MASPIN真核表达载体的构建及对胃癌细胞SGC7901的诱导凋亡作用

背景与目的:MASPIN基因与多种恶性肿瘤的发生密切相关,在细胞的生长、浸润、转移和凋亡中起着十分重要的作用。本研究通过构建MASPIN基因真核表达载体,分析MASPIN过表达对胃腺癌细胞株SGC7901凋亡的影响。方法:构建MASPIN/PCR2.1表达载体,转染胃癌细胞株SGC7901。RT-PCR和Western bolt检测MASPIN基因、Bax/Bcl-2基因表达变化;琼脂糖凝胶电泳检测凋亡特征性DNA梯形带;采用AnnexinV-FIFC/PI检测凋亡率。结果:酶切证实成功构建真核表达质粒MASPIN/PCR2.1;转染重组质粒组MASPIN mRNA(33.6±1.2)和蛋白水平(23.4±1.6)的表达明显高于未处理组(13.7±2.0、12.0±1.3)和空质粒组(15.0±1.5、12.3±1.5,P<0.05);凝胶电泳观察到特征性DNA梯带;各组细胞均有凋亡率的增加且呈时间依赖性:转染重组质粒∕TRAIL作用组最高,12、24、48h分别达到8.0%、16.3%、25.8%,转染重组质粒组为3.0%、8.2%、14.4%,TRAIL作用组为4.1%、9.8%、15.9%(P<0.05);48h转染重组质粒∕TRAIL组BaxmRNA和蛋白表达(55.3±2.1、75.4±1.3)高于转染重组质粒组(34.3±1.2、40.7±1.8,P<0.05)和TRAIL作用组(43.2±1.8、36.2±1.3,P<0.05);48h转染重组质粒∕TRAIL组、转染重组质粒组、TRAIL作用组Bcl-2mRNA表达为28.3±2.5、34.3±1.2、32.8±2.1(P<0.05),蛋白表达为17.4±1.5、45.1±2.1、42.8±1.5(P<0.05)。结论:上调MASIPIN基因的表达能显著增加胃癌细胞对凋亡刺激的敏感性。其机制可能通过上调Bax,下调Bcl-2基因的表达诱导胃癌细胞凋亡。

hsa-miR-19a-3p下调靶基因SEMA4C抑制胃癌细胞增殖、侵袭能力

目的:探讨SEMA4C在胃癌中的表达以及hsa-miR-19a-3p下调SEMA4C对胃癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法:收集23例胃癌组织和对应癌旁组织标本,采用免疫组化染色、Real-time PCR方法检测SEMA4C的表达,并分析其与临床资料的相关性;检索Targetscan、Miranda等数据库预测调控SEMA4C基因的microRNA,并利用Real-time PCR、双荧光素酶报告系统检测加以证实;通过脂质体转染使人胃癌细胞系BGC823内过表达hsa-miR-19a-3p,Real-time PCR、Western blot检测SEMA4C的表达,通过细胞集落形成实验和Transwell小室研究BGC823细胞的增殖、侵袭能力的变化。结果:胃癌组织中SEMA4C阳性率87.0%,高于癌旁组织(χ2=20.30,P<0.000 1),胃癌组织中SEMA4 C mRNA的表达高于癌旁组织(t=13.47,P<0.000 1)。SEMA4C的表达与胃癌TNM分期(P=0.036 4)、分化程度(P=0.042 7)、淋巴结转移度(P=0.012 8)有关。生物信息学分析hsa-miR-19a-3p、hsa-miR-214-5p、hsa-miR-138-5p可能调控SEMA4C表达,胃癌组织中hsa-miR-19a-3p的表达低于癌旁组织(t=8.233,P<0.000 1),hsamiR-214-5p(t=0.846 3,P=0.097 6)、hsa-miR-138-5p(t=1.345,P=0.185 7)表达与癌旁组织无明显差异,hsa-miR-19a-3p转染后荧光素酶表达下降至0.46±0.12(F=5.685,P=0.003 2)。hsa-miR-19a-3p转染后,SEMA4C mRNA(F=34.39,P<0.000 1)、SEMA4C蛋白(F=67.49,P<0.000 1)表达减少,BGC823细胞克隆数目减少(F=20.77,P<0.000 1),Transwell下室细胞数较少(F=16.37,P=0.000 4)。结论:SEMA4C在胃癌中过表达并与肿瘤的发生发展有关,hsa-miR-19a-3p通过下调靶基因SEMA4C抑制胃癌细胞增殖、侵袭能力来发挥其抗肿瘤效应。

鼠源抗胃癌抗体轻链可变区基因克隆及其结构分析

目的 扩增与人胃癌细胞特异结合的鼠源性抗体轻链可变区基因 ,并对其基因序列进行分析 .方法 用 RT-PCR方法从分泌鼠源抗人胃癌抗体的杂交瘤细胞扩增出抗体轻链可变区基因 ,克隆到 p GEM- T载体 ,测序仪测定其基因序列并对其结构进行分析 .结果 所获得的基因由 35 4bp组成 ,编码 118个氨基酸 ,序列分析证实该基因可变区序列符合小鼠 Ig轻链可变区的氨基酸序列特征 .结论 获得的鼠源抗胃癌抗体轻链可变区基因为κ 家族 。

