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Basic Investigations EXPRESSION OF GAP JUNCTION PROTEIN Cx43 IN CULTURED HUMAN NORMAL AND MALIGNANT LUNG CELLS
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作者 张志谦 林仲翔 +2 位作者 吕有勇 孟松娘 韩亚玲 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 1994年第2期95-101,共7页
Gap junctional intercellular communicationexchange of small molecules and ions between contiguous cells through membranous gap junctional channelsis essential for growth control and tissue homecotasis. This work conce... Gap junctional intercellular communicationexchange of small molecules and ions between contiguous cells through membranous gap junctional channelsis essential for growth control and tissue homecotasis. This work concerns the functional expression of gap junction protein connexin 43 (Cx43) in normal human lung cells and the changes in lung carcinoma cells. By. using Northern blot hybridization analysis and Cx43 immunocytochemical methods, it was otherved that cultured normal human embryonic lung cells expressed a high level of Cx43 in both mRNA and protein levels.The Cx43 immunofluorescence was localized at cell membrane regions corresponding to the location of gap junctions. These normal lung cells were competent of intercellular communication function as detected by Lucifer yellow dye transfer. In contrast to normal celis, Cx43 mRNA and protein was not detectable in the carcinoma PG cell line. These tumor cells were defective of intercellular communication function. These results demonstrate that Cx43 is expressed in normal cultured human embryonic lung cells but not in lung tumor cells. The lack of intercellular communication in the lung tumor cell line correlates with dysfunctional intercellular communication. The suggestive role of Cx as a tumor suppersor gene is discussed. 展开更多
关键词 gap junction protein connexin 43. Intercellular communication Normal human lung cells Human lung carcinoma.
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胃癌组织中间隙连接超微结构改变及间隙连接蛋白-43的表达及其意义 被引量:4
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作者 李春辉 潘理会 +2 位作者 徐贝贝 刘海旺 程玉 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期697-701,共5页
