银杏叶提取物预处理对大鼠术后认知功能的影响

目的探讨银杏叶提取物预处理对大鼠术后认知功能的影响及可能机制。方法雄性无特定病原体（SPF）级SD大鼠54只,体重600~700g,月龄12月左右,按随机数字表法分为三组：空白对照组（C组）、手术组（O组）和Egb干预＋手术组（E组）,每组18只。E组于手术前连续5d腹腔注射Egb 100mg/kg,C组和O组分别腹腔注射等量生理盐水。行肝叶部分切除术建立大鼠术后认知功能障碍（POCD）模型。采用Morris水迷宫测试观察各组大鼠认知功能变化。三组大鼠于术前5d行定位航行实验训练,记录大鼠逃避潜伏期。于术后第3、5、7天行空间探索实验测试,记录目标象限停留时间和穿台次数。应用透射电镜观察大鼠海马CA1区缝隙连接结构,Western blot法测定大鼠海马缝隙连接蛋白Cx36的表达水平。结果大鼠术前定位航行实验第1天到第5天各组逃避潜伏期均逐渐缩短,但三组差异无统计学意义。术后第3、5、7天E组和O组大鼠目标象限停留时间明显短于C组（P〈0.05）,穿台次数明显少于C组（P〈0.05）;E组大鼠目标象限停留时间明显长于O组（P〈0.05）,穿台次数明显多于O组（P〈0.05）。C组大鼠海马CA1区神经元之间的缝隙连接部分正常;O组大鼠术后3、5、7天海马CA1区神经元之间缝隙连接细胞膜结构不连续,通道间距不规则增宽,中间有空泡状结构。E组海马CA1区神经元之间细胞膜密度较高,至第7天基本恢复正常,与C组相似。术后第3、5、7天O组大鼠海马Cx36蛋白的表达水平明显低于C组（P〈0.05）,E组大鼠海马Cx36蛋白的表达水平明显高于O组（P〈0.05）。术后第3、5天E组大鼠海马Cx36蛋白的表达水平明显低于C组（P〈0.05）;术后第7天E组大鼠海马Cx36蛋白的表达水平低于C组,但差异无统计学意义。结论银杏叶提取物预处理可改善大鼠术后的认知功能,其机制可能与影响海马缝隙连接结构及Cx36蛋白的表达有关。

冬凌草甲素对人肝癌细胞HepG_2缝隙连接功能的影响

目的：观察冬凌草甲素对人肝癌细胞Hep G2缝隙连接功能（GJIC）的影响。方法：采用划痕标记染料示踪技术（Scrape-loading Dye Transfer Assay,SL/DT）,观察不同浓度的冬凌草甲素处理人肝癌细胞Hep G2之后细胞间隙连接通讯功能。结果：空白对照组细胞的荧光染料主要出现在划痕旁1-2列细胞中（±）,且划痕两边被染色的细胞较少;细胞经冬凌草甲素处理48h后,荧光染料不仅出现在划痕的附近细胞内,而且在划痕以外的3~4列细胞内也出现了荧光（＋＋＋＋）,划痕两边被染色的细胞明显增多,出现了明显的细胞间染料传输现象,呈浓度依赖性。结论：冬凌草甲素能增强Hep G2细胞间缝隙连接功能,可能是其抗肿瘤作用机制之一。

舒胃汤对FD肝郁脾虚证模型大鼠胃肠平滑肌Beclin-1、mTOR、Cx43蛋白与mRNA表达的影响

目的通过研究舒胃汤(柴胡、香附、白术,等)对功能性消化不良(FD)肝郁脾虚证模型大鼠胃窦和幽门区平滑肌中自噬调控基因Beclin-1、雷帕霉素靶蛋白mTOR、连接蛋白Cx43蛋白与mRNA表达的影响,从自噬与细胞间缝隙连接通道探讨舒胃汤对功能性消化不良的治疗作用及机制。方法取60只Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,莫沙必利组(1.37 mg/kg),舒胃汤低、中、高剂量组(7.67、15.34、30.68 g/kg)。除空白组外,各组大鼠按复合病因造模法造模21 d复制FD肝郁脾虚证大鼠模型。于造模结束后第1天开始给药,空白组与模型组大鼠给予等量蒸馏水,其余各组大鼠按剂量要求灌胃给药,每天1次,连续给药14 d。末次给药2 h后,颈静脉放血处死大鼠,摘取各组大鼠胃窦与幽门组织,Western blot法检测Beclin-1、mTOR、Cx43蛋白表达,RT-qPCR法检测Beclin-1、mTOR、Cx43 mRNA表达。结果 Western blot结果显示,舒胃汤低、中、高剂量组Beclin-1表达明显降低(P<0.01),舒胃汤高剂量组Cx43表达明显升高(P<0.05);RT-qPCR结果显示,舒胃汤中、高剂量组Beclin-1表达明显降低(P<0.01),mTOR表达明显升高(P<0.01),舒胃汤低、中、高剂量组Cx43表达明显升高(P<0.01)。结论舒胃汤可通过上调FD模型大鼠胃肠平滑肌细胞mTOR mRNA、Cx43蛋白及mRNA表达,下调Beclin-1蛋白及mRNA表达,抑制细胞自噬及增强细胞间缝隙连接治疗功能性消化不良。

