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GC-MS结合网络药理学探讨贵州苗家米酒功能成分对调节高脂血症的作用机制
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作者 王佳佳 杨玉玲 +2 位作者 李术钗 和春菊 彭怡 《中国酿造》 CAS 北大核心 2024年第10期97-102,共6页
该研究首先采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)结合Swiss ADME从贵州苗家米酒中筛选得到主要的挥发性活性成分,通过Swiss TargetPrediction预测其作用靶点,并结合OMIM、Drugbank、Dis GeNET等数据库收集高脂血症疾病靶点,进一步获得活性成... 该研究首先采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)结合Swiss ADME从贵州苗家米酒中筛选得到主要的挥发性活性成分,通过Swiss TargetPrediction预测其作用靶点,并结合OMIM、Drugbank、Dis GeNET等数据库收集高脂血症疾病靶点,进一步获得活性成分作用靶点及高脂血症疾病靶点的交集靶点;然后利用STRING、Cytoscape构建蛋白互作(PPI)网络分析,并利用DAVID平台进行基因本体论(GO)和京都基因与基因百科全书(KEGG)通路富集分析;最后结合KEGG通路富集分析构建“苗家米酒-成分-靶点-通路-疾病”网络图,探索苗家米酒发挥调节高脂血症作用的药效物质基础及潜在作用机制。结果表明,贵州苗家米酒可能以3,4-二羟基苯基二醇、辛酸乙酯、正己酸乙酯、反-2-十二烯醛等为关键活性成分,作用于过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路、癌症通路、脂肪细胞因子信号通路等通路上的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARG)、白细胞介素-6(IL-6)和3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)等关键靶点发挥调节高脂血症的作用。 展开更多
关键词 苗家米酒 高脂血症 气相色谱-质谱 网络药理学 蛋白互作网络分析 信号通路
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美洲大蠊不同发育阶段蛋白质、重金属含量测定及脂溶性成分的GC-MS分析
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作者 原丝婧雯 杨自忠 +1 位作者 杨银河 杨大松 《广东化工》 CAS 2024年第11期157-160,共4页
为促进药材资源的综合开发利用,对美洲大蠊1龄、3龄、6龄以及成虫中蛋白质和4种重金属元素含量、脂溶性成分组成进行了测试。采用凯氏定氮法测定粗蛋白含量、ICP-MS测定重金属元素含量、GC-MS测定脂溶性成分及相对含量。美洲大蠊在不同... 为促进药材资源的综合开发利用,对美洲大蠊1龄、3龄、6龄以及成虫中蛋白质和4种重金属元素含量、脂溶性成分组成进行了测试。采用凯氏定氮法测定粗蛋白含量、ICP-MS测定重金属元素含量、GC-MS测定脂溶性成分及相对含量。美洲大蠊在不同生长发育阶段的粗蛋白含量为56.61%~67.38%;砷含量≤0.2714 mg/kg;汞含量≤0.1972 mg/kg;铅含量≤0.5482 mg/kg;镉含量≤0.1222 mg/kg;从脂溶性成分中鉴定30种化合物,其中5种为4个生长发育阶段共有成分。美洲大蠊成虫体内蛋白质达63%,是优质的饲料蛋白来源。根据《饲料卫生标准》相关规定,其虫体中汞含量超标,需要对美洲大蠊养殖过程所用的饲料配方进行优化;美洲大蠊体内以棕榈酸为代表的饱和脂肪酸是其表现脂毒性的重要因素,油脂中富含抗氧化酚类物质。 展开更多
关键词 美洲大蠊 gc-MS 含量 粗蛋白 重金属
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草鱼呼肠孤病毒GCRV VP56相互作用蛋白的鉴定 被引量:5
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作者 喻飞 王浩 +4 位作者 宗乾坤 张娅楠 刘海云 陈百朋 吕利群 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期371-378,共8页
