树舌灵芝深层发酵产物抑菌作用的研究

以分离自广西乐业天坑群的树舌灵芝的深层发酵产物(菌丝体、发酵液)为试材,采用滤纸片法、二倍稀释法,研究了树舌灵芝发酵产物提取物的抑菌作用,以期为开发防腐、食品保鲜产品提供参考依据。结果表明:树舌灵芝菌丝体提取物和发酵液提取物中均含有抗菌活性物质,发酵液乙酸乙酯提取物的抑菌能力最强,对10种供试菌均有较好的抑菌效果;发酵液乙酸乙酯提取物梯度洗脱、分离纯化后得到的30%乙酸乙酯组分(B5)的抑菌能力最高,对10种供试菌的抑菌圈直径基本上均最大;B5对藤黄微球菌的最低抑菌浓度(MIC)值为25 mg·mL^(-1),对大肠杆菌等5种菌的MIC值为50 mg·mL^(-1),对酿酒酵母的MIC值为200 mg·mL^(-1),对黑曲霉、米曲霉和绿色木霉的MIC值为400 mg·mL^(-1)。

一株野生树舌灵芝菌株鉴定及其液态发酵特性

为进一步丰富灵芝真菌资源,对从野外桃树上采集的灵芝子实体,采用形态学观察和ITS序列比对进行菌种鉴定,并对其摇瓶发酵液的菌丝体生物量和胞内外代谢物特性进行分析。结果表明:该灵芝菌株在分类上属于多孔菌科灵芝属,学名为树舌灵芝,序列上传GenBank,登录号为OK037622。液态发酵研究表明,其菌丝体生物量为15.16 g∕L,底物葡萄糖利用率为77.63%,胞内外多糖含量和质量浓度分别为16.04 mg∕g和1.23 g∕L,胞内代谢物主要有糖醇类(45.07%)、糖类(40.05%)、脂肪酸类(13.33%),胞外代谢物主要有氨基酸类(40.02%)、糖类(15.74%)、糖酸类(12.09%)、糖醇类(9.85%)、脂肪酸类(6.28%)、有机酸类(5.82%)、酯类(4.34%)、醇类(2.83%)、核苷类(2.79%)。该研究可为下一步开展灵芝研究提供菌种准备,并为后续的开发应用提供参考。

刺五加—树舌灵芝镇静催眠成分的筛选及酸奶的制备工艺

通过网络药理学筛选刺五加-树舌(5∶1)发挥镇静催眠作用的活性成分及潜在的作用机制;采用75%乙醇回流提取法提取刺五加-树舌中的活性成分,并根据“相似相溶”原理进行梯度萃取;采用紫外-可见分光光度法测定各萃取部位中黄酮类、多酚类和三萜类化合物含量;将具有镇静催眠作用的物质按比例添加于牛奶中,采用传统酸奶制作工艺制成酸奶。结果显示:正丁醇为提取刺五加-树舌中黄酮类、多酚类、三萜类化合物的最佳溶剂。此条件下,刺五加-树舌酸奶中的活性成分水平较好。

树舌灵芝总三萜提取工艺优化及其抗氧化作用研究

以树舌灵芝为原料,研究总三萜的提取工艺及其抗氧化性。选择料液比、乙醇浓度、超声温度和超声时间进行单因素实验,在单因素实验基础上,采用Box-Behnken试验设计,以树舌灵芝总三萜得率为响应值进行响应面分析,确定最优工艺参数为:料液比1∶20(g/m L),乙醇浓度70%,超声温度55℃,超声时间60 min。在此工艺条件下进行5次验证性实验,树舌灵芝总三萜的提取得率平均值为1.75%。并通过测定DPPH的清除率、羟基自由基的清除率以及总还原力,研究其抗氧化活性。

树舌多糖对胃黏膜损伤大鼠胃黏膜PGE_2含量及血流量和黏液分泌的影响

目的:研究树舌多糖对大鼠胃黏膜损伤的保护作用及其机制。方法:采用醋酸法和幽门结扎法复制大鼠胃溃疡模型,分别测定胃黏膜PGE2含量和胃黏膜血流量及胃黏液分泌。结果:与模型对照组比较,多次灌服树舌多糖250～1000mg·kg-1可明显增加大鼠胃黏膜PGE2含量和胃黏膜血流量,对大鼠胃内游离黏液和胃壁黏液的分泌也具有显著的增加作用,且有明显量效关系。结论:树舌多糖通过提高胃黏膜PGE2含量和胃黏膜血流量及胃黏液分泌来加强胃黏膜屏障,这是其保护胃粘膜损伤的作用机制之一。

