TK/GCV系统对骨肉瘤MG-63细胞杀伤的体外实验研究

目的:探讨脂质体介导的TK/GCV系统对骨肉瘤MG-63细胞的杀伤作用以及所产生的旁观者效应。方法:脂质体介导TK基因体外转染骨肉瘤MG-63细胞,倒置荧光显微镜观察细胞转染是否成功,流式细胞仪检测转染细胞与未转染细胞的转染效率。将未转染的骨肉瘤MG-63细胞分为3组,实验1组用转染TK/GCV的细胞上清液与原培养液按1/10、1/7、1/5、1/2比例混和液培养;实验2组用0.22μm滤器过滤的转染后的细胞上清液与原培养液按1/10、1/7、1/5、1/2比例混和液培养;对照组用培养液培养,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法分别测定各组细胞的生长抑制率及骨肉瘤细胞对TK/GCV系统的敏感性。结果:经TK基因转染的MG-63细胞,倒置荧光显微镜下有大量绿色荧光蛋白表达,流式细胞仪检测转染TK基因的细胞转染效率可达75.5%。6 d后MTT检测结果显示实验1组中各比例浓度的混合培养液对细胞的抑制率与对照组相比有统计学意义(P<0.05);实验2组中1/10、1/7比例浓度的混合培养液对细胞的抑制率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。经TK基因转染的MG-63细胞随GCV浓度增加,细胞凋亡率增加。结论:脂质体介导的TK/GCV系统能够通过旁观者效应抑制骨肉瘤MG-63细胞的生长。

WTp53基因联合TK/GCV、CD/5-Fc系统治疗人结肠癌的实验研究

目的:观察WTp53基因联合TK/GCV、CD/5-Fc系统对人结肠癌的治疗效果,并探讨其作用机理。方法:采用培养细胞移植法,将人结肠癌细胞系SW480接种于裸鼠背部皮下,建立裸鼠人结肠癌移植瘤模型,将32只裸鼠随机分为4组:对照组、WTp53组、TK、CD组、WTp53与TK、CD组,每组8只,WTp53采用脂质体介导,TK、CD采用逆转录病毒介导。将WTp53、TK、CD注入移植瘤体内,瘤内注射TK、CD的裸鼠同时腹腔注射GCV、5-Fc治疗,观察各组小鼠的生存状况及肿瘤体积、瘤重、肿瘤生长抑制率、常规病理、生存期等指标,比较观察各治疗组的治疗效果及对荷瘤裸鼠存活的影响。结果:各治疗组裸鼠人结肠癌移植瘤的生长均受到显著抑制,裸鼠存活期显著延长,联合基因治疗组效果更好,WTp53、与TK、CD有交互协同作用。结论:WTp53、TK/GCV、CD/5-Fc对人结肠癌SW480细胞有明显抑制作用,WTp53基因联合TK/GCV、CD/5-Fc系统效果更强。

注射用更昔洛韦细菌内毒素检查法的实验研究

目的研究注射用更昔洛韦对细菌内毒素检查实验的干扰情况,并建立其细菌内毒素检查的质量标准。方法参照《中国药典》2000年版二部附录ⅪE细菌内毒素检查法进行试验,用二个不同厂家的鲎试剂对注射用更昔洛韦进行干扰试验研究。结果注射用更昔洛韦稀释成0.5 mg/m l时对细菌内毒素检查无干扰作用。结论可以用细菌内毒素检查法(凝胶法)代替家兔热原检查法控制其产品质量。

成人水痘46例临床分析

目的探索更昔洛韦治成人水痘的疗效,与阿昔洛韦比较。方法将46例成人水痘随机分成2组：治疗组22例,用更昔洛韦10mg/kg,每日1次静滴,连用7d;对照组24例,用阿昔洛韦10mg/kg,每日1次静滴,连用7d。2组年龄为18~34岁,平均25~39岁。结果治疗组与对照组按照随机分组治疗1周后皮疹消失,体温逐渐降至正常,血常规正常,症状消失。治疗组发热持续时间短于对照组（P〈0.01）,皮疹结痂时间早于对照组（P〈0.01）。结论更昔洛韦治疗成人水痘效果优于阿昔洛韦。

更昔洛韦眼用凝胶联合干扰素治疗单纯疱疹病毒性角膜炎的疗效分析与评价

目的探讨0.15%更昔洛韦眼用凝胶联合干扰素治疗单纯疱疹病毒性角膜炎的临床疗效。方法选取患者75例(80眼),随机分为两组,治疗组37例(40眼)采用干扰素球结膜下注射,联用更昔洛韦眼用凝胶治疗;对照组38例(40眼),联用阿昔洛韦滴眼液治疗,并对两组治疗效果进行分析。结果治疗组患者疗效明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论应用更昔洛韦眼用凝胶联合干扰素治疗单纯疱疹病毒性角膜炎具有治愈率高优点,值得临床推广应用。