目的观察胃癌组织中间隙连接结构的改变,并检测Cx43蛋白及m RNA在组织中的表达,为胃癌的发病机制研究提供新的思路,同时也为药物治疗提供潜在的作用靶点。方法通过透射电子显微镜技术观察正常胃与胃癌组织中间隙连接的变化;利用Western ... 目的观察胃癌组织中间隙连接结构的改变,并检测Cx43蛋白及m RNA在组织中的表达,为胃癌的发病机制研究提供新的思路,同时也为药物治疗提供潜在的作用靶点。方法通过透射电子显微镜技术观察正常胃与胃癌组织中间隙连接的变化;利用Western blot和RT-PCR技术检测Cx43在正常胃与胃癌组织中的表达水平。结果胃癌组织超微结构中细胞间隙连接破坏,分化越差破坏越严重,在正常胃组织中Cx43蛋白及m RNA的表达高于胃癌组织中的表达(P<0.05),在胃癌组织中高-中分化者Cx43蛋白及m RNA表达高于低分化者(P<0.05),胃癌组织中TNM分期Ⅰ/ⅡCx43蛋白及m RNA表达高于Ⅲ/Ⅳ期的表达(P<0.05),胃癌组织中浸润深度未侵及浆膜层者Cx43蛋白及m RNA的表达高于侵及浆膜层者(P<0.05),胃癌组织中无淋巴结转移者Cx43蛋白及m RNA的表达高于有淋巴结转移者(P<0.05),Cx43蛋白及m RNA在不同年龄和性别组中的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论间隙连接超微结构的改变同Cx43蛋白及m RNA的异常表达与胃癌的发生、发展有关,这为胃癌的发病及靶向治疗提供了新的方向。 展开更多
关键词 胃癌 间隙连接 间隙连接蛋白-43 超微结构 蛋白
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血管紧张素Ⅱ经AT_1受体和ERK1/2上调心肌细胞Cx43间隙连接 被引量:4
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作者 王业松 马虹 +3 位作者 胡苑 曾武涛 张惠忠 陈健文 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期58-62,共5页
目的:探讨血管紧张素Ⅱ对培养新生鼠心室肌细胞Cx43间隙连接的影响及其机制。方法:AngⅡ处理培养心肌细胞24h。缬沙坦、PD98059在AngⅡ刺激细胞前1h加到培养基中,对照组加等体积药物溶剂DMSO。用Westernblotting分析、代谢标记和免疫沉... 目的:探讨血管紧张素Ⅱ对培养新生鼠心室肌细胞Cx43间隙连接的影响及其机制。方法:AngⅡ处理培养心肌细胞24h。缬沙坦、PD98059在AngⅡ刺激细胞前1h加到培养基中,对照组加等体积药物溶剂DMSO。用Westernblotting分析、代谢标记和免疫沉淀测定、电镜观察心肌细胞Cx43表达、合成和间隙连接。结果:Westernblotting分析显示用10-9-10-6mol/LAngⅡ刺激细胞24h,Cx43的表达与对照组相比呈浓度依赖性增加;用AngⅡ0.1μmol/L刺激心肌细胞24h,磷酸化ERK1/2(P-ERK1/2)活性高于对照组(P<0.01),AT1受体拮抗剂缬沙坦(1μmol/L)能完全阻断AngⅡ增加P-ERK1/2活性;用AngⅡ0.1μmol/L刺激心肌细胞24h,Cx43表达及P-ERK1/2活性均高于对照组(P<0.01),ERK1/2激酶特异性抑制剂PD98059(1μmol/L)能阻断AngⅡ上调Cx43表达和增加P-ERK1/2活性。代谢标记和免疫沉淀测定显示AngⅡ处理组放射渗入Cx43的量明显高于对照组(P<0.01),缬沙坦(1μmol/L)能完全阻断AngⅡ增加放射渗入Cx43的量。电镜观察表明用AngⅡ0.1μmol/L刺激心肌细胞24h,AngⅡ处理组细胞间隙连接数目和大小大于对照组(P<0.05)。结论:AngⅡ通过AT1受体和ERK1/2促进培养心肌细胞合成Cx43,上调Cx43表达和增加间隙连接数目及大小。 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ 心肌细胞 连接蛋白43 缝隙接合部 有丝分裂素激活蛋白激酶类
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心脏连接蛋白43羧基末端相互作用蛋白的酵母双杂交筛选 被引量:5
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作者 梁庆 林吉进 李玉光 《心脏杂志》 CAS 2007年第3期280-285,共6页