树舌灵芝化学成分分析及其多糖、三萜组分的抗氧化活性

本研究测定了树舌灵芝子实体的粗多糖、粗蛋白、粗脂肪、矿物质元素以及三萜的含量,分析了其氨基酸、脂肪酸及矿物质元素组成,并通过测定DPPH·与HO·的清除率,研究三萜及多糖的抗氧化活性。研究结果表明,树舌灵芝子实体含有总糖43.8%,三萜1.75%,蛋白质11.4%,粗脂肪0.40%,灰分1.80%,维生素C 10.5%,维生素A 15.6%;还包含丰富的矿物质元素如Ca、Fe、Zn等,其含量分别为5740、29.7、15.6 mg/kg。树舌灵芝子实体还富含甲硫氨酸(19.3 g/kg)、天冬氨酸(5.5 g/kg)、缬氨酸(19.4 g/kg)、亮氨酸(4.2 g/kg)以及亚油酸(340.9 mg/kg)等,是一种营养丰富且气味独特的食药用菌,通过测定DPPH·的清除率与HO·的清除率得知,三萜与多糖均具有一定的抗氧化活性,且三萜的抗氧化能力比多糖强。

长白山药用真菌树舌凝集素的纯化及生化特性

用硫酸铵分级沉淀、离子交换和HPLC层析等方法,从长白山药用真菌树舌的菌丝体中分离纯化了一种凝集素(Ganoderma applanatum lectin,简称GAL),SDS-PAGE检测其为单一蛋白条带。经过SDS-PAGE测得其亚基分子量为15kDa左右,HPLC分析分子量为58kDa左右,表明GAL由4个亚基组成。氨基酸组成分析表明,GAL中甘氨酸含量较高,不含蛋氨酸和色氨酸,中性糖含量约11.2%。圆二色CD谱显示其含有3.6%的α螺旋、46.8%的β转角和49.6%无规则卷曲,不含有β折叠。GAL可以凝集供试的2种动物血和3种血型人血的血红细胞,但对不同来源的血红细胞凝集滴度不同。糖抑制实验表明,只有棉籽糖和D-松三糖部分抑制GAL的凝血活性。GAL具有较好的热稳定性且其凝血活性不受Ca2+、Mg2+和Zn2+等二价阳离子的影响。

树舌灵芝菌丝体发酵工艺条件试验

树舌灵芝是灵芝属真菌中的一种,是我国中医药宝库中的珍贵药用菌。为寻求高产的生长条件和经济的培养基,进行了转速、温度、pH值、装瓶体积、接种量、碳源、氮源、C/N等单因素试验和多因素试验设计,利用菌丝体液体培养探索这些条件对菌丝体产量的影响。结果表明,菌丝生长的最适转速为150r/min,最适温度为25～30℃,最适pH值为5.5～6.5,最适装瓶体积为125ml,最适接种量为5ml/100ml;最适碳源为葡萄糖,最适氮源为米糠,最适C/N为25:1。液体培养的最佳营养条件为:3%的葡萄糖,0.072%的KNO3,0.02%的NaH2PO4,pH为8.5。通过生长曲线实验得出logistic方程:Y=0.616/(1+17.732e-8.874x),菌丝体干重达到500～700mg/100ml。

树舌荧光多糖的制备及其在人大肠癌细胞SWWC1116中的定位

应用胺化还原法在树舌灵芝液体深层发酵浸膏水提多糖(GAP)的还原性末端连接荧光基团(FITC),制备荧光标记GAP(FITC-GAP),并测定其荧光取代率为0.90%.利用xCELLigence RTCA DP全自动实时细胞分析仪检测GAP荧光标记,其前后的细胞毒活性不变.流式细胞仪和荧光显微镜对GAP在人大肠癌细胞SWWC1116定位结果表明,GAP可与人大肠癌细胞SWWC1116的细胞膜结合,并可转运至细胞核内.