为研究Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒外纤维蛋白VP56与宿主蛋白的相互作用,实验采用酵母双杂交Gal4系统鉴定与VP56相互作用的草鱼蛋白。首先利用RT-PCR技术从Ⅱ型GCRV感染的草鱼肾细胞中扩增目的基因VP56,构建p GBKT7-VP56诱饵表达载体;在酵母菌... 为研究Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒外纤维蛋白VP56与宿主蛋白的相互作用,实验采用酵母双杂交Gal4系统鉴定与VP56相互作用的草鱼蛋白。首先利用RT-PCR技术从Ⅱ型GCRV感染的草鱼肾细胞中扩增目的基因VP56,构建p GBKT7-VP56诱饵表达载体;在酵母菌株中检测其自激活性后,以VP56为诱饵在草鱼酵母双杂交文库中筛选阳性菌株,并对阳性克隆的序列进行分析。实验也克隆了草鱼JAM-A(Gc JAM-A)基因,并构建p GADT7-Gc JAM-A载体,在酵母中研究草鱼Gc JAM-A与病毒蛋白VP56相互作用的可能性。研究表明构建的诱饵质粒p GBKT7-VP56无自激活作用,可以应用于酵母双杂交筛选;从草鱼肾细胞文库中筛选得到9株阳性克隆,基因测序及序列分析确定其中包含草鱼7个细胞内蛋白和1个细胞外基质蛋白;VP56蛋白与Gc JAM-A蛋白在酵母中不能发生相互作用。本研究初步确定了与Ⅱ型GCRV蛋白VP56存在潜在相互作用的宿主蛋白,为深入探讨VP56蛋白在Ⅱ型GCRV感染宿主过程中的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 草鱼 呼肠孤病毒 VP56蛋白 酵母双杂交 gc jam-a蛋白
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Construction of Vectors to Express Foreign Protein within Potato Starch Grains 被引量:11
4
作者 李珺 马力通 姚新灵 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2009年第4期72-74,共3页
[Objective] The aim is to study the construction of vectors expressing foreign protein in potato starch grains specifically, and provide some reference for solving industrialized core problem of high cost and low expr... [Objective] The aim is to study the construction of vectors expressing foreign protein in potato starch grains specifically, and provide some reference for solving industrialized core problem of high cost and low expression level of foreign protein. [Method] By using molecular biological techniques of RT-PCR and nested PCR, plant expression vector for the foreign protein locating in the potato starch grains was constructed. [ Result] Coding sequence ( GC20 ) of potato starch grains that was located and expressed by GBSSI promoter was cloned. Plant expression vector was screened out through connection, transformation and enzyme digestion identification. [ Conclusion] This result laid a foundation for further screening the foreign protein on the potato starch grains. 展开更多
关键词 Foreign protein Plant bioreactor GBSSI gc20 Starch grains
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牛传染性鼻气管炎病毒gC蛋白单克隆抗体的制备与初步应用 被引量:14
5
作者 马辉 边传周 +3 位作者 王永芬 王鲜萍 郑宝亮 赵绪永 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1637-1644,共8页