目的研究心脏连接蛋白43(Cx43)羧基末端与哪些心肌细胞内蛋白质存在相互作用。方法①通过PCR方法得到编码心脏Cx43羧基末端(AA235-382)的cDNA片段,并在其两端分别加上EcoRI和BamHI酶切位点,应用EcoRI/BamHI酶切PCR产物及pGBKT7空载体,... 目的研究心脏连接蛋白43(Cx43)羧基末端与哪些心肌细胞内蛋白质存在相互作用。方法①通过PCR方法得到编码心脏Cx43羧基末端(AA235-382)的cDNA片段,并在其两端分别加上EcoRI和BamHI酶切位点,应用EcoRI/BamHI酶切PCR产物及pGBKT7空载体,凝胶分离后应用T4连接酶进行连接;②通过化学转化法将pG-BKT7-Cx43-CT转化酵母菌AH109;③通过“尿素/SDS”法从被转化的酵母菌中提取蛋白质;④应用抗C-myc抗体,通过Western blot方法检测”诱饵”蛋白的表达(即Gal4-BD-C-myc-Cx43-CT融合蛋白);⑤检测”诱饵”蛋白自我激活报告基因与否后,将已被“诱饵“质粒转化的AH109与人心脏cDNA文库进行杂交,筛选阳性克隆分离阳性克隆中的cDNA,并测序。结果①诱饵载体测序结果证明pGBKT7中的“Gal4 DNA binding domain-C-myc”与Cx43的羧基末端在同一读框中;②“诱饵”质粒转化AH109酵母菌成功率100%;③从被转化的AH109中能提取到浓度满意的总蛋白;④Western blot能检测到特异性条带,其位置与Gal4-BD-C-myc-Cx43-CT的分子量相当;⑤“诱饵”蛋白不能自激活报告基因Ade2和Mel1,但可自激活His3,5mmol/L的3-AT可有效抑制“诱饵”蛋白本身自激活报告基因His3,以利于下一步的杂交筛选,筛选得到10个准阳性克隆。结论心脏连接蛋白43羧基末端能与心肌细胞中的多种蛋白质存在相互作用,这些蛋白质可能参与对间隙连接通道的功能调控。 展开更多
关键词 缝隙连接通道 连接蛋白43 心律失常 蛋白质-蛋白质相互作用
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上调Cx43对心肌细胞间通讯及离子通道的影响 被引量:3
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作者 唐良虎 李德 +3 位作者 杨大春 王强 马双陶 张彦 《西部医学》 2016年第3期312-316,320,共6页
目的通过重组腺病毒介导缝隙连接蛋白Cx43在体外培养的心肌细胞中过度表达,观察心肌细胞间通讯及细胞离子通道变化。方法通过RT-PCR法克隆SD大鼠缝隙连接蛋白Cx43基因的全长cDNA,用基因重组的方法构建腺病毒pAdEasy-1-Cx43。行心肌细胞... 目的通过重组腺病毒介导缝隙连接蛋白Cx43在体外培养的心肌细胞中过度表达,观察心肌细胞间通讯及细胞离子通道变化。方法通过RT-PCR法克隆SD大鼠缝隙连接蛋白Cx43基因的全长cDNA,用基因重组的方法构建腺病毒pAdEasy-1-Cx43。行心肌细胞基因转染后,分别用RT-PCR和蛋白质免疫印迹技术检测Cx43在心肌细胞中的mRNA和蛋白表达,用免疫荧光技术分析Cx43在心肌细胞膜上的分布。采用划痕标记荧光染料示踪(SLDT)技术观察培养心肌细胞群之间的罗氏黄(lucifer yellow,LY)染色传输,检测上调Cx43对心肌细胞间通讯的影响;采用单细胞膜片钳技术分析各离子通道电流的变化,观察上调Cx43对心肌细胞膜离子通道表达的影响。结果腺病毒重组质粒pAdEasy-1-Cx43构建成功;转染心肌细胞后,pAdEasy-1-CX43转染组Cx43mRNA及蛋白表达上调,且心肌细胞膜上分布较多;细胞划痕荧光染料示踪提示转染后,心肌细胞间通讯增强;膜片钳全细胞膜电流提示转染后钙内流降低,钾离子电流未发现有明显改变。结论成功构建腺病毒重组质粒pAdEasy-1-Cx43载体,隙连接蛋白Cx43表达上调增强了心肌细胞间通讯以及钙内流,为Cx43改善心室肌电重构,减少或预防室性心律失常发生的进一步研究打下了基础。 展开更多
关键词 重组腺病毒转染 缝隙连接蛋白CX43 细胞划痕荧光染料示踪 细胞间通讯 膜片钳
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热疗上调细胞间隙连接通讯对胶质瘤侵袭性的影响及其机制 被引量:2
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作者 秦丽娟 张志勇 +5 位作者 王银环 朱丽艳 杨秀红 张田 孙娜 宋鸿艳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1692-1695,共4页
目的探讨热疗降低胶质瘤侵袭性的作用与细胞间隙连接通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)的关系。方法热疗处理C6胶质瘤细胞后,免疫组织化学法和Western blot法动态检测HSP70和Cx43的表达水平;划痕标记染料示踪技术... 目的探讨热疗降低胶质瘤侵袭性的作用与细胞间隙连接通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)的关系。方法热疗处理C6胶质瘤细胞后,免疫组织化学法和Western blot法动态检测HSP70和Cx43的表达水平;划痕标记染料示踪技术检测胶质瘤GJIC功能变化;结晶紫染色法检测胶质瘤侵袭性的改变。结果 C6细胞经热疗后,HSP70表达增加,于30 min时含量最多。C6细胞内Cx43的表达水平也在热疗后明显增加,并于热疗后的120 min达高峰,后逐渐减少。热疗后GJIC功能的恢复与C6细胞内Cx43的表达相一致,且GJIC功能越强,胶质瘤侵袭性越低。结论胶质瘤细胞经热疗后HSP70表达增加,增加的HSP70可能是通过其分子伴侣作用提高Cx43的表达水平,进而上调GJIC功能而引起胶质瘤侵袭性的下降。 展开更多