长白山树舌水溶性多糖的研究——F_T.F_A分离纯化与结构确定

长白山树舌经分离纯化获两个级份 F_T.F_A,经超离心、电泳、Sepharose 4B 柱层析检验。F_T 与 F_A 均为均一级份。采用 G.C.、高碘酸氧化、Smith 降解、部分酸水解、甲基化分析、IR、H—NMR、^(13)C-NMR 等方法,确定 F_T、F_A 均是由β(1→3)葡萄糖基组成其主链,在6—0上有分支,F_T 分支较多,F_A 分支较少。

树舌胞内多糖抗氧化活性的研究

目的:探讨树舌胞内多糖(GAPS)体外抗氧化作用。方法:从清除超氧阴离子自由基、抑制羟基自由基的产生、清除DPPH自由基和还原力4个方面,研究了树舌胞内多糖的体外抗氧化效果。结果:树舌胞内多糖有较强的还原力,并在体外对超氧阴离子自由基(O_2^-·)、羟基自由基(·OH)、DPPH有机自由基有较强的清除作用。树舌胞内多糖浓度为1.0mg/mL时,其清除O_2^-·能力为36.36%;对于·OH,在浓度为2.5mg/mL时,清除率达到56.97%;对于DPPH·,在浓度为1.0mg/mL时,清除率达到45.31%;当树舌胞内多糖浓度为0.5mg/mL时的还原能力与0.03mg/mLV_C相当。结论:树舌胞内多糖具有抗氧化方面的应用开发前景。

树舌灵芝免疫调节蛋白基因克隆,生物信息学分析及真核表达载体构建

树舌灵芝(Ganoderma applanatum)为灵芝属内独特的一类,克隆树舌灵芝免疫调节蛋白(fungal immunomodulatory protein,FIP)基因,对其进行生物信息学分析并构建真核表达载体,将为高效表达重组树舌灵芝FIP和揭示其生物学功能奠定基础。采用染色体步移的方法从树舌灵芝菌丝体基因组DNA中扩增得到1个新型真菌免疫调节蛋白基因—FIP-gap,对其核苷酸序列进行生物信息学分析,结果表明,FIP-gap基因属于灵芝属FIP家族,含有342 bp,编码113个氨基酸。对其氨基酸序列分析表明:树舌灵芝免疫调节蛋白FIP-gap分子量为12.7 k D,理论等电点为4.93,富含丝氨酸,缬氨酸和苏氨酸,不含组氨酸和半胱氨酸。另外将FIP-gap与其他灵芝属FIP进行蛋白质序列比对分析,其具有FIP典型的保守序列,并与灵芝(G.lucidum)、松杉灵芝(G.tsugae)、紫灵芝(G.japoncium)、紫芝(G.sinensis)、小孢子灵芝(G.microsporum)和黑灵芝(G.atrum)具有78%、78%、78%、79%、78%和77%的同源性,为一新型的FIP。构建灵芝属真菌免疫调节蛋白系统进化树,结果表明树舌灵芝FIP-gap与其他灵芝属FIP均不聚类,说明其与其他灵芝属FIP的亲缘性相对较远。同时,构建了毕赤酵母重组表达载体p PIC9-FIP-gap,为进一步研究FIP-gap的生物学功能提供基础,为全面了解真菌免疫调节蛋白提供理论依据。

灵芝三萜类成分与药理学研究进展

灵芝的化学成分有三萜类、多糖、生物碱、有机酸、核苷、氨基酸、酶类及微量元素等 ,其主要成分是三萜类化合物中的灵芝酸。由于灵芝化学成分的多样性 ,使灵芝具有较广泛的药理活性 ,主要包括抗肿瘤作用 ;调节免疫系统、心血管系统、神经系统、呼吸系统的作用 ;保肝、抗衰老、抗病毒、消炎抗菌、放射保护作用 ;清除氧自由基和抗氧化、致突变、活血化淤作用 ;对学习和增强记忆有良好的影响。

树舌灵芝发酵液中灵芝酸的提取及测定

利用有机溶剂萃取法提取树舌灵芝MP-01发酵液中灵芝酸,并用分光光度法测定提取液中灵芝酸的含量,确定了分光光度法测定的最佳比色条件为:比色波长为520 nm,5%香草醛-冰醋酸和高氯酸用量分别为0.2 mL和1.0 mL(在反应系统中浓度分别为1.0%和83%),显色温度70℃,显色时间为25 min,在此条件下测得醇溶物和醇沉物提取液中灵芝酸含量分别为0.022 mg/g和0.049 mg/g。

UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS整合网络药理学探讨树舌灵芝有效成分及其防治新型冠状病毒肺炎的可行性