为制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gC蛋白的特异性单克隆抗体,并分析其免疫学特性,以原核表达并纯化的重组gC蛋白为免疫原注射免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合。建立间接ELISA方法筛选分泌gC蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,获得... 为制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gC蛋白的特异性单克隆抗体,并分析其免疫学特性,以原核表达并纯化的重组gC蛋白为免疫原注射免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合。建立间接ELISA方法筛选分泌gC蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,获得1株能稳定分泌gC蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3D6。3D6的亚类为IgG1型,轻链为κ链;上清、腹水抗体效价分别为6.4×103、1.28×105;Western blot和间接免疫荧光试验表明该单克隆抗体能识别牛gC蛋白。利用3D6细胞株分泌的单克隆抗体建立了检测IBRV的双抗体夹心ELISA方法,结果证明,该方法特异性和敏感性良好,为快速诊断IBRV和研究gC蛋白功能奠定了基础。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gc蛋白 单克隆抗体 ELISA
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人类蛋白编码基因局部GC水平相关性分析 被引量:5
6
作者 陈祥贵 胡军 杨潇 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1169-1174,共6页
GC含量是基因组DNA序列碱基组成的重要特征,蕴涵基因结构、功能和进化信息。文中通过从公共数据库提取7992个非冗余的人类蛋白质编码基因DNA序列,分析了基因序列不同区域的局部GC含量和相关性。结果表明:基因局部GC含量呈现不均一性,5... GC含量是基因组DNA序列碱基组成的重要特征,蕴涵基因结构、功能和进化信息。文中通过从公共数据库提取7992个非冗余的人类蛋白质编码基因DNA序列,分析了基因序列不同区域的局部GC含量和相关性。结果表明:基因局部GC含量呈现不均一性,5′非翻译区GC水平最高,为62.56%;而3′非翻译区GC水平最低,为43.97%。3′侧翼序列的GC含量能较好地代表基因所在区域DNA长片段的GC水平。虽然开放阅读框的GC含量比内含子、3′非翻译区和3′侧翼序列的GC含量高,但4个区域的GC含量之间均存在较高的相关性。密码子第三位置的平均GC含量(GC3)为58.09%,显著高于密码子第一位置和第二位置的GC含量,且与开放阅读框的GC水平高度相关,相关系数高达0.91。GC3与内含子、3′非翻译区、3′侧翼序列的GC水平相关性也较高,GC3对3′侧翼序列的GC含量的直线回归斜率为1.25。因此,GC3可作为基因所在区域GC水平变化的敏感性指标。而密码子第一位置和第二位置以及5′侧翼序列和5′非翻译区GC水平与基因其他区域的GC水平的相关性较弱。该研究结果提示:基因蛋白编码区密码子第三位置、内含子、3′非翻译区和3′侧翼序列的碱基可能经历了相近的进化过程,而蛋白编码区密码子第一位置和第二位置、5′侧翼序列和5′非翻译区由于功能的需要而经历了不同的突变和选择。 展开更多
关键词 局部gc含量 相关 人类蛋白编码基因
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基于电子鼻和GC-MS分析3种市售大豆组织蛋白中挥发性豆腥味物质 被引量:10
7
作者 徐文 余小贞 +3 位作者 张雪儿 杜沁岭 何贵萍 贾冬英 《中国调味品》 CAS 北大核心 2022年第8期145-149,共5页
