作者 郭亚芬 兰干球 蒋钦杨 陈江伟 阮志华 王爱德 《实用预防医学》 CAS 2010年第10期2068-2073,共6页
为进一步研究α-1,3半乳糖转移酶在机体中的功能情况,以及本地猪种编码序列的缺失可能造成的对酶活性的影响。本研究对三个品种猪机体中主动脉、前腔静脉、心脏、肺脏、肝脏、肾脏、气管、胃等组织的α-1,3半乳糖转移酶催化产物α-Gal... 为进一步研究α-1,3半乳糖转移酶在机体中的功能情况,以及本地猪种编码序列的缺失可能造成的对酶活性的影响。本研究对三个品种猪机体中主动脉、前腔静脉、心脏、肺脏、肝脏、肾脏、气管、胃等组织的α-1,3半乳糖转移酶催化产物α-Gal抗原表位进行免疫组织化学分析。结果表明:猪体内的α-1,3半乳糖转移酶在表达模式上是保守的,空间分布上是广泛的。若以巴马小型猪构建异种器官移植供体模型,从遗传上将GGTA1基因敲除仍是最为有效的途径。 展开更多
关键词 广西巴马小型猪 α-1 3半乳糖转移酶 α-gal抗原
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2种Gal抗原缺失小鼠的免疫学特性比较研究 被引量:10
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作者 邵安良 魏利娜 +2 位作者 范昌发 陈亮 徐丽明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1285-1295,共11页
目的:考察2种Gal抗原缺失小鼠对外来抗原刺激的免疫应答特性,分析其用于Gal抗原阳性材料免疫毒性评价的敏感性。方法:采用外来Gal抗原(兔血红细胞,RRBC)免疫刺激2种Gal抗原缺失小鼠(GGTA1单基因敲除,KO与GGTA1/iGb3S双基因敲除,DKO),比... 目的:考察2种Gal抗原缺失小鼠对外来抗原刺激的免疫应答特性,分析其用于Gal抗原阳性材料免疫毒性评价的敏感性。方法:采用外来Gal抗原(兔血红细胞,RRBC)免疫刺激2种Gal抗原缺失小鼠(GGTA1单基因敲除,KO与GGTA1/iGb3S双基因敲除,DKO),比较分析经免疫刺激后2种小鼠的免疫应答特性和敏感性,包括:特异性抗-Gal抗体水平,与免疫排斥反应及炎症反应相关的细胞因子表达水平和脾脏淋巴细胞亚型分型比例。结果:GGTA1/iGb3S DKO小鼠经腹腔内RRBC免疫刺激2次后,血清抗-Gal IgG和抗-Gal IgM水平与未接受免疫刺激的小鼠相比,分别升高约41倍和184倍;同时,脾脏T细胞亚型标志物(CD3^+CD8^+)水平轻度增高。GGTA1 KO小鼠经RRBC免疫刺激2次后,血清抗-Gal IgG和抗-Gal IgM水平与未接受免疫刺激小鼠相比,分别升高约92倍和407倍;同时,脾脏B细胞亚型标志物(CD3^-CD19^+)水平轻度升高。然而,与GGTA1/iGb3S DKO小鼠相比,可能由于个体间差异较大,除了2次免疫后抗-Gal IgG在800倍稀释,抗-GalIgM在3 200倍稀释时略高之外,其他并不存在显著性差异。2种Gal抗原缺失小鼠在RRBC免疫刺激后的NK细胞亚型标志物水平及细胞因子(IFN-gama,IL-4与IL-12P70)表达水平未见明显变化。结论:2种Gal抗原缺失小鼠均对外来抗原刺激具有较强的敏感性,表现为特异性抗-Gal抗体的显著升高,然而,GGTA1/iGb3S DKO小鼠与GGTA1 KO小鼠相比,未表现出更高的敏感性。因此,作为异种免疫原的免疫学评价模型,GGTA1 KO小鼠和GGTA1/iGb3S DKO小鼠都是敏感的实验动物模型。本研究采用的RRBC预免疫方法既能够提升小鼠的抗-Gal抗体水平,又不引起显著的免疫毒性反应,为后期用于动物源性生物材料的免疫学评价实验动物模型的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 GGTA1 KO GGTA1/iGb3S DKO 外来抗原 兔血红细胞 抗-gal抗体 免疫毒性
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酶解法清除猪皮α-Gal抗原的研究 被引量:2
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作者 贠志敏 李素波 +4 位作者 张雪 檀英霞 季守平 高红伟 宫锋 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期938-940,共3页