类胡萝卜素的功能研究进展(综述)

β-胡萝卜素和类胡萝卡素广泛存在自然界中。作为维生素A的前体，可提高人体的免疫能力，也是一种抗氧化剂，可淬灭与清除机体内产生的自由基。重要的是β-胡萝卜素和类胡萝卜素能预防癌症和减缓癌症的发展，细胞缝间联结的理论支持了类胡萝卜素的具有这一效果的看法，但是根据人群调查也出现类胡萝卜素具有负结果的报道。本文就类胡萝卜素的营养功能的研究现状作一概要综述。

荧光示踪法在检测神经元细胞间缝隙连接功能中的应用

目的:建立细胞荧光示踪法定量检测神经元细胞间缝隙连接功能。方法:原代培养神经元细胞,免疫荧光法鉴定神经元细胞的纯度。2种不同分子量的荧光染料Calcein和Dil与神经元细胞共同孵育30 min制成供体神经元细胞,与受体神经元细胞共同孵育2.5 h后,在倒置荧光显微镜下观察供体神经元细胞周围的受体神经元细胞数目。结果:原代培养的神经元细胞纯度达90%,可用于检测神经元细胞缝隙连接功能的实验。所建立的方法可以清晰观察到供体神经元细胞周围受体神经元细胞,并可以计数。结论:本实验所建立的荧光示踪法能够定量检测神经元细胞间缝隙连接功能。

六味地黄丸增效小鼠黑色素瘤HSV-tk/GCV自杀基因疗法的免疫机制

目的明确六味地黄丸是否增强单纯疱疹病毒核苷激酶/更昔洛韦(HSV-tk/GCV)自杀基因疗法对小鼠黑色素瘤的免疫杀伤效果,并对其相关机制进行探索。方法采用Western Blot实验、免疫荧光实验检测六味地黄丸对缝隙连接蛋白43(Cx43)表达水平及膜定位的影响;通过荧光黄染料、钙黄绿素荧光传输实验检测六味地黄丸对小鼠黑色素瘤细胞B16(B16细胞)缝隙连接通讯(GJIC)功能的影响;PI/Hoechst染色实验检测CD8+T细胞对B16细胞的免疫杀伤效果;CD8+T细胞激活实验观察GJIC在六味地黄丸增强对小鼠黑色素瘤免疫杀伤中的作用。结果自杀基因疗法联合六味地黄丸治疗较单独应用自杀基因疗法能更显著地抑制肿瘤生长;Western Blot及免疫荧光实验显示六味地黄丸组Cx43表达明显上调,荧光传输实验显示六味地黄丸组B16细胞GJIC功能显著增强;PI/Hoechst染色实验显示,六味地黄丸组CD8+T细胞对B16细胞的免疫杀伤效果更加显著,阻断Cx43后,对B16细胞的免疫杀伤效果则被逆转,同时CD8+T细胞的激活也被减弱。结论六味地黄丸可通过上调B16细胞中Cx43的表达,改善GJIC功能,促进肿瘤抗原的交叉提呈,更强地激活CD8+T细胞以增强其对肿瘤细胞的免疫杀伤效果。

缝隙连接与脑功能研究进展

缝隙连接是一些细胞间连接通道的聚合物,它能够让细胞间交流一些物质,如离子、小分子,并实现交换。目前,在哺乳动物组织中已发现的缝隙连接蛋白家族大约有20个成员。其中有一半表达在神经系统中,如星型胶质细胞、少突胶质细胞可以表达某些特定的缝隙连接蛋白。已有大量的研究表明:缝隙连接对于胶质细胞间、星型胶质细胞和神经元之间,以及神经元之间的细胞间交流是非常重要的,并与维持正常脑功能密切相关。文中以胶质细胞间和神经元之间,以及胶质细胞和神经元之间的缝隙连接与脑功能的研究进展,作为主题进行论述。

缝隙连接蛋白Connexin43参与神经精神疾病发病机制的研究进展

缝隙连接(gap junction,GJ)是细胞间的一种连接形式,主要由缝隙连接蛋白(connexin,Cx)构成。细胞间的物质能量交换通过GJ完成。Cx43蛋白是星形胶质细胞中构成GJ的Cx家族主要成员之一。近些年的研究越来越清晰地阐述了Cx43蛋白的特性及其在神经、肿瘤、心血管等系统疾病发病过程中的重要作用。该文就GJ的结构与功能,Cx43蛋白的编码基因、结构解析、合成、细胞膜定位、调节和在人体中发挥的生理功能,及其在相关神经系统疾病发病进程中的作用等方面的研究成果展开综述。