以3种不同原料和挤压温度生产的大豆组织蛋白(TSP)(1号:大豆分离蛋白、谷朊粉、食用小麦淀粉、低温脱脂豆粕和大豆浓缩蛋白,挤压温度150℃;2号:低温脱脂豆粕,挤压温度180~190℃;3号:低温脱脂豆粕和谷朊粉,挤压温度150℃)为研究对象,分... 以3种不同原料和挤压温度生产的大豆组织蛋白(TSP)(1号:大豆分离蛋白、谷朊粉、食用小麦淀粉、低温脱脂豆粕和大豆浓缩蛋白,挤压温度150℃;2号:低温脱脂豆粕,挤压温度180~190℃;3号:低温脱脂豆粕和谷朊粉,挤压温度150℃)为研究对象,分别采用电子鼻和气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分析了其气味特征和挥发性物质含量,通过风味活度值(OAV)确定其关键挥发性豆腥味物质。结果显示:电子鼻能够有效区分3种TSP样品的气味,且1号和3号的气味差异较大。3种TSP样品中共检测出69种挥发性物质,主要为醛类、呋喃类、酮类和醇类,其中10种为挥发性豆腥味物质;3种样品中挥发性豆腥味物质含量由高到低依次为3号、2号和1号。3种TSP样品中关键挥发性豆腥味物质的种类和构成不同,1号、2号和3号TSP样品中分别含有4种、4种和6种关键挥发性豆腥味物质,正己醛、1-辛烯-3-醇和2-正戊基呋喃分别是该3种TSP样品中含量最多的挥发性豆腥味物质。不同原料和挤压温度生产的大豆组织蛋白含有不同种类和含量的挥发性豆腥味物质。 展开更多
关键词 大豆组织蛋白 豆腥味物质 风味活度值 电子鼻 gc-MS
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裂谷热病毒Gc蛋白主要抗原区的表达、纯化及鉴定 被引量:3
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作者 夏鹏 沈丽 +8 位作者 魏建超 钟登科 陆莹梅 李蓓蓓 刘珂 邵东华 邱亚峰 温贵兰 马志永 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第1期15-20,共6页
根据裂谷热病毒(Rift valley fever virus,RVFV)M基因(Gen Bank登录号:DQ380206)序列,用PCR方法扩增其主要抗原区,将目的基因克隆至原核表达质粒p ColdⅠ中,将重组质粒转化到BL21感受态细胞中,诱导表达重组蛋白,将表达蛋白利用His-tag N... 根据裂谷热病毒(Rift valley fever virus,RVFV)M基因(Gen Bank登录号:DQ380206)序列,用PCR方法扩增其主要抗原区,将目的基因克隆至原核表达质粒p ColdⅠ中,将重组质粒转化到BL21感受态细胞中,诱导表达重组蛋白,将表达蛋白利用His-tag Ni柱进行亲和层析纯化。纯化后的蛋白分别应用SDS-PAGE、Western blot方法鉴定,结果显示,本研究不仅成功表达出Gc蛋白的主要抗原区,而且具有良好抗原性,为后续裂谷热抗原ELISA试剂盒的研制奠定了物质基础。 展开更多
关键词 裂谷热病毒 gc蛋白 原核表达 抗原性
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新型伪狂犬病病毒gB、gC蛋白串联表达及免疫活性分析 被引量:1
9
作者 吴学敏 陈如敬 +5 位作者 陈秋勇 王隆柏 车勇良 严山 刘玉涛 周伦江 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第5期60-65,共6页
为研究新型PRV毒株主要抗原表位,并获得具有良好免疫原性的表位串联体,本研究通过扩增新型PRV FJ-2012株gB、gC蛋白基因片段,经密码子优化后构建串联表达序列,并链接原核表达载体pET-28a(+)克隆位点,转化至BL21(DE3)感受态细胞,利用IPT... 为研究新型PRV毒株主要抗原表位,并获得具有良好免疫原性的表位串联体,本研究通过扩增新型PRV FJ-2012株gB、gC蛋白基因片段,经密码子优化后构建串联表达序列,并链接原核表达载体pET-28a(+)克隆位点,转化至BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导表达获得gBC串联蛋白,并用间接ELISA法测定其兔多克隆抗体血清效价,通过Western blot、间接免疫荧光试验评价其免疫活性。结果表明成功构建了PRV-gBC串联蛋白表达体系,并获得新型PRV FJ-2012株gBC串联重组蛋白;ELISA检测其克隆抗体血清效价可以达到1∶6400,Western blot试验显示gBC串联蛋白与多抗血清能产生特异性反应,免疫荧光试验说明克隆抗体血清能与FJ-2012株抗原发生免疫反应。本研究串联表达的新型PRV FJ-2012株gB、gC跨膜区域蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究新型PRV优势抗原表位奠定了基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 gB蛋白 gc蛋白 串联表达 免疫活性
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发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒Gn和Gc蛋白的分段表达 被引量:10
10
作者 张文帅 迟莹 +3 位作者 张黎 温恬 曾晓燕 焦永军 《江苏预防医学》 CAS 2013年第1期4-6,共3页