关键词 热疗 胶质瘤 肿瘤侵袭性 细胞间隙连接通讯 热休克蛋白70 连接蛋白CX43
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抗抑郁药对海马星形胶质细胞缝隙连接蛋白表达和通道功能的影响 被引量:3
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作者 梁沛彰 颜茹芳 +2 位作者 张永华 黄焕森 汪灵芝 《新医学》 CAS 2022年第3期188-192,共5页
目的探讨3种不同机制抗抑郁药对海马星形胶质细胞缝隙连接蛋白和通道功能的影响。方法CCK-8实验检测不同机制抗抑郁药对海马星形胶质细胞的细胞毒性,采用蛋白免疫印迹法和细胞接种荧光示踪法测定3种不同机制抗抑郁药对由缝隙连接蛋白43(... 目的探讨3种不同机制抗抑郁药对海马星形胶质细胞缝隙连接蛋白和通道功能的影响。方法CCK-8实验检测不同机制抗抑郁药对海马星形胶质细胞的细胞毒性,采用蛋白免疫印迹法和细胞接种荧光示踪法测定3种不同机制抗抑郁药对由缝隙连接蛋白43(Cx43)组成的通道功能和Cx43蛋白表达的影响。结果CCK-8实验显示,25.00μmol/L氟西汀、0.10μmol/L阿米替林和0.20 nmol/L文拉法辛对海马星形胶质细胞无细胞毒性(P均>0.05);25.00μmol/L氟西汀、0.10μmol/L阿米替林和0.20 nmol/L文拉法辛能抑制海马星形胶质细胞缝隙连接的荧光传递功能(P均<0.05),但3种抗抑郁药均不影响海马星形胶质细胞Cx43蛋白的表达(P均>0.05)。结论抗抑郁药能够显著降低海马星形胶质细胞Cx43组成的通道功能。 展开更多
关键词 细胞缝隙连接 星形胶质细胞 海马 抗抑郁药 缝隙连接蛋白43
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Carbenoxolone pretreatment and treatment of posttraumatic epilepsy 被引量:2
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作者 Weiguan Chen Zhiwei Gao +1 位作者 Yaohui Ni Zhenxiang Dai 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2013年第2期169-176,共8页
Gap junction blocking agents can inhibit spontaneous discharge frequency in cells. We established a rat model of posttraumatic epilepsy induced using ferric ions. Rats were intraperitoneally injected with carbenoxolon... Gap junction blocking agents can inhibit spontaneous discharge frequency in cells. We established a rat model of posttraumatic epilepsy induced using ferric ions. Rats were intraperitoneally injected with carbenoxolone, 20 mg/kg, prior to and 30 minutes after model establishment, once a day for 14 consecutive days. Immunohistochemistry showed glial cell proliferation around a cortical focus and significantly increased connexin expression in posttraumatic epilepsy. However, carbenoxolone pretreatment or treatment significantly reduced connexin expression in the cortex, inhibited glial fibdllary acidic protein expression and ameliorated seizure degree in rats. These findings indicate that large amounts of glial cell proliferation and abnormal gap junction generation play a role in posttraumatic epilepsy, and that carbenoxolone may prevent and treat this disease. 展开更多
