目的:探讨LKB1在胃癌发生中的作用及相关分子机制研究,为胃癌化疗药物的研发提供一定的理论基础.方法:利用L K B1过表达质粒以及L K B1s i R N A转染人胃癌细胞株S G C7901,实时荧光定量PCR及Western blot检测质粒以及s i R N A转染效果...目的:探讨LKB1在胃癌发生中的作用及相关分子机制研究,为胃癌化疗药物的研发提供一定的理论基础.方法:利用L K B1过表达质粒以及L K B1s i R N A转染人胃癌细胞株S G C7901,实时荧光定量PCR及Western blot检测质粒以及s i R N A转染效果,流式细胞术检测L K B1过表达以及干扰后的SGC7901细胞(血清饥饿处理2 h)凋亡数量.活性氧检测试剂盒检测L K B1对S G C7901细胞内R O S产生的影响M T T法检测N A C抑制细胞内R O S产生后LKB1过表达以及干扰后SGC7901细胞数量的改变.Western blot检测LKB1过表达以及干扰后SGC7901细胞中凋亡相关蛋白的表达水平.结果:LKB1过表达质粒转染后的人胃癌细胞株SGC7901细胞凋亡增加,胞内ROS产生增加,LKB1过表达后的SGC7901细胞凋亡则明显增多(3.54%vs 1.29%),转染LKB1 si RNA的人胃癌细胞株SGC7901早期凋亡和晚期凋亡的细胞数量占总数较转染scramble si RNA组明显减少(0.54%vs 1.39%)同时Western blot检测发现LKB1过表达后的SGC7901细胞中剪切型Caspase3表达明显升高上升3.12倍,较对照组差异有统计学意义而si RNA干扰后剪切型Caspase3表达则表现为相反的趋势.结论:LKB1通过促进ROS的产生,上调剪切型Caspase3介导的凋亡通路促进胃癌细胞凋亡,因此LKB1在胃癌发生发展过程中具有重要抑制作用,其可能作为胃癌化疗药物研发的重要目标分子.展开更多
文摘目的:探讨LKB1在胃癌发生中的作用及相关分子机制研究,为胃癌化疗药物的研发提供一定的理论基础.方法:利用L K B1过表达质粒以及L K B1s i R N A转染人胃癌细胞株S G C7901,实时荧光定量PCR及Western blot检测质粒以及s i R N A转染效果,流式细胞术检测L K B1过表达以及干扰后的SGC7901细胞(血清饥饿处理2 h)凋亡数量.活性氧检测试剂盒检测L K B1对S G C7901细胞内R O S产生的影响M T T法检测N A C抑制细胞内R O S产生后LKB1过表达以及干扰后SGC7901细胞数量的改变.Western blot检测LKB1过表达以及干扰后SGC7901细胞中凋亡相关蛋白的表达水平.结果:LKB1过表达质粒转染后的人胃癌细胞株SGC7901细胞凋亡增加,胞内ROS产生增加,LKB1过表达后的SGC7901细胞凋亡则明显增多(3.54%vs 1.29%),转染LKB1 si RNA的人胃癌细胞株SGC7901早期凋亡和晚期凋亡的细胞数量占总数较转染scramble si RNA组明显减少(0.54%vs 1.39%)同时Western blot检测发现LKB1过表达后的SGC7901细胞中剪切型Caspase3表达明显升高上升3.12倍,较对照组差异有统计学意义而si RNA干扰后剪切型Caspase3表达则表现为相反的趋势.结论:LKB1通过促进ROS的产生,上调剪切型Caspase3介导的凋亡通路促进胃癌细胞凋亡,因此LKB1在胃癌发生发展过程中具有重要抑制作用,其可能作为胃癌化疗药物研发的重要目标分子.