鱼藤酮对星形胶质细胞缝隙连接耦联功能的影响

目的观察鱼藤酮对星形胶质细胞缝隙连接耦联功能的影响。方法建立星形胶质细胞与常用的神经细胞株PC12细胞共培养鱼藤酮染毒模型,应用划痕染料标记示踪技术观察染毒星形胶质细胞缝隙连接耦联功能的变化,采用RT-PCR法检测CX43 mRNA的表达,Western Blot技术观察CX43蛋白活性变化。结果随着染毒剂量的增加,鱼藤酮对星形胶质细胞缝隙连接耦联功能的抑制作用愈发明显;与正常对照组比较,0.5、1.0μmol/L鱼藤酮染毒组CX43 mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.01)。结论鱼藤酮可引起星形胶质细胞CX43表达水平降低,显著抑制细胞缝隙连接耦联功能,这可能是其诱导神经细胞损伤的原因之一。

电针预处理对急性脑梗死大鼠神经功能损伤及大脑皮层Cx43蛋白表达的影响

目的:通过观察电针顶中线和顶旁线对大脑中动脉梗死大鼠神经功能和大脑皮层缝隙连接蛋白(Cx)43蛋白水平及活性的影响,探讨电针预处理对急性脑梗死大鼠神经功能保护作用的可能机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针预处理组,每组20只。造模前14d,电针预处理组电针大鼠顶中线和顶旁线,持续30min,每日1次,治疗12次后造模。利用改良Zea-Longa线栓法复制大鼠脑梗死模型。于造模后24h,按照Zea-Longa评分标准评估各组大鼠神经功能,TTC法检测各组大鼠脑梗死体积,Western blot法检测各组大鼠右侧大脑皮层梗死灶组织中Cx43、p-Cx43和蛋白激酶C(PKC)蛋白的表达。结果:模型组神经功能缺损评分高于假手术组(P<0.05),电针预处理组神经功能缺损评分低于模型组(P<0.05)。模型组脑梗死体积大于假手术组(P<0.05),电针预处理组脑梗死体积小于模型组(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠脑组织中Cx43蛋白表达量升高(P<0.05),p-Cx43和PKC蛋白表达量降低(P<0.05);与模型组比较,电针预处理组大鼠脑组织中Cx43蛋白表达量降低(P<0.05),p-Cx43和PKC蛋白表达量升高(P<0.05)。结论:电针预处理可减轻急性脑梗死大鼠神经损伤,减小脑梗死体积,可能与PKC促进Cx43蛋白磷酸化有关。

缝隙连接蛋白Cx43抑制剂对癫痫大鼠认知功能的影响及其机制研究

目的探讨缝隙连接蛋白Cx43抑制剂甘珀酸(CBX)对癫痫大鼠认知功能的影响及其可能的机制。方法120只Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组、癫痫组、癫痫+溶剂组、癫痫+CBX组,每组30只。后3组大鼠海马内注射海人酸(KA)制备颞叶癫痫模型。癫痫+CBX组大鼠造模前30 min腹腔注射CBX(20 mg/kg),癫痫+溶剂组大鼠造模前30 min腹腔注射等量生理盐水。造模后6、12、24 h采用Western blotting检测大鼠海马CA3区磷酸化(p)-Cx43和微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达,造模后24 h采用免疫组化染色检测大鼠海马CA3区p-Cx43和LC3的定位及其阳性细胞的吸光度值,造模后30 d采用Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力的变化。结果Western blotting检测结果显示,与假手术组比较,癫痫组、癫痫+溶剂组大鼠造模后6 h、12 h、24 h海马CA3区p-Cx43、LC3蛋白的表达均增加;与癫痫组、癫痫+溶剂组比较,癫痫+CBX组大鼠各时间点海马CA3区p-Cx43、LC3蛋白的表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫组化染色检测结果显示,p-Cx43定位于海马星形胶质细胞的细胞膜和细胞质中,LC3定位于海马神经元胞质内。与假手术组比较,癫痫组、癫痫+溶剂组大鼠海马CA3区p-Cx43、LC3阳性细胞的吸光度值增加;与癫痫组、癫痫+溶剂组比较,癫痫+CBX组大鼠海马CA3区p-Cx43、LC3阳性细胞的吸光度值降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。Morris水迷宫实验结果显示,与假手术组比较,癫痫组、癫痫+溶剂组大鼠的逃避潜伏期明显延长;与癫痫组、癫痫+溶剂组比较,癫痫+CBX组大鼠的逃避潜伏期明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CBX通过抑制癫痫大鼠海马CA3区星形胶质细胞p-Cx43蛋白的表达,减弱神经元自噬,从而减轻其认知功能损害。