目的分段表达发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)Gn和Gc蛋白。方法采用PCR方法克隆了SFTSV Gn和Gc基因上三段相互重叠的基因片段Gn1、Gn2、Gn3、Gc1、Gc2、Gc3,将PCR产物分别连接到原核表达载体pET28a(+)上,经酶切、PCR、测序鉴定... 目的分段表达发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)Gn和Gc蛋白。方法采用PCR方法克隆了SFTSV Gn和Gc基因上三段相互重叠的基因片段Gn1、Gn2、Gn3、Gc1、Gc2、Gc3,将PCR产物分别连接到原核表达载体pET28a(+)上,经酶切、PCR、测序鉴定,获得重组质粒pET28a-Gn(Gn1)、pET28a-Gn(Gn2)、pET28a-Gn(Gn3)、pET28a-Gc(Gc1)、pET28a-Gc(Gc2)、pET28a-Gc(Gc3),将其分别转化感受态菌BL21,IPTG诱导表达,通过Western blot鉴定Gn1、Gn2、Gn3、Gc1、Gc2、Gc3蛋白的表达。结果成功构建重组质粒pET28a-Gn(Gn1)、pET28a-Gn(Gn2)、pET28a-Gn(Gn3)、pET28a-Gc(Gc1)、pET28a-Gc(Gc2)、pET28a-Gc(Gc3),Western blot可见Gn1、Gn2、Gn3、Gc1、Gc2和Gc3编码蛋白的成功表达。结论 Gn和Gc蛋白的分段表达成功,为进一步深入研究SFTSV的Gn和Gc蛋白结构与功能及精确定位其抗原表位奠定了基础。 展开更多
关键词 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒 Gn和gc蛋白 分段表达
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转cry1Ab/Gc基因玉米的不同转化事件Bt蛋白表达和抗虫性分析 被引量:4
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作者 刘洋 柳青 +6 位作者 李楠 刘相国 张航 赵方方 贾伟 韩四平 尹悦佳 《哈尔滨师范大学自然科学学报》 CAS 2016年第3期87-92,共6页
分析不同转化体Bt蛋白表达量和评估其抗虫性,进而筛选优异转化事件是转基因玉米新品种培育研究中的重要环节.为分析转cry1Ab/Gc基因玉米中Bt蛋白表达特性与抗虫性的关系,筛选优秀转化事件,研究以三个转化事件HG-1、HG-2、HG-3为试验材料... 分析不同转化体Bt蛋白表达量和评估其抗虫性,进而筛选优异转化事件是转基因玉米新品种培育研究中的重要环节.为分析转cry1Ab/Gc基因玉米中Bt蛋白表达特性与抗虫性的关系,筛选优秀转化事件,研究以三个转化事件HG-1、HG-2、HG-3为试验材料,利用ELISA检测、玉米螟生测等技术,在室内和田间详细分析心叶期和抽丝期玉米抗虫蛋白表达量,并评估抗虫性.研究结果表明,同一转化事件不同组织或器官Cry1Ab/Gc蛋白含量存在显著差异,均表现为叶>茎>根;不同时期叶片Cry1Ab/Gc蛋白含量存在显著差异,表现为抽丝期>心叶期;不同转化事件间,心叶期转化事件HG-1的叶片、抽丝期转化事件HG-1和HG-2的茎中Cry1Ab/Gc蛋白的含量明显高于其他材料.室内和田间亚洲玉米螟生测试验结果表明:不同转化事件抗虫性差异显著,转化事件HG-1在心叶期和抽丝期亚洲玉米螟抗性显著高于其他两个玉米转化事件,与该时期Cry1Ab/Gc蛋白高表达的试验结果一致.本研究结果证实不同玉米转化事件Bt蛋白表达量显著差异,心叶期和抽丝期Bt蛋白表达量与亚洲玉米螟抗性呈正相关,可以作为抗虫转基因玉米优秀转化体初步筛选的重要技术指标,具有可操作性强、技术稳定性好、节省时间等优势,为抗虫转基因玉米新品种培育研发提供数据参考. 展开更多
关键词 Cry1Ab/gc蛋白 转化事件 抗虫性
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抗GC血清的制备及鉴定 被引量:3
12
作者 侯一平 吴梅筠 《中国法医学杂志》 CSCD 1989年第4期193-195,共3页
作者用分离纯化的GC蛋白免疫新西兰兔制备了抗GC血清。鉴定结果表明,抗GC血清与进口商品抗GC血清特异性相同;与人血清其他蛋白没有交叉反应。琼脂双向扩散法测得抗血清效价为128;可检出GC蛋白的最低浓度为3.1μg/ml。免疫电泳法可测出... 作者用分离纯化的GC蛋白免疫新西兰兔制备了抗GC血清。鉴定结果表明,抗GC血清与进口商品抗GC血清特异性相同;与人血清其他蛋白没有交叉反应。琼脂双向扩散法测得抗血清效价为128;可检出GC蛋白的最低浓度为3.1μg/ml。免疫电泳法可测出入血清三种GC表型。 展开更多
关键词 gc血清 维生素D 结合蛋白