目的利用脆弱拟杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶清除猪皮细胞及基质的异种抗原(α-Gal抗原),降低猪皮基质敷料的免疫原性。方法 2月龄健康无皮肤疾患的猪皮皮片,经剖层裁切成不同的规格后,分别经碘酊和75%乙醇溶液浸泡消毒,随后用PBS... 目的利用脆弱拟杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶清除猪皮细胞及基质的异种抗原(α-Gal抗原),降低猪皮基质敷料的免疫原性。方法 2月龄健康无皮肤疾患的猪皮皮片,经剖层裁切成不同的规格后,分别经碘酊和75%乙醇溶液浸泡消毒,随后用PBS清洗后进行酶解条件的摸索;采用免疫荧光法检测猪皮的α-Gal抗原,双抗夹心ELISA法检测残留酶,通过对酶解猪皮的残留酶和α-Gal抗原的检测进而优化、改进酶解条件和洗涤条件,以确立最佳酶解工艺。结果建立了有效的酶解方法和洗涤方法,酶解后猪皮的α-Gal抗原清除率>90%,残留酶不能检出(间接ELISA法检测微量α-半乳糖苷酶的下限为1 ng/ml)。结论所建立的酶解工艺和洗涤工艺可有效清除猪皮细胞及基质的α-Gal抗原,建立了制备低免疫原性猪皮敷料的方法。 展开更多
关键词 猪皮 免疫原性 Α-半乳糖苷酶 α-gal抗原 残留酶
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α-Gal抗原定量检测试剂盒的研发 被引量:1
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作者 吴勇 邵安良 +3 位作者 徐晓莉 贾雪荣 王金恒 徐丽明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1910-1919,共10页
目的:通过优化α-Gal抗原检测的方法及改善相关试剂的稳定性,研发α-Gal抗原定量检测试剂盒,并评价该试剂盒的稳定性、可靠性和适用性。方法:以医疗器械行业标准(YY/T 1561—2017组织工程医疗器械产品动物源性支架材料残留α-Gal抗原检... 目的:通过优化α-Gal抗原检测的方法及改善相关试剂的稳定性,研发α-Gal抗原定量检测试剂盒,并评价该试剂盒的稳定性、可靠性和适用性。方法:以医疗器械行业标准(YY/T 1561—2017组织工程医疗器械产品动物源性支架材料残留α-Gal抗原检测)中的α-Gal抗原检测酶联免疫抑制方法为基础,通过评价回收率、相关系数R2、最大吸收值和一抗的最高结合抑制率,对一抗、酶标二抗和固相抗原包被反应条件进行优化。预先制备好抗原包被板以及即用型试剂,制备成套试剂盒。通过考察Gal-BSA标准品的Gal抗原含量,评价试剂盒的检测回收率、标准曲线的R2值、最高反应的吸收度(A)和最高结合抑制率,考察其稳定性。使用优化好的试剂盒检测几种样品的Gal抗原,考察试剂盒的适用性。结果:经过优化后的试剂盒Gal抗原最低检测限为5.64×1012个/每反应,检测回收率80%~120%;相关系数R2>0.98;6批次的板内、板间检测的相对标准偏差RSD<5%;阴性参考品无Gal抗原检出。使用该试剂盒能够准确检测小鼠脏器Gal抗原含量,其结果显示小鼠各脏器Gal抗原表达趋势与Gal抗原调控基因的m RNA表达趋势完全一致,间接地佐证了该试剂盒的准确性和可信性。检测生物型硬脑膜补片原材料Gal抗原含量为(8.34±1.17)×1014个·mg-1,产品Gal抗原含量为(4.16±2.56)×1012个·mg-1,计算得抗原清除率为99.5%。结论:该试剂盒具有较好的灵敏度,特异性,适用于依照行业标准YY/T 1561—2017进行动物源医疗器械/生物材料α-Gal抗原残留量的定量和Gal抗原清除率检测,为行业标准的实施提供技术保障。 展开更多
关键词 动物源医疗器械 生物材料 gal抗原残留量 抗原清除率 酶联免疫抑制方法 试剂盒 行业标准
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人外周血淋巴细胞增殖试验的优化及其应用 被引量:5
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作者 邵安良 穆钰峰 +2 位作者 屈树新 陈亮 徐丽明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1354-1361,共8页