关键词 neural regeneration brain injury posttraumatic epilepsy ferric ion gap junction CARBENOXOLONE glial fibrillary acidic protein connexin 43 SEIZURE brain injury grant-supported paper photographs-containing paper NEUROREGENERATION
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工频磁场辐照导致细胞连接蛋白Cx43的异常移位 被引量:6
9
作者 曾群力 胡根林 +3 位作者 姜槐 付一提 毛国根 鲁德强 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期260-262,F003,共4页
目的 研究 5 0Hz正弦磁场对细胞连接蛋白Cx4 3移位的影响 ,以探索极低频磁场 (ELFMF)抑制细胞间隙连接通讯 (GJIC)的机制。方法 用 5 0Hz、0 .8mT的正弦磁场和 (或 )十四酰基咐哌醇酯 (TPA ,5ng/ml)对培养的中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL... 目的 研究 5 0Hz正弦磁场对细胞连接蛋白Cx4 3移位的影响 ,以探索极低频磁场 (ELFMF)抑制细胞间隙连接通讯 (GJIC)的机制。方法 用 5 0Hz、0 .8mT的正弦磁场和 (或 )十四酰基咐哌醇酯 (TPA ,5ng/ml)对培养的中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL)处理 2 4h(其中TPA处理 1h)。采用间接免疫荧光细胞化学法和激光共聚焦显微镜进行连接蛋白Cx4 3定位的测定 ;采用Westernblot方法检测胞浆和核内Cx4 3蛋白的含量。结果 正常组细胞间连接处有明亮的点状标记 ,连接成线 ;TPA处理组、0 .8mT正弦磁场单独作用组及 0 .8mT正弦磁场联合TPA处理组细胞的连接处标记斑点均较正常组减少 ,大量Cx4 3蛋白标记斑点出现在胞浆内 ,且在核附近聚集。各组核内Cx4 3蛋白条带很淡 ,而胞浆内Cx4 3蛋白含量ELF组 (2 .0 3± 0 .89)和TPA组 (2 .4 3± 0 .82 )明显增加 ,与正常组 (1.0 4± 0 .17)相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论  5 0Hz正弦磁场直接和 (或 )协同TPA抑制体外培养细胞GJIC功能与细胞连接蛋白Cx4 展开更多
关键词 极低频磁场 连接蛋白CX43 激光共聚焦显微镜 细胞缝隙连接通讯 生物学效应 工频磁场 异常移位
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温胆汤对精神分裂症模型鼠海马PKC,p38 MAPK及P-Cx43的影响 被引量:11
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作者 魏妍妍 刘丹丹 +3 位作者 戎文娟 熊怀亮 朱金华 万红娇 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期103-106,共4页
目的:研究温胆汤对精神分裂症模型鼠大脑蛋白激酶C(PKC),p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及磷酸化连接蛋白Cx43(P-Cx43)蛋白表达的影响。方法:将72只清洁级SD大鼠随机平均分为6组:正常组(A,生理盐水20 m L·kg-1),模型组(B,生理盐... 目的:研究温胆汤对精神分裂症模型鼠大脑蛋白激酶C(PKC),p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及磷酸化连接蛋白Cx43(P-Cx43)蛋白表达的影响。方法:将72只清洁级SD大鼠随机平均分为6组:正常组(A,生理盐水20 m L·kg-1),模型组(B,生理盐水20 m L·kg-1),氯氮平组(C,20 mg·kg-1),温胆汤高剂量组(D,40 g·kg-1),温胆汤中剂量组(E,20g·kg-1),温胆汤低剂量组(F,10 g·kg-1)。