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鲫鱼PKR-like Zα与d(GC)_(13)质粒的结合及其适应性进化 被引量:6
13
作者 陶敏 吴初新 +1 位作者 杨攀 胡成钰 《细胞生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第4期494-498,共5页
Zα是一类能特异性识别与结合左旋DNA(Z-DNA)的蛋白质结构域,分布于不同物种的多种蛋白质中,其结构保守并分化自一个共同的祖先Z-结构域。适应性进化分析显示Zα没有经历正达尔文选择,表明与其结构对应Zα的功能相当保守。凝胶阻滞试验... Zα是一类能特异性识别与结合左旋DNA(Z-DNA)的蛋白质结构域,分布于不同物种的多种蛋白质中,其结构保守并分化自一个共同的祖先Z-结构域。适应性进化分析显示Zα没有经历正达尔文选择,表明与其结构对应Zα的功能相当保守。凝胶阻滞试验表明原核表达的鲫鱼PKR-like Zα多肽(CaPZα)不与pMD18-T质粒结合,而却能与包含d(GC)13的重组质粒pMD18-T/(GC)13结合。同时,与ADAR1Zα相比,CaPZα与d(GC)13质粒的结合能力较弱,即CaPZα1和CaPZα2子域单独不能结合d(GC)13质粒。这表明Zα功能虽然没有异化,但有很大的不同。实验结果还表明负超螺旋和d(GC)n可能都是正常生理条件下,DNA形成潜在Z-DNA必不可少的因素。定点突变试验证实38N与60W两个氨基酸位点对于CaPZα结合Z-DNA非常关键。 展开更多
关键词 PKR-like d(gc)n 适应性进化 Z-DNA结合蛋白
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用重组腺病毒免疫方法制备伪狂犬病病毒gC蛋白单克隆抗体 被引量:1
14
作者 陈振海 杨金先 +2 位作者 宋铁英 刘晓东 林天龙 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期684-689,共6页
将表达伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gC基因的重组腺病毒经肌肉免疫BALB/c小鼠,测试了重组腺病毒免疫小鼠制备抗目的蛋白单克隆抗体的效果。ELISA分析表明,BALB/c小鼠接种重组腺病毒后能产生针对gC蛋白的特异性抗体。给BALB/... 将表达伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gC基因的重组腺病毒经肌肉免疫BALB/c小鼠,测试了重组腺病毒免疫小鼠制备抗目的蛋白单克隆抗体的效果。ELISA分析表明,BALB/c小鼠接种重组腺病毒后能产生针对gC蛋白的特异性抗体。给BALB/c小鼠用大肠杆菌表达的gC融合蛋白MBP-gC-NC加强免疫后第3 d,取小鼠脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞在PEG4000作用下进行杂交融合,经筛选、克隆,获得了3株稳定分泌抗PRV gC蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1B4、1H4和2C8。单抗特性分析结果表明,1B4、2C8属IgG2a亚类,1H4属IgG1亚类;腹水抗体的ELISA效价为1∶2×10^5~1∶2×10^6;3株单抗都具有间接免疫荧光试验(IFA)和免疫印迹试验(Western-blotting)反应特性,能够特异地识别PRV gC蛋白。证实重组腺病毒免疫可用于制备目的蛋白单克隆抗体,为制备单抗提供了一种新的方法。 展开更多
关键词 重组腺病毒 伪狂犬病病毒 gc蛋白 单克隆抗体
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伪狂犬病病毒Bartha株gC膜外区部分基因的原核表达及纯化 被引量:1
15
作者 刘庆伟 邱亚峰 +6 位作者 王晓杜 郭林 刘超 沈阳 李向东 单虎 马志永 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第2期1-4,共4页
构建伪狂犬病病毒(PRV)gC膜外区部分基因的重组质粒,原核表达并纯化目的蛋白。根据GenBank已发表的伪狂犬病病毒Bartha(PRV Ba)株gC基因的序列(NC EU719641),设计并合成了1对引物,以PRV Ba株为模板,PCR扩增出PRV gC膜外区部分基因片段;... 构建伪狂犬病病毒(PRV)gC膜外区部分基因的重组质粒,原核表达并纯化目的蛋白。根据GenBank已发表的伪狂犬病病毒Bartha(PRV Ba)株gC基因的序列(NC EU719641),设计并合成了1对引物,以PRV Ba株为模板,PCR扩增出PRV gC膜外区部分基因片段;将该基因片段克隆到原核表达载体pET-28a上,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导,获得大小为35 ku的重组蛋白,命名为pET-gCN813。按照His-Bind纯化试剂盒说明书纯化表达产物,获得融合蛋白的纯化产物。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 gc基因 原核表达 融合蛋白 纯化