目的:优化人外周血淋巴细胞增殖试验条件;考察动物源材料的Gal抗原含量与淋巴细胞增殖效应的相关性;并比较人外周血淋巴细胞与小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验对动物源材料的敏感性差异。方法:从细胞接种量,阳性对照(刀豆球蛋白A,Con A)的工... 目的:优化人外周血淋巴细胞增殖试验条件;考察动物源材料的Gal抗原含量与淋巴细胞增殖效应的相关性;并比较人外周血淋巴细胞与小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验对动物源材料的敏感性差异。方法:从细胞接种量,阳性对照(刀豆球蛋白A,Con A)的工作浓度与细胞培养时间,优化人外周血淋巴细胞增殖试验的最佳条件;利用优化的试验方法,通过人外周血淋巴细胞与动物源性材料的(牛跟腱或由牛跟腱纯化的胶原蛋白海绵)匀浆液或浸提液共培养,考察材料的不同前处理方式对人外周血淋巴细胞增殖的影响;参考标准YY/T 1561-2017,检测材料匀浆液或浸提液的Gal抗原含量,分析其抗原含量与淋巴细胞增殖效应的相关性;同时参考标准YY/T 1465.1-2016,考察材料匀浆液与浸提液对小鼠脾脏淋巴细胞增殖效应的影响,并对比分析对动物源材料的敏感性差异。结果:人外周血淋巴细胞增殖试验最佳反应条件经优化确定为:细胞接种量为1×10^5,阳性对照(Con A)的终浓度选择5~10μg·mL^-1,培养时间为4 d。人外周血淋巴细胞与胶原蛋白海绵(匀浆组与浸提液组)共培养后,样品组与正常细胞对照组相比不存在明显差异;与牛跟腱匀浆液共培养后,与正常细胞对照组相比不存在显著性差异。胶原蛋白海绵(匀浆组与浸提液组)对小鼠脾脏淋巴细胞均无明显增殖效应。牛跟腱匀浆液在5倍稀释与50倍稀释后,对小鼠脾脏淋巴细胞均有明显增殖效应(增殖率为143.20%和128.71%)。牛跟腱匀浆液的Gal抗原含量为(3.98±1.06)×10^13个·mg^-1、胶原蛋白海绵匀浆液为(2.24±0.60)×10^13个·mg^-1、胶原蛋白海绵浸提液为(1.89±0.64)×10^13个·mg^-1。结论:淋巴细胞增殖效应与动物源性生物材料中残留Gal抗原含量的正向相关性不强。与小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验相比,采用人外周血淋巴细胞增殖试验评价含Gal抗原的动物源性生物材料细胞免疫的敏感性未见优势。淋巴细胞增殖试验是评价动物源生物材料细胞免疫的可用方法之一。 展开更多
关键词 淋巴细胞增殖试验 人外周血淋巴细胞 小鼠脾脏淋巴细胞 牛跟腱 胶原蛋白海绵 gal抗原
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去细胞异种角膜基质与去细胞异种结膜基质的免疫原性研究 被引量:5
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作者 魏利娜 邵安良 +3 位作者 黄立静 程祥 陈亮 徐丽明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1362-1369,共8页
目的:应用Gal抗原缺失小鼠从体液免疫、细胞免疫、植入物局部组织病理等多方面评价去细胞异种角膜基质(猪源)与去细胞异种结膜基质(猪源)的免疫原性。方法:将用于每种材料的小鼠分为3个实验组:对照组(Con)、原材料组(T1)和基质组(T2)。... 目的:应用Gal抗原缺失小鼠从体液免疫、细胞免疫、植入物局部组织病理等多方面评价去细胞异种角膜基质(猪源)与去细胞异种结膜基质(猪源)的免疫原性。方法:将用于每种材料的小鼠分为3个实验组:对照组(Con)、原材料组(T1)和基质组(T2)。将去细胞异种角膜基质与去细胞异种结膜基质及其原材料植入经兔血红细胞2次预免疫的Gal抗原缺失小鼠体内,于植入1个月后取材,分别分析2种基质及其原材料组与对照组在小鼠血清总抗体、抗-Gal抗体、细胞因子,脾脏淋巴细胞不同亚型的细胞表面分子表达水平,以及植入物局部组织病理等方面的变化。结果:2种基质及其原材料组在植入1个月后小鼠血清总抗体含量、细胞因子含量与对照组相比均无显著性差异。少数脾脏淋巴细胞表面分子表达水平与对照组相比有显著性差异(P<0.05),但均在对照组历史数据变异范围内。然而,小鼠血清抗Gal抗体检测结果显示:去细胞异种结膜基质植入1个月时基质及其原材料组小鼠血清抗-Gal抗体水平比对照组显著升高(P<0.05);而去细胞异种角膜基质植入1个月时基质及其原材料组小鼠血清抗-Gal抗体水平与对照组相比均无显著性差异。植入物局部组织病理显示:去细胞异种结膜基质植入1个月时大部分已降解,组织学显示轻微炎症反应,原材料组已无材料残留,组织学显示无明显炎症反应。去细胞异种角膜基质及原材料组植入1个月时植入物未发生明显降解,基质及原材料组的组织学反应均为重度炎症反应。结论:本研究结果证实了Gal抗原缺失小鼠对材料中残留Gal抗原的敏感性,应用Gal抗原小鼠能够科学地评价动物源性生物材料的异种免疫原性风险。 展开更多
关键词 去细胞异种角膜基质 去细胞异种结膜基质 原材料 gal抗原缺失小鼠 免疫原性
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