A,B组ig生理盐水;C组ig氯氮平;D,E,F组分别ig温胆汤,1次/d,21 d后,B,C,D,E,F组一次性ip地卓西平马来酸盐(MK-801)0.6 mg·kg-1,建立精神分裂症模型,行为学观察3 d后,处死大鼠,取海马组织,采用蛋白免疫印迹(Western bloting)法检测海马组织中PKC,p38 MAPK及P-Cx43蛋白的含量。结果:与正常组相比,模型组大鼠出现刻板行为;海马组织PKC,p38 MAPK及P-Cx43含量明显升高(P<0.05)。与模型组比较,温胆汤各组及氯氮平组均不同程度改善了模型鼠的一般状况;明显降低海马组织PKC,p38 MAPK及P-Cx43的含量(P<0.05)。Cx43的磷酸化程度也有统计学意义(P<0.05),且模型组磷酸化水平最高。结论:温胆汤可明显降低PKC,p38 MAPK及P-Cx43蛋白的浓度,进而调节缝隙连接通讯(GJIC)的功能。 展开更多
关键词 温胆汤 蛋白激酶C P38丝裂原活化蛋白激酶 磷酸化连接蛋白43 缝隙连接通讯
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缝隙连接蛋白43在脑缺血再灌注中的作用及其机制 被引量:2
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作者 李孔平 郑剑华 +2 位作者 陈晓辉 方敏华 徐恩 《国际脑血管病杂志》 2018年第9期708-716,共9页
在中枢神经系统中,神经元与胶质细胞之间存在缝隙连接.其中,缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)是中枢神经系统中含量最丰富的缝隙连接蛋白之一,参与细胞间物质交换的代谢偶联以及电信号传递的电偶联,对细胞新陈代谢、内环境稳态、细胞... 在中枢神经系统中,神经元与胶质细胞之间存在缝隙连接.其中,缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)是中枢神经系统中含量最丰富的缝隙连接蛋白之一,参与细胞间物质交换的代谢偶联以及电信号传递的电偶联,对细胞新陈代谢、内环境稳态、细胞分化等生理过程具有重要调控作用.脑缺血后,缝隙连接失偶联及半通道活性异常引起细胞内外环境的稳态失衡,最终导致脑组织损伤.因此,维持Cx43的正常功能对于保护脑组织免受脑缺血再灌注诱导的神经元损伤至关重要. 展开更多
关键词 脑缺血 再灌注损伤 缝隙连接 缝隙连接蛋白43 src家族激酶类 闭锁小带蛋白1 兴奋性氨基酸转运体2 离子通道 细胞死亡 神经保护
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针刺“长强”穴对自闭症模型大鼠学习记忆能力和前额叶皮层缝隙连接相关蛋白表达的影响 被引量:16
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作者 洪钰竺 张学君 +2 位作者 洪霖 黄倩茹 吴强 《针刺研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期173-179,共7页
目的:观察针刺"长强"穴对自闭症模型大鼠学习和记忆能力及对前额叶皮层缝隙连接相关蛋白(CX)表达的影响,探讨针刺"长强"穴改善自闭症大鼠学习记忆能力的可能机制。方法:Wistar孕鼠予以腹腔注射丙戊酸钠后所产子代,... 目的:观察针刺"长强"穴对自闭症模型大鼠学习和记忆能力及对前额叶皮层缝隙连接相关蛋白(CX)表达的影响,探讨针刺"长强"穴改善自闭症大鼠学习记忆能力的可能机制。方法:Wistar孕鼠予以腹腔注射丙戊酸钠后所产子代,经睁眼试验、游泳试验筛选后,确定为自闭症大鼠模型,随机挑选30只,分为长强组、非穴组、模型组,每组10只,正常Wistar大鼠子代随机挑选10只作为空白组。长强组针刺"长强",每次1min,10d为1个疗程,干预3个疗程;非穴组取胁下非经非穴点针刺。采用Morris水迷宫观察大鼠学习记忆能力,免疫组化法检测大鼠前额叶皮层CX 43、CX 32、CX 36蛋白的表达。结果:自闭症模型组幼鼠睁眼时间在出生后14d(PN 14)、PN 15、PN 16较空白组晚(P<0.05),游泳能力在PN 13和PN 15时较空白组低下(P<0.05)。治疗前长强组、非穴组、模型组逃避潜伏期及平均速度与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后长强组较模型组及非穴组明显改善(P<0.05)。与空白组比较,模型组CX 43、CX32、CX 36蛋白的表达显著降低(P<0.05);治疗后,长强组CX 43、CX 32、CX 36蛋白的表达显著高于模型组和非穴组(P<0.05)。结论:针刺"长强"穴能通过提高前额叶皮层CX 43、CX 32、CX 36蛋白的表达来改善自闭症模型大鼠学习和记忆能力。 展开更多
关键词 自闭症 针刺干预 长强穴 缝隙连接蛋白 CX 43 32 36 学习记忆能力
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