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猕猴B病毒gC蛋白特异性抗原表位的合成和表达 被引量:2
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作者 隋丽华 孙兆增 +6 位作者 刘一 张小飞 崔晓霞 赵彦斌 刘冰 许琴 曾林 《中国比较医学杂志》 CAS 2012年第7期21-24,共4页
目的获得B病毒gC蛋白的特异性表位抗原。方法利用长片段基因合成的方法,合成B病毒C蛋白的特性抗原表位基因,将该基因连接到pMAL-5x载体,转化到BL21受体菌进行表达,并纯化表达产物。结果成功的获得了B病毒gC蛋白的特异性抗原蛋白,该蛋白... 目的获得B病毒gC蛋白的特异性表位抗原。方法利用长片段基因合成的方法,合成B病毒C蛋白的特性抗原表位基因,将该基因连接到pMAL-5x载体,转化到BL21受体菌进行表达,并纯化表达产物。结果成功的获得了B病毒gC蛋白的特异性抗原蛋白,该蛋白以可溶的形式表达。结论利用原核表达系统,可以产生B病毒gC蛋白的可溶性抗原,可以作为B病毒的检测抗原。 展开更多
关键词 猕猴B病毒 C蛋白 抗原表位 合成与表达
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伪狂犬病病毒变异株gC抗体间接ELISA检测方法的建立及初步应用 被引量:1
17
作者 吴学敏 陈如敬 +5 位作者 陈秋勇 车勇良 严山 刘玉涛 周伦江 王隆柏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期2029-2034,共6页
本研究旨在建立变异伪狂犬病病毒FJ-2012株gC蛋白抗体间接ELISA检测方法,掌握不同猪场猪群的gC抗体水平情况。将FJ-2012株gC基因连接至pCzn1载体,转染至Arctic express(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达产物经SDS-PAGE和Western blot验证,... 本研究旨在建立变异伪狂犬病病毒FJ-2012株gC蛋白抗体间接ELISA检测方法,掌握不同猪场猪群的gC抗体水平情况。将FJ-2012株gC基因连接至pCzn1载体,转染至Arctic express(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达产物经SDS-PAGE和Western blot验证,通过矩阵法试验、临界值的确定、特异性试验、重复性和敏感性试验,建立PRV-gC抗体间接ELISA检测方法,并对源于不同猪场的280份血清进行PRV-gC抗体检测。结果表明,成功表达获得FJ-2012株pCzn1-gC重组蛋白;建立的间接ELISA方法的最佳抗原包被浓度为10μg·mL^(-1)和最佳样品血清稀释比例为1∶50,阴性和阳性判定的OD_(650 nm)临界值为0.406~0.438,介于之间的判定为可疑;临床检测结果显示,120份盲样猪血清PRV-gC抗体阳性率为91.67%、PRV-gB抗体阳性率为95.00%,两种抗体检测结果的整体符合率为95.83%;PR不稳定的猪场血样PRV-gC抗体阳性率为96.25%(77/80),而PRV已净化的种猪场血样PRV-gC抗体阳性率为78.75%(63/80)。因此,建立的PRV变异株gC抗体间接ELISA检测方法为临床猪血清抗体检测提供了特异、灵敏和稳定的技术,也为开展变异PRV血清学调查奠定基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 gc蛋白 酶联免疫吸附试验
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Gc蛋白的分离纯化 被引量:2
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作者 侯一平 吴梅筠 《中国法医学杂志》 CSCD 1989年第2期79-82,共4页
本文报道Gc蛋白的分离与纯化.人血浆经DEAE-Sephadex-A50, Sephadex G100和DEAE-Sephadex-A50三次柱层析即可获得纯化Gc.纯化Gc经PAGE, SDS-PAGE和免疫电泳等证明,其纯度和特异性均符合要求.