更昔洛韦治疗婴幼儿轮状病毒肠炎疗效及安全性评价

目的探讨更昔洛韦治疗婴幼儿轮状病毒肠炎的疗效及安全性。方法选择轮状病毒肠炎患儿62例,随机分为2组。治疗组用更昔洛韦静滴,对照组不用任何抗病毒药物,其余治疗方法2组相同,治疗结束后用ELISA方法复查大便轮状病毒及血常规。结果治疗组和对照组总有效率分别为90%和53%,2组比较有显著性差异(2=10.8,P<0.01),2组7 d内大便轮状病毒转阴率分别为84%和57%,治疗组病毒转阴率明显高于对照组(2=5.43,P<0.05)。胃肠外并发症发生率治疗组为6%,对照组为30%,2组比较有显著性差异(2=9.68,P<0.01)。治疗组疗程结束后复查血常规、白细胞、血小板与治疗前比较无显著性差异(P均>0.05)。结论早期短程应用更昔洛韦治疗轮状病毒,可减轻症状,缩短大便排毒时间,疗效好,安全性高。

更昔洛韦在碳糊电极上的电化学性质及电分析方法研究

目的:研究更昔洛韦(GCV)在碳糊电极(CPE)上的电化学行为、电化学动力学性质、可能的电极反应机理和电化学定量分析方法。方法:运用循环伏安法(CV)、计时电流法(CA)、计时电量法(CC)和差分常规脉冲伏安法(DNPV)。结果:GCV在CPE上的伏安行为是一受扩散控制的不可逆电化学氧化过程,氧化峰电位(Ep)为1.191V,并且扫描速度在5～1000mV·s-1范围内Ip与v1/2呈良好的线性关系。测得GCV在CPE上的电极过程动力学参数:电子转移系数α为0.44;扩散系数D为8.86×10-4cm2·s-1;电极反应速率常数kf为2.10×10-2s-1。用DNPV法测得GCV氧化峰电流与其浓度在5.0×10-7～4.0×10-4mol·L-1范围内呈良好的线性关系(r=0.9986),检出限为4.2×10-8mol·L-1,RSD为3.0%～4.0%,加样回收率为98.0%～100.4%。结论:本方法仪器简单,操作便捷,分析成本低廉,用于GCV含量测定结果令人满意。

更昔洛韦联合门冬氨酸鸟氨酸治疗婴儿巨细胞病毒性肝炎疗效观察

目的探讨更昔洛韦联合门冬氨酸鸟氨酸对婴儿巨细胞病毒（CMV）性肝炎的疗效及副作用。方法我院于2009年12月至2010年12月住院60例婴儿CMV性肝炎患儿，给予更昔洛韦联合门冬氨酸鸟氨酸治疗，观察治疗前、后血清总胆红素（TBIL）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（AKP）及肝、脾回缩情况，并观察药物不良反应。结果更昔洛韦联合门冬氨酸鸟氨酸治疗后血清TBIL、ALT下降，肝、脾回缩，与治疗前比较差异均有统计学意义[治疗前、后血清TBIL浓度：（158．32±15．64）、（60．73±16．46）μmoL／L，t=5．74，P〈0．05；ALT：（132．854-32．14）、（75．81±27．63）U／L，t=2．92，P〈0．05；肝脏回缩：（4．16±0．53）、（2．35±0．41）cm，t=8．27，P〈0．05；脾脏回缩：（1．64±0．21）、（1．03±0．19）cm，t=5．03P〈0．05]。更昔洛韦治疗有肝功能损害以及皮疹的不良反应，门冬氨酸鸟氨酸有呕吐等轻微胃肠反应。结论更昔洛韦联合门冬氨酸鸟氨酸治疗CMV性肝炎疗效好，但应注意监测不良反．应的发生。

人巨细胞病毒UL97基因耐更昔洛韦突变检测的研究

目的了解造血干细胞移植受者人巨细胞病毒（HCMV）UL97基因耐更昔洛韦（GCV）突变情况。方法前瞻性收集2008至2010年在北京大学人民医院血液病研究所行骨髓干细胞移植术后血浆HCMVDNA阳性时间至少持续2周的患者43例，其中男29例，女14例，平均年龄21岁。利用实时荧光定量PCR检测HCMVDNA的负荷，收集49份血浆标本检测UL97耐GCV突变。应用改进的聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析方法（PCR—RFLP）检测UL97M460V／I、H520Q、A591V、A594V、L595S／F及C603W共8种常见耐GCV突变；使用PCR直接测序法（PCR—DS）检测UL97耐GCV突变；建立扩增阻滞突变系统实时PCR方法（ARMSRT—PCR）检测UL97A594V耐药突变。结果PCR—RFLP分析方法未检测出8种已知的UL97耐GCV突变。PCR—DS方法未检测到已知的uL97耐GCV突变，新发现UL97R494P、T502A、N558D及G561S突变。成功建立UL97A594VARMSRT—PCR检测方法，结合核酸提取试剂的使用，其检测下限至少达7．5×10^2拷贝数／ml，检测筛选的临床标本发现2例患者为阳性，UL97A594V耐药突变率为4．7％（2／43）。结论构建的ARMSRT—PCR方法具有较高的敏感性，可用于临床监测UL97A594V耐药突变。

更昔洛韦治疗儿童病毒性脑炎的疗效观察

目的:探讨更昔洛韦治疗儿童急性病毒性脑炎的疗效。方法:对40例病毒性脑炎患儿应用更昔洛韦治疗,每千克体重5～10mg加入10%葡萄糖液50～100ml中静滴,疗程10～14天。结果:痊愈32例,好转6例,有效率95%,未发现明显副作用。结论:更昔洛韦是一种高效的治疗急性病毒性脑炎的药物。