骨桥蛋白与MMP-9在胃癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的 :研究骨桥蛋白和基质金属蛋白酶 9(MMP 9)在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法 :应用免疫组织化学方法检测胃癌组织中骨桥蛋白和MMP 9的表达。结果 :60例胃癌组织中骨桥蛋白和基质金属蛋白酶 9表达的阳性率分别为 73 3% ( 4 4/ 60 )、66 7% ( 4 0 / 60 ) ,骨桥蛋白和基质金属蛋白酶 9的表达与肿瘤浸润深度、肿瘤直径、淋巴结转移程度及有无远处转移有关。骨桥蛋白和MMP 9的表达均与肿瘤的分化程度无关。结论 :骨桥蛋白和MMP 9在胃癌组织中表达均较正常胃组织增强 ,能够作为反映肿瘤的生物学特性 ,评估预后的重要参考指标。

骨桥蛋白及诱导型一氧化氮合成酶在胃癌中的表达

目的 研究骨桥蛋白在胃癌组织中的表达及其与诱导型一氧化氮合成酶表达的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测胃癌组织中骨桥蛋白和诱导型一氧化氮合成酶的表达 ,并进行随访。结果 66例胃癌组织中骨桥蛋白和诱导型一氧化氮合成酶表达的阳性率分别为 72 .7% ( 4 8/66)、75 .7% ( 5 0 /66) ,骨桥蛋白的表达与肿瘤浸润深度、肿瘤直径、淋巴结转移程度及有无远处转移有关 ,iNOS的表达与肿瘤浸润深度、肿瘤直径、淋巴结转移程度有关。结论 骨桥蛋白在胃癌组织中表达均增强 ,能够作为反映肿瘤的生物学特性 ,评估预后的重要参考指标。骨桥蛋白和iNOS表达有协同作用。

c-Fos,c-Jun与Bcl-2蛋白在胃癌组织中的表达及意义

目的:探讨c-Fos,c-Jun,Bcl-2在胃癌中的表达与胃癌的发生、发展及生物学行为的关系．方法:应用免疫组织化学SABC法,检测54例胃癌及癌旁组织中c-Fos,c-Jun,Bcl-2蛋白的表达,结果采用SPSS统计软件包及X2检验分析．结果:胃癌组织中c-Fos,c-Jun,Bcl-2的表达显著高于癌旁组织(68．5％vs 27．8％,X2=17．95, P<0．01;63．0％vs 24．1％,X2=16．61,P<0．01; 64．8％vs 25．9％,X2=16．48,P<0．01)．c-Fos, c-Jun的表达在胃癌不同组织学分级间有显著性差异(P=0．018;P=0．032),在淋巴结转移、TNM分期间无显著性差异;Bcl-2的表达在胃癌不同组织学分级、淋巴结转移、TNM分期间有显著性差异(P=0．035;P=0．032;P =0．009)．胃癌及癌旁组织中Bcl-2与c-Fos、c-Jun(r=0．336,0．688,P<0．05;r=0．318, 0．512,P<0．05)及c-Fos与c-Jun(r=0．719,0．586, P<0．001)之间的表达呈正相关．结论:c-Fos,c-Jun,Bcl-2的表达与胃癌的发生、发展以及组织学分级密切相关．

胃腺癌组织中Ets-1及微血管密度检测

目的:研究转录调节因子Ets-1(E26 transformation specific-1)及微血管密度(MVD)在胃腺癌组织中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测Ets-1和MVD在28例正常胃黏膜、40例不典型增生胃黏膜及70例胃腺癌组织中的表达。结果:胃腺癌组织中Ets-1阳性表达率(87.1%)明显高于癌旁病变组织(57.5%)和正常胃黏膜(32.1%)(P均<0.05);CD105标记的MVD均值(30.16±3.92)明显高于癌旁病变组织(12.98±1.62)和正常胃黏膜(11.29±1.08)(P均<0.05)。胃腺癌组织中Ets-1的表达和MVD均值与胃腺癌浸润深度、淋巴结转移及临床分期有关(P均<0.05),与年龄和性别无关(P均>0.05)。胃腺癌组织中MVD值随着Ets-1表达增强而增高(P<0.05)。结论:高表达的Ets-1参与胃腺癌浸润和淋巴道转移,并与胃腺癌组织中微血管生成有关,Ets-1可作为判断胃腺癌恶性行为的重要生物学标记物之一。

多层螺旋CT在胃神经鞘瘤诊断中的临床价值

目的:探讨胃神经鞘瘤的CT特征及多层螺旋CT在胃神经鞘瘤诊断中的临床价值。方法:回顾性分析2014年7月—2017年6月经手术病理证实的胃神经鞘瘤7例,所有患者均行多层螺旋CT检查。结果:肿瘤位于胃体部5例,胃窦部2例,肿瘤长径0.9～5.2cm,平均3.2cm。肿瘤均为单发,呈圆形与类圆形,2例腔内生长,5例腔内外混合生长。4例呈渐进性强化,1例动脉期强化较著。3例动脉期强化较著。3例瘤周见肿大淋巴结,术后病理显示为良性增生淋巴结。例瘤周见肿大淋巴结,术后病理显示为良性增生淋巴结。结论:胃神经鞘瘤在CT上多呈圆形或类圆形,好发于胃体,增强扫描肿瘤渐进性强化为其特点;另外,瘤周肿大淋巴结常为良性增生淋巴结,不是恶性胃神经鞘瘤的诊断依据。