目的基于UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS技术阐明树舌灵芝主要成分,结合网络药理学探讨其防治新型冠状病毒肺炎的作用机制。方法采用UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS技术鉴定树舌灵芝的主要成分;采用Swiss Target Prediction数据平台对鉴定成分进行靶点预测,对核心靶基因进行GO和KEGG富集分析,运用Cytoscape 3.8.0绘制关联网络图,同时通过分子对接评价树舌灵芝核心成分与血管紧张素转化酶Ⅱ(ACE2)及3种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)蛋白的结合作用。结果该研究从树舌灵芝中鉴定化合物62个;30个活性化合物主要作用在IL-6、PTGS2和MAPK1等32个核心靶点,通过PI3K/Akt、TNF及肺结核等多条与肺损伤保护相关通路,发挥防治COVID-19的作用;分子对接显示小白菊内酯、1,4-二羟基-2-萘甲酸和瑞香素等核心成分与ACE2及3种SARS-CoV-2蛋白的亲和作用较好。结论该研究初步阐明树舌灵芝的化学成分及潜在作用机制,为筛选树舌灵芝防治COVID-19的药效成分及深入阐明作用机制提供了科学的理论依据。

树舌灵芝深层发酵培养基的优化研究

通过单因素试验,确定以米糠和蔗糖为复合碳源,黄豆粉为氮源,以筛选的碳源、氮源与无机盐KH2PO4和MgSO4.7H2O为考察因素,以菌丝干重和总三萜产量为主要指标,利用正交设计法优化树舌灵芝菌丝体培养基配方比例,确定树舌灵芝液体发酵培养基最佳配方为:米糠40.0g/L,蔗糖10.0g/L,黄豆粉40.0g/L,磷酸氢二钾2.0g/L,硫酸镁0.5g/L,自然pH。于25℃、120r/min振荡培养7d,该菌菌丝体干重高达21.41g/L,总三萜产量为69.94g/L。

树舌多糖的分离纯化、理化性质及抗炎镇痛活性研究

目的:分离纯化树舌多糖,获得均一多糖,并对其理化性质进行研究。对树舌多糖抗炎镇痛活性进行研究。方法:分离纯化采用DEAE离子交换色谱法和葡聚糖凝胶色谱法;纯度鉴定及分子量测定采用高效液相色谱法,示差折光检测器;单糖组成采用气相色谱质谱联用法测定。抗炎实验采用小鼠二甲苯性耳廓水肿法及大鼠角叉菜胶足肿胀法,镇痛实验采用小鼠醋酸扭体法。结果:获得三种均一多糖(GapsⅠ、GapsⅡ、GapsⅢ),峰位分子量分别为6 221、5 535、3 518D。红外光谱证实GapsⅢ结构中有β构型异头碳,核磁共振氢谱和碳谱均证实GapsⅢ结构中有α、β构型异头碳。树舌多糖明显减轻二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀和角叉菜致大鼠足肿胀,并减少小鼠扭体次数。结论:三种多糖分子量分布及单糖组成均不同,均主要由葡萄糖组成。

树舌灵芝发酵产漆酶培养基优化

在单因素试验的基础上,采用Plackett-Burman设计对影响树舌灵芝产漆酶活性的因素进行了评价,筛选出具有显著影响的因素并优化了树舌灵芝产漆酶培养基的主要成分。结果表明,产酶培养基中小麦麸皮、豆粕、硫酸铜和香兰素的添加量对树舌灵芝产漆酶活性具有显著影响;预测得到最佳培养基组成为:小麦麸皮(20 g/L)、豆粕(2 g/L),硫酸铜(0.625 g/L)和香兰素(0.037 5 g/L);优化培养基后漆酶活性达到45.85 IU/m L,约为优化前的56倍,为大规模发酵生产漆酶提供技术支持。

树舌胞内粗多糖的提取及其抗炎活性研究

采用正交试验设计,对微波辅助法提取树舌胞内多糖的工艺进行了优化;采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型、角叉菜胶致小鼠足肿胀模型对多糖抗炎活性进行了研究。根据极差分析确定了微波辅助法的最优工艺为微波处理10 min、液料比40∶1、提取2次。按此工艺多糖提取率为24.92%,多糖得率和含量分别为188.3 mg/g和78.47%。抗炎活性试验结果表明:树舌胞内多糖高、中、低剂量组对二甲苯致小鼠耳肿胀有明显的抑制作用,抑制率分别为52.16%、37.80%、27.97%,与空白对照组均有极显著性差异(P<0.01);树舌胞内多糖高、中、低剂量可显著抑制角叉菜胶致小鼠足肿胀,具有良好的抗炎作用。