Sorcin高表达与胃癌细胞株SGC7901多药耐药的关系

背景与目的:长春新碱耐药胃癌细胞SGC7901/VCR是具有P-糖蛋白(P-gp)高表达的典型多药耐药细胞,但P-gp抑制剂维拉帕米(VRP)不能完全逆转其耐药,说明还存在其它耐药机制。我们运用差异蛋白质组学技术研究发现,可溶性耐药相关钙结合蛋白(Sorcin)在SGC7901/VCR中表达较SGC7901细胞明显上调。为进一步阐明Sorcin与胃癌细胞耐药的关系,本研究构建了FLAG-Sorcin融合表达载体,探讨Sorcin在胃癌多药耐药中的作用。方法:采用逆转录聚合酶链反应法(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增Sorcin cDNA片段编码区序列全长,DNA重组技术构建FLAG-Sorcin融合表达载体,经脂质体介导稳定转染SGC7901细胞,RT-PCR及Western blot分别检测转染细胞Sorcin mRNA表达的变化;噻唑蓝(MTT)法测定转染细胞及对照细胞对化疗药物的敏感性。用Sorcin反义核苷酸转染SGC7901-F-SOR细胞,RT-PCR检测Sorcin表达水平的变化,MTT法测定转染后细胞对VCR敏感性的变化。结果:RT-PCR法扩增出616bp全长Sorcin cDNA片段,成功构建了FLAG-Sorcin融合表达载体;RT-PCR及Western blot证实,Sorcin在SGC7901转染细胞中高表达;Sorcin高表达的SGC7901细胞对长春新碱(VCR)、阿霉素(ADM)、紫杉醇(Taxol)、氟尿嘧啶(5-FU)分别产生了8.87倍、6.13倍、6.67倍和2.80倍耐药。Sorcin反义核苷酸转染SGC7901-F-SOR细胞后,RT-PCR验证Sorcin表达被抑制,MTT结果显示细胞对VCR敏感性增加。结论:Sorcin高表达可致SGC7901细胞产生低倍数的多药耐药,说明Sorcin与SGC7901细胞多药耐药密切相关,有望成为逆转胃癌多药耐药的靶点。