关键词 gc蛋白 分离 型特异成分 法医
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GCS评分、CT评分联合血清CRP水平对颅脑损伤患者损伤程度及预后的应用价值 被引量:1
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作者 周剑青 杨西玲 +2 位作者 谢仁先 王琴秀 刘炎雄 《右江医学》 2023年第4期348-351,共4页
目的探讨格拉斯哥昏迷评分(GCS)、计算机断层扫描评分(CT)联合血清C反应蛋白(CRP)水平对评价颅脑损伤(TBI)患者损伤程度及预后的应用价值。方法选择2019年3月至2021年9月莲花县人民医院收治的TBI患者98例,所有患者均按照GCS评分进行病... 目的探讨格拉斯哥昏迷评分(GCS)、计算机断层扫描评分(CT)联合血清C反应蛋白(CRP)水平对评价颅脑损伤(TBI)患者损伤程度及预后的应用价值。方法选择2019年3月至2021年9月莲花县人民医院收治的TBI患者98例,所有患者均按照GCS评分进行病情程度分级,并计算CT评分,检测CRP水平。比较不同病情程度、不同预后患者GCS评分、CRP水平与CT评分的差异,分析患者三项指标与病情程度、疾病预后的相关性。结果三组患者GCS评分相比,重度组<中度组<轻度组;三组CRP水平、CT评分相比,重度组>中度组>轻度组,差异有统计学意义(P<0.001);预后良好组GCS评分高于预后不良组,CRP水平、CT评分均低于预后不良组,差异有统计学意义(P<0.001)。经Pearson相关性分析显示,GCS评分与病情程度呈负相关(r=-0.459,P<0.05),CRP、CT评分与病情程度呈正相关(r值分别为0.361和0.245,P<0.05);GCS评分与预后呈正相关(r=0.538,P<0.05),CRP、CT评分与预后呈负相关(r=-0.546、-0.396,均P<0.05)。结论GCS、CT评分、CRP水平与TBI患者损伤程度及预后均存在密切关系,可用于临床早期诊断、疗效评估及预后判断。 展开更多
关键词 颅脑损伤 格拉斯哥昏迷评分 计算机断层扫描评分 血清C反应蛋白 损伤程度 预后
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鸡传染性喉气管炎病毒gC蛋白的多抗制备、细胞定位及功能研究 被引量:4
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作者 孙永珍 赵妍 +1 位作者 崔红玉 王云峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1309-1316,共8页
为制备对鸡传染性喉气管炎具有诊断应用价值的抗体,并研究鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)gC蛋白在LMH细胞内的分布及gC蛋白对病毒在细胞间传播过程中的作用,本研究以ILTV—LJS09毒株基因组为模板,应用PCR方法扩增gC基因的主要抗原性片段,... 为制备对鸡传染性喉气管炎具有诊断应用价值的抗体,并研究鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)gC蛋白在LMH细胞内的分布及gC蛋白对病毒在细胞间传播过程中的作用,本研究以ILTV—LJS09毒株基因组为模板,应用PCR方法扩增gC基因的主要抗原性片段,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)构建pET-32a—gC质粒,经IPTG诱导表达并纯化,获得His—gC重组蛋白,免疫新西兰大白兔制备抗血清。Western blot结果表明,所制备的兔抗-ILTV gC抗体能与纯化的His—gC蛋白发生特异性反应且能检测到内源性gC蛋白。间接免疫荧光试验结果表明,所制备的兔抗ILTV-LJS09 gC蛋白的多抗能与ILTV LJS09、HLJ0507、MDJ0442、SD0203、Zhj1298毒株反应,特异性良好。采用获得的抗gC抗体观测LJS09-gC蛋白在LMH细胞内的分布,发现gC蛋白主要存在于病毒感染细胞的胞质和胞膜上,细胞核和未感染的细胞中没有gC蛋白。利用抗体中和ILTV gC蛋白的试验结果表明,gC蛋白可能直接参与病毒在细胞间传播,从而影响病毒蚀斑的形成。本研究成功制备了具有诊断价值的兔抗ILTV-LJS09 gC蛋白的多克隆抗体,并证实LJS09 gC蛋白在分布及功能上具有a-疱疹病毒的保守性,为gC蛋白生物学特性和ILTV感染机制的研究提供了重要数据。 展开更多
关键词 ILTV gc蛋白 多克隆抗体 细胞定位 功能
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