内源性抗菌多肽防御素是机体先天性免疫系统的重要组成部分,可帮助机体防御外界病原微生物的入侵。鸡β-防御素-1(G a llinac in-1,G a l-1)对许多致病菌都具有杀菌作用,具有很好的研究开发价值。本研究利用PCR技术从重组质粒pGEM-TE as...内源性抗菌多肽防御素是机体先天性免疫系统的重要组成部分,可帮助机体防御外界病原微生物的入侵。鸡β-防御素-1(G a llinac in-1,G a l-1)对许多致病菌都具有杀菌作用,具有很好的研究开发价值。本研究利用PCR技术从重组质粒pGEM-TE asy-ga l-1中克隆出G a l-1基因成熟肽区,将该基因插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-32a(+)-ga l-1,然后用重组质粒转化大肠杆菌BL-21。挑选阳性克隆菌,用浓度为0.5 mm o l/L的IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE电泳显示在目标位置约25kD处出现了条带并用W erstern B lot进行了鉴定。表明G a l-1基因在大肠杆菌以融合形式得到了表达。经灰度扫描显示重组蛋白表达量占细菌总蛋白的15.54%。用50%N i-NTA纯化树脂进行层析纯化,在洗脱液E中出现单一条带。G a l-1多肽在pET-32a(+)质粒表达体系中成功表达为鸡防御素多肽下一步的研究奠定基础。展开更多
文摘内源性抗菌多肽防御素是机体先天性免疫系统的重要组成部分,可帮助机体防御外界病原微生物的入侵。鸡β-防御素-1(G a llinac in-1,G a l-1)对许多致病菌都具有杀菌作用,具有很好的研究开发价值。本研究利用PCR技术从重组质粒pGEM-TE asy-ga l-1中克隆出G a l-1基因成熟肽区,将该基因插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-32a(+)-ga l-1,然后用重组质粒转化大肠杆菌BL-21。挑选阳性克隆菌,用浓度为0.5 mm o l/L的IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE电泳显示在目标位置约25kD处出现了条带并用W erstern B lot进行了鉴定。表明G a l-1基因在大肠杆菌以融合形式得到了表达。经灰度扫描显示重组蛋白表达量占细菌总蛋白的15.54%。用50%N i-NTA纯化树脂进行层析纯化,在洗脱液E中出现单一条带。G a l-1多肽在pET-32a(+)质粒表达体系中成功表达为鸡防御素多肽下一步的研究奠定基础。
文摘目的 :采用同位素相对标记和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQi)技术分析耳蜗核(cochlear nucleus,CN)区域特异性膜蛋白。方法 :出生60 d的雄性SD大鼠分为4组,分别是CN、下丘(inferior colliculus,IC)、上橄榄核(superior oliver complex,SOC)、大脑其余部位(Rest)。提取这4个部位组织的细胞膜蛋白,再采用iTRAQi技术检测出CN区域特异性蛋白。通过Uniprot检索这些蛋白的功能和参与的生物代谢过程。结果:本实验最终得到17种CN区域特异性膜蛋白。对CN区域蛋白进行基因本体(gene ontology,GO)分析发现,这些蛋白主要参与生物调节与发育。UNIPROT检索发现3种蛋白与神经系统功能相关,即半乳糖凝集素-1(galectin-1,Gal-1)、膜联蛋白A2(annexin-A2,AXNA2)和外周蛋白(peripherin,PRPH)。Gal-1与神经生长发育相关;AXNA2参与多种生物调节过程;PRPH与神经退行性病变相关。其中,Gal-1可促进轴突生长、调节突触可塑性且具有神经保护作用;AXNA2可能参与了神经递质释放过程,且有神经营养作用;PRPH在高表达时具有神经毒性,和神经丝蛋白共同参与神经退行性病变。结论:Gal-1、ANXA2和PRPH在耳蜗核中高度表达,可能与中枢信息处理相关,这为进一步研究中枢听觉处理障碍发病机制提供了一定